Malassezia :
un género emergente en micología clínica
Bioq. Silvana RamadánCEREMICFac. Cs. Bioq. y FarmacéuticasUNR
MalasseziaReino: FUNGYDivisión: BASIDIOMYCOTAClase: USTILAGINOMYCETESOrden: MALASSEZIALES
Género: MALASSEZIA
M.furfur (1889)M.sympodialis (1990)M.obtusa ( 1996)M.globosa (1996)M.sloffiae (1996)M.restricta (1996)
LIPOFÍLICAS
M.pachydermatis (1935) NO LIPOFÍLICA
M. dermatis (2002)M. equi (2002)M. japónica (2003)M.nana (2004)M.yamatoensis (2004)M. cuniculi sp nov. (2010)
LIPOFÍLICAS
Pared celular
multilaminada
Brotes enteroblásticos
Malassezia COMENSAL �tronco� miembros superiores� espalda� frente� lóbulo retroauricular� nuca
Factorespredisponentes
Patologías cutáneas Patología sistémica
� Pitiriasis versicolor� Foliculitis� Dermatitis seborreica� Dermatitis atópica� Psoriasis� Pustulosis neonatal� Onicomicosis� Otitis� Papilomatosis confluente
o reticulada
Pitiriasis Pitiriasis versicolorversicolor
Factores predisponentes: ◊ susceptibilidad genética◊ enf. de base debilitantes◊ desnutrición◊ aumento del cortisol plasmático◊ altas temperaturas y humedad
Infección superficial crónica, benigna con hipo o hiperpigmentación de la piel
Edad: pubertad, jóvenes y adultos
Pitiriasis Pitiriasis versicolorversicolor
Patogenicidad de Malassezia:
Actividad queratolítica: ruptura mecánica o química de la queratina de las células
Producción de enzimas: lipooxigenasas, producción de lipoperóxidos que dañan las membranas celulares
Pitiriasis Pitiriasis versicolorversicolor
Probables mecanismos de la despigmentación de la piel:
Bloqueo en la transferencia del melanosomaal queratinocito
Producción de productos indólicos que bloquean la luz UVA, UVB
Inhibición de la producción de melanina por la presencia de ác. azelaico, inhibidor por competición de la Tirosinquinasa
FoliculitisFoliculitis
Características clínicas: pápulas pruriginosas y pústulas que se localizan en tronco, brazo, cuello y cara.
Factores predisponentes: embarazo, leucemias, SIDA, diabetes, pacientestransplantados, corticoterapia, antibióticoterapia, estrés.
Patogenia: crecimiento exacerbado de las levaduras en el folículo y liberación de metabolitos que producen inflamación e irritación
Dermatitis seborreica/ CaspaDermatitis seborreica/ Caspa
DS: descamación e inflamación en áreas del cuerpo ricas en glándulas sebáceas.Características
clínicasCaspa: forma menos severa, descamante pero no inflamatoria
Patogenia: * aumento del crecimiento de Malassezia en la zona afectada
* respuesta inmunológica del hospedero
Descamación e inflamación de regiones del cuerpo rica en glándulas seb
Dermatitis Dermatitis atatóópicapica((Eczema Eczema AtAtóópicopico/ / SmeSme. Dermatitis). Dermatitis)
Factores predisponentes: factores genéticos, defectos en el SI, daño en la integridadde la piel como barrera defensora, estrés emocional.
Las levaduras de Malassezia estarían actuando como alergenos.
Especies más frecuentemente asociada:M. sympodialis (Canadá, SueciaM. restricta, M. globosa (Japón)M. sympodialis, M. globosa, M. furfur (Arg.)
