![Page 1: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/1.jpg)
Inovace studia biochemie prostřednictvím e-learningu CZ.04.1.03/3.2.15.3/0407
Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky.
Základy biochemie KBC / BCH
Proteiny, peptidy a aminokyseliny
![Page 2: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/2.jpg)
Základy biochemie KBC/BCH, ZS 20011/12.
• Prof. Pavel PEČ
• http://ibiochemie.upol.cz
![Page 3: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/3.jpg)
Další biochemická literatura
• Kodíček Milan, Biochemické pojmy, výkladový slovník http://vydavatelstvi.vscht.cz/knihy/uid_es-002_v1/
• Berg, M. Jeremy, Tymoczko, L. John, Stryer Lubert: BIOCHEMISTRY (6th Edition), W.H. Freeman and Company, New York (2007); ISBN 0-7167-8724-5.
• Web: http://bcs.whfreeman.com/biochem6/
• Knihkupectví Malé centrum, Brno, Kotlářská 2 (Areál PřF MU) http://www.malecentrum.cz/
![Page 4: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/4.jpg)
Biochemická literatura
• Příklad interaktivní elektronické učebnice: • http://orion.chemi.muni.cz/e_learning/biochemie.htm
![Page 5: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/5.jpg)
Proteiny, peptidy a aminokyseliny:
• Předmět biochemie. • Aminokyseliny a peptidy. • Sekvencování peptidů a problematika peptidových syntéz. • Přírodní peptidy: hormony, antibiotika, jedy, toxiny. • Proteiny. Rozdělení proteinů. Purifikace proteinů.
Elektroforéza proteinů. Metody stanovení molekulové hmotnosti proteinů. Strukturní typy proteinů.
• Určení třírozměrné struktury proteinů. • Základy imunologie.
![Page 6: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/6.jpg)
Úvod
• Biochemie popisuje struktury, organizaci a funkci živé hmoty na molekulární úrovni.
• Dělíme na tři základní oblasti: 1. Strukturní chemie složek živé hmoty a vztah mezi
biologickou funkcí a chemickou strukturou.
2. Studium metabolismu – sledy chemických reakcí probíhajících v živé hmotě.
3. Molekulární genetika – uchovávání a přenos informací.
![Page 7: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/7.jpg)
Kořeny biochemie
• F. Wöhler – 1828 – syntéza močoviny z anorganických látek
• Bratři Eduard a Hans Buchnerové – 1897 –bezbuněčný extrakt z kvasinek katalyzuje fermentaci (reakce „in vitro“.).
• J. B. Sumner -1926 – krystaluje enzym ureasu, protein z luštěniny Canavalia ensiformis
• Současný rozvoj biologie buňky • Historický pohled na úlohu deoxyribonukleové kyseliny
(DNA) v buňce • Objev 1869 F. Miescher; 1953 – James Watson a
Francis Crick – struktura DNA – start molekulární biologie.
![Page 8: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/8.jpg)
Biochemie jako disciplina a interdisciplinární věda
• Biochemie vychází hlavně z poznatků organické chemie a ostatních chemických oborů.
• Dále z poznatků medicíny, nauky o výživě, mikrobiologie, fyziologie, buněčné biologie, biofyziky a genetiky.
• Co sama biochemie ? Zaměřuje se na strukturu biomolekul a jejich reakce, na enzymy a biologickou katalýzu, na vysvětlení metabolických cest a jejich regulaci a na principy životních procesů, které mohou být vysvětleny chemickými zákony.
![Page 9: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/9.jpg)
Chemické prvky živé hmoty:
• První úroveň: C, H, O, N
• Druhá úroveň: Na, K, Mg, Ca, Cl, S, P
• Třetí úroveň: Co, Cu, Fe, Mn, Zn
• Čtvrtá úroveň: Al, As, B, Br, Cr, F, Ga, I, Mo, Se, Si, V
• Proč C a ne Si ??
![Page 10: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/10.jpg)
Uhlíkový šovinismus (nadřazenost)
• Křemík má řadu nevýhod oproti uhlíku: • Atomy Si jsou mnohem větší, mají vyšší hmotnost a atomový poloměr. Těžko se tvoří dvojné a trojné
kovalentní vazby. • Silany (sloučeniny s vodíkem), analogie alkanů, jsou silně
reaktivní s vodu - rozkládají se. • Silikony, polymery vážící křemík přes kyslík, jsou velmi
stabilní. Komplexní silikony s dlouhými řetězci jsou zase méně stabilní než odpovídající uhlíkaté sloučeniny.
• Oxid křemičitý je analogem oxidu uhličitého. Je to známá pevná látka nerozpustná ve vodě.
• Dovedete si představit oxid křemičitý jako produkt aerobní respirace ??
![Page 11: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/11.jpg)
Šovinismus
• Cogniard je příjmení dvou bratrů - francouzských
(pařížských) dramatiků: • Hippolyta Cogniarda (1807–1882) a • Théodora Cogniarda (1806–1872).
• V jejich hře „La Cocarde Tricolore“ (Tříbarevná kokarda) z roku 1831 vystupuje postava napoleonského vojáka
Chauvina, jehož postoje jsou typické pro šovinismus.
