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基質の比較:
Geltrex® vs. Recombinant Vitronectin
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ES細胞/iPS細胞 基質
Geltrexはマウス腫瘍から分離した基底膜成分(BME)
− 最も豊富なコンポーネントにはラミニン、IV型コラーゲン、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、ニドゲンが含まれる
− BMEはフィーダーフリーの幹細胞培養において最も一般的な選択肢
− 様々な培地に使用可
− Geltrex & Essential 8™培地の組み合わせはゼノフリーではない
Vitronectinは血漿中や細胞外基質に存在する、豊富で多機能な糖タンパク質
− 組み換えビトロネクチン (VTN-N) は、フィーダーフリーの幹細胞培養向けにEssential 8™培地とともに開発(Chen et al., Nature Methods, 2011)
− VTN-N & Essential 8™培地の組み合わせはゼノフリー
3
H9 ES細胞は、Geltrexでも VTN-Nでも良好なコロニー形態を示す 継代
72時間後
10x
1:100 Geltrex & Essential 8 1ug/cm2 VTN-N & Essential 8
継代
24時間後
3継代後の画像
4
Cytotuneを用いて作製したiPS細胞は、 GeltrexでもVTN-Nでも良好なコロニー形態を示す
10x
1:100 Geltrex &
Essential 8 0.5ug/cm2 VTN-N &
Essential 8
1ug/cm2 VTN-N &
Essential 8
継代
72時間後
継代
24時間後
3継代後の画像
5
NANOG Oct4 Sox2 SSEA4 Tra-1-60 Tra-1-81 A. B.
蛍光
マージ
D
AP
I
位相コントラスト
蛍光
マージ
iPS細胞 (CytoTuneを使用しBJ線維芽細胞から作製)を1:100のGeltrex&Essential 8で 8継代以上培養した後、以下を見るために染色 A)細胞内マーカー B) 多能性表面マーカー
GeltrexおよびVTN-Nは、 いずれも多能性マーカー発現を維持
6
NANOG Oct4 Sox2 SSEA4 Tra-1-60 Tra-1-81
位相コントラスト
蛍光
マージ
蛍光
マージ
D
AP
I
A. B.
iPSC (CytoTuneを使用しBJ線維芽細胞から作製)を 0.5μg/cm2 のVTN-Nで8継代以上
培養した後、以下を見るために染色 A) 細胞内マーカー B) 多能性表面マーカー
GeltrexおよびVTN-Nは、 いずれも多能性マーカー発現を維持
7
GeltrexおよびVTN-Nは、 いずれも多能性マーカー発現を促進
NANOG Oct4 Sox2
1:100 Geltrex
NANOG Oct4 Sox2
0.5μg/cm2 VTN-N
10x
H9 ES細胞をGeltrexおよびVTN-Nで8継代以上培養した後、
多能性の細胞内マーカーを見るために染色
8
染色体解析により、どちらの基質で 長期培養しても、核型が安定であることが示された
1:100 Geltrex &
Essential 8
0.5 μg/cm2 VTN-N &
Essential 8
1 μg/cm2 VTN-N &
Essential 8
8継代後のGバンド核型解析において、 GeltrexでもVTN-NでもiPS細胞(CytoTuneを使用し作製)は正常な核型を示す
P44 – 46,XY[20]
正常男性 ヒト核型
P44 – 46,XY[20]
正常男性
ヒト核型
P44 – 46,XY[20]
正常男性
ヒト核型