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LES MYCOPLASMES
Dr H. GONSU KAMGAMédecin biologiste
FMSB / CHU Yaoundé
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OBJECTIFS
OBJECTIF GENERAL
Etablir le diagnostic biologique des mycoplasmesOBJECTIFS SPECIFIQUES
• Identifier les mycoplasmes les plus rencontrés en pathologie
humaine
• Apprécier la pathogénicité des mycoplasmes
• Maîtriser l’identification morphologique et biochimique des
mycoplasmes
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PLAN
INTRODUCTION
I. PROPRIETES GENERALES
II. HABITAT – POUVOIR PATHOGENE
III. CIRCONSTANCES DIAGNOSTQUES
IV. DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE
V. SENSIBILITE AUX ATB
CONCLUSION
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INTRODUCTION
Plus petites bactéries capables de réplication autonome
Développement intra et extra-cellulaire
Structure unique : absence de paroi
Nombreux génomes séquencés
Ubiquitaires : homme,animal,insectes,plantes
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INTRODUCTION
16 espèces chez l’homme : colonisation des muqueuses respiratoires et génitales- Présence à l’état commensal- Infections aigües ,maladies chroniques- Immunodéprimés:bactéries opportunistes
Contaminants de cultures cellulaires
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I. PROPPRIETES GENERALES
A. QUELQUES DATES 1898 Nocard et Roux:agent de la
pleuropneumonie bovine(M.mycoides) 1937 Dienes et Edsall: pleuropneumoniae like
organisms PPLO chez l’homme(M.hominis) 1954 Shepard : souche T(U.urealyticum)
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I. PROPRIETES GENERALES
B. TAXONOMIE
- Ordre des Procaryotes
- Classe des Mollicutes
- Mollicutes pathogènes pour l’homme
- Ordre des Mycoplasmatales
- Famille des Mycoplasmataceae
- 2 genres: Mycoplasma et Ureaplasma
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I. PROPRIETES GENERALES
C. MORPHOLOGIE
- Pas de formes définies
- Visible en fond noir ou contraste de phase:
non colorable au Gram
- Parfois mobiles(spiroplasme ou par glissement sur support solide)
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I. PROPRIETES GENERALES
D. STRUCTURE Absence de paroi (ni peptidoglycane,ni PLP)
uniquement une membrane plasmique
- caractère flexible et petite taille(passage à travers les filtres antibactériens de
0,45µm)
- résistances aux antibiotiques agissant à ce niveau (bétalactamines)
Membrane cytoplasmique
Riche en protéines 50 à 60% et en lipides 30 à 40%
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I. PROPRIETES E. CULTURE ET METABOLISME
1. Caractères culturaux● Mycoplasmes cultivables en milieu acellulaire ;mais exigences nutritionnelles complexes en facteurs de
croissance, en cholestérol: sérum,extrait de levure, tween 80…
● Aéro-anaérobies (certains anaérobies strictes)● Croissance lente 18h - 2 à 3 mois● Colonies en œuf sur le plat ou en tête d’épingle● Inhibition de croissance et du métabolisme par Ac
spécifiques
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I. PROPRIETES
2. Propriétés métaboliques
● Espèces fermentantes par fermentation du glucose:
M.pneunoniae,M.genitalium
● Espèces non fermentantes par hydrolyse de
L’arginine : M.hominis
L’urée : Ureaplasma sp.