![Page 12: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/12.jpg)
Aminokyseliny, peptidy a proteiny. Aminokyseliny
![Page 13: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/13.jpg)
Základní struktura α-aminokyselin. Proteinogenní aminokyseliny (20) dělíme podle charakteru vedlejšího řetězce R do tří skupin:
C COONH3+
R
H
-
![Page 14: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/14.jpg)
Tab. 1 – 1 Struktura, zkratky, výskyt v proteinech a pK hodnoty ionizovatelných skupin proteinogenních aminokyselin
Aminokyseliny s nepolárním
vedlejším řetězcem
Strukturní vzorec a molekulová hmotnost
Glycin
Gly
G
Alanin
Ala
A
Valin
Val
V
C
COO
NH3+
HH
-
C
COO
NH3+
CH3H
-
C
COO
NH3+
CHH
CH3
CH3-
Molekulová hmotnost: 75,07
Molekulová hmotnost: 89,09
Molekulová hmotnost: 117,15
7,2
7,8
6,6
2,35
2,35
2,29
9,78
9,87
9,74
pK2
α-NH3
pK1
α-COO4- +
pKR
vedlejší řetězec
vedlejšířetězec
Průměrný výskyt v proteinech
(%)
![Page 15: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/15.jpg)
Tab. 1 – 1 Struktura, zkratky, výskyt v proteinech a pK hodnoty ionizovatelných skupin proteinogenních aminokyselin
Aminokyseliny s nepolárním
vedlejším řetězcem
Strukturní vzorec a molekulová hmotnost
Leucin
Leu
L
Isoleucin
Ile
I
Methionin
Met
M
Molekulová hmotnost: 131,17
Molekulová hmotnost: 131,17
Molekulová hmotnost: 149,21
9,1
5,3
2,2
2,33
2,32
2,13
9,74
9,76
9,28
pK2
α-NH3
pK1
α-COO4- +
pKR
vedlejší řetězec
vedlejšířetězec
Průměrný výskyt v proteinech
(%)
C
COO
NH3+
CH2H CH
CH3
CH3-
C
COO
NH3+
CH2H CH2 S CH3
-
C
COO
NH3+
CH CH2 CH3
H
CH3-
∗
![Page 16: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/16.jpg)
Tab. 1 – 1 Struktura, zkratky, výskyt v proteinech a pK hodnoty ionizovatelných skupin proteinogenních aminokyselin
Aminokyseliny s nepolárním
vedlejším řetězcem
Strukturní vzorec a molekulová hmotnost
Prolin
Pro
P
Fenylalanin
Phe
F
Tryptofan
Trp
W
Molekulová hmotnost: 115,13
Molekulová hmotnost: 165,19
Molekulová hmotnost: 204,22
5,2
3,9
1,4
1,95
2,20
2,46
10,64
9,31
9,41
pK2
α-NH3
pK1
α-COO4- +
pKR
vedlejší řetězec
vedlejšířetězec
Průměrný výskyt v proteinech
(%)
C
COO
NH3+
CH2H
-
C
COO
NH3+
CH2H
NH
-
CH
NH2
+
OOC
CH2
CH2CH2
-
+
![Page 17: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/17.jpg)
Tab. 1 – 1 Struktura, zkratky, výskyt v proteinech a pK hodnoty ionizovatelných skupin proteinogenních aminokyselin
Aminokyseliny s polárním vedlejším
řetězcem bez náboje
Strukturní vzorec a molekulová hmotnost
Serin
Ser
S
Asparagin
Asn
N
Glutamin
Gln
Q
C
COO
NH3+
CH2H OH
-
C
COO
NH3+
CH2H C
NH2
O-
C
COO
NH3+
CH2H CH2 C
NH2
O-
Molekulová hmotnost: 105,09
Molekulová hmotnost: 132,12
Molekulová hmotnost: 146,15
6,8
4,3
4,3
2,19
2,14
2,17
9,21
8,72
9,13
pK1
α-COO4-
pK2
α-NH3+
pKR
vedlejší řetězec
vedlejšířetězec
Průměrný výskyt v proteinech
(%)
![Page 18: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/18.jpg)
Tab. 1 – 1 Struktura, zkratky, výskyt v proteinech a pK hodnoty ionizovatelných skupin proteinogenních aminokyselin
C
COO
NH3+
CH2H SH
-
Aminokyseliny s polárním vedlejším
řetězcem bez náboje
Strukturní vzorec a molekulová hmotnost
Threonin
Thr
T
Tyrosin
Tyr
Y
Cystein
Cys
C
Molekulová hmotnost: 133,15
Molekulová hmotnost: 197,23
Molekulová hmotnost: 121,16
5,9
3,2
1,9
2,09
2,20
1,92
9,10
9,21
10,70
pK1
α-COO4-
pK2
α-NH3+
pKR
vedlejší řetězec
vedlejšířetězec
Průměrný výskyt v proteinech
(%)
C
COO
NH3+
CH2H OH
-
C
COO
NH3+
CH2H C CH3
OH
H-
∗
10,46
(fenol)
8,37
(sulfhydryl)
![Page 19: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/19.jpg)
Tab. 1 – 1 Struktura, zkratky, výskyt v proteinech a pK hodnoty ionizovatelných skupin proteinogenních aminokyselin
C
COO
NH3+
CH2H
NH
NH+
-
Aminokyseliny s polárním vedlejším
řetězcem s nábojem (bazické)
Strukturní vzorec a molekulová hmotnost
Lysin
Lys
K
Arginin
Arg
R
Histidin
His
H
Molekulová hmotnost: 147,19
Molekulová hmotnost: 175,21
Molekulová hmotnost: 155,10
5,9
5,1
2,3
2,16
1,82
1,80
9,06
8,99
9,33
pK1
α-COO4-
pK2
α-NH3+
pKR
vedlejší řetězec
vedlejšířetězec
Průměrný výskyt v proteinech
(%)
12,48
(guanidium)
6,04
(imidazol)
C
COO
NH3+
CH2H CH2 CH2 CH2 NH3+
-
C
COO
NH3+
CH2H CH2 CH2 NH
C
NH2
NH2+
-
10,54
(ε-NH3)+
![Page 20: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/20.jpg)
Tab. 1 – 1 Struktura, zkratky, výskyt v proteinech a pK hodnoty ionizovatelných skupin proteinogenních aminokyselin
Aminokyseliny s polárním vedlejším
řetězcem s nábojem (kyselé)
Strukturní vzorec a molekulová hmotnost
Asparagová kyselina
Asp
D
Glutamová kyselina
Glu
E
Molekulová hmotnost: 133,10
Molekulová hmotnost: 147,13
5,3
6,3
1,99
2,10
9,90
9,47
pK1
α-COO4-
pK2
α-NH3+
pKR
vedlejší řetězec
vedlejšířetězec
Průměrný výskyt v proteinech
(%)
4,07
(γ-COO )
3,90
(β-COO )-
C
COO
NH3+
CH2H C
O
O-
-
C
COO
NH3+
CH2H CH2 C
O
O-
- -
![Page 21: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/21.jpg)
Selenocystein, zkratky Sec, U. UGA kodon, normálně STOP. Součástí například: glutathionperoxidas, tetraiodothyronine 5‚-
deiodinas, thioredoxinreduktas, formátdehydrogenas, glycinreduktas, hydrogenas).
• Sec má nižší hodnotu pK a vyšší redukční potenciál –
součást selenoproteinů – antioxidantů (na rozdíl od Cys).
• Pro zařazení do řetězce peptidu musí UGA kodon předcházet SECIS element – asi 60 nukleotidů. (selenocysteine insertion
sequence ).
H
COO
CH2NH3
SeH+
-
![Page 22: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/22.jpg)
Tvorba disulfidových vazeb oxidací SH skupin vedlejších řetězců Cys.
C
C
NH
CH2H SH
O
Cystein
C
C
NH
CH2 HSH
O
Cystein
+
1/2 O2
H2O
disulfidová vazba
C
C
NH
CH2H S
O
S C
C
NH
CH2 H
O
![Page 23: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/23.jpg)
Třírozměrná struktura aminokyseliny s chirálním α-uhlíkem. L a D izomer. Předmět a jeho obraz v zrcadle. Proteinogenní aminokyseliny mají konfiguraci L.
