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Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de
Hongos Entomopatógenos
Eduardo Francisco Esteves Vélez
Roberto Joao Cedeño Dávila
Proyecto de Graduación para obtener el título de
Ingeniero Agrónomo con el grado académico de
Licenciatura en Ciencias Agrícolas
Guácimo, Limón, Costa Rica 2008
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La Universidad EARTH certifica que el Proyecto de Graduación titulado
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
Presentado por
Eduardo Francisco Esteves Vélez
Roberto Joao Cedeño Dávila
Reúne las condiciones para obtener el título de Ingeniero Agrónomo
con el grado académico de Licenciatura
Decano de Asuntos Académicos
Manuel Cerrato, Ph.D.
Asesor
Edgar Alvarado, M.Sc.
Diciembre 2008
v
Dedicatoria
Dedico este trabajo a mi familia, quienes me han apoyado, no solo durante estos cuatro años de carrera,
si no durante toda mi vida. Para ellos con mucho cariño.
A mis padres, que con su sacrificio y dedicación me condujeron por el sendero del saber y me sirvieron
como ejemplo de perseverancia, sabiduría y ternura. A mis abuelos, que con sus consejos y cariño,
fueron libros abiertos para que aprendiera en cualquier momento de la escuela de la vida y aunque me
faltase su presencia física seguían conmigo. A mis hermanos, por crecer junto a mi y permitirme vivir con
ellos las alegrías y tristezas de nuestras vidas y por ser mis mejores amigos. A mis amigos que me
apoyaron en las buenas y en las malas y por sobre todas las cosas siguen siendo mis amigos. A la
agricultura y todas aquellas personas que trabajan en ella, por ser la ocupación más noble del ser
humano y por llevarla siempre en el corazón.
Agradecimiento
Quiero agradecer al profesor Edgar Alvarado, quien con su esfuerzo y dedicación, formó parte importante
en la consecución y éxito de este trabajo. También quiero agradecer el apoyo de la Dirección de
Investigación y Extensión de la Caña de Azúcar (DIECA), por haber contribuido gentilmente donando
cepas de hongos para este proyecto.
Primero a Dios, por haberme permitido caminar de su mano en este largo recorrido, en el que hoy, veo
cristalizado en una realidad tangible, mi ideal. En las páginas de este trabajo, en las que he ido
deshojando las enseñanzas recibidas día tras día, quedan aprisionados, mi amor y mi gratitud
imperecedera, como una pequeña recompensa a los desvelos y sacrificios de ustedes queridos padres. A
mis hermanos, familiares y amigos, que a la distancia estuvieron presentes, para apoyar siempre mi
decisión, que ahora me permitirá enfrentar los retos de la vida. A EARTH y a mi profesor asesor Edgar
Alvarado, por brindarme su ayuda y apoyo desinteresado, transmitiéndome lo mejor de sus
conocimientos y experiencias; reciban el fruto de la siembra que infatigablemente cultivaron. A todas las
personas que directa o indirectamente, colaboraron para que este proyecto alcance su feliz término.
vii
Resumen
La palma aceitera, Elaeis guineensis, es afectada por una enfermedad letal llamada
anillo rojo del cocotero, causada por el nematodo Bursaphelenchus cocophilus, cuyo
vector es el Rhynchophorus palmarum (Coleoptera: Curculionidae). Se evaluó la
mortalidad y rapidez de infección de ciertos hongos entomopatógenos sobre R.
palmarum. Una población de R. palmarum, colectada del campo con trampas de
feromonas sintéticas y cebos a base de caña de azúcar, se usó para realizar los
bioensayos. Los insectos en el laboratorio fueron colocados en recipientes plásticos de
9 mm de diámetro y 5,4 mm de profundidad con alimento a base de caña de azúcar. Se
evaluaron tres cepas de Beauveria bassiana, D0101, D0106 y D0205; de Trichoderma
asperellum se evaluó la cepa Ale; de Metarhizium anisopliae se evaluó la var.
anisopliae; y, también un testigo. Los insectos fueron expuestos a una dosis de 0,017 g
de esporas g-1 de insecto y se observaron diariamente, a partir de 24 horas de
inoculados. El período de observación por tratamiento fue de 21 días. Las cepas de B.
bassiana y M. anisopliae lograron mortalidad de los insectos del 90 % - 100 % en el
tiempo de observación. La cepa D0106 de B. bassiana y la cepa de M. anisopliae
fueron las más virulentas pues infectaron al 100 % de los insectos entre 6 días y 8 días.
Si estas cepas se comportan de igual manera en el campo, se considerarían como una
opción de control biológico para el manejo de R. palmarum.
Palabras clave: Elaeis guineensis, Rhynchophorus palmarum, hongos
entomopatógenos, Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, Trichoderma
asperellum.
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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Abstract
Red ring, caused by the Bursaphelenchus cocophilus nematode, is a lethal disease
affecting the oil palm tree, Elaeis guineensis. The red ring nematode parasitizes the
palm weevil, Rhynchophorus palmarum, which is attracted to trunks and acts as a vector
for B. cocophilus in uninfected trees. The susceptibility of R. palmarum to selected
strains of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, and
Trichoderma asperellum was evaluated through a bioassay under laboratory conditions.
Weevils from the field were obtained using pheromone and sugar cane baited traps for
use in the study. In the laboratory, weevils were kept in 9 mm diameter and 5,4 mm
depth plastic containers with sugar cane diet . B. bassiana’s strains D0101, D0205,
D0106; Trhichoderma asperellum´s strain Ale; and Metarhizium anisopliae var.
anisopliae were compared with an untreated control. Weevils were exposed to 0,017 g
conidia g-1 insect, and observed during 21 days. B. bassiana and M. anisopliae strains
outperformed all other strains causing 90 % to 100 % mortality. Time-mortality response
was significant for M. anisopliae var. anisopliae and B. bassiana D0106, since insect
mortality was observed between 6 days to 8 days. If these fungi perform similar under
field conditions, there is a potential use of entomopathogenic fungi for R. palmarum
management.
Key words: Elaeis guineensis, Rhynchophorus palmarum, entomopathogenic fungi,
Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, Trichoderma asperellum.
