Download - Apresentação do lcga dez.2012
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DESENVOLVIMENTO DE CÉLULAS GERMINATIVAS
DE TECIDO TESTICULAR EQUINO TRANSPLANTADO
EM CAMUNDONGOS
Germ cell development in equine testis tissue
xenografted into mice
Reproduction Researsh, 2006
Pedro Augusto Cordeiro Borges
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Introdução
Enxerto de diferentes espécies em camundongos
Eficiência da espermatogênese
* Eficiente * Ineficiente
- Porcos - Gatos
- Bodes - Macacos
-Touros
Honaramooz,Oatley;Snedaker, 2004; Rathi, 2005
Honaramooz, 2002
2
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Introdução
Enxerto de tecido testicular equino não relatado
Modelo in vivo - entendimento da espermatogênese
- tratamentos semelhantes
- animais experimentais
- descendência por ICSI
- cavalos valiosos
castração ou morte
(Cochran et al. 1998)
3
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Introdução
Gonadotrofinas crescimento e desenvolvimento testicular
Enxerto em camund. Castrado gonadotrofinas endogenas
LH Leyding testosterona Feedback
Diferenças ↓ eficiência da espermatogênese
Suplementação com gonadotrofinas melhorar a espermatogênese
4
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Objetivo
Eficiência da espermatogênese
Efeito da administração de gonadotrofinas
5
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Material e Métodos
6
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Material e Métodos
• Experimento 1
Standardbred
2 semanas Welsh pony
5 mesesWarmblood
10 meses Quarterhorse
12 mesesThoroughbred
4 anos
7
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Material e Métodos
• Experimento 1
Remoção da cápsula e do
tecido conjuntivo
1 – 2 mm
Dulbecco’s
Eagle’s
8
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Material e Métodos
• Experimento 1
6 semanas
Imunossuprimidos
9
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Material e Métodos
• Experimento 1
Anestesiados e castrados Comissão Institucional de
Usos e Cuidados com os
Animais – Universidade da
Pensilvânia
Base
histológica
10
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Material e Métodos
• Experimento 2
Shetland pony
8 meses
Thoroughbred
12 meses
14 semanas após
20 semanas
25 semanas após
10 semanas
PSMG 10 UI
hCG 10 UI
11
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• Recuperação e analise dos tecidos transplantados
Material e Métodos
Eutanásia • Inalação de CO2
Fixação • Solução de Bouin’s
Banhos • Etanol 70%
Parafina • Histologia
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Material e Métodos
• Recuperação e analise dos tecidos transplantados
Todos os túbulos seminíferos avaliados
Maturação lúmen e espermatogênese
Células germinativas morfologia e localização
Túbulos degenerados sem distinção de tipos celulares
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Material e Métodos
• Recuperação e analise dos tecidos transplantados
Tecidos saudáveis x degenerados
Apenas os saudáveis analisados
Camundongo = unidade experimental
Vesículas seminais pesadas secreção de testosterona
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Análise estatística
NRC-nude e ICR-scid
Chi-square ou Student
ANOVA
SigmaStat 3.0
Média e Desvio
P< 0,05
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Resultados
16
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Experimento 1
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Resultados
65 % saudáveis
2-4 vezes maior
% d
e
tecid
os s
audáveis
recupe
rados
Idade do doador
Figura 1. Porcentagem de tecidos saudáveis recuperados por doador, 4 ou 8
meses após o enxerto (n=6 receptores por doador)
84,6%
93,8%
56,3%65%
20,3%
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• Espermatogênese e desenvolvimento dos túbulos seminíferos
Células intersticiais e poucos cordões
Espermatogônias
Tecidos recuperados (4 e 8 meses) pouco desenvolvidos
- 35, 7% cordões túbulos
- 52 % degenerados
- Espermatogônias
- Após 8 meses lóbulos mais aparente
Resultados
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ResultadosP
orc
enta
gem
de t
úbulo
s s
em
inífero
s
Tempo em meses
Figura 2. A porcentagem de túbulos
seminíferos contendo o tipo de célula
germinativa indicada é demonstrada para o
tecido proveniente do Welsh pony - 5 meses
Espermatidés alongadas
Espermatides arredondadas
Espermatócitos em paquíteno
Espermatogônia
Sem células germinativas
0 – cachos e arranjo em lóbulos
8 – espermatócitos em paquíteno
4,8 0,8 % de túbulos
degenerados
Welsh pony
5 meses
20
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Resultados
Figura 3. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Welsh pony – 5 meses),
antes de transplantado (A), apresentando apenas espermatogônias , e recuperado
após 8 meses (B), apresentando espermatócitos em paquíteno.
Welsh pony
5 meses
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ResultadosP
orc
enta
gem
de t
úbulo
s s
em
inífero
s
Tempo em meses
Figura 4. A porcentagem de túbulos
seminíferos contendo o tipo de célula
germinativa indicada é demonstrada para o
tecido proveniente do Warmblood 10 meses
Espermatidés alongadas
Espermatides arredondadas
Espermatócitos em paquíteno
Espermatogônia
Sem células germinativas
0 – Espermatócitos em paquíteno
4 – Redução significativa
8 – Espermátides alongadas
7,7 1,5 % de túbulos degenerados
Warmblood
10 meses
22
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Resultados
Figura 5. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Warmblood– 10 meses),
antes de transplantado (C), apresentando espermatócitos em paquíteno como o
tipo celular mais maduro, e recuperado após 8 meses (D), apresentando
espermátides alongadas.