L-isomer D-isomer
R
H
Cα
-COONH3+
R
H
Cα
-COO NH3+
![Page 24: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/24.jpg)
Cahn-Ingold-Prelogův model absolutní konfigurace. Substituenty na α-uhlíku se řadí podle klesající priority. Směr šipky proti směru
hodinových ručiček značí S konfiguraci (sinister = doleva)
NH3+
R
H
Cα
-COO(1)
(2)
(3)
(4)
![Page 25: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/25.jpg)
Skupiny dle klesající priority pro Cahn-Ingold-Prelogův model:
→ SH, OR, OH, NH-COCH3, NH2, COOR → COOH, CHO, CH2OH, C6 H5, CH3, 3H, →
2H, H
![Page 26: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/26.jpg)
Absolutní konfigurace L-Asp a L-Cys:
C HNH3+
CH2COO
COO
-
-
L-Aspartát
C HNH3+
CH2SH
COO-
L-Cystein
(S )-Aspartát
H NH3+H
OOC-
H
OOCH2C-
H 1
2
3
(R )-Cystein
H NH3+H
OOC-
H
HSH2C
H 1
2
3
![Page 27: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/27.jpg)
Absolutní konfigurace proteinogenních L-aminokyselin:
• Gly (G) není chirální • Cys (C) je v absolutní konfiguraci R • Ile (I) a Thr (T) mají dvě chirální centra.
• L-Ile (2S,3S) …., existuji dva enantiomery
diastereoizomerní k alloisoleucinu (2R,3S)
• L-Thr (2S,3R)…, existují dva enenatiomery, které jsou diastereoizomerní k allothreoninu (2R,3R).
• Všechny ostatní L-aminokyseliny jsou S !!
![Page 28: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/28.jpg)
Optická otáčivost aminokyselin
Dalším důsledkem chirality aminokyselin je vlastnost jejich roztoků otáčet rovinu polarizovaného světla (kmitá v jedné rovině).
Otočení - ve směru hodinových ručiček: Značíme (d nebo +), proti směru hodinových ručiček: Značíme (l nebo -) Nezaměňovat l a L , d a D !!! Některé L-aminokyseliny otáčí
doprava (např. L-Leu) !! Měří se polarimetrem. Úhel otočení závisí na: délce optické dráhy (1 dm), vlnové délce polarizovaného
světla (žlutá D čára sodíku 589,3 nm), koncentraci roztoku a teplotě.
![Page 29: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/29.jpg)
Ionizační stavy aminokyselin jako funkce pH:
pH
2 12
Konc
entr
ace
0 4 6 8 10 14
Obojetná forma Obě skupiny deprotonizovány
Obě skupiny protonizovány
COO
H
NH3
+
R
H+ COO
H
NH3
+
R
+ - COO
H
NH2
R
-
H+
H+
H+
H+
![Page 30: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/30.jpg)
Určení pK1, pK2 a pI alaninu. pI = pK1 + pK2 / 2 (izoelektrický bod, pI = 6, 11 )
pH
2
12
4
6
8
10
0 0,5 1,0 1,5 2,0Disociované H+ ionty/ molekula
pK1
pI
pK2
HNH3+ CH
CH3
COO + H+-NH3+ CH
CH3
COO
+ H+-NH3+ CH
CH3
COO-NH3+ CH
CH3
COO
![Page 31: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/31.jpg)
Aromatické aminokyseliny absorbují světlo v UV oblasti:
C
H
CH2
NH3+ COO
CH
C
CH
CH
CH
CH
-
Fenylalanin(Phe, F)
C
H
CH2
NH3+ COO
CH
C
CH
CH
CH
C
OH
-
Tyrosin(Tyr, Y)
-
Tryptofan(Trp, W)
C
H
CH2
NH3+ COO
C
CHCHCH
CHC
CNH
CH
![Page 32: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/32.jpg)
Absorpční spektra a molární absorpční koeficienty Trp, Phe a Tyr:
40 000
20 000
10 000
5 000
2 000
1 000
500
200
100
10
20
50
200 240220 260 280 300 320
λ (nm)
ε
Phe
Tyr
Trp
![Page 33: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/33.jpg)
Posttranslačně modifikované aminokyseliny:
O-Fosfoserin
CH
CH2
NH CO
PO3
O
2-
γ-Karboxyglutamát
CH
CH2
NH CO
COOCH
OOC- -
γ
β
α4-Hydroxyprolin
CHN
COO
H OH
-1
2
34
5
3-Methylhistidin
1
2 34
5
CH
CH2
NH CO
N
NCH3
ε-N-Acetyllysin
CH
CH2
NH CO
CH2
CH2
CH2
NH C CH3
O
γ
β
α
ε
δ
![Page 34: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/34.jpg)
Některé fyziologicky významné sloučeniny odvozené od aminokyselin:
γ-Aminomáselná kyselina
CH2
CH2
NH3+
OOC CH2
γ
βα
(GABA)Histamin
CH2
CH2
NH3+
N
NH
Dopamin
CH2
CH2
NH3+
OH
OH
Thyroxin
CH
CH2
NH3+
O
COO
I
I
OH
I
I
-
![Page 35: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/35.jpg)
Peptidy
CO
O
NH3
+ C
R1H
+ - CO
O
NH3
+ C
R2H
+
-+ C
O
O
NH
C
HR2
C
O
NH3
+ C
R1H
+-
+ H2O
Peptidová vazba
![Page 36: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/36.jpg)
Peptidová vazba mezi karboxylem jedné aminokyseliny α aminoskupinou další aminokyseliny.
Peptidy do Mr = 5500, resp. 5, 5 kDa, výše proteiny. V biochemii se obvykle Mr udává v jednotkách
označených jako dalton = hmotnosti vodíku, zkratka Da po Johnu Daltonovi
Proteiny 5 500 až 220 000 daltonů, nebo 5, 5 kDa až 220 kDa.
Průměrná molekulová hmotnost aminokyselin 110 Da • John Dalton FRS (Fellow of the Royal Society) (6. September 1766 – 27. July 1844) was an English
chemist, meteorologist and physicist. He is best known for his pioneering work in the development of modern atomic theory, and his research into colour blidness (sometimes referred to as Daltonism, in his honour).
![Page 37: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/37.jpg)
Jednotka molekulové hmotnosti v biochemii
• Da, zkratka jména Dalton, jednotka molekulové hmotnosti, jedna dvanáctina atomové hmotnosti uhlíku 12C, 1 Da = 1,66.10-27 kg. Voda tedy má molekulovou hmotnost 18 Da (molární hmotnost 18 g/mol a relativní molekulovou hmotnost 18). Jednotka Da (často se užívají násobky kDa, kilodalton); ač vůbec nezapadá do systému jednotek SI, je běžně používána pro vyjádření molekulové hmotnosti biomakromolekul.
