Download - Poliphenols detection in wines
Partea Teoretică CuvinteCheie
Obiectiv
Aparatură şi materiale
Apă distilată
K3[Fe(CN6)]
KCl ”Reactivul“ Bucuresti
Fenol
NaH2PO4 si Na2HPO4
Nafion
Albumină din ser bovin (BSA)
Glutaraldehidă (GA)
Catechol
Tirozinază, din ciuperci, EC.1.14.18.1, 2085 u/mg, pudră liofilizată (Ty)
Ty
BSA GA Nafion
Rezultate şi discuţii
Voltamograma ciclica a catecolului pe electrod de grafit
Condiţii experimentale: tampon fosfat 0.1 M, pH 6.74; potenţial de start -0.8 V, viteza de baleiaj, 50 mV/s.
Voltamograma ciclică a fenolului pe bioelectrod G/Ty-BSA-Nafion
Condiţii experimentale: tampon fosfat 0.1 M, pH 6.74; potenţial de start -0.8 V, viteza de baleiaj, 50 mV/s.
Voltamograma ciclică a catecolului pe bioelectrod G/Ty-BSA-Nafion
Condiţii experimentale: tampon fosfat 0.1 M, pH 6.74; potenţial de start -0.8 V, viteza de baleiaj, 50 mV/s.
Voltamograma ciclica a 0.1 mM K3[Fe(CN)6] pe bioelectrod G/Ty-BSA-NafionCondiţii experimentale: potenţial de start -0.1 V.
10 100
1E-4
log
I
log v
I anodic I catodic
0 2 4 6 8 10 12 14 16-150
-100
-50
0
50
100
150
I c /
A
I a
/ A
v1/2 / (mV/s)1/2
0.9982 / 70.9965 / 7R/n0.43 0.0040.4 0.008
catodicanodic
Panta dependenţei log I vs. log v
Dependenţa log I vs. log v (A) si I vs. v1/2 (B).
Ip = 2.69*10-5 n3/2 A D01/2 v1/2 Co
*
-0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7-150
-100
-50
0
50
100
150
I /
A
E / V vs. Ag/AgCl, KClsat
ciclul 1 ciclul 3 ciclul 5 ciclul 10 ciclul 15 ciclul 20 Stabilitatea bioelectrodului
G/Ty-BSA-Nafion
Condiţii experimentale: 0.1 mM K3[Fe(CN)6] + 0.1 M KCl, potential de start -0.1 V, 50 mV/s.
Parametrii analitici ai biosenzorului G/Ty-BSA-GA-Nafion
H20
O2
Ty
Chinona
Catecol
ne-
Ty
Fenol
H20
O2
Ty
o-Chinona
Catecol
ne-
O2
Înregistrările I vs. timp pentru bioelectrodul G/Ty-BSA-GA-Nafion
Condiţii experimentale: potenţial aplicat, 0.05 V vs. Ag/AgCl, KClsat, tampon fosfat 0.1 M, pH 6.74; agitare continuă controlată de EDR, ω = 1500 rpm.
Curba de calibrare a bioelectrodului G/Ty-BSA-GA-Nafion
Condiţii experimentale: potenţial aplicat, 0.05 V vs. Ag/AgCl, KClsat, tampon fosfat 0.1 M, pH 6.74; agitare continuă controlată de EDR, ω = 1500 rpm.
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.40.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
0.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.050.0
0.5
1.0
1.5
I = (3.2e-6+- 2.30e-8[catechol]/M)/ 6e-5+-1.4e-6 +[catechol]/M
R2 =0.9979, n = 25
I /
A[catechol] / mM
I/ A = 1.267 +/1.93e-8 + 0.033+- 8.78e-4 [catechol]/ MR = 0.9962, n = 13
I / A
[catechol]/ mM
Linearizarea Lineweaver-Burk (A), Eadie-Hofstee (B) si Hanes-Woolf (C) pentru bioelectrodul G/Ty-BSA-GA-Nafion.
Condiţii experimentale: potenţial aplicat, 0.05 V vs. Ag/AgCl, KClsat, tampon fosfat 0.1 M, pH 6.74; agitare continuă controlată de EDR, ω = 1500 rpm.
A B
C
0.9994/ 220.07913.11 e-63.93 e-5Linearizare Hanes-Woolf
0.9835 / 250.06513.12 e-64.79 e-5Linearizare Eadie-Hofstee
0.9978 / 220.06763.17 e-64.69 e-5Linearizare Lineweaver-Burk
0.9989 / 250.05563.2 e-6 ± 2.3 e-85.75 e-5 ± 1.394 e-6
Fitare Origin
R/nS / A/MImax / AKM / M
Valorile paramterilor cinetici pentru biosenzorul G/Ty-BSA-GA-Nafion
Concluzii
Imobilizarea enzimei s-a realizat cu ajutorul unui amestec de BSA si GAPeakurile de oxidare
caracteristice catecolului si fenolului sunt deplasate spre valori mai pozitiveCurbele de calibrare a bioelectrodului
G/Ty-BSA-GA-Nafion au permis determinarea următorilor parametrii analitici: timpul de răspuns < 30 s, domeniul de linearitate 0 - 0.04 mM catechol si sensibilitatea 0.0333 A/mM
Reprezentările grafice liniare ale I vs. v1/2 sugerează un comportament difuziv al speciei la electrod, deci o bună permeabilitate a filmului.
-Imobilizarea enzimei s-a realizat cu ajutorul unui amestec de BSA si GA
-Peakurile de oxidare caracteristice catecolului si fenolului sunt deplasate spre valori mai pozitive
-Curbele de calibrare a bioelectrodului G/Ty-BSA-GA-Nafion au permis determinarea următorilor parametrii analitici: timpul de răspuns < 30 s, domeniul de linearitate 0 - 0.04 mM catechol si sensibilitatea 0.0333 A/mM
-Reprezentările grafice liniare ale I vs. v1/2 sugerează un comportament difuziv al speciei la electrod, deci o bună permeabilitate a filmului.
Vă mulţumesc pentru atenţie!
Q&A
Q&A