Enfermedad multifactorial con inflamación crónica disparada por varios alergenos con ciclos de exacerbación y remisión
Enfermedad sistEnfermedad sistéémicamica
Neonatos prematuros o noAdultos inmunosuprimidos
alimentación parenteral
Especies más frecuentemente relacionadas: M. furfurM. pachydermatis
Procesamiento de la muestra
1º Examen microscópico con Azul de Lactofenol e Hidróxido de potasio al 20% + calor
Escamas, secreciones
Hemocultivos
1º Examen microscópico con May Grünwald-Giemsa
Extracción de la muestra
Piel: Con cinta scotchRaspado con bisturí estéril y recuperación en portas flameados
Sangre: Extracción para hemocultivo
32ºC- 5-7 días
CULTIVO POSITIVO
Examen microscópicocon A. de Lactofenol
Examen macroscópico Preservación y almacenamientode la cepa
Identificación
FenotípicaGenotípica
2º Siembra en los medios de cultivo :
* Sabouraud-Glucosa + Ac. de oliva estéril* Agar Dixon modificado* Leeming y Notman
PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA (continuación)
Caracterización fenotípica de las cepas de Malassezia
1) Reacción de la catalasa
2) Utilización de compuestos Tween
3) Desdoblamiento de la esculina
4) Test de termotolerancia
20
4060
80
5) Asimilación de Aceite de Ricino
Malassezia spp.
Sub-cultivo en Sb-Glucosa
Utilización de Tweens
M.pachydermatis 2080
60 40
+ -+ +
+ +
+ +
+
++- - -
- -
M.sympodialis M.furfur M.slooffiiae
Aceite de ricino(+)M.furfur
(-)
Pba. de la esculinaM.sympodialis(+)
(-)M.slooffiae
Catalasa(-)M.restricta
(+)
Pba. de la esculina
M.globosa M.obtusa(-) (+)
(+)(-)
CHROMagar Candida- modificado
Kaneko et al., Med Mycol, 2005
•BILIS DE BUEY
•GLICEROL
•MONOESTEARATO DE GLICEROL
•TWEEN 60
M. pachydermatis
M.sympodialis
M.globosa
M.furfurM.slooffiae
M.obtusa
M.restricta
M.dermatis
M.japonica
CHROMagar Malassezia- Tween 40
Kaneko et al., Med Mycol, 2006
Kaneko et al., Med Mycol, 2007
ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN
•CHROM-MALASSEZIA MODIFICADO
•AGAR ESCULINA-TWEEN 60
•AGAR SABOURAUD – GLUCOSA
•REACCIÓN DE LA CATALASA
•Presencia de pp.
•Morfología
M.pachydermatis
Kaneko et al., Med Mycol, 2007
ALGORITMO DE TRABAJO
Cultivo en CHROMagar-Malassezia mod.
AUSENCIA DE PP.PRODUCCIÓN PP.
Sub-cultivo en SBG
Esculina-tween 60
M.sympodialis
M.dermatis
M.globosa
+_
D +E+
D+E-
D-E-
Catalasa
M.restricta
-GrandeRosa p.rugosa
M.furfur
M.japonica
M.slooffiae
Esculina-tween 60
D+E-
D+E+
D-E+
M.obtusa
Caracterización genotípica de las cepas de Malassezia
PCR-FINGERPRINTING
Modificación del método RAPD
Cebador único : M 13 (5’ -GAGGGTGGCGGTTCT-3’)
Amplifica regiones minisatélites
Estable y reproducible
Nested-PCR (Sugita et al., 2001) PCR anidada. Se trabaja desde laMUESTRA CLÍNICA
PCR-REA (Guillot et al., 2000// Giusiano et al., 2003) Análisis derestricción enzimática
�PCR-RFLP (Gupta et al., 2000// Guillot et al., 2000//Mirhendi et al., 2005)� Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción.
9
1 2 3 4 5 6 7 8 10 11 bp
10000
3000
1500
1000
750500
250/500
9
Calle 1: 1kb ladder, calle 2: M. sympodialis, Calle 3: M. pachydermatisCalle 4: M,furfur, Calle 5: M. slooffiiae, Calle 6: 1 Kb ladder, Calle 7: M. restrictaCalle 8: M.obtusa, Calle 9: M.globosa, Calle 10: M.globosa, Calle 11: 1 kb ladder