![Page 38: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/38.jpg)
Pentapeptid TyrGlyGlyPheLeu s označením N-konce Tyr a C konce Leu:
+C
O
O
CNH
O
NH
C
HH
C
O
NH3
+ C
HCH2
CNH
O
C
HH
CNH
O
C
HCH2
C
HCH2
OH
CH3CH
CH3
-
Tyr Gly Gly Phe Leu
AminoskupinaN-konec
KarboxylC-konec
![Page 39: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/39.jpg)
Názvosloví peptidů
Dvě aminokyseliny-dipeptid, tři – tripeptid. 1. Acylační – od N konce AGK = alanylglycyllysin 2. Triviální – např. insulin, glukagon… V peptidech mohou být i neproteinogenní aminokyseliny a
konfiguračně D.
• Peptidy mohou být lineární nebo cyklické (cyklopeptidy).
![Page 40: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/40.jpg)
Leu – enkefalin – opioidní peptid
Sekvence pentapeptidu od N-konce: Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu YGGFL Pentapeptid reverzní: LFGGY je neaktivní jako opioidní peptid – vnímání
bolesti.
![Page 41: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/41.jpg)
Glutathion je tripeptid účastnící se oxidačně redukčních reakcí v metabolismu. Redukovaný glutathion odstraňuje kyslíkaté radikály (ROS)
1/2 O2
H2O
Glutathion (GSH)(γ-Glutamylcysteinylglycin)
CH CNH
CH2
SH
NHC
O
CH2 COOCH2 CH2
O
CHNH3+
COO
-
-
2
CH CNH
CH2
S
NHC
O
CH2 COOCH2 CH2
O
CHNH3+
COO
CH CNH
CH2
S
NHC
O
CH2 COOCH2 CH2
O
CHNH3+
COO
-
-
-
-
Glutathiondisulfid (GSSG)
![Page 42: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/42.jpg)
Peptidový řetězec s vyznačením umístění vedlejších řetězců aminokyselin
C
O
CNH
O
NH
C
HR2
C
O
NH
C
R1H
CNH
O
C
R3H
CNH
O
C
HR4
C
R5H
![Page 43: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/43.jpg)
Délky vazeb peptidové vazby: Vazba C – N (13, 2 nm) je delší než dvojná (12, 7 nm)
a kratší než jednoduchá (14, 9 nm). Peptidová vazba nemá náboj. Hodnota jednoho Ångströmu je rovna 0,1 nm neboli 10-10 m.
Cα
CαC
O
N
HR
N
R
H
C
O
H
1.45 A
1.00 A
1.32 A
1.51 A
1.24 A
![Page 44: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/44.jpg)
Rezonanční struktury peptidové vazby, které jsou příčnou její planarity.
+N
C+
+
C
O
+ C
++
H +N+
C+
+
C
O-
+ C
++
H
Rezonanční struktury pepetidové vazby
![Page 45: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/45.jpg)
Peptidové vazby leží v rovině. Vedlejší řetězce R (zelené) směřují nad nebo pod roviny peptidových
vazeb.
Cα
CαC
O
N
HR
N
RH
C
O
H
![Page 46: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/46.jpg)
Stereochemie peptidové vazby. Forma trans vysoce převažuje nad cis. Forma cis je stericky nevýhodná.
Trans Cis
![Page 47: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/47.jpg)
Prolin v peptidové vazbě může existovat v obou formách – cis i trans. Obě jsou prostorově shodně nevýhodné.
Trans Cis
![Page 48: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/48.jpg)
Rotační (torzní, dihedrální = úhly mezi rovinami !!) úhly kolem vazeb v polypeptidu:
φ (fí) je torzní úhel kolem vazby mez dusíkem a α-uhlíkem, ψ (psí) je torzní úhel mezi α-uhlíkem a uhlíkem karbonylu
CN
O
NC
RH
C
O
NC
RH
C
O
C
RH
H
H
Hφ ψ
![Page 49: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/49.jpg)
Jak se měří torzní úhly ? Pohled od dusíku k α-uhlíku (φ), pohled od karbonylového uhlíku k α-uhlíku (ψ)
φ = +80° ψ = -85°
ψφ
![Page 50: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/50.jpg)
Ramachandranův diagram znázorňující hodnoty torzních úhlů (φ) a (ψ). Tmavě zelená pole jsou přípustné konformace. Struktura
vpravo dole je nereálná ze sterických důvodů.
Nereálná(φ = +90°,ψ = -90°)
+180
+120
+60
0
-120
-60
-1800 +60 +120 +180-60-120-180
φ
ψ
![Page 51: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/51.jpg)
Stanovení primární struktury – sekvence peptidů (sekvencování)
• Primární strukturou peptidů rozumíme pořadí aminokyselin
v peptidovém řetězci. • Čteme od N – konce.
• Taktika sekvencování (lineární peptidy): • A) Oddělení řetězců – např. odstranění disulfidových
vazeb. • B) Štěpení peptidů chemickými a enzymovými metodami na
kratší řetězce a jejich rozdělení. • C) Vlastní sekvencování. • D) Rekonstrukce peptidu z přesahujících fragmentů.
![Page 52: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/52.jpg)
HNYCFR
S S
TDIFCYKGVAGR
SGEHNY
CYKTDIGVAGRF
CF
RSGE
GVAGRFCYKTDI HNYCFRSGE
GVAGRFCYKTDI
HNYCFRSGE
S
S
(dva různé polypeptidové řetězce spojené disulfidovými
vazbami)
Protein
Redukce disulfidové vazby a následné oddělení řetězců
+
Chemickými a enzymovými metodami se štěpí každý
polypeptid na kratší peptidy
Jinými chemickými a enzymovými metodami se štěpí každý
polypeptid na jiné kratší peptidy
Určí se sekvence každého peptidového fragmentu
Určí se sekvence každého peptidového fragmentu
K rekonstrukci každého polypeptidu se použijí soubory překrývajících se
peptidových sekvencí
Opakuje se fragmentace při zachování disulfidových vazeb za účelem identifikace Cys sekvencí
disulfidové vazby
![Page 53: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/53.jpg)
Redukce disulfidové vazby mezi polypeptidovými řetězci nebo uvnitř řetězce 2-merkaptoethanolem:
2-Merkaptoethanol volné SH skupiny Cysteinu
CHC NH
CH2
SH
O
CH CNH
CH2
SH
O
+
disulfidová vazba
CHC NH
CH2
S
O
S
CH CNH
CH2 O
CH2CH2
SH
OH
+ 2
CH2CH2
S
OH
CH2CH2
S
OH
+
![Page 54: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/54.jpg)
Reakcí jodacetátu s volnou SH skupinou na polypetidovém řetězci se zabrání její reoxidaci:
JodacetamidCystein S-Karboxymethylcystein
SHCH2Cys + +COOCH2I - SCH2Cys COOCH2- HI
(CM-Cys)
![Page 55: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/55.jpg)
Pro stanovení přesné pozice disulfidové vazby se používá „diagonální elektroforéza“ při které se oxiduje disulfidová
vazba permravenčí kyselinou:
Cysteová kyselinaCHC NH
CH2
S
O
CH CNH
CH2
S
O
+
Cystin
CHC NH
CH2
S
O
S
CH CNH
CH2 O
Permravenčí kyselina
OC
HOH
O
O3-
O3-
![Page 56: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/56.jpg)
Diagonální elektroforéza (ELFO). Po oxidaci peptidů se v druhém směru elektroforézy původní peptidy zastaví na diagonále, kdežto peptidy
obsahující disulfidové vazby (jsou kyselejší) se objeví mimo diagonálu.
