Download - Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija
![Page 1: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/1.jpg)
Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē:
skābekļa reducēšana un protonu translokācija
Elektronu transporta ķēdē notiek skābekļa četrelektronu reducēšana par ūdeni, un elektronu transports ir sajūgts ar protondzinējspēka veidošanu.
![Page 2: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/2.jpg)
![Page 3: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/3.jpg)
Citohroma c oksidāzē skābekļa reducēšana ir saistīta ar protonu translokāciju
“vektoriālie protoni”
“ skalārie protoni”
![Page 4: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/4.jpg)
Divi protondzinējspēka veidošanās mehanismi, kas saistīti jeb sajūgti ar elektronu transportu, ir:
• “protonu pumpja” jeb konformāciju sūkņa mehanisms; vektoriālie protoni
• tāds red-oks reakciju telpiskais izkārtojums elektronu transporta ķēdē, ka membrānas iekšpusē notiek reducēšanās ar protonu saistīšanu, un/vai ārpusē – oksidēšanās ar protonu atbrīvošanu; skalārie protoni
Protondzinējspēka veidošanos atvieglo tas, ka protoni tieši iesaistīti daudzās red-oks reakcijās
![Page 5: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/5.jpg)
Fea33+- O -– O --Cub
2+
Fea33+- O -– O --Cub
2+
Brzezinski and Gennis (2008) J Bioenerg Biomembr 40:521–531
![Page 6: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/6.jpg)
Stacionārās kinētikas dati nesniedz informāciju par enzimātiskās reakcijas mehanisma elementārajiem soļiem, piemēram, elementārajām konstantēm
P
To ļauj priekšstacionārā kinētika, kas aplūko periodu, kurā [ES] nav vēl stabilizējies
– no pikosekundēm līdz sekundei
Kā tiek pētīti citohroma c oksidāzes elementārie reakcijas etapi?
![Page 7: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/7.jpg)
CuA
aa3
CuB
matrix
e-
Lai noskaidrotu elementāros reakcijas etapus, kuru laika mērogs ir mikrosekunžu
diapazonā, pielieto flash-fotolīzi, vienu no priekšstacionārās kinētikas metodēm
e-
e-e-
CO
cyt c oksidāzes preparātu anaerobos apstākļos reducē, izgāzē ar CO, kas cieši piesaistās binukleārajā centrā, un tad piesātina vidi ar skābekli
O2
O2
O2
O2
O2
O2
O2
![Page 8: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/8.jpg)
CuA
aa3
CuB
matrix
e-
Lai noskaidrotu elementāros reakcijas etapus, kuru laika mērogs ir mikrosekunžu diapazonā, pielieto flash-fotolīzi
e-
e-e-
CO
Tad ar ≈ 10 nanosekunžu lāzera impulsu (‘flash’) izraisa CO disociāciju no binukleārā centra, kam var sekot pārākumā esošā skābekļa piesaistīšanās
O2
O2
O2
O2
O2
O2
O2
![Page 9: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/9.jpg)
Notikumiem pēc skābekļa piesaistīšanās var izsekot spektroskopiski, ar mikrosekunžu izšķirtspēju:
560 nm – citohroma redox stāvoklis;
610 nm – peroksisavienojuma veidošanās;
570 nm – pH indikators fenolsarkanais, kura absorbcija pieaug, saistot protonu;
830 nm – CuA redox stāvokļa izmaiņas
Ballmoos et al. (2011) PNAS vol. 108: 11057–11062
![Page 10: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/10.jpg)
H+
CuA
aa3
CuB
matrix
e-
Vektoriālais H+ elektriski kompensē elektronu
Kā darbojas protonu sūknis?Elektronam nonākot hidrofobajā vidē pie binukleārā centra, kur vides dielektriskā konstante ir ļoti zema, tā nekompensētais negatīvais lādiņš rada enerģētiski nestabilu stāvokli
![Page 11: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/11.jpg)
CuB
a3
a
CuA
H+
matrix
H+
Binukleārajā centrā saistoties skalārajam protonam, tas ar savu elektrisko lādiņu sekmē vektoriālā protona disociāciju
Kā darbojas protonu sūknis?
