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Motori molecolari
Prof. Giorgio Sartor
Copyright © 2001-2018 by Giorgio Sartor.
All rights reserved.
M09 - Versione 1.7 – 02/10/2018
II – Miosina, Kinesine e Dineine
Strutture per il movimento
MIOSINE
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v. 1.7 © gsartor 2018 Motori molecolari
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Miosina/e
• 18 classi:
–Miosina I: monomero, trasporto vescicole
–Miosina II: contrazione muscolare
–Miosina III: coinvolta nel meccanismo della fototrasduzione in Drosophila
–altre 15 …
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MiosinA
• 18 classi:
–Miosina I: monomero, trasporto vescicole
–Miosina II: contrazione muscolare
–Miosina III: coinvolta nel meccanismo della fototrasduzione in Drosophila
–altre 15 …
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Miosina• Responsabile della contrazione
muscolare;
• Si muove lungo un filamento di actina;
• Costituita da due copie di catena pesante (87 kDa) e due catene leggere, una essenziale e una regolatrice;
• 40 distinte miosine codificate dal genoma umano (alcune di esse specifiche per la contrazione muscolare).
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Struttura della miosina
• Proteina con due teste ed una lunga coda
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Struttura della miosina
• Dalla proteolisi con tripsina e papaina si ottengono :– Due frammenti S1
– Un frammento S2• Meromiosina
pesante (HMM)
• Meromiosina leggera (LMM)
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S1
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S1 - HMM
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S1 - HMM
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S1 - HMM
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S1 - HMM
• Analogia strutturale con la calmodulina
• Legano altre proteine in α-elica
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Miosina II
• Le due catene leggere (essenziale e regolatoria) si avvolgono intorno alla catena pesante della miosina II
– Il sito di legame di ogni catena leggera è un motivo IQ (Isoleucina-Glutamina): IQxxxRGxxxR.
– La loro struttura è simile alla struttura della calmodulina. In molti organismi hanno perso la capacità di legare Ca++
1cdm
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Miosina II
Ile
Gly
Gln
Arg
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S1 - HMM
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Sito di legame dell’ATP• L’ATP si lega alla testa della miosina adiacente ai sette segmenti β
che formano il β-sheet.• I loops che si estendono di β-strands interagiscono con il nucleotide• Il sito di legame del nucleotide è in posizione opposta alla fenditura
che lega l’actina.• L’occupazione del sito del nucleotide causa apertura e la chiusura
della fenditura che lega l’actina e causa la rotazione della testa intorno al collo della proteina.
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Sito di legame dell’ATP• L’ATP si lega alla testa della miosina adiacente ai sette segmenti β
che formano il β-sheet.• I loops che si estendono di β-strands interagiscono con il nucleotide• Il sito di legame del nucleotide è in posizione opposta alla fenditura
che lega l’actina.• L’occupazione del sito del nucleotide causa apertura e la chiusura
della fenditura che lega l’actina e causa la rotazione della testa intorno al collo della proteina.
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Sito di legame dell’ATP• L’ATP si lega alla testa della miosina adiacente ai sette segmenti β
che formano il β-sheet.• I loops che si estendono di β-strands interagiscono con il nucleotide• Il sito di legame del nucleotide è in posizione opposta alla fenditura
che lega l’actina.• L’occupazione del sito del nucleotide causa apertura e la chiusura
della fenditura che lega l’actina e causa la rotazione della testa intorno al collo della proteina.
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Sito di legame dell’ATP• L’ATP si lega alla testa della miosina adiacente ai sette segmenti β
che formano il β-sheet.• I loops che si estendono di β-strands interagiscono con il nucleotide• Il sito di legame del nucleotide è in posizione opposta alla fenditura
che lega l’actina.• L’occupazione del sito del nucleotide causa apertura e la chiusura
della fenditura che lega l’actina e causa la rotazione della testa intorno al collo della proteina.
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Sito di legame dell’ATP• L’ATP si lega alla testa della miosina adiacente ai sette segmenti β
che formano il β-sheet.• I loops che si estendono di β-strands interagiscono con il nucleotide• Il sito di legame del nucleotide è in posizione opposta alla fenditura
che lega l’actina.• L’occupazione del sito del nucleotide causa apertura e la chiusura
della fenditura che lega l’actina e causa la rotazione della testa intorno al collo della proteina.
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Sito di legame dell’ATP
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Sito di legame dell’ATP
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Expanded view of the nucleotide binding site of MgADP·BeFx·S1Dc where the MgADP·beryllium fluoride complex mimics MgATP in a prehydrolysis state.
Rayment I J. Biol. Chem. 1996;271:15850-15853
©1996 by American Society for Biochemistry and Molecular Biology
v. 1.7 © gsartor 2018 Motori molecolari
Ribbon representation of the movement of the lower 50-kDa domain in the vanadate complex relative to the position in the beryllium fluoride complex.
Rayment I J. Biol. Chem. 1996;271:15850-15853
©1996 by American Society for Biochemistry and Molecular Biology
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Le miosine – differenze strutturali• La Miosina I possiede una
catena pesante con un singolo dominio globulare (monomero). La sua catena corta non possiede la sequenza di sette AA del α-helical coiled coil.
• La Miosina II possiede due catene pesanti.
• Il dominio globulare di ogni catena pesante catalizza l’drolisi di ATP e interagisce con l’actina– Ogni catena pesante
continua con un dominio (coda) dove una sequenza di sette AA è ripetuta e dimerizza per formare una struttura rod-like α-helical coiled coil.