Směr první ELFO
ELFO
po
půso
bení p
ermra
venč
í ky
selin
y
R CH2 SO3-
´R CH2 SO3-
![Page 57: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/57.jpg)
Enzymové štěpení polypeptidů endopeptidasami:
• Endopeptidasy, proteinasy, jsou hydrolytické enzymy štěpící specificky určité peptidové vazby.
• Trypsin štěpí na místě karboxylu Arg a Lys. • Chymotrypsin štěpí na místě karboxylu hydrofobních
aminokyselin Phe, Tyr a Trp. • Elastasa štěpí na místě karboxylu malých neutrálních
aminokyselin Ala, Gly, Ser a Val. • Ve všech případech se vazba neštěpí, pokud je následující
aminokyselinou Pro. • Všechny předchozí enzymy jsou z hovězího pankreatu. • Endopeptisa V8 ze S. aureus je specifická na Glu. • Štěpením polypeptidu různými enzymy získáme řadu
peptidových fragmentů
![Page 58: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/58.jpg)
Enzymové štěpení polypeptidového řetězce trypsinem na místě karboxylu Arg nebo Lys:
Kterákoliv aminokyselina kromě Prolinu
+CH CNH
CH2
NH
O
CH C
R O
CH2
CH2
CH2
NH3+ Lysin
nebo
Arginin
Trypsin
H2O
CH CNH
CH2
O-
O
CH2
CH2
CH2
NH3+
NH3+ CH C
R O
![Page 59: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/59.jpg)
Vznik různých fragmentů z polypeptidu enzymovým a chemickým štěpením peptidových vazeb. V tomto příkladu se
získalo šest překrývajících se fragmentů.
Fragmenty CNBr
Trypsinové fragmenty
Trypsin
Phe Trp Met Gly Ala Lys Leu Pro Met Asp Gly Arg Cys Ala Gln
Trypsin
CNBr CNBr
![Page 60: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/60.jpg)
Příklad chemického štěpení peptidové vazby. Bromkyan štěpí specificky na místě karboxylu Met.
+
CHC
NH
CH2
NH
O
CH C
R O
CH2
S
CH3
BromkyanBr
C N
CHC
NH
CH2
NH
O
CH C
R O
CH2
S+
CH3
C N
Br-
CH
C
NH
CH2
N
O
CH C
R O
CH2
S
CH3
C N
OH2
NH2 CH C
R O
CH C
NH
CH2
O
O
CH2
+
Peptidyl homoserinlakton
![Page 61: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/61.jpg)
Původní Sangerova metoda založená na sekvenaci polypeptidu (insulin) od N-konce 2,4-dinitrofluorbenzenem. Nevýhodou bylo, že se při stanovení
jedné aminokyseliny se hydrolyzoval celý peptid.
+NH2
C
C
H
O
R1
F
NO2
NO2
2,4-Dinitrofluorobenzen(DNFB)
HF
NH
C
C
H
O
R1
NO2
NO2
DNP Polypeptid
![Page 62: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/62.jpg)
Při použití dansyl chloridu (fluorescence) došlo k výraznému zvýšení citlivosti Sangerovy metody. Stanovuje se 1 nM.L-1 aminokyseliny.
+
N(CH3)2
S
Cl
OO
NH2 CH C NH
OR1
CH C NH
OR2
CH C
OR3
HCl
OH -
NH CH C NH
OR1
CH C NH
OR2
CH C
OR3
N(CH3)2
O2S
5-Dimethylamino-1-naftalensulfonylchlorid(Dansylchlorid)
Polypeptid
Dansylpolypeptid
NH CH C OH
OR1
N(CH3)2
O2S
Dansylaminokyselina(fluorescentní)
OH2H+
NH3+ CH C OH
OR2
+NH3+ CH C OH
OR3
+ + NH3+
Volné aminokyseliny
![Page 63: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/63.jpg)
Edmanova metoda sekvenace peptidu od N-konce: +N C S NH2 CH C NH
OR1
CH C NH
OR2
CH C
OR3
OH -Fenylisothiokyanát(PITC)
Polypeptid
+
NH C NH CH C NH
OR1
CH C NH
OR2
CH C
OR3
S
BezvodáF3C COOH
PTC Polypeptid
NH3+ CH C NH
OR2
CH C
OR3
Původní polypeptid bez N-koncové aminokyselinyNH
CHS
C
NH
CH
OR1
S
CN
C
NH
CH
OR1
H+
PTH-aminokyselina
Derivát thiazolonu
Polypeptid je navázán C-koncem na polymerní nosič. Postupně se oddělují fenylthiohydantoinové (PTH) deriváty aminokyselin. Činidlem je fenylisothiokyanát (PITC).
![Page 64: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/64.jpg)
Sestavení původního polypeptidu z fragmentů získaných enzymovou hydrolýzou:
PheValLeu
Leu Val Phe Asp Lys
TyrGluLysAsp
Glu Tyr Gly Ile Arg
PheSerArgIleGly
Ser Phe Thr Lys
TrpAlaProCysLysThr
Cys Pro Ala Trp Lys
TrpArgMetHisLys
His Met Arg
Trp Gly
Gly
N-Leu-Val-Phe-Asp-Lys-Glu-Tyr-Gly-Ile-Arg-Ser-Phe-Thr-Lys-Cys-Pro-Ala-Trp-Lys-His-Met-Arg-Trp-Gly-C
Původní polypeptid
Trypsinové peptidy
Chymotrypsinové peptidy
Trp Gly
His Met Arg
Ser Phe Thr Lys
Cys Pro Ala Trp Lys
Glu Tyr Gly Ile Arg
Leu Val Phe Asp Lys
Gly
PheValLeu
TyrGluLysAsp
TrpArgMetHisLys
PheSerArgIleGly
TrpAlaProCysLysThr
Trypsin Chymotrypsin
Enzymováhydrolýza
![Page 65: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/65.jpg)
Proč sekvencujeme peptidy a proteiny ?