● Propriétés d’hémadsorption et d’hémolyse: M.pneumoniae
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II. HABITAT-POUVOIR PATHOGENE
A. 16 ESPECES RETROUVEES CHEZ L’HOMME
● Le plus souvent extracellulaires
● Certaines commensales de l’oropharynx : PP certain de
M.pneumoniae
● Certaines commensales des voies génitales
PP certain mais occasionel de MH et de UU
PP certain de M.genitalium
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HABITAT-PP
B. MECANISMES DU PP
2 types: action directe
action indirecte : mec.immunopathogène Adhérence Production de métabolites toxiques Pénétration intracellulaire Interaction avec le système immunitaire
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III. CIRCONSTANCES DE DIAGNOSTIC
A. Infections du tractus respiratoire M.pneumoniae+++
Trachéobronchites Pneumonies atypiques Infections ORL(rares) Formes asymptomatiques 20,formes graves
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III. CIRCONSTANCES DE DIAGNOSTIC
B. INFECTIONS URO-GENITALES
1. Espèces rencontrées ●3 espèces pathogènes : Ureaplasma spp.,M.hominis,M.genitalium
● M.hominis et Ureaplasma spp.présents à l’état commensal
- Colonisation variale avec: l’âge, l’état hormonal,la race, le niveau socio-économique, le nombre de partenaires
- Plus fréquente chez l’homme que chez la femme Chez femme Mh < 10% , Uu >ou= 50%
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III. CIRC.DE DIAGNOSTIC B. INFECTIONS UROGENITALES (2)
1. Espèces rencontrées(2)
● Pb d’interprétation du pouvoir pathogène:
seuil de pathogénicité(appréciation quantitative)
● M.genitalium non documenté chez le sujet sain
(pousse très mal, dg uniquement moléculaire)
2. Infections chez l’homme Mg,U
● UNG
● Epidydimites, rares(U) prostatite
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III.CIRCONSTANCES DE Dg B. INFECTIONS UROGENITALES
3. Infections gynécologiques Mh,U,Mg
Cervicite Mg
Bartholinite Mh
Vaginose bactérienne = déséquilibre de la flore
bactérienne(X GV,anaérobies , Mh)
Endométrites( Mh, U, Mg), salpyngite Mh,Mg)
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III. CIRCONSTANCES DE Dg
B. INFECTIONS UG
4. Mycoplasmes et stérilité U • Retentissement qualitatif sur la mobilité des
spermatozoïdes
5. Infections au cours de la grossesse Mh, U • Chorioamniotites
• Fièvres post-partum, post-abortum
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III.CIRCONSTANCES DE Dg
B. INFECTIONS UG
4. Mycoplasmes et stérilité U
Retentissement qualitatif sur la mobilité des spermatozoïdes
5. Infections au cours de la grossesse Mh, U.
- chorioamniotites
- fièvres post-partum, post-abortum Mh+++
- avortements à répétition? Prématurité? hypotrophie?
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III.CIRCONSTANCES DE DgC. INFECTIONS EXTRAGENITALES ET
EXTRARESPIRATOIRES ● Souvent méconnues
● arthrites ● infections invasives chez ID Mp,Mh, U
● surinfections de plaies sternales Mh
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IV. Dg BIOLOGIQUE DES INFECTIONS A MYCOPLASMES
A. INFECTIONS RESPIRATOIRES Mp 1. Dg direct Prélèvements- Respiratoires (écouvillons gorge,aspiration
nasopharyngées,LBA)- Exta-respiratoires (bulles cutanées…) Conditions de prélèvement et de transport- écouvillons: éviter écouvillons en bois- Milieu de transport nécessaire : car bactéries fragiles- Si temps de stockage long ; congeler à -20°C
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IV. Dg BIOLOGIQUE
A. INFECTIONS RESPIRATOIRES
1. Dg direct(2)
Recherche directe- Détection des antigènes: peu sensible ,peu
spécfique- Recherche par PCR: cible gène de l’adhésine P1
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IV.Dg BIOLOGIQUE A. INFECTIONS RESPIRATOIRES
Culture (idem MUG)
Milieux de culture complexes- Base de peptone ou tryptone (protéine, aa)
- Extrait de levure(vitamines et facteurs de croissance)
- Substrat métabolique source d’énergie(glucose,arginine,urée)
- Sérum (stérols et cholestérol)
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VI. Dg BIOLOGIQUEA. INFECTIONS RESPIRATOIRESCulture (2)- Milieux rendus sélectifs par ajout
d’ATB(P,Amp)- Aucun milieu ne convient à toutes les espèces- Croissance +ou- lente en 02j à +++sem.;
T° 30°c et 37°c- Atmosphère aérobie ou anaérobie enrichie en
CO2.
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VI. Dg BIOLOGIQUEA. INFECTIONS PULMONAIRESCulture 3- Milieux de culture liquides ou gélosés- Milieux liquides: avec indicateur coloré(rouge
de phénol) ph adapté 7,4-7,6 Mycoplasmes; 6-6,5Uréaplasmes
- Milieux solides: sans substrat métabolique,ni rouge de phénol.
Typage PCR-RFLP m.e.e de 2 types :1+2
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VI. Dg BIOLOGIQUE
A.INFECTIONS RESPIRATOIRES
2. Diagnostic sérologique Ac non spécifiques: agglutinines froides
Ac spécifiques
. FC
. IFA
. Agglutination de particules de latex
. ELISA
Diagnostic de certitude: PCR + présence d’IgM
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VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UROGENITALES Ureaplasma spp.
M.hominis
M.Genitalium
Uniquement un diagnostic direct
Ureaplasma spp.et M.hominis- Culture sur milieux adaptés ou kits de Dg- Pas de sérologie- PCR rarement
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VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UROGENITALES
M.genitalium:
Culture très fastidieuse
Pas de sérologie
Diagnostic par PCR
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VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UROGENITALES
1. Prélèvements
Prélèvements urogénitaux
Chez m: écouvillonage urétral, urine 1er jet, sperme, sécrétions prostatiques
Chez f: PCV,endomètre, trompe,liq.Douglas, liq.amniotique,placenta
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VI. Dg BIOLOGIQUE
1. Prélèvements(2)
Nouveaux-nés
Prélèvement nasopharyngé, gorge, endotrachéal
Autres : en fonction du site de l’infection
Liquide synovial, biopsie articulaire , sang, LCR…
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VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UG
2. Culture: U.spp et M.h Milieux cf M.p Culture U.spp. M.hMilieu Shepard Hayflick
Ph milieu 5,5 – 6 7,0 – 7,2
Temps 16 – 20h 24 – 48h
Substrat urée arginine
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VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UROGENITALES
2. Culture (2)
Identification- Propriétés métaboliques en milieu liquide :
Changement de couleur de l’indicateur de pHUreaplasma spp. Jaune à orangé
M.Hominis orangé à framboise
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VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UROGENITALES
2. Culture(3) Identification- Aspect des colonies sur géloseUreaplama spp. Petites colonies ponctiformes noires
(MnSO4) en 24h
M.hominis : aspect en « œuf sur le plat »en 2 – 4j
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VI. Dg BIOLOGIQUE
2. Culture (4)Interprétation
Prélèvements seuil- Pvts normalement stériles aucun
isolement = infection
- Homme
Urètre et sperme U > 104 UCC /ml
Urine 1er jet U > 103 UCC /ml
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VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UROGENITALES
2. Culture (5)
Interprétation
- Femme Cervico-vaginal U aucun,non significatif
Mh >104UCC / ml
- NNé Endotrachéal U > 103UCC / ml
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VI. Dg BIOLOGIQUEB. INFECTIONS URO-GENITALES2. Culture U et Mh Kits commercialisés pour:- Identification- Numération- Sensibilité aux ATBbioMérieux, International Microbio, Bio-Rad, PBS Orgenics
Typage de Ureaplasma spp.2 espèces ; 2biovars U.parvum plus fréq..que U.urealyticum
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V. SENSIBILITE AUX ATB
A. METHODES D’ETUDE
Pas de méthode standardisée
Pas de diffusion en gélose
1. Diffusion en milieu liquide• CMI• Microméthode en plaque+++• Kits commercialisés pour les mycoplasmes
génitaux
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V. SENSIBILITE AUX ATBA. METHODE D’ETUDEKits commercialisés- 2 rangées de puits à 2 concentrations d’ATB lyophilisés- Inoculum standardisé- Après une culture primaire
2. Dilution en milieu gélosé- CMI- Méthode classique sur milieu adapté CMI,CMB- Etest (M.hominis) : diffusion en gelose;pas possible pour U
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V. SENSIBILITE AUX ATB
A. RESISTANCE INTRINSEQUE OU NATURELLE
Commune à tous Absence de paroi R.aux β
lactamines,glycopeptides,fosfomycine
Sous-unité β de l’ARN polymérase R à la rifampicine
R. à : polymyxines,acide nalidixique , sulfamides
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V. SENSIBILITE AUX ATB
B. RESISTANCE ACQUISE
Pas de plasmide de Résistance décrit
Mutations chromosomiques ou transposons
Absence de systèmes de réparation de l’ADN:
fréquence de mutation élevée
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TRAITEMENT DES INFECTIONS à M.
A. Infections respiratoires- Macrolides et apparentés- Tétracyclines- Fluoroquinolones
B. Infections génitales- Attention à l’ interprétation pour Mh et Uu- UNG doxycycline- Azythromycine
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V. TRAITEMENT
C. Infections néonatales
Macrolides
D. Infections extragénitales, chez l’immunodéprimé
Association de plusieurs ATB : CC +D +FQ
Traitement de l’immuno suppression
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CONCLUSION Pb de standardisation des méthodes de diagnostic
et d’étude à la sensibilité aux ATB Résistances acquises peu connues et peu étudiées Durée du traitement : fonction de la localisation et
de la gravité Pb majeur: traiter ou pas les infections à
M.génitaux? sites stériles : ok sites non stériles (pcv,pvts respiratoiresNNés ) ???
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JE N’AI PAS DE PAROI MAIS JE SUIS AUSSI UNE
BACTERIEFAITES ATTENTION A
MOI!!!