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Lista de Contenido Página
1 INTRODUCCIÓN 1 2 OBJETIVOS 5
2.1 OBJETIVO GENERAL .................................................................................... 5 2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS ........................................................................... 5
3 REVISIÓN DE LITERATURA 7 3.1 PALMA ACEITERA ......................................................................................... 7
3.1.1 Taxonomía y biología ........................................................................... 7 3.1.2 Clima .................................................................................................... 7 3.1.3 Suelos................................................................................................... 7 3.1.4 Proceso agroindustrial .......................................................................... 7 3.1.5 Importancia económica......................................................................... 8
3.2 RHYNCHOPHORUS PALMARUM.................................................................. 8 3.3 BIOLOGÍA R. PALMARUM ............................................................................. 9
3.3.1 Huevo ................................................................................................... 9 3.3.2 Larva..................................................................................................... 9 3.3.3 Pupa ................................................................................................... 10 3.3.4 Adulto ................................................................................................. 10 3.3.5 Daño................................................................................................... 10
3.4 ANILLO ROJO DEL COCOTERO O ANILLO ROJO/HOJA AMARILLA ....... 10 3.5 MÉTODOS DE CRÍA DE R. PALMARUM ..................................................... 11 3.6 MÉTODOS DE TRAMPEO ........................................................................... 11 3.7 HONGOS ENTOMOPATÓGENOS............................................................... 12
3.7.1 Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales) ............................... 13 3.7.2 Metarhizium anisopliae var. anisopliae (Ascomycota:
Hypocreales) ...................................................................................... 15 3.7.3 Trichoderma (Ascomycota: Hypocreales).......................................... 16
4 MATERIALES Y MÉTODOS 17 4.1 COLECTA DE INSECTOS ............................................................................ 17 4.2 EVALUACIÓN DEL CONTROL DE INSECTOS CON HONGOS EN EL
LABORATORIO ............................................................................................ 19 4.3 LOS HONGOS .............................................................................................. 19 4.4 EXPOSICIÓN DE LOS INSECTOS............................................................... 20 4.5 ANÁLISIS DEL EXPERIMENTO ................................................................... 20
5 RESULTADOS Y DISCUSIÓN 23 5.1 MORTALIDAD............................................................................................... 23 5.2 TIEMPO DE INFECCIÓN.............................................................................. 24
6 LISTA DE REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 29
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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1 Introducción
El desarrollo de combustibles a partir de fuentes renovables, ha impulsado el área de
cultivo de especies potenciales, como la palma aceitera. En Ecuador, la superficie
sembrada de palma supera las 200 mil hectáreas (ANCUPA, 2005) y tiene un
crecimiento sostenido.
La palma aceitera, Elaeis guineensis, es afectada por una letal enfermedad, llamada
anillo rojo de cocotero o también llamada anillo rojo/hoja pequeña (Coto y Saunders,
2004). Esta enfermedad es causada por el nematodo Bursaphelenchus cocophilus
(Cobb), el cual es diseminado por el picudo de la palma Rhynchophorus palmarum
(Coleoptera: Curculionidae). El control del picudo se lo ha estado realizando con
trampas, utilizando cebos impregnados de insecticida y, como atrayente, feromonas
(Mexzón et al., 1994). Existe muy poca información sobre el control biológico del
picudo. Prior y Arura (1985) utilizaron Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) Sorokin
como controlador del picudo negro de la palma Rhynchophorus bilineatus, en Papúa
Nueva Guinea, obteniendo resultados aceptables. Liu y Bauer (2006) realizaron
experimentos exitosos al tratar de controlar al barrenador esmeralda del fresno, Agrilus
planipennis (Coleoptera: Buprestidae), utilizando Beauveria bassiana (Balsamo)
Vuillemin (cepa GHA) y M. anisopliae. Asimismo, Badilla y Alves (1991) tuvieron éxito
en control del picudo de la caña Sphenophorus levis (Coleoptera: Curculionidae),
mediante el uso de B. bassiana (447) y B. brogniartii. Hasta el momento se han
realizado muy pocos estudios al respecto, por lo tanto se requieren más
investigaciones. Es imperioso contar con más información sobre agentes controladores
biológicos para este picudo, con el objetivo de suprimir la utilización de insecticida en
las trampas de captura, controlar más eficientemente el insecto y tener un manejo más
integral de la enfermedad. El control de R. palmarum se realiza, principalmente,
mediante un trampeo con feromonas y luego una intoxicación del insecto, al ingerir
cebo contaminado con insecticida. Existe muy poca información sobre otro tipo de
control u otro tipo de sustancias alternativas a los insecticidas.
Las regulaciones agrícolas están cambiando constantemente a favor del cuidado del
medio ambiente y es muy probable que en cualquier momento los insecticidas utilizados
para controlar este vector sean prohibidos. Esto traería graves complicaciones para el
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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sector palmero, ya que hasta ahora no se ha difundido otro método de control más
eficiente, ni productos alternativos a los insecticidas. El control de picudos es una
práctica imposible de obviar, ya que estos son vectores de una enfermedad letal para la
palma aceitera. Los insectos son capaces de desarrollar resistencia a los insecticidas,
sin embargo, hasta ahora no se ha reportado resistencias de insectos a productos
biológicos, como los hongos entomopatógenos. Si R. palmarum desarrollara resistencia
a los insecticidas comúnmente utilizados como el carbaril o el diazinón sería también un
gran problema, ya que las opciones de insecticidas cada vez se van reduciendo más.
Lo anteriormente mencionado indica claramente que, si el sector palmero continúa
dependiendo de los insecticidas para el control de R. palmarum, dentro de poco tendrán
un grave problema. Es por esto que se vuelve imperiosa la necesidad de buscar
alternativas al uso de insecticidas, las cuales puedan ser igual de efectivas y, a su vez,
más amigables con el ambiente. Hasta el momento no se ha encontrado un estudio que
muestre resultados del uso de entomopatógenos, sobre R. palmarum. Si se descubre
que algún entomopatógeno infecta a R. palmarum, se podría controlar biológicamente a
este insecto. Esta enfermedad causa millonarias pérdidas al sector palmero. Al ser la
palma aceitera un cultivo perenne, la pérdida de cada unidad de palma representa un
costo muy significativo, más aún cuando existen variedades que tardan hasta 3 años
para iniciar su producción y 8 años en alcanzar su pico productivo. La enfermedad de
anillo rojo puede disminuir las densidades poblacionales hasta un 60 % (Agrios, 1995),
por lo que fácilmente una empresa podría quebrar, por un brote de esta enfermedad. Al
controlar este insecto se disminuiría la diseminación de la enfermedad y por ende, las
pérdidas económicas también se reducirían. Se evitaría una pérdida de biodiversidad
en el agroecosistema, ya que este hongo actúa sobre determinados órdenes de
insectos y, dependiendo de la cepa, puede que actúe sobre ciertas familias, a diferencia
de los insecticidas, que por lo general, son de amplio espectro e incluso tóxicos para
animales y humanos. Los entomopatógenos son totalmente inofensivos hacia animales
de sangre caliente, por lo que el riesgo de intoxicación de trabajadores y animales, con
insecticidas, se reduciría considerablemente. Asimismo se evitaría la contaminación de
alimentos y mantos acuíferos, lo cual brinda seguridad a poblaciones cercanas al
cultivo. Hasta la fecha no se ha reportado que algún insecto genere resistencia hacia el
control biológico con hongos entomopatógenos.
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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Se espera que el conocimiento generado por este proyecto, pueda contribuir hacia un
cambio en el uso de insecticidas, por productos biológicos más amigables con el
ambiente y que tengan un nivel aceptable de control.
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2 Objetivos
2.1 Objetivo General Evaluar hongos entomopatógenos para el control de Rhynchophorus palmarum, para
que se reduzca la diseminación de la enfermedad de anillo rojo.
2.2 Objetivos Específicos • Evaluar alternativas biológicas al uso de insecticidas químicos sintéticos, en
el control de R. palmarum.
• Evaluar el efecto de Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae var. anisopliae y Trichoderma asperellum en el control de R. palmarum.
• Seleccionar cepas según rapidez de infección a R. palmarum.
• Determinar porcentaje de mortalidad de las cepas evaluadas en R. palmarum.
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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3 Revisión de Literatura
3.1 Palma Aceitera 3.1.1 Taxonomía y biología La palma aceitera es una planta monocotiledónea del orden Arecales, familia
Arecaceae, género Elaeis, especie guineensis. (Coto y Saunders 2004; Bayer 2008). Es
una planta monoica, perenne con una vida productiva aproximada de 25 años. Tiene
apariencia de árbol, con un tallo que puede llegar a medir hasta 25 m. Su sistema foliar
tiene un arreglo helicoidal compuesto por hojas largas y arqueadas con una longitud
entre 5 m y 8 m. La productividad promedio por hectárea, en Ecuador, es de 12
toneladas métricas de fruta fresca (ANCUPA, 2005). Las inflorescencias femeninas,
después de la polinización, darán origen a los frutos y racimos de la planta los cuales
son drupas que constan de un exocarpio, mesocarpio (que es de donde se obtiene el
aceite) e interiormente un endocarpio, que junto con la almendra constituyen la semilla.
Una vez que el racimo alcanza su madurez fisiológica puede pesar hasta 50 kg
(Raygada, 2005).
3.1.2 Clima El cultivo de palma aceitera requiere una precipitación pluvial entre 2000 mm y 4000
mm distribuidos uniformemente durante el año. Soporta hasta cuatro meses de sequía
sin presentar sensibles caídas en la producción. Requiere una temperatura que oscile
entre 20 °C y 34 °C con una humedad relativa entre 75 % a 85 %. Este cultivo es
altamente demandante de energía solar, requiere más de 2000 horas luz al año.
Soporta vientos entre 10 m s-1 y 25 m s-1 (Donough, 2008).
3.1.3 Suelos La palma aceitera se desarrolla en una amplia gama de condiciones agroecológicas
siempre y cuando se mantengan dentro del trópico húmedo. Requiere suelos con una
profundidad entre 50 cm y 100 cm y con una capa de materia orgánica de 5 cm a 20
cm. Este cultivo se desarrolla en bien suelos francos y francos arcillosos con topografía
plana o ligeramente ondulada (0° a 12°) (Raygada, 2005).
3.1.4 Proceso agroindustrial El procesamiento de los frutos de la palma de aceite se lleva a cabo en la planta
extractora. En ella se desarrolla el proceso de extracción del aceite rojo de palma y
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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palmiste. El proceso consiste en someter los frutos a un tratamiento térmico,
desgranarlos, macerarlos, extraer el aceite de la pulpa, clarificarlo y recuperar las
almendras del bagazo resultante. De las almendras se obtienen dos productos: el aceite
de palmiste y la torta de palmiste que sirve para alimentación animal. Finalmente el
cuesco resultante de la extracción del aceite de palmiste se utiliza para la elaboración
de carbón vegetal. Este carbón vegetal se considera amigable con el ambiente ya que
se produce a partir de un desecho agroindustrial y este carbono es fijado del medio
ambiente.
3.1.5 Importancia económica El cultivo de palma aceitera genera grandes divisas para países como Colombia,
Ecuador, Perú, Costa Rica. Además de generar miles de empleos directos e indirectos.
En Ecuador existen alrededor de 200 mil hectáreas de palma aceitera. Estas producen
aproximadamente 480 mil toneladas de aceite al año, de las cuales el 70 % son
destinadas para consumo interno y el 30 % restante es exportado a Europa y Estados
Unidos (ANCUPA, 2005). Debido a los altos precios del petróleo y en el afán de buscar
energías limpias que sean amigables con el medio ambiente, en los últimos años se ha
incrementado la demanda de biodiesel como fuente de energía alternativa. Esta
tendencia ha causado un sensible incremento en los precios del aceite rojo de palma y
por ende el precio de la tonelada de fruta fresca. Lo cual torna al negocio
económicamente más rentable y atractivo.
3.2 Rhynchophorus palmarum Comúnmente se llama picudo de la palma, pero también se conoce como picudo
americano de la palma, gualpa y gorgojo del cocotero. Las larvas pueden desarrollarse
en caña de azúcar, palma de coco, palma aceitera, palmito e inclusive en piña. Se
distribuye por toda América tropical. Las larvas perforan túneles a lo largo del tallo de la
planta, debilitándola y haciéndola susceptible a otras enfermedades. Si estas
perforaciones hicieran contacto con el meristemo apical, la planta moriría. Si existe una
gran infestación de larvas en el meristemo superior, la planta presenta el cogollo muerto
y las hojas marchitas. El daño en la planta es similar al que realiza el picudo Rhina
barbirostris, sin embargo los túneles de R. palmarum son más pequeños y las larvas
son más pequeñas. Los adultos son vectores del nematodo Bursaphelenchus
cocophilus, el cual causa la enfermedad de anillo rojo de cocotero o también conocida
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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como “anillo rojo – hoja pequeña”, en palma africana y palma de coco. Esta enfermedad
es mucho más importante que el daño físico que provoca el picudo (Coto y Saunders,
2004).
3.3 Biología R. palmarum 3.3.1 Huevo Tiene periodo de incubación entre 3 días y 5 días. El huevo mide alrededor de 2,2 mm
de longitud y 0,9 mm de ancho. Es ovalado y de color blanco crema brillante, en uno de
sus extremos tiene un mucílago oscuro, el cual es utilizado para adherirse a las paredes
donde es ovipositado. Por lo general son depositados en el cogollo o en tejidos frescos
y blandos (heridas) de la palma. La hembra perfora un agujero con el rostrum,
posteriormente se da la vuelta e inserta el ovipositor dentro del tejido afectado. Se
calcula que una hembra puede ovipositar cerca de 144 huevos a lo largo de su vida.
Mexzón et al., (1994) reportaron en un estudio que las hembras eran afectadas en la
oviposición por el nematodo Bursaphelenchus cocophilus. Las hembras que no fueron
afectadas por el nematodo, ovipositaban alrededor de 400 huevos en 30 días, mientras
que las afectadas ovipositaban cerca de 40 huevos en el mismo periodo de tiempo.
3.3.2 Larva El periodo larval dura entre 40 días y 70 días. La larva mide 76 mm de longitud y 25 mm
de ancho, con un peso que oscila entre 9 g a 39 g. Presenta 13 segmentos arrugados,
además realiza de 8 mudas a 9 mudas. Las primeras mudas son de color blanco crema
y la cabeza es semi- esclerotizada de color caoba claro. Mientras que las mudas
posteriores son de color amarillo tenue y la cabeza totalmente esclerotizada. En cada
segmento tienen un par de muñones musculares, además presentan manchas laterales
amarillas y pronoto grande. En el octavo y el noveno segmento dorsal existen manchas
negras irregulares y seis cerdas. El último segmento tiene forma de espátula
esclerotizada, dorsalmente es cóncavo y ventralmente convexo. Las larvas previas a la
pupación cesan de alimentarse por 35 horas y empiezan a formar un capullo con fibras
de palma aceitera, en el cual se introduce. Según Coto y Saunders (2004) presenta un
estadio de pre-pupa el cual dura entre 4 días y 12 días. Sin embargo no existen
mayores especificaciones con respecto a este estadio.
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3.3.3 Pupa El estado de pupa tiene una duración entre 16 días y 30 días. La pupa mide 80 mm de
longitud y 35 mm de ancho. Es de color pardo y por lo general se encuentra en la
periferia del tallo, cogollo o en troncos en descomposición (Coto y Saunders, 2004).
3.3.4 Adulto El periodo adulto dura entre 40 días y 90 días. El insecto mide alrededor de 30 mm y 44
mm de longitud y entre 8 mm y 15 mm de ancho. Es de color negro opaco. La cabeza
tiene un pico prolongado (rostrum) ligeramente curvado. Las antenas son geniculadas y
terminan en mazo. El protórax es aplanado y liso en el dorso, hexagonal y delgado a
medida que avanza hacia la cabeza. El insecto está cubierto por muchas setas cortas y
densas que le dan una textura aterciopelada. El meso y metatórax invaden la región
abdominal y los dos primeros segmentos abdominales son cortos. Presenta tres pares
de patas cortas y fuertes con fémures robustos, los cuales en conjunto con la tibia
tienen una faja de pelillos. El abdomen es voluminoso, los élitros son lisos y tienen
estrías. La hembra se diferencia del macho porque tiene el rostrum más largo y
delgado con una leve curvatura distal. Además la hembra tiene rostrum completamente
liso. Según Chinchilla et al., (1990) encontraron en Honduras insectos que presentaban
una longitud rostral menor en la hembra que en el macho. Esto puede deberse a que
son poblaciones diferentes y al tamaño de la muestra. El insecto adulto se encuentra en
los ductos larvales únicamente cuando acaba de emerger de la pupa, después se ubica
en el cogollo y axilas de las hojas (Coto y Saunders, 2004).
3.3.5 Daño El daño causado por el insecto inicia cuando la hembra deposita los huevos en la
planta, posteriormente las larvas barrenan el tallo debilitándolo. Si las perforaciones
entran en contacto con el punto de crecimiento de la palma, esta muere. El daño
principal que causa el Rhynchophorus palmarum cuando es adulto es que es vector del
nematodo Bursaphelenchus cocophilus, causante de la enfermedad conocida como
síndrome de anillo rojo en palma aceitera y coco (Coto y Saunders, 2004).
3.4 Anillo Rojo del Cocotero o Anillo Rojo/Hoja Amarilla Según Agrios (1998) la enfermedad de anillo rojo de cocotero se desarrolla rápidamente
en palmas jóvenes de 3 años a 10 años de edad. A estas edades, las palmas pueden
morir en cuestión de 3 meses después de la infección. Las pérdidas pueden ser del 10
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% al 15 % en vivero y afecta también a palmas de coco y de dátiles. En plantaciones
muy infestadas las pérdidas pueden ser de hasta el 60 %. El principal síntoma de la
enfermedad es la coloración verde amarillenta y secado progresivo de las hojas
intermedias, así como también el doblamiento del pecíolo de las hojas cerca del tallo.
Además se observa un anillo pardo rojizo localizado a 7 cm - 8 cm de la periferia del
tallo y de 3 cm - 5 cm de ancho. Este síntoma se puede apreciar al realizar un corte
transversal del tallo. Otro síntoma es que los foliolos presentan corrugaciones similares
a la deficiencia de boro. Para combatir la enfermedad se deben eliminar las fuentes de
inóculo, así como la reducción de la población adulta del vector (Coto y Saunders,
2004).
3.5 Métodos de Cría de R. palmarum Varios métodos de cría se han desarrollado para este insecto. En 1965 Hagley utilizó
tejido tierno de palma de coco para mantenerlo vivo. En 1968 Quezada usó tallos de
papaya, Carica papaya, en 1989 Giblin-Davis y sus colaboradores desarrollaron una
dieta de caña azucarera, Saccharum officinarum, y piña, Ananas comosus, y en 1993
Zagatti y sus compañeros de estudio hicieron una dieta con cereales, agar y
suplementos vitamínicos. Con esta última pudieron desarrollar larvas y adultos del
insecto (Mexzón et al., 1994). Mexzón et al. (1994), en su estudio, ubicaron insectos
adultos en jaulas en forma individual y los alimentaron diariamente con 25 g de vaina de
hoja de palma de coco. En dicho estudio el consumo diario de alimento fue de 1,61 g en
hembras y 1,94 g en machos. Se utilizaron otros tejidos como caña de azúcar y palma
aceitera. La palma perdió frescura a las pocas horas y esto motivó a los insectos a dejar
de comer, en cambio la caña de azúcar permaneció atractiva y fue comida y destruida
casi en su totalidad. El problema de la caña fue que el tejido fue muy destruido, lo cual
dificultó poder obtener el dato de consumo. La vaina de hoja de palma de coco fue muy
atractiva y no fue dañada con facilidad, lo cual facilitó la toma de datos.
3.6 Métodos de Trampeo Para reducir las poblaciones de este vector se utilizan algunos métodos de trampeo. El
método más utilizado es el uso de trampas elaboradas con baldes plásticos con
capacidad de 50 L. Estos baldes tienen aperturas en el fondo para drenar los lixiviados
y otra en la tapa para permitir la entrada del picudo, los cuales son atraídos por una
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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feromona de agregación que es colgada en la tapa del envase. Dentro del balde son
colocados tallos de caña de azúcar impregnados con insecticida. Una vez que la trampa
está lista, es colgada en los tallos de palma aceitera a una altura de 2,5 m y a una
distancia entre trampas de 100 m. Los tallos de caña de azúcar deben de ser
cambiados cada 7 días para que la trampa no pierda su capacidad atrayente. También
pueden usarse trozos de tallo de cocotero con baldes o troncos de palma aceitera a los
que se les extrae la parte central. A estos troncos se les agrega caña de azúcar fresca
impregnada con insecticida. Al no usar feromonas, la captura de picudos será
sensiblemente menor (Coto y Saunders, 2004). Según Sánchez et al. (2005) se pueden
utilizar baldes o recipientes de 20 L con ventanas en la parte superior, para permitir el
ingreso de los picudos. En el fondo del balde se colocan de 4 a 6 capas de trozos de
caña, impregnados con carbaril o malation, a una concentración del 1 %. El área de
atracción de la trampa es de aproximadamente 50 m, por lo que estos autores
recomienda dos trampas por hectárea. Para efectos de este proyecto no se utilizó el
insecticida, ya que el objetivo era capturar y mantener los picudos vivos. Existe otro
método de trampeo que presentó buenos resultados, este consiste en utilizar tallos de
caña de azúcar de una longitud de 30 cm. Los tallos de caña de azúcar son colocados
en forma transversal y longitudinal formando una estructura de varios pisos. Estos tallos
deben ser cambiados cada 5 días. Una vez que la estructura está formada, es envuelta
con un saco de yute o fibra, dejando aberturas a los lados para permitir la entrada de
los insectos. La estructura envuelta con el saco es colocada sobre una base a una
altura de 1,5 m, para palma aceitera y en el caso del palmito, se pueden dejar sobre el
suelo bajo la sombra de la planta. Posteriormente los insectos son recogidos
diariamente para minimizar fugas. Ferreira et al. (2003) evaluaron, en Brasil, diferentes
fuentes atrayentes como trampas para R. palmarum y determinaron que la fuente más
efectiva fue caña de azúcar + feromona + acetato de etilo y la segunda más efectiva fue
caña de azúcar + feromona.
3.7 Hongos entomopatógenos El primer hongo entomopatógeno reportado perteneció al género Cordiceps.
Actualmente se conocen más de 700 especies que infectan a miles de insectos y
ácaros, además de su capacidad para desarrollarse en diferentes hábitats. Los hongos
difieren de los otros patógenos para causar infección, pues no necesita ser ingerido por
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
13
el insecto. Los hongos tienen la capacidad de invadir al huésped penetrando su
cutícula. Una vez el hongo ha llegado huésped potencial se inician una serie pasos que
pueden llevar a una reacción compatible o incompatible. Cuando la reacción es
compatible es porque ha habido un reconocimiento entre hongo y la cutícula del insecto
y se presenta una adhesión al tegumento, luego la germinación del conidio, seguido por
la penetración dentro de la cutícula y la colonización del hemocele. En el momento de
estar el hongo colonizando el hemocele habrá disminución de nutrientes o inanición, lo
que provoca la muerte. El hongo ingresa a través del tegumento usando hifas
filamentosas, pero dentro del hemocele se transforma en cuerpos de hifas como de
levadura o protoplastos que proliferan en nuevos crecimientos. Después el hongo
nuevamente cambia a fase filamentosa e invade tejidos y órganos. El hongo
posteriormente sale a través de la cutícula y micelios externos cubren al huésped. En
condiciones que no son favorables de humedad y temperatura, el hongo podría formar
estructuras de descanso dentro del cadáver (Castrillo, 2005). Los hongos, también,
producen metabolitos secundarios, derivados de varios pasos en la formación de los
metabolitos primarios, de los cuales algunos poseen propiedades insecticidas. Los
hongos que los poseen producen la muerte más rápidamente que los que no. El grupo
más importante de hongos entomopatógenos son los Hyphomycetes, en el cual se
encuentran los géneros más importantes como Beauveria, Verticilium, Metarhizium,
Hirsutella y Paecilomyces (Fernández-Larrea, 2002). Sin embargo estos hongos han
sido reclasificados y según NCBI (2008) ahora pertenecen al orden de los Hypocreales.
3.7.1 Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales) Es un hongo entomopatógeno que fue descubierto en 1835 y es ampliamente utilizado
para el control de insectos. Pertenece al orden Hypocreales y a la familia
Clavicipitaceae (NCBI, 2008). Tiene los conidióforos agrupados en forma apiñada, sus
conidias son lisas y transparentes. Presenta un color blanco cremoso. El hongo tiene un
mecanismo de acción invasivo, las esporas invaden la superficie del huésped
específicamente la cutícula. En la penetración de la cutícula participan mecanismos
físicos y químicos. El mecanismo físico es la presión ejercida por la estructura de
penetración, rompiendo áreas esclerosas y membranosas de la cutícula. Por otra parte,
el mecanismo químico consiste en la acción enzimática de proteasas, lipasas y
quitinazas, las cuales provocan descomposición de la zona de penetración. Una vez
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
14
que la hifa penetra se ensancha y se ramifica por todos los tejidos del insecto. Cuando
el hongo se desarrolla dentro del insecto causa destrucción de los tejidos, pérdida de
sensibilidad, incoordinación de movimientos y finalmente la muerte del mismo. Después
de que el hongo haya infectado al insecto, el micelio sale a través de las articulaciones
dando una apariencia algodonosa. Una vez muerto el insecto, el hongo produce un
antibiótico llamado oosporeina para combatir las bacterias intestinales. Este hongo tiene
la ventaja de que no es nocivo para la salud humana, no daña el medio ambiente y
además es permitido usarlo en el programa de manejo de plagas para producción
orgánica (FAO, 2003). B. bassiana está relacionado con alrededor de 200 especies de
insectos hospederos, entre estos hospederos se encuentran especies de coleóptera,
lepidóptera, isóptera, hemíptera y díptera (Dubois et al., 2004; Klinger et al., 2006;
Toledo et al., 2007; Lord, 2007; Shapiro-ilan et al., 2008). Cabe mencionar que este es
uno de los pocos hongos que puede parasitar curculiónidos (Marcano y Morales, 1998;
Delbene, 2005; El-Sufty et al., 2007). Para inocular el insecto con el hongo existen
varios métodos como: aspersión de una suspensión del hongo, inmersión en una
suspensión de hongo, aplicación de esporas en seco y aplicación de esporas y sustrato
de esporas en seco. Marcano y Morales (1998) utilizaron como metodología la
aspersión de suspensión de hongo y la inmersión en suspensión (cinco minutos), para
el control del picudo de la batata Cylus formicarius, determinando que el método de
inmersión fue el más efectivo para este caso. El-Sufty et al. (2007) utilizaron B.
bassiana para el control de Rhynchophorus ferrugineus en palmas de dátiles,
obteniendo resultados satisfactorios aplicando suspensiones con 5 x 107 conidios mL-1,
5 L de suspensión por palma, con una mortalidad en campo entre el 13,7 % y el 19,2 %,
durante tres semanas después de la aplicación, mientras que utilizando 40 g de polvo
por palma con 5 % de esporas, obtuvieron mortalidades de hasta 8,9 % durante tres
semanas después de la aplicación. Durán et al. (2004) evaluaron el efecto de varios
fungicidas sobre la germinación y crecimiento de B. bassiana en un cultivo de chile
dulce o pimiento Capsicum annuum, determinando que fungicidas como Benlate,
Curzate, Acrobat, Daconil, Antracol y Ditharie afectan significativamente a este hongo,
mientras que Aliette (fosetyl-Al), Previcur (propamocarb) y Kocide (oxicloruro de cobre)
no afectaron significativamente el crecimiento y la germinación.
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
15
3.7.2 Metarhizium anisopliae var. anisopliae (Ascomycota: Hypocreales) Es junto a B. bassiana el hongo más utilizado en control biológico, esto debido a la gran
cantidad de investigaciones sobre producción masiva, formulación y almacenamiento.
Pertenece al orden Hypocreales y a la familia Clavicipitaceae (NCBI, 2008a). Fue
aislado en 1879 por el científico ucraniano Elías Metchnikoff, el cual dirigió las primeras
investigaciones para la infección de Anisoplia austriaca mediante el uso de Metarhizium
anisopliae. Presenta el mismo mecanismo de B. bassiana para penetrar e infectar
insectos. Posee un amplio espectro de acción ya que puede infectar a una gran
cantidad de insectos, además de tener la facilidad para crear epizootias, lo cual
favorece su diseminación. Se produce principalmente sobre productos y desechos
agrícolas como cascarilla de arroz y arroz. Se puede aplicar de forma granulada (en
seco) o realizar una suspensión de esporas en agua, sin embargo dicha suspensión no
debe aplicarse después de 4 horas de preparada, ya que para este momento los
conidios habrán germinado y su efectividad habrá disminuido. Se puede conservar
hasta 3 meses a 20 °C granulado o en polvo. En Brasil se utiliza este hongo para el
control de la mosca prieta de la caña de azúcar Mahanarva posticata, en África se ha
utilizado contra diferentes especies de salta hojas (Fernández-Larrea, 2002).
Metchnikoff y Krassilstchik desarrollaron en Ucrania (1880-1888) las primeras
instalaciones para la producción de M. anisopliae para ser utilizado contra el gorgojo de
la remolacha azucarera Cleouns puctiventris. En Brasil existen más de 200 mil ha año-1
de caña de azúcar y pastos que son aplicadas con M. anisopliae para el control de
salivazo y otras plagas (Lecuona, 2002). Este hongo ha demostrado ser muy efectivo
contra insectos del orden coleóptera (Dubois, 2004; Kabaluk y Ericsson, 2007; Erisson
et al., 2007). Según Sánchez et al. (2005) Rhynchophorus palmarum es susceptible
tanto a B. bassiana como a M. anisopliae al someterlos a una suspensión de esporas
de los hongos, por aproximadamente 10 segundos; los picudos mueren en su totalidad
entre los 8 días y 15 días, asimismo estos autores aseguran que los picudos infectados
copularán e interactuarán con otros picudos, infectándolos y distribuyendo el hongo.
Bautista y González (2005) utilizaron tres dosis de M. anisopliae sobre Aeneolamia spp.
en caña de azúcar, evaluando 5 x 1011 conidios ha-1, 1 x 1012 conidios ha-1 y 1,5 x 1012
conidios ha-1, obteniendo mortalidades de 80,8 %, 96,4 % y 98,7 % respectivamente.
Quesada et al. (2006) evaluaron este hongo aplicando suspensiones e inmersiones
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
16
para el control de la mosca del mediterráneo Ceratitis capitata, utilizando
concentraciones entre 1 x 105 conidios mL-1 y 1x 108 conidios mL-1, obteniendo
mortalidades entre 30 % y 100 % y reducciones en la fertilidad de hasta un 45,9 %. Por
otro lado, Kabaluk y Ericsson (2007) encontraron que M. anisopliae fue efectivo para el
control del gusano de alambre Agriotes obscurus, al ubicar los insectos en un suelo con
una concentración de 1 x 106 conidios g-1. Estos autores aseguran que obtuvieron
mortalidades significativas en suelos con una temperatura de 18 °C y, por lo menos,
48 horas después de la aplicación. También demostraron que, conforme disminuye la
temperatura, se reduce la efectividad del entomopatógeno.
3.7.3 Trichoderma (Ascomycota: Hypocreales) Es un hongo entomopatógeno imperfecto ampliamente usado para el control de hongos
aéreos y hongos del suelo. Pertenece al orden Hypocreales y a la familia Hypocreaceae
(NCBI, 2008b). Es cosmopolita y se encuentra en forma natural en todos los suelos. Su
estructura de esporulación son conidios de color verde y sus estructuras de resistencia
son clamidosporas, las cuales son de 5 veces a 10 veces más grandes que los conidios
por la acumulación de lípidos. Son de forma cilíndrica globosa. Este hongo se desarrolla
en temperaturas que oscilen entre 30 °C y 38 °C, aunque la temperatura óptima es
31 °C. Los hongos del género Trichoderma consumen otros hongos, materia orgánica,
insectos y algunos nutrientes que son secretados por las raíces. La cantidad de
nutrientes que consuma el hongo influye en la densidad del micelio, mas no en el
crecimiento. El principal mecanismo de acción de este hongo es micoparasitismo, este
hongo envuelve al hongo a ser atacado, penetrando sus células y causándole daños
como: alteraciones de la pared celular; retracción de la membrana plasmática de la
pared y desorganización del citoplasma. Cuando el hongo es aplicado al suelo, este
entra en simbiosis con la raíz, este se alimenta de los exudados de las raíces y las
raíces son protegidas por el hongo. T. harzianum actúa como barrera impidiendo la
entrada de patógenos a la raíz. Cuando actúa sobre insectos, este utiliza algunas
enzimas como proteasas, lipasas y quitinazas, penetrando la cutícula e infectándolos.
(FAO, 2003). Arango (2008) encontró en Colombia resultados prometedores en control
de la hormiga arriera (Atta spp.).
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
17
4 Materiales y Métodos
El estudio de bioensayo de este trabajo se realizó en el Laboratorio de Recursos
Naturales y del Ambiente de la Universidad EARTH, mientras que los insectos usados
como material experimental fueron colectados de poblaciones naturales, en esa misma
Universidad. Este trabajo tuvo como propósito determinar la mortalidad y rapidez de
infección que podrían causar ciertas cepas de hongos entomopatógenos contra R.
palmarum. Este trabajo se realizó de junio a septiembre de 2008.
4.1 Colecta de Insectos Se obtuvo una población experimental de R. palmarum, la cual fue capturada de
plantaciones tanto comerciales como experimentales de la Universidad EARTH. Estas
plantaciones se encuentran a una altitud de 80 msnm., con temperatura máxima
promedio de 30 °C y mínima promedio de 20 °C, precipitación pluvial media anual de
3200 mm y humedad relativa de 85 %, por lo que se ubican dentro de la zona de vida
bosque muy húmedo premontano, transición basal y bosque húmedo tropical transición
a prehúmedo. El método de captura fue probado una vez por semana, durante dos
meses, hasta determinar la forma de captura masiva que permitiera tener la población
necesaria para los bioensayos. Una vez determinada la forma más eficaz de captura, se
procedió al trampeo para obtener la población de los insectos para el estudio de
laboratorio. Los especímenes de estudio fueron capturados a través de trampas de
feromonas sintéticas y trampas con cebos naturales. Las trampas de feromonas fueron
construidas utilizando envases plásticos de 3,78 L de capacidad, a los que se le
abrieron dos ventanas para el ingreso de los insectos. En la parte superior, en donde va
la tapa, se colocó una burbuja de membrana plástica conteniendo el atrayente 2-metil1-
4-hidroxi-5-heptenol, conocido como Rhyncholure®. Dentro del recipiente se colocó un
trozo de caña de azúcar de 10 cm de largo que le sirviera de atrayente y alimento a los
insectos (Figura 1).
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
18
Figura 1. Trampa para captura de R. palmarum usando feromona sintética. Mientras que las trampas naturales consistieron en un apilamiento de pedazos de caña
de azúcar, de 20 cm de largo, colocados dentro de un costal de polipropileno de malla
de 1 cm (Figura 2).
Figura 2. Trampa para captura de R. palmarum usando cebo natural. Las trampas fueron ubicadas tanto en plantaciones de palmito, Bactris gasipaes, como
en plantaciones de palma aceitera, E. guineensis, por un periodo de dos días. Al
término de este periodo se revisaron las trampas y se colectaron los insectos. Los
insectos capturados se transportaron al laboratorio en cajas de cartón, guardadas en un
termo con hielo seco a temperatura de (17±1) °C. Quince trampas de cada una se
colocaron en la plantación de palmito y de la misma manera, 15 trampas de cada tipo
se ubicaron en la plantación de palma. El tiempo de colecta y transporte del campo al
laboratorio fue de fue de 1,5 horas.
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
19
4.2 Evaluación del control de insectos con hongos en el laboratorio Una vez llevados los insectos al laboratorio, estos fueron lavados con agua destilada,
con el objeto de eliminar contaminación de tierra y otros materiales, procurando dejar a
cada espécimen limpio de materias extrañas. Luego los insectos fueron ubicados en
recipientes de plástico de 9 mm de diámetro y 5,4 mm de profundidad, a cuya tapa,
también del mismo material, se le hizo un agujero en el centro, el cual fue cubierto con
tela de queso. La motilidad fue observada al momento de la colocación en los
recipientes y nuevamente observada a las 24 horas. Esto con el propósito de eliminar
ejemplares que manifestaran síntomas de conducta anormal, asegurando que todos
tuvieren vigor natural, típico de los insectos silvestres. La conducta de motilidad de los
insectos era muy evidente al tratar de escapar de la cápsula que les contenía, aún en
presencia de alimento, cuando los mismos eran expuestos a luz artificial.
4.3 Los hongos Los tratamientos evaluados en el bioensayo fueron seis. Se utilizaron tres cepas de
Beauveria bassiana, una de Trichoderma asperellum, una de Metarhizium anisopliae
var. anisopliae y un testigo absoluto. Las cepas de B. bassiana fueron las siguientes:
cepa D0101, cepa D0205 y cepa D0106. La cepa de T. asperellum fue Ale y también se
utilizó M. anisopliae. Todos los hongos fueron inoculados en medios de papa-dextrosa-
agar y se verificó que estén viables (Cuadro 5). De cada cepa se inoculó la dosis de
0,017 esporas g-1 de insecto. La cepa de B. bassiana D0101 fue aislada de la zona de
Naranjo, Costa Rica, en el año de 2001, de especímenes de broca del cafeto
Hyphotenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae). La cepa D0205 y la cepa Navarro
D0106, de B. bassiana, fueron aisladas en la zona de Orosi, Costa Rica, en el año de
2005 y 2006, respectivamente. Estas dos últimas cepas también fueron aisladas de
especímenes de H. hampei y todas provienen de formulaciones comerciales
BEAUVEDIECA, producidas por la Dirección de Investigación y Extensión de la Caña
de Azúcar (DIECA). Las cepas de T. asperellum y de M. anisopliae son formulaciones
comerciales de Plantisana S.A., Aurora, Heredia, Costa Rica. La cepa de M. anisopliae
fue aislada de trips (Thysanoptera: Thripidae) en la provincia de Cartago, Costa Rica.
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
20
4.4 Exposición de los Insectos Todas las cepas se usaron en formulaciones secas con sustrato de arroz, de tal forma
que todas llevaron el mismo procedimiento. El hongo se cernió con un tamiz # 850
(Micro Meter USA Standard Testing Sieve) para obtener las esporas. Luego se pesó y
se colocaron las esporas en un recipiente en donde se introdujeron los insectos, a
razón de 0,017 g de esporas g-1 de insecto. Los insectos en el medio fueron movidos
de manera suave procurando que las esporas cubrieran sus cuerpos y luego se les dejó
por espacio de 5 minutos. En el caso del tratamiento testigo se procedió de la misma
manera pero sin inóculo. Posteriormente los insectos contaminados fueron colocados
en los recipientes plásticos. En cada envase se colocaron cuatro insectos con un
pedazo de caña de azúcar de 8 g. El alimento se cambió cada tres días. Después de
inocular los picudos, se observaron diariamente, a partir de 24 horas de inoculados. Se
midió la rapidez con que el hongo inducía síntomas de reducción de la motilidad del 90
% al 100 %, para lo cual se lo consideró infectado. También se cuantificó el porcentaje
de mortalidad de los insectos en cada tratamiento. El período de observación por
tratamiento fue de 21 días. A los insectos muertos se les hizo una necropsia para
verificar la presencia de micosis. Paralelamente a la inoculación de insectos, se
inocularon las cepas en cajas de Petri en medio de papa-dextrosa-agar con ácido
láctico al 0,25 %, para determinar velocidad de crecimiento in vitro y verificar la
viabilidad de los conidios. El conteo de esporas para el bioensayo se hizo a través de
un hematocímetro, cámara de Neubauer. El procedimiento utilizado fue de pesar 0,05 g
de esporas, que se disolvieron en 50 mL de agua destilada en un Erlenmeyer. A esta
solución se le agregó 0,05 % de Tween 80 y se agitó durante un minuto para dispersar
las esporas, usando un agitador Vortex-Mixer Modelo VM-2000. Se tomó una muestra
de la suspensión y se colocó en la cámara de Neubauer y se contaron las esporas en el
campo, para lo cual se realizaron cinco repeticiones para obtener un promedio.
4.5 Análisis del Experimento El diseño experimental utilizado fue de un completo azar, con seis tratamientos y cuatro
repeticiones (Cuadro 1). Para la interpretación de este estudio se realizó un análisis de
varianza y prueba de comparaciones múltiples de Tukey, para determinar la mortalidad.
Mientras que para comparar la rapidez de infección se estimaron, mediante análisis de
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
21
regresión, las pendientes de las rectas de ajuste entre el porcentaje de infección y el
tiempo. Para ello se usó el paquete InfoStat Statistical Sofware 2004®.
Cuadro 1. Tratamientos y formulaciones del experimento.
Tratamiento Dosis
Beauveria bassiana D0101 0,017 g de espora g-1 de insecto
Beauveria bassiana D0205 0,017 g de espora g-1 de insecto
Beauveria bassiana D0106 0,017 g de espora g-1 de insecto
Trichoderma asperellum Ale 0,017 g de espora g-1 de insecto
Metarhizium anisopliae 0,017 g de espora g-1 de insecto
Testigo 0,017 g de espora g-1 de insecto
Cuadro 2. Concentración de conidios de cepas de hongos evaluadas en laboratorio contra R. palmarum.
Entomopatógeno Esporas g-1
Beauveria bassiana D0101 9,3 x 107
Beauveria bassiana D0205 9,2 x 108
Beauveria bassiana D0106 7,9 x 108
Trichoderma asperellum Ale 5,3 x 108
Metarhizium anisopliae 4,9 x 108
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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5 Resultados y Discusión
5.1 Mortalidad Los resultados de este estudio demuestran que adultos de R. palmarum mostraron
susceptibilidad B. bassiana y M. anisopliae al ser expuestos directamente a las
formulaciones en polvo de esos entomopatógenos. Las cepas B. bassiana D0101,
D0106, D0205 fueron tan efectivas como la cepa M. anisopliae, las cuales no mostraron
diferencias significativas entre sí (Alfa<0,05) (Cuadro 3). Sin embargo, la cepa de T.
asperellum se comportó de similar manera que el testigo, de tal forma que no hubo
asocio entre el hospedero y el parásito en este caso (Figura 2). La cepa de M.
anisopliae, aunque no difiere de las cepas de B. bassiana, fue consistente durante todo
el estudio para provocar mortalidad, no obstante la fuente de accesión no proviene de
coleópteros, como sí las de B. bassiana. Estos hongos han demostrado poseer
patogenicidad y virulencia para R. palmarum en condiciones de laboratorio, por lo que
el siguiente paso sería hacer evaluaciones de campo para determinar la mejor forma de
exponer los hongos a los especímenes de esta especie. Dado al incremento constante
de precios de insecticidas químico sintéticos derivados del petróleo, que deben ser
importados en la mayoría de países productores de palma aceitera, estos hongos
tienen un potencial como componentes de programas de manejo de plagas. Aún más,
también en el cultivo del palmito, debido a que el R. palmarum se ha transformado en
una especie plaga para este cultivo. Dada la demanda urgente del medio, las cepas
evaluadas pueden ser utilizadas de inmediato, tanto en sistemas convencionales de
producción como orgánicas, dado a que todas tienen registro de uso en Costa Rica. Y,
eventualmente, podrían registrarse en otros países de la zona productora de estos
cultivos.
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
24
Cuadro 3. Porcentajes de mortalidad demostrada por R. palmarum al ser expuesto a hongos entomopatógenos.
Tratamiento Media E.E. n LI (95 %) LS (95 %)
B. bassiana D0101 57,36 8,33 21 39,99 74,73
B. bassiana D0205 54,16 8,96 17 35,16 73,15
B. bassiana D0106 60,68 9,4 16 40,64 80,72
T. asperellum Ale 6,9 0,81 21 5,22 8,59
M. anisopliae 64,55 11,13 11 39,75 89,34
Testigo 5 0,98 21 2,96 7,04
B.bassiana D0101B.bassiana D0205
B.bassiana D0106T.asperellum Ale
M.anisopliaeTestigo
0
20
40
60
80
100
Mor
talid
ad (%
) a aa
a
b b
Figura 2. Mortalidad causada por entomopatógenos a poblaciones de R. palmarum en condiciones de laboratorio. Columnas con la misma letra no manifiestan deferencias (Alfa<0,05; DMS=28,88. InfoStat Sofware).
5.2 Tiempo de Infección Los tratamientos a base de B. bassiana y de M. anisopliae no presentaron diferencias
significativas en cuanto al porcentaje de mortalidad; sin embargo, sí hubo diferencias
con relación al tiempo de infección. M. anisopliae y B. bassiana D0106 fueron las más
eficientes con relación al tiempo. M. anisopliae fue el que demostró mayor rapidez para
infectar a los insectos, conjuntamente con la cepa B. bassiana D0106, quienes no
manifiestan diferencias significativas entre ellos, según comparación de los intervalos
de confianza (16,66; 28,49) y (13,51; 19,22) respectivamente. De igual manera se
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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comportaron en pruebas in vitro en medios de papa-dextrosa-agar, siendo estas dos
cepas las que lograron un mayor porcentaje de esporulación a los 6 días (Cuadro 5). La
mortalidad de más del 90 % de los especímenes se presentaba entre el sexto y octavo
día de exposición. Esta característica es de suma importancia debido al tiempo de vida
de los adultos de R. palmarum, ya que si el control no es rápido, el picudo tiene tiempo
suficiente para cumplir su función de vector. Mientras que el tratamiento B. bassiana
D0101 fue el más lento en provocar infección (5, 93; 9,61). El tratamiento B. bassiana
DO205 fue más rápido en infectar (10,96; 13,29) que B. bassiana D0101, pero
ligeramente. En todos los casos la bondad de ajuste fue de R2 >0,85, de tal manera que
la relación lineal entre el porcentaje de infección y el tiempo es alta (Figura 3a). En
Cuadro 4 se aprecian los valores de las pendientes, los intervalos de confianza de la
pendiente y del coeficiente de determinación lineal (R2). Dada las condiciones de
infestación del picudo de la palma, cuyas larvas viven dentro del interior del tronco de
las plantas, su control es sumamente difícil, al menos que se traten a los adultos. De
esa manera esta evaluación ha detectado dos cepas muy rápidas para inducir infección,
6 días a 8 días, lo que le permitiría a los productores tener una posibilidad más en el
sistema de control de estos insectos. Además, en el método de trabajo de este
experimento, los insectos fueron expuestos a las formulaciones en polvo solo escasos 5
minutos de tiempo, para detectar si en ese período de tiempo las esporas eran
suficientemente patogénicas y virulentas, de poder hacer asocio con su hospedero,
adherirse al tegumento e iniciar el proceso de infección. Las condiciones de campo son
más adversas y los R. palmarum tienen una alta motilidad, lo que implica que los
hongos deben ser también suficientemente eficientes para parasitar. En general, los
hongos entomopatógenos son considerados como más seguros para el ambiente que
los insecticidas convencionales y pueden ser usados en zonas sensibles. Los hongos
también persisten y proliferan en el ambiente y tienen la capacidad de transmitirse
horizontal y verticalmente, de tal manera que las poblaciones silvestres de insectos
plagas pueden colaborar en la transmisión de los mismos entre ellos. Basados en los
resultados obtenidos, consideramos que eventualmente estos hongos pueden ser
usados en un programa de manejo de R. palmarum. Agregado a este estudio, tendrá
que realizarse un estudio de dosis mínima y la técnica adecuada de poner los hongos
en el campo.
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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B.bassiana D0101 B.bassiana D0205B.bassiana D0106 M.anisopliae
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16Día
0
18
37
55
73
92
110In
fecc
ión
(%)
100 %
B.bassiana D0101 B.bassiana D0205B.bassiana D0106 M.anisopliae a
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16Día
0
18
37
55
73
92
110
Infe
cció
n (%
)
100%
b
Figura 3. Porcentaje de infección observado (a) y rectas de ajuste elaboradas según la pendiente (b). En (b) línea cortada (M. anisopliae), línea continua (B. bassiana D0106), línea y punto (B. bassiana D0205) y puntos (B. bassiana D0101). R2 > 0,85.
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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Cuadro 4. Valor estimado de la pendiente de la recta de regresión (% Infección = a x Día + b) y el intervalo de confianza de la estimación con un 95 % de confianza.
Tratamiento Pendiente LI (95 %) LS (95 %) R2
B. bassiana D0101 7,77 5,93 9,61 0,86
B. bassiana D0205 12,12 10,96 13,29 0,99
B. bassiana D0106 16,37 13,51 19,22 0,97
M. anisopliae 22,57 16,66 28,49 0,97
Cuadro 5. Porcentaje de esporulación a 3 días y 6 días, de las cepas utilizadas en el experimento.
Porcentaje de esporulación
3 días 6 días
B. bassiana D0101 60 80
B. bassiana D0205 55 60
B. bassiana D0106 48 90
T. asperellum Ale 52 80
M. anisopliae 55 95
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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Figura 4. R. palmarum momificado con conidios de B. bassiana que emergen del interior del cuerpo.
Figura 5. R. palmarum momificado con conidios de M. anisopliae que emergen del cuerpo, al inicio los conidios son de color blanquecino.
Susceptibilidad de Rhynchophorus palmarum (L.) (Coleoptera: Curculionidae) a Cepas de Hongos Entomopatógenos
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