• 1. Sekvence se porovnává se známými sekvencemi. Z analogie je možné usoudit např. na katalytický mechanismus enzymu nebo příslušnost nově získaného peptidu do určité rodiny peptidů.
• 2. Srovnávají se sekvence stejného polypeptidu z různých zdrojů a sleduje se evoluční mapa.
• 3. Sekvenční data se využívají jako podklad k syntéze protilátek a peptidů nebo proteinů s významným účinkem.
• 4. Aminokyselinová sekvence je podstatná pro tvorbu DNA sond specifických pro geny kódující odpovídající proteiny.
• 5. Mnohé proteiny obsahují signální aminokyselinové sekvence sloužící k ke kontrole určitého procesu. Sekvence mohou např. obsahovat signál pro umístění proteinu v membráně.
![Page 66: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/66.jpg)
Využití technologie rekombinantní DNA k sekvenaci velkých proteinů. Řetězce DNA jsou klonovány a poté sekvencovány. Sekvence nukleotidů udávají sekvenci aminokyselin v proteinu. Nevýhodou je, že nepostihuje
posttranslační úpravy polypeptidů.
Sekvence DNA
Sekvence aminokyselin
GGG
Gly
TTC
Phe
TTG
Leu
GGA
Gly
GCA
Ala
GCA
Ala
ACT
Thr
GGA
Gly
AGC
Ser
ATG
Met
GGC
Gly
GCA
Ala
![Page 67: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/67.jpg)
Proč syntetizovat peptidy ?
• 1. Syntetické peptidy slouží jako antigeny stimulující tvorbu specifických protilátek.
• 2. Syntetické peptidy mohou být využity k izolaci receptorů hormonů a jiných signálních molekul. Také jako afinanty při afinitní chromatografii.
• 3. Syntetické peptidy mohou být využity jako léky. Např. analog vasopresinu, hormonu stimulujícícm reabsorpci vody, 1-desamino-8-D-argininvasopresin se odbourává pomaleji a slouží jako náhrada vasopresinu.
• 4. Peptidy mohou sloužit jako pomocná strukturu při studiu složitějších proteinů (třírozměrná struktura).
![Page 68: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/68.jpg)
Porovnání struktur přírodního a syntetického vasopresinu:
1-Desamino-8-D-argininvasopresin(syntetický ADH)
ProNH
NH
CH2
NH2
O
O
O
HH
NH
AspGluPheTyr
O
H
H
S S
NH
NH2
NH2
+
ProNH
NH
CH2
NH2
O
O
O
H
NH
NH2
NH2
H
NH
AspGluPheTyr
O
NH3
+
H
S S
+
2 3 4 5 71Cys
6Cys
8Arg
9Gly
+
8-Argininvasopresin(antidiuretický hormon, ADH)
![Page 69: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/69.jpg)
Taktika peptidových syntéz:
• 1. Aktivace karboxylu • 2. Chránění skupin, které nevstupují do peptidové vazby
• Syntézy peptidů jsou zautomatizovány. První chráněná skupina se
naváže C –koncem na makromolekulární pryskyřici a postupně se přidávají na N - konec další chráněné aminokyseliny. Reakcí karboxylu a aminoskupiny s N, N ‚ – dicyklohexylkarbodiimidem (DCC) za odštěpení vody a uvolnění N, N ‚– dicyklohexylmočoviny, se tvoří peptidová vazba.
• Skupiny, které nemají vstoupit do peptidové vazby se chrání činidly jako např. t – butyloxykarbonyl, t –Boc nebo benzyloxakarbonyl (dříve karbobenzoxy nebo karbobenzyloxy) – symbol Z nebo Cbz. Obě skupiny se po skončení syntézy lehce odštěpují.
![Page 70: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/70.jpg)
CO
O
NH
C
HR
CH3O
C
CH3CH3
C
O
-
t-Butyloxykarbonylaminokyselina(t-Boc aminokyselina)
N C N
Dicyklohexylkarbodiimid(DCC)
![Page 71: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/71.jpg)
Vstup chráněné aminokyseliny (t-Boc) do peptidové vazby za účasti DCC:
t-Boc aminokyselina n-1
DCC
Aktivovaná aminokyselina
CO
O
NH
C
HR
NHC
N
t-Boc
Aminokyselina n vázaná na polymer
CO
O
NH2C
H
Polymer
Rn
Dipeptid vázaný na polymer+O
NH
CNH
Dicyklohexylmočovina
t-Boc
Rn
CNH
O
NH
C
HR
CO
O
C
H
Polymer
![Page 72: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/72.jpg)
Celkový postup syntézy peptidu na polymerním nosiči. Syntéza peptidů v pevné fázi – Merrifieldova metoda (SPPS).
Reaktivní polymer
Cl
Polymer
Chráněná aminoskupina n
+
t-Boc
Rn
CO
O
NH
C
H
-
Ukotvení1
t-Boc
Rn
CO
O
NH
C
H
Polymer
![Page 73: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/73.jpg)
Odstranění chránící skupiny pomocí F3C-COOH2
Rn
CO
O
NH2
C
H
Polymer
t-Boc
Rn
CO
O
NH
C
H
Polymer
![Page 74: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/74.jpg)
Tvorba peptidové vazby s chráněnou aminokyselinou n-1
+ DCC 3
Rn
CO
O
NH
C
H
C
O
NH
C
H
Polymer
Rn
CO
O
NH2
C
H
Polymer
t-Boc
Rn-1
![Page 75: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/75.jpg)
Rn
CO
O
NH
C
H
C
O
NH
C
H
Polymer
t-Boc
Rn-1
Rn
CO
O
NH
C
H
C
O
NH
C
H
C
O
NH2C
HR1
Polymer
Rn-1
Další odstranění chránících skupin a syntetické cykly
Odštěpení peptidu pomocí HF4
![Page 76: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/76.jpg)
Přírodní peptidy
• Zvláštnosti struktury přírodních peptidů: - obsahují i neproteinogenní aminokyseliny - obsahují i D-aminokyseliny - isopetidové vazby (např. γ-karboxyl Glu) - cyklické struktury (laktamy, disulfidové vazby) - větvené struktury - blokování koncových aminokyselin (pyroglutamát, glycinamid)
• Skupiny přírodních peptidů - di- a tripeptidy (glutathion, sladidlo aspartam…) - peptidové hormony (oxytocin, vasopresin, přechod k proteohormonům,
insulin) - neuromodulátory (endorfiny, 15 až 32 aminokyselin, enkefaliny,
pentapeptidy) - peptidové zoo- a fytotoxiny ( hadi, štíři, včely – apamin; falloidiny a
amanitiny – Amanitia phalloides ) - protaminy – krátké lineární peptidy, mlíčí ryb - polyaminokyseliny (buněčné stěny baktérií, poly –γ-L-Glu a poly-γ-D-Glu)
![Page 77: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/77.jpg)
CH CNH CH2
SH
NH
C
O
CH2 COOCH2 CH2
O
CHOOC
NH3+
--
Glutathion (GSH)(redukovaný)
Cys GlyGlu
S
S
Cys GlyGlu
γ-
γ-Glutathion (GSSG)
(oxidovaný)
Oxytocin
Cys TyrNH3+
S
S
Cys
Ile
Asn
Gln
Gly CLeu NH2Pro
O
Cys TyrNH3+
S
S
Cys
Phe
Asn
Gln
Gly CArg NH2Pro
O
Vasopresin
Gly PheGly LeuTyr
Gly PheGly MetTyr
Leucinenkefalin
MethioninenkefalinCH CN
H
CH2
OCH3C
OO
CHNH3+
NH
COO-
Methylester L-aspartyl-L-fenylalaninu (Aspartám)
CysSSCysAla
CysGlnGluValIle
SerValCysSer
Gly
Gly
LeuHisGlnAsnValPhe
LeuTyrGlnLeuGluAsnTyrCys
Asn
AlaLeu
GluValLeuHisSer
GluArg
GlyCysVal
LeuTyr
ProLys
ThrTyrPhePheGly
SS
SS
Ala
N-terminálníkonec
Řetězec A
Řetězec B
Insulin
5 5
10
15
20 20
15
10
25
30
![Page 78: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/78.jpg)
Insulin je skladován v těle jako hexamer. Jen monomer je funkční. Monomery spojují atomy Zn2+ přes His.