Warmblood
10 meses
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Resultados
Porc
enta
gem
de t
úbu
los s
em
inífero
s
Tempo em meses
Figura 6. A porcentagem de túbulos
seminíferos contendo o tipo de célula
germinativa indicada é demonstrada para o
tecido proveniente do Quarterhorse12 meses
Espermatidés alongadas
Espermatides arredondadas
Espermatócitos em paquíteno
Espermatogônia
Sem células germinativas
0 – Espermátides alongadas
4 – Espermatócitos em paquíteno
8 – Retomada da espermatogênese
6,5 2,2 % de túbulos degenerados
Quarterhorse
12 meses
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Resultados
Figura 7. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Quarterhorse – 12
meses), antes de transplantado (E), apresentando espermatogênese completa e
recuperado após 8 meses (F), apresentando espermatócitos em paquíteno como o
tipo celular mais maduro.
Quarterhorse
12 meses
25
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Resultados
Porc
enta
gem
de t
úbu
los s
em
inífero
s
Tempo em meses
Figura 8. A porcentagem de túbulos
seminíferos contendo o tipo de célula
germinativa indicada é demonstrada para o
tecido proveniente do Thoroughbred 4 anos
Espermatidés alongadas
Espermatides arredondadas
Espermatócitos em paquíteno
Espermatogônia
Sem células germinativas
0 – Espermátides alongadas
4 – Redução significativa
8 – Retomada da espermatogênese
46,8 13,9 % de túbulos degenerados
Thoroughbred
4 anos
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Resultados
Figura 9. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Thoroughbred – 4 anos),
antes de transplantado (G), apresentando espermatogênese completa e
recuperado após 8 meses (H), apresentando espermatócitos em paquíteno como o
tipo celular mais maduro.
Thoroughbred
4 anos
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Experimento 2
28
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Resultados
• Efeito da gonadotrofina nos tecidos enxertados (experimento 2)
- Antes do transplante
Thoroughbred e Welsh pony espermatogônias
Recuperados 8 meses
10 semanas 20 semanas
- 3 tratados com gonadotrofina
- 3 grupo controle
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• Welsh pony – 8 meses
Resultados
Porc
enta
gem
de t
úbulo
s s
em
inífero
s
Tempo em meses
Figura 10. A porcentagem de túbulos
seminíferos contendo o tipo de célula
germinativa indicada é demonstrada para o
grupo controle e o grupo tratado com
gonadotrofina, com tecidos provenientes do
doador de 8 meses de idade.
Espermatidés alongadas
Espermatides arredondadas
Espermatócitos em paquíteno
Espermatogônia
Sem células germinativas
0 – Gonócitos
8 – Espermatócitos em paquíteno
8 - Espermatides alongadas
30
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Resultados
Figura 11. Aspecto histológico do tecido testicular do doador de 8 meses, antes
do transplante (A) e após recuperação (8 meses), para o grupo controle (B) e
para o grupo tratado com gonadotrofina (C).
Antes Tratado - gonadotrofinaControle
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• Thoroughbred – 12 meses
Resultados
Porc
enta
gem
de t
úbulo
s s
em
inífero
s
Tempo em meses
Figura 10. A porcentagem de túbulos
seminíferos contendo o tipo de célula
germinativa indicada é demonstrada para o
grupo controle e o grupo tratado com
gonadotrofina, com tecidos provenientes do
doador de 12 meses de idade.
Espermatidés alongadas
Espermatides arredondadas
Espermatócitos em paquíteno
Espermatogônia
Sem células germinativas
0 – Gonócitos
8 – Espermatogônias
8 - Espermatócitos em paquíteno
32
![Page 33: Apresentação do lcga dez.2012](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052413/559f681a1a28ab34118b4583/html5/thumbnails/33.jpg)
Resultados
Figura 13. Aspecto histológico do tecido testicular do doador de 12 meses, antes
do transplante (D) e após recuperação (8 meses), para o grupo controle (E) e
para o grupo tratado com gonadotrofina (F).
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![Page 34: Apresentação do lcga dez.2012](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052413/559f681a1a28ab34118b4583/html5/thumbnails/34.jpg)
• Peso das vesículas seminais
177 30.8 mg 4 meses após o transplante
130.9 27.4 mg 8 meses após o transplante
Sem tecidos saudáveis 15.6 2.7 mg
Tecido equino transplantado produção de testosterona
Administração de gonadotrofina sem significância
Resultados
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![Page 35: Apresentação do lcga dez.2012](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052413/559f681a1a28ab34118b4583/html5/thumbnails/35.jpg)
Considerações finais
Espermatogênese até meiose
Gonadotrofinas exógenas
Tecido testicular de equinos – modelo – espermatogênese
Fisiologia e Fisiopatologia
35
![Page 36: Apresentação do lcga dez.2012](https://reader034.vdocuments.net/reader034/viewer/2022052413/559f681a1a28ab34118b4583/html5/thumbnails/36.jpg)
DESENVOLVIMENTO DE CÉLULAS GERMINATIVAS
DE TECIDO TESTICULAR EQUINO TRANSPLANTADO
EM CAMUNDONGOS
Germ cell development in equine testis tissue
xenografted into mice
Reproduction Researsh, 2006
Pedro Augusto Cordeiro Borges