Institut für Lebensmittelsicherheit und -hygiene
Die wichtigsten Mastitiserreger im Labor (kulturelle Diagnostik)
Roger Stephan und Sabrina Corti
Ausgabe April 2012
Institut für Lebensmittelsicherheit und -hygiene
steril
nicht steril
2007; n=2011
Kulturelle Untersuchung von bovinen Mastitisproben Routinedaten (repräsentative Abbildung)
Institut für Lebensmittelsicherheit und -hygiene
S. uberis
S. dysgalactiae
S.aureus
andere Staph
E.coli
C. bovis
GPS
A. pyogenes
Hefen
Klebsiellen
S. agalactiae
2007; n=1349
Kulturelle Untersuchung von bovinen Mastitisproben Routinedaten: Verteilung der Erreger (repräsentative Abbildung)
Institut für Lebensmittelsicherheit und -hygiene
Staphylokokken
Koagulase: Enzym, welches Fibrinogen zu Fibrin ausfällt
CPS (Koagulase positiv)
CNS (Koagulase negativ)
Neben S. aureus auch S. intermedius Koagulase-positiv und S. hyicus Koagulase-variabel
RPF Agar
Institut für Lebensmittelsicherheit und -hygiene
Staphylococcus aureus
Blutagar: grosse (2-5 mm), glatte, pigmentierte Kolonien, bei Staphylo-coccus aureus Farben von hellbeige bis dunkelgelb Typisch breite, deutliche Zone Teilhämolyse, welche von einer schmäleren, klaren Zone Totalhämolyse begleitet sein kann. Seltener breite Zone von Totalhämolyse. Hämolysen typischerweise scharf begrenzt, Ausnahmen mit diffuser Begrenzung. Gram-positive Kokken, Katalase-positiv
Schafblutagar Schafblutagar Schafblutagar
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Koagulase-negative Staphylokokken
Häufig keine Hämolyse oder schmale, diffuse Zone einer Totalhämolyse
Dissertation Moser, in preparation
n=100; 03/2011-03/2012
S. epidermidis
S. equorum
S. haemolyticus
S. hyicus
S. sciuri
S. simulans
S. chromogenes
S. xylosus
Schafblutagar
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DNAse-Reaktion
Häufig aus Kostengründen in der kulturellen Mastitisdiagnostik DNAse-Agar für die Differenzierung in Staphylococcus aureus und andere Staphylokokken verwendet
S. aureus: Typische Hämolyse und DNAse-Reaktion von grösser/gleich 2mm
Sensitivität 91,2%, Spezifität 96,9% (Fantelli und Stephan, 2003)
+
+ -
- +
DNAse Reaktion nach Überschichten des Agars mit HCl
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Streptokokken
Blutagar: kleine Kolonien (1-3 mm), glatt, durchsichtig, konvex, drei verschiedene Hämolyseformen: keine Hämolyse (Gamma), grünliche Hämolyse (Alpha, ungefärbte Erythrocyten), totale Hämolyse (Beta, lysierte Erythrocyten)
γ -Hämolyse α -Hämolyse β -Hämolyse
Schafblutagar Schafblutagar Schafblutagar
Institut für Lebensmittelsicherheit und -hygiene
Streptococcus agalactiae
β Hämolyse
CAMP-positiv
Aesculin-negativ
+
Schafblutagar
Institut für Lebensmittelsicherheit und -hygiene
Streptococcus uberis und dysgalactiae Keine oder vergrünende Hämolyse um die Kolonien
Differenzierung von S. uberis und S. dysgalactiae
CAMP Aesculin Hippurat
S. agalactiae + - +
S. uberis - (+) + -
S. dysgalactiae - - (+) +
Enterokokken
Differenzierung durch Wachstum in Bouillon mit 6,5% NaCl-Gehalt, Enterokokken wachsen, Strepto- kokken nicht
Dissertation Moser, in preparation
n=220; 03/2011-03/2012
S. uberis
S. dysgalactiae
L. garvieae
E. faecium
E. faecalis
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Escherichia coli
Blutagar: grosse Kolonien (3-5 mm), grau, schleimig, typischer Geruch, meistens keine Hämolyse Brolacinagar: sehr gutes Wachstum, grosse Kolonien, meistens Laktose-positiv
Brolacinagar Schafblutagar
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Klebsiellen
Schleimigeres Wachstum als Escherichia coli insbesondere auf Brolacin-Agar, typischer Geruch fehlt
Bestätigung durch biochemische Reaktionen, Unterschied: 1) Urease-positive Reaktion 2) Indol negativ
E. coli
1 2
Schafblutagar Brolacinagar
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Hefen
Langsames Wachstum, Charakteristiken der Kolonien unterschiedlich Blutagar: kleine, Weisse bis beigeliche, flache, wachsige Kolonien, keine Hämolyse, evt. nach 24 Stunden Bebrütung noch keine richtigen Kolonien vorhanden Brolacinagar: gutes Wachstum, Laktose-negativ
Gram-positive, eiförmige oder ovale Zellen, Knospung, ca. dreifach grösser als Gram-positive Kokken
Schafblutagar Brolacinagar
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Arcanobacterium pyogenes
Relativ einfache Erregeridentifikation, Klinik, Aussehen und Geruch der Milchprobe typisch
Blutagar: nach 24 Stunden kein Wachstum oder winzig kleine Kolonien, evt. Hämolyse, nach 48 Stunden winzig kleine, flache, weissliche Kolonien, klare Hämolyse. Kein Wachstum auf dem Brolacinagar.
Gram-positive, pleomorphe, kurze Stäbchen. Katalase-negativ.
Schafblutagar Schafblutagar
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Corynebacterium bovis
Blutagar: nach 24 Stunden meistens kein Wachstum, nach 48 Stunden hellbeige, undurchsichtige, unregelmässige, trockene, kleine Kolonien mit rauher Oberfläche. Keine Hämolyse. Wachstum abhängig vom Milchfett hilfreich für die Erregeridentifikation. Brolacinagar: kein Wachstum
Gram-Färbung: kurze, pleomorphe, Gram-positive Stäbchen Katalase-positiv
Schafblutagar