Insulin Lispro má nízkou tendenci tvořit dimery a hexamery.
![Page 79: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/79.jpg)
Metabolická funkce insulinu
![Page 80: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/80.jpg)
PROTEINY – BÍLKOVINY
• Proteiny z řeckého proteos (prvotní, nejpodstatnější), bílkoviny z německého eiweisse – vaječný bílek.
• Proteiny jsou univerzální makromolekuly živých systémů mající
klíčové funkce v téměř všech biologických procesech.
• Klíčové vlastnosti proteinů: - Proteiny jsou lineární polymery sestavené z monomerních
jednotek – aminokyselin. - Proteiny obsahují řadu funkčních skupin. - Proteiny mohou reagovat spolu vzájemně nebo s jinými
biologickými makromolekulami za tvorby vyšších komplexních celků.
- Některé proteiny jsou silně rigidní, zatímco jiné vykazují omezenou flexibilitu.
![Page 81: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/81.jpg)
Klasifikace a rozdělení proteinů
• Klasifikace proteinů podle funkce (specifické a obecné), chemického složení a tvaru.
• Obecné funkce proteinů: Zdroj energie a dusíku, účinné ústoje (krev, cytosol),
významný příspěvek k udržení osmotického tlaku vně i uvnitř buněk.
• Specifické funkce proteinů (zvláštní tabulka).
• Chemické složení: A) Jednoduché – pouze polypeptidový řetězec B) Složené (polypeptidová část + neproteinová část) - Metaloproteiny – obsahující kovový iont. - Fosfoproteiny – obsahující fosfáty. - Glykoproteiny – obsahující sacharidovou složku - Lipoproteiny – obsahující lipidovou složku - Nukleoproteiny – obsahující nukleové kyseliny
![Page 82: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/82.jpg)
Specifické funkce proteinů
• Typ proteinu Příklad Výskyt a funkce
• Katalytické (enzymy) Trypsin Hydrolýza peptidové vazby • Regulační (hormony) Insulin Stimulace metab. glukosy • Ochranné Protilátky Vazba na cizorodé látky • Skladovací Kasein Mléčný protein • Transportní Hemoglobin Transport O2 krví • Strukturní Kolagen Vláknité pojivové tkáně • Kontraktilní Myosin, aktin Svalová vlákna • Genetické funkční Histony Asociace s DNA (chromosomy) • Toxické Ricin Toxický protein z Ricinus
communis (skočec obecný)
![Page 83: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/83.jpg)
Pokračování – rozdělení proteinů
• Rozdělení proteinů podle tvaru molekul: - Globulární – tvar koule, obvykle ve vodě rozpustné - Fibrilární – ve tvaru vláken, ve vodě nerozpustné - Membránové – součást biologických membrán
• Další možnosti dělení proteinů podle lokalizace nebo dějů, ve kterých působí: - Krevní proteiny - Membránové receptory - Elektrontransportní systémy (vnitřní membrána mitochondrií)
![Page 84: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/84.jpg)
Purifikace proteinů
• Pro všechny studie proteinů musí být k dispozici čistý protein. • Proto, abychom ho získali, musíme mít zdroj, kde je proteinu
dostatečné množství a metodu pro jeho sledování během purifikace (čištění).
• Metody sledování purifikovaného proteinu jsou různé. Uvádím metodu, kdy má protein katalytickou funkci (enzym) a jeho koenzymem je nikotinamidadenindinukleotid (NAD+), který po redukci na NADH přechází na produkt identifikovatelný ve spektru UV vlnové délky 340nm. Dle rostoucí hodnoty absorbance posuzujeme aktivitu enzymu. Dalším důležitým údajem je obsah proteinů, který se během purifikace mění. Rozhodující pro úspěšný průběh purifikace je rostoucí hodnota specifické aktivity ( aktivita enzymu / obsah proteinů).
• Abychom získali proteiny z buněk v roztoku musíme biologický materiál homogenizovat – rozdrtit buněčné membrány. Po homogenizaci obvykle následuje oddělení různých frakcí diferenciální centrifugací.
• Získáme sediment (u dna) a nad sedimentem supernatant.
![Page 85: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/85.jpg)
Diferenční centrifugace po homogenizaci. Zvyšující se centrifugační síla (násobky g) umožňuje oddělení těžšího
materiálu od lehčího, případně se oddělí pevné částice od rozpuštěných v roztoku.
![Page 86: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/86.jpg)
Další metody purifikace proteinů
• Vysolování a dialýza. Mnohé proteiny jsou méně rozpustné v roztocích s vyšší koncentraci solí. Vysolování lze provádět frakčně např. síranem amonným různé koncentrace. Dialýza je proces při kterém se oddělují velké molekuly proteinů od malých molekul (např. solí) přes semipermeabilní membránu.
• Gelová chromatografie. Metoda slouží k oddělování velkých molekul od malých. Používají se kolony obsahující porézní kuličky o rozměrech 100 µm (0, 1 mm). Obvykle nerozpustné, ale vysoce hydratované polysacharidy dextran, agarosa nebo polyakrylamid. Např. Sephadex, Sepharosa nebo Biogel. Malé molekuly vnikají do hydratovaných gelů a tím se zpožďují, kdežto velké molekuly prochází rychleji (nezpožďují se). Pořadí eluce molekul z gelu je : první velké, poté střední a nakonec malé molekuly. Používá se také k odsolování.