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Le miosine – differenze strutturali
• La Miosina V possiede due catene pesanti come al Miosina II ma ha una regione più lunga con sei siti di legame della calmodulina. La sua corta regione α-helix-coiled-coil è seguita da un dominio globulare alla fine dei ogni catena che lega un “cargo”.
• Il dominio della coda della Miosina VI possiede un corto segmento ripetuto di sette AA e si può trovare nella forma monomerica e dimerica a seconda delle condizioni.
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Senso del movimento
• I domini motore di quasi tutte le miosine si muovono verso l’estremità “più” dei filamenti di actina.
• Il movimento è ATP-dipendente ed è accompagnato dall’idrolisi dell’ATP
• La Miosina VI è l’unica delle miosine che si muove verso l’estremità “meno” dell’actina.
v. 1.7 © gsartor 2018 Motori molecolari
Representative distance matrix-based phylogeny (protdist/neighbor) of myosin head domains.
Foth B J et al. PNAS 2006;103:3681-3686
©2006 by National Academy of Sciences
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Miosina
Cosa e come trasportare
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1b7t
S1 - HMM
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α-helix coiled-coil• Il motivo strutturale α-elica
coiled-coil consiste in due lunghe α-eliche con un pattern ripetitivo di AA con catena laterale idrofobica che produce una struttura superavvolta.
• Le strutture superavvolte sono proprie nelle miosine di classe II, V, VI, VII, VIII, X, XI and XII.
• Nella Miosina II la porzione C terminale forma una struttura molto lunga.
• Le cariche si ripetono al di fuori del coiled-coil permetteno un assemblaggio di più filamenti.
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α-helix coiled-coil
• Le ripetizioni di 7, 28 e 196 residui sono responsabili dell’organizzazione dei filamenti
• I residui 1 e 4 (a e d) sono idrofobici
• I residui 2,3 e 6 (b, c e f) sono ionici
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α-helix coiled-coil
• Le ripetizioni di 7, 28 e 196 residui sono responsabili dell’organizzazione dei filamenti
• I residui 1 e 4 (a e d) sono idrofobici
• I residui 2,3 e 6 (b, c e f) sono ionici
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LMM
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Stabilizzazione del filamento
• La ripetizione di 28 residui (4 x 7) consiste in pattern distinti di catene laterali di carica opposta e si impaccano con la regione della miosina adiacente per stabilizzare il filamento
• La ripetizione di 196 residui (7 x 28) contribuisce a stabilizzare l’impaccamento
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Flessibilità
a. Geometria dell’esperimento
b. Grafico della forza applicata contro l’estensione:
I. Miosina II di muscolo di coniglio
II. Miosina II diDictyostelium
III. Coda accorciata di miosina II da Dictyosteliumespressa in batteri
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Impaccamento
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Movimento!!!
• Tutti gli organismi si muovono (Singole cellule e organismi complessi)
–Verso le sorgenti di energia (cibo, luce, ecc.)
– Lontano dai pericoli
–… dovunque serva …
• … e si muovono al loro interno.
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Kinesine e Dineine
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Kinesine e Dineine
• Le kinesine e le dineine si muovono lungo microtubuli trascinando il loro carico.
• Tutti questi motori sono composti da un dominio motore che scinde l'ATP e converte l'energia in movimento, ed un dominio di legame che si connette all'oggetto che viene mosso
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Andare sui binari
• Le kinesine vengono usate per trascinare verso l'esterno delle cellule grandi oggetti, come vescicole, lisosomi o il reticolo endoplasmatico, dall’interno (membrana nucleare) verso la membrana cellulare.
• Le Dineine vengono usate per lo scopo opposto, tirare oggetti verso l'interno.
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Kinesina
• Struttura simile alla miosina:– Testa
– Coda
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Kinesina
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Kinesina
• Struttura simile alla miosina:– Testa
– Coda
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Kinesina
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Kinesina
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Kinesina
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Dineina
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Dineina
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Crediti e autorizzazioni all’utilizzo• Questo materiale è stato assemblato da informazioni raccolte dai seguenti testi di Biochimica:
– CHAMPE Pamela , HARVEY Richard , FERRIER Denise R. LE BASI DELLA BIOCHIMICA [ISBN 978-8808-17030-9] – Zanichelli
– NELSON David L. , COX Michael M. I PRINCIPI DI BIOCHIMICA DI LEHNINGER - Zanichelli
– GARRETT Reginald H., GRISHAM Charles M. BIOCHIMICA con aspetti molecolari della Biologia cellulare - Zanichelli
– VOET Donald , VOET Judith G , PRATT Charlotte W FONDAMENTI DI BIOCHIMICA [ISBN 978-8808-06879-8] - Zanichelli
• E dalla consultazione di svariate risorse in rete, tra le quali:
– Kegg: Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes http://www.genome.ad.jp/kegg/
– Brenda: http://www.brenda.uni-koeln.de/
– Protein Data Bank: http://www.rcsb.org/pdb/
• Il materiale è stato inoltre rivisto e corretto dalla Prof. Giancarla Orlandini dell’Università di Parma alla quale va il mio sentito ringraziamento.
Questo ed altro materiale può essere reperito a partire da:
http://www. gsartor.org/pro
Il materiale di questa presentazione è di libero uso per didattica e ricerca e può essere usato senza limitazione, purché venga riconosciuto l’autore usando questa frase:
Materiale ottenuto dal Prof. Giorgio Sartor
Università di Bologna a Ravenna
Giorgio Sartor - [email protected]
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