![Page 12: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/12.jpg)
2e-
b o Cu
2H+ Periplazma
UQH2
UQ
2H+
2H++ 0.5O2 H2O
2H+
b595 d
b558
UQH2
UQ
2H+
2e- 2e-
2H++ 0.5O2 H2O
Citoplazma
Ne visas vara-hema oksidāzes ir cyt c oksidāzes, un ne visas terminālās oksidāzes pieder vara-hema grupai
piemēram, E. coli terminālās oksidāzes:
bo bd • abas oksidē ubihinolu, nevis cyt. c
• tikai bo pieder vara – hema oksidāžu grupai
• bo pumpē protonus, H+/e-=2
• bd nepumpē protonus, H+/e-=1; protondzinēj-spēku veido tikai skalārie protoni
![Page 13: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/13.jpg)
III komplekss, jeb bc1 komplekss, jeb ubihinol:cyt. c oksidoreduktāze
matrix
Ciklisks elektronu transports – red-oks reakcijas ar H+ saistīšanu un atbrīvošanu notiek pretējās membrānas pusēs
Ciklam ir 2 apgriezieni:
(1) QH2 pie ārējās virsmas oksidējas par Q, 2H+ tiek atbrīvoti starpmembrānu telpā, 1e- tiek pārnests uz c1 un 1e- caur cit. bl un bh uz Q pie membrānas iekšējās virsmas, to reducējot par QH., protonu piesaistot no matriksa puses
(2) tas pats, tikai pie iekšējās virsmas QH., piesaistot vēl vienu protonu no matriksa puses, reducējas par QH2
![Page 14: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/14.jpg)
I komplekss (NADH:UQ oksidoreduktāze) ir vislielākais elpošanas ķēdes komplekss
Red-oks kofaktori – FMN, vairāki (7) Fe/S centri (N1a, N1b, N2,...)
un kompleksā saistīts ubihinons
matrix
H+ translokācijas mehanisms – iespējams, protonu sūknis, kā
citohromoksidāzē: red-oks reakcijas pie N2 izsauc konformāciju
izmaiņas, kuras darbina H+ vai Na+ sūkni (daļai baktēriju)
![Page 15: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/15.jpg)
O2
.- O2
.-
Elpošanas ķēde ir aktīvo skābekļa formu avots
Elektronu pārnesēju autooksidācija: flavīni semihinons
Vienelektrona skābekļa molekulas reducēšana dod superoksīda anjonradikāli; divelektronu skābekļa molekulas reducēšana dod ūdeņraža peroksīdu
Četrelektronu skābekļa reducēšanā terminālajā oksidāzē rodas ūdens
![Page 16: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/16.jpg)
Fentona reakcija:
Oksidatīvo stresu šūnā rada skābekļa aktīvās formas, tām mijiedarbojoties ar brīvu (kofaktoros neiesaistītu) Fe2+
Divvērtīgā dzelzs viegli asociē pie proteīniem un DNS, un iesaistoties Fentona reakcijā izraisa oksidatīvus bojājumus
Aerobos augšanas apstākļos šie oksidatīvie bojājumi ir galvenais mutaģenēzes avots. Mutanti ar defektīvām DNS reparācijas sistēmām ir hipersensitīvi pret H2O2.
![Page 17: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/17.jpg)
Superoksīds un ūdeņraža peroksīds noārda dzelzs-sēra klasterus, kas ir daudzu fermentu prostētiskās grupas:
[4Fe – 4S]2+
[3Fe – 4S]+ + Fe3+
[3Fe – 4S]2+ + Fe2+
H2O2O2
.-
H2O2
Fentona reakcija
Fe3+ + HO.
Aizsardzības mehanismi: •šūnā pēc oksidatīvā stresa notiek strauja klasteru reparācija
•parādīts, ka oksidatīvā stresa apstākļos Fe-S klasterus saturoši enzīmi (piem. fumarāze un akonitāze Krebsa ciklā) tiek nomainīti pret izoenzīmiem, kas šādus kofaktorus nesatur
![Page 18: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/18.jpg)
Peroksidāžu reakcijas:
Katalāzes reakcija:
2 O2.- + 2 H+ O2 + H2O2
Superoksīddismutāzes reakcija:
Kas pazemina superoksīda un H2O2 līmeni šūnā?
![Page 19: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/19.jpg)
H2O2 izraisa S-S saišu veidošanos proteīnos.
Tioredoksīni un glutaredoksīni ir nelieli –SH grupas saturoši olbaltumi, kuri veic oksidētu makromolekulu redox reparāciju, reducējot to S-S saites. Glutations ir tripeptīds (Glu-Cys-Gly) ar līdzīgu funkciju
Savu SH grupu reģenerēšanai kā reducējošo ekvivalentu avotu tie izmanto NADPH.
NADPH ir svarīgākais elektronu donors šūnas aizsargsistēmām oksidatīvā stresa apstākļos.
![Page 20: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/20.jpg)
![Page 21: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/21.jpg)
H2O2 inhibē GAPDH un novirza katabolismu uz pentozofosfāta ceļu
![Page 22: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/22.jpg)
a member of the di-iron carboxylate group of proteins, characterized by an active site that includes two iron atoms coordinated by several highly conserved glutamate and histidine residues
Augos iespējams alternatīvs elektronu transports, kurš neietver I, III un IV kompleksus, un ģenerē siltumu, neveidojot protondzinējspēku
![Page 23: Elektronu transports mitohondriju elpošanas ķēdē: skābekļa reducēšana un protonu translokācija](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022061614/56813ba6550346895da4d716/html5/thumbnails/23.jpg)