• Chromatografie na iontoměničích. Proteiny se oddělují na základě náboje na jejich povrchu. Když má protein na povrchu kladný náboj při pH 7, váže se na kolonu polymeru obsahujícího karboxylátové skupiny, zatímco protein s negativním nábojem se neváže. Navázaný protein s kladným nábojem se uvolní přidáním chloridu sodného do ústoje, protože sodný iont kompetuje s kladným nábojem proteinu. Proteiny s kladným nábojem se váží na negativní náboj kolony (např. karboxymethylcelulosa). Naopak proteiny se záporným nábojem se váží na pozitivní náboj např. diethylaminoethylcelulosu DEAE.
![Page 87: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/87.jpg)
Dialýza
Dializační sáček
Koncentrovaný roztok
Pufr (ústroj)
Zahájení dialýzy V rovnováze
![Page 88: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/88.jpg)
Gelová chromatografie na Sephadexu (polysacharid)
![Page 89: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/89.jpg)
Chromatografie na iontoměničích – katex – karboxymethylcelulosa
--- -
--- -
--- - --
- ---
- ---
- -
--- - --
- -
++-
++-++-
++-
+---
+---
+---
+--- +---
Karboxymethylová (CM) skupina (ionizovaná forma)
CO
O
CH2
-Celulosanebo
agarosa
CH2
CH2
CH2
N+
CH3
CH2
CH3
H
Celulosanebo
agarosa
+
Diethylaminoethylová (DEAE) skupina (protonovaná forma)
![Page 90: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/90.jpg)
Afinitní chromatografie
• Afinitní chromatografie spočívá
ve vazbě proteinů na specifické chemické skupiny (afinanty).
• Např. enzym se může vázat na afinitní kolonu s navázaným kompetitivním inhibitorem.
• Směs proteinů se nanese na kolonu.
• Hledaný enzym se naváže pevně na inhibitor.
• Všechny ostatní proteiny se vymyjí.
• Enzym se uvolní přidáním substrátu.
Ze směsi proteinů se specificky zachytí pouze jeden druh.
Ostatní molekuly se nezachytí.
![Page 91: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/91.jpg)
Ověření úspěšnosti purifikace. Elektroforéza. Gelová elektroforéza.
• Molekuly nesoucí náboj putují stejnosměrným elektrickým
polem. Proces se nazývá elektroforéza. V biochemie můžeme takto dělit peptidy, proteiny i nukleové kyseliny.
• Rychlost pohybu molekul v elektrickém poli závisí na síle el. pole (E), celkovém náboji molekuly (z) a frikčním koeficientu (f):
v = E. z / f • Proti elektrické síle E.z nesoucí molekulu s nábojem proti
elektrodě s opačným nábojem působí viskozita jako projev interakce mezi putující molekulou a prostředím.
• Frikční koeficient f závisí na hmotnosti a tvaru molekuly a viskozitě prostředí (η ).
• Pro molekulu ve tvaru koule o poloměru r, platí: f = 6 π. η . r • Elektroforéza se provádí na nosiči o konzistenci gelu nebo na
papíře. Gel slouží současně jako molekulové síto.
![Page 92: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/92.jpg)
Polyakrylamidová gelová elektroforéza (PAGE). Zesíťování akrylamidu (toxický).
Akrylamid N,N´-Methylenbisakrylamid
S2O82- Persíran
2 SO4- Síranový radikál
(iniciátor polymerace)
NH2
O
NH
CH2
NH
O O
+
CONH2 CONH2 CONH2 CONH2
NH
CH2
NH
O
O
CONH2 CONH2 CONH2 CONH2
![Page 93: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/93.jpg)
Provedení PAGE. Vertikální (shora dolů), molekuly se pohybují směrem k anodě (+). Velké molekuly se zpožďují, malé putují v čele.
Porézní gel
Elektroforeza
Směs makromolekul
(proteinů)
+
-
Směr elektroforézy
![Page 94: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/94.jpg)
• Modifikací je elektroforéza za podmínek denaturace – SDS-PAGE. • Denaturačním činidlem je obvykle dodecylsíran sodný (SDS) – aniontový
detergent. SDS štěpí téměř všechny nekovalentní vazby v proteinech. Aniont SDS se váže na hlavní řetězec polypeptidu (jedna molekula SDS na dvě aminokyseliny). Komplex denaturovaného proteinu s SDS získá záporný náboj, který je úměrný molekulové hmotnosti proteinu.
• Kromě SDS se přidává merkaptoethanol nebo dithiothreitol k redukci disulfidových vazeb. • Po proběhnutí elektroforézy se proteinové pásy vizualizují. Nejčastěji se
používá trifenylmethanové barvivo Coomasie blue nebo barvení stříbrem. • Pohyblivost většiny polypeptidů je za těchto podmínek je přímo úměrná
logaritmu jejich molekulové hmotnosti.
CH3O S
O
O
O-Na+
Dodecylsíran sodný
![Page 95: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/95.jpg)
Stupeň Celkové Celková Specifická Výtěžek Stupeň proteiny aktivita aktivita purifikace
(mg) (jednotky) (jednotky/mg) (%) Homogenizace 20 000 200 000 10 100 1
Vysolování 5 000 150 000 30 75 3
Chromatografie na iontoměniči 1 000 120 000 120 60 12
Gelová filtrace 100 80 000 800 40 80 Afinitní chrom. 2 60 000 30 000 30 3 000
Kvantifikace purifikačního protokolu – fiktivní protein
![Page 96: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/96.jpg)
Idealizovaná PAGE purifikace fiktivního proteinu
![Page 97: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/97.jpg)
Stanovení relativní molekulové hmotnosti proteinů
• 1. Pomocí SDS-PAGE elektroforézy (objasněno)
• 2. Ultracentrifugace
• 3. Hmotnostní spektrometrie
![Page 98: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/98.jpg)
Ultracentrifugace
• Centrifugace se používá k oddělení hrubých směsí buněčných komponent.
• Při kvantifikaci rychlosti pohybu molekul v roztoku v centrifugačním poli používáme sedimentační koeficient (s) dle rovnice:
s = m(1 – νρ)/f kde m je hmotnost částice, ν je parciální specifický objem (reciproká
hodnota hustoty částice), ρ je hustota média, f frikční koeficient (závisí na tvaru molekuly)
• (1 – νρ) vyjadřuje schopnost prostředí nadnášet částice
• Sedimentační koeficient se obvykle vyjadřuje v jednotkách