Download - GENÈTICA HUMANA
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
GENÈTICA HUMANA
Un cas d’homocistinúriaclàssica
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
ESTRUCTURA DEL TREBALL
• PART I: Introducció a la genètica humana
• PART II: Homocisteïna i malaltia: Homocistinúria clàssica
• PART III: Part experimental: Un cas d’Homocistinúria clàssica
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
DNA
MUTACIONS
RNA
GÈNETICADuplicació
Transcripció
Traducció
Proteïnes
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
MUTACIONS
GÈNIQUES
CROMOSÒMIQUES
GENÒMIQUES
Pèrdua o inserció de nucleòtids
Substitució de base
CLASSIFICACIÓ DE LES MUTACIONS
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
CONSEQÜÈNCIES DE LES MUTACIONS GÈNIQUES EN LES PROTEÏNES
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
HOMOCISTIEÏNA I EL SEU METABOLIME
Hcy
Cys
Met
CBS
Cicle de la metionina
Transulfuració
MS MTs
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
ENZIM I GEN CBS
GEN CBS
ENZIM CBS
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
HOMOCISTINÚRIA CLÀSSICA
SIMPTOMES:
• Sistema ossi: Pectus excabatum, aracnodactilia, osteoporosi.
• Sistema ocular: Luxació del cristal·lí, miopia.
• Sistema nerviós: Retràs mental
• Sistema vascular: Complicacions cardiovasculars
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
A la universitat va arribar el material genètic d’un pacient (al que vam anomenar pacient 94) el qual patia els símptomes de la malaltia Homocistinúria Clàssica. Als laboratoris es va dur a terme un seguit de tècniques en que es va seqüenciar el gen CBS i van descobrir que, efectivament, el pacient 94 era afecte i es tractava d’un heterozigot que era portador de les dues mutacions següents: la T191M (exó 4-6) i la I278S (exó 8).
PRESENTACIÓ EXPERIMENT
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
QUADRE FAMILIAR (Familia 94)
94p 94m
94 T191M/I278S
94h
?/? ?/ ?
?/?
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
QÜESTIÓ I HIPÒTESI DE L’EXPERIMENT
“A partir de les dades obtingudes del pacient 94, quin serà el patró genètic de la seva família?”
Basant-nos en que la Homocistinúria Clàssica és una malaltia recessiva hereditària, ambdós pares haurien de ser portadors de alguna de les mutacions (una el pare i l’altre la mare), i la germana tindria un 25% de probabilitat de ser portadora de les dues mutacions, un 50% a presentar la mutació però no expressar-la i un 25% a no tenir cap de les mutacions.
QÜESTIÓ
HIPÒTESI
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
ELS OBJECTIUS
OBJECTIU GENERAL:
• Trobar el patró genètic de la família a partir de les mutacions
que presenta el fill
OBJECTIUS ESPECÍFICS:
• Averiguar quina mutació presenta el pare i quina la mare
• Mirar si la germana presenta alguna de les mutacions o si
pateix Homocistinúria Clàssica.
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
DISSENY DE L’EXPERIMENT
DNA
PCR d’amplificació
DIGESTIÓ (Enzims de restricció)
ELECTROFORESI (Gel d’Agarosa)
METODOLOGIA PREPARACIÓ DE L’EXPERIMENT
DNA (94)
PCR de seqüenciació
Seqüència del DNA i detecció de
les mutacions
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
SEQÜENCIACIÓ DEL GEN CBS
WT
94
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
LA PCRPolymerase Chain Reaction
Material: DNA motlle, dNTPs, els “primers”, Magnesi, el “Buffer”, la Taq DNA polimerasa, H2Od, tubs eppendorf i el termociclador.
Cicle de 3 fases:• Desnaturalització del DNA motlle• Alineació dels “primers”• Extenció del nou DNA
Repetició del cicle
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
PCRs SENSE DIGERIR
Marcador pUC
Mutació T191MMutació I278S
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
DIGESTIÓ AMB ENZIMS DE RESTRICCIÓ
Material: DNA amplificat, enzims de restricció, H2Od, “Buffer”, incubadora.
Enzims de restricció
Tsp RI Hsp 925' ..3' ..
CG
AT
SS
TA
GC
3' ..5' ..
5' ..3' ..
CG
AT
TA
G
C3' ..5' ..
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
ELECTROFORESI AMB GEL D’AGAROSA
Gel agarosa: TBE x1, Agarosa, Bromur d’Etidi, base, peinetes.
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
PCRs DIGERIRIDES
Marcador Ф-Hae III
Exó 8 (mutació I278S) Exó 4-6 (mutació T191M)
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
RESULTATS
Exó 8 (mutació I278S) Exó 4-6 (mutació T191M)
MUTACIÓ I278S
Al·lels possibles Pacients que ho presenten
I278S/X 94
I278S/WT 94m
WT/WT 94h, 95p
MUTACIÓ T191M
Al·lels possibles Pacients que ho presenten
T191M/X 94
T191M/ T191M 64
T191M/WT 94h, 95p
WT/WT 94m
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
CONCLUSIONS
• Com que la malaltia Homocistinúria Clàssica és una malaltia
autosòmica recessiva hereditària cada un dels pares del pacient
94 són portadors de una mutació diferent. El pare (94p) és
portador de la mutació T191M i la mare (94m) és portadora de
la mutació I278S. Cap dels dos l’expressa ja que es comporta de
manera recessiva.
• La germana (94h) no presenta la malaltia però, com era més
probable (amb un 50% de probabilitat), si que és portadora de
una de les mutacions, la T191M.
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
QUADRE FAMILIAR COMPLET (família 94)
94p 94m
94
T191M/I278S
94h
T191M/WT I278S/WT
T191M/WT
GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica
TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós
GENÈTICA HUMANA
Un cas d’homocistinúriaclàssica