Fitoplasmas y virus que afectan a
frutales de pepita y hueso
Equipo investigador IRTA:
Assumpció Batlle
Amparo Laviña
Jose Aramburu
Colaboración con el Programa de Fruticultura del IRTA:
Lérida, Gerona (Mas Badia) y Reus (Mas Bover). Con
técnicos de Laboratorios de Sanidad Vegetal, técnicos de
distintas cooperativas frutícolas y técnicos de las ADVs.
IRTA, Patología Vegetal, Cabrils, Barcelona
Proyectos R+D en frutales, participantes y colaboradores.
Fondos públicos
INIA SC97-131-C2
INIA RTA01-077
INIA RTA2004-066
INIA RTA2005-00156
INIA-TRT2006-00004
COST FA0807
Euphresco 2010
INIA-RTA09-0070
Ester Torres. Laboratorio Sanidad Vegetal, DAAM
Luis Asín (IRTA, Lleida)
Pere Vilardell (Estación Mas Badia, Girona)
Miquel Peris (IRTA,Lleida)
Vicente Medina (UDL, Lleida)
Dionisio Berra. Laboratorio Agrario de Fraisoro,
Guipúzcoa
Elena Landeras, Lab Sanidad Vegetal. Oviedo. Asturias
Remedios Santiago, Lab.Sanidad Vegetal, Badajoz,
Extremadura
Rafael Balduque y MªJosé Rubio (CITA, Zaragoza)
-Entidades y empresas colaboradoras: Certiplant,
Agromillora, Viveros Orero, Viveros Provedo,
PLANASA, Grup Actel, Cooperativa Fruits de Ponent,
Cooperativa Crex y CAVAL (Extremadura)
-Fitoplasmas del grupo ribosómico 16Sr-X que afectan a frutales de pepita y hueso
Ca. Phytoplasma pyri o Pear decline (decaimiento peral)
Ca.P.prunorum o European stone fruit yellows (enrollamiento clorótico del albaricoquero, leptonecrosis ciruelo, amarilleamientos melocotonero)
Apple proliferation or Ca.P.mali
Líneas de investigación en fitoplasmas.
-Líneas de Investigación
-Epidemiología: Evolución de la incidencia. Identificación , dinámica
poblacional y biología de los vectores, Identificación de plantas huésped.
-Caracterización biológica y molecular de aislados.
-Mejora técnicas de detección de fitoplasmas
-Desarrollo y evaluación de métodos de control
PCR and nested-PCR P1/ P7 (Deng y Hiruki, 1991; Schneider et al., 1995)
fO1/ rO1 (Lorenz et al., 1995)
Resultados (1.-Identificación de vectores)
-Transmision de Pear decline por Cacopsylla pyri en España
-Identificación de C.pruni y ciclo de ESFY en frutales de hueso
-Identificación de C.picta y C.melanoneura como vectores de proliferación del manzano
2.-Resultados (Técnicas de detección) de fitoplasmas del grupo 16Sr-X mediante PCR y PCR a tiempo real
Comparación de métodos de
extracción :
Extracción con E.Z.N.A.
Extracción con CTAB
Extracción con PGB
Figura 2. Comparación de los métodos de extracción y amplificación.
-Evaluación de distintos
métodos de PCR a tiempo real :
-Cinco con sondas TaqMan
-Uno con tinción SYBR
Metodología del muestreo: época, tejido
Comparación de técnicas: PCR a tiempo
real, PCR nido
3.-Caracterización molecular de aislados de Ca.P.prunorum y Ca.P.pyri, mediante secuenciación de los genes imp, aceF, pnp, y secY
-Variabilidad genética determinada con el estudio del gen Imp Trabajo realizadoen colaboración con el INRA de Burdeos.
Ca.P.Pyri
-Se ha identificado un recombinante de
Ca.P.pyri, causante del Pear decline que
presenta dos genes de Ca.P. prunorum
causante de los ESFY. Se ha encontrado en
peral y en melocotonero.
-Secuenciación del genoma completo de Ca.P.prunorum
-Se han determinado distintos aislados de Ca.P. prunorum y de Ca.P.pyri. Se están utilizando para evaluar tolerancia o resistencia en material vegetal.
-Se han determinado 9 aislados de Ca.P.prunorum en Europa, 4 en España.
• 4.1. Se ha evaluado la susceptibilidad/ resistencia en material vegetal de Pyrus y Prunus. Se han determinado distintos grados de tolerancia pero no resistencia.
• 4.2.Control de vectores. Identificación de sustancias volátiles para ser utilizadas como atrayentes de psilas
• 4.3. Se esta evaluando el saneamiento mediante termoterapia de agua caliente.
• 4.4. La micorrización con hongos seleccionados incrementa la tolerancia a la infección con fitoplasmas
4.-Control de fitoplasmas del grupo 16r-X
Puesta a punto de técnicas de detección de virus de frutales por RT-PCR. Etiología de
algunas enfermedades transmisibles. Programas de selección sanitaria de material
vegetal. Control sanitario bancos de Germoplasma de nogal, almendro y algarrobo.
-INIA-TRT2006-004
-Proyecto Cefrut
-INIA RFP 2009-0013
-INIA RFP 2013-0014
ACLSV
Detección de virus en árboles con distintas
enfermedades
-Detección de 6 virus mediante RT_PCR
-Todos las muestras positivas por
indexaje también lo fueron por técnicas
de laboratorio.
• Identificación y caracterización biológica y molecular de fitoplasmas y virus.
• Estudio de la epidemiologia en una determinada zona. Identificación de vectores y plantas huésped. Diseño de métodos de control.
• Puesta a punto de técnicas de detección de PCR y PCR a tiempo real. Diseño de cebadores para reconocimiento de distintos aislados de fitoplasmas y virus.
• Ensayos con distintos productos que incrementen la tolerancia a fitoplasmas y/o virus (BTH, Fosetil-Al, AIA, AIB, SA) o inhiban su multiplicación (péptidos).
• Ensayos de control sostenible de vectores, con la utilización de atrayentes de psilas como trampas.
4.-Oferta Tecnológica
Parcela 8 (Blanquilla) Parcela 3 (Limonera)
Impacto del cambio climático en las enfermedades
producidas por fitoplasmas
-Ampliación del limite geográfico
del fitoplasma y de los vectores a
zonas donde no estaban
presentes por exceso de frio.
-Mayor permanencia del
fitoplasma en la parte aérea del
árbol durante todo el año, lo que
implica una mayor concentración
del mismo
-En especies sensibles mayor
concentración implica mayor
expresión y virulencia de
síntomas.
Transmisión a través de injerto de
yemas tomadas en febrero Detección del PD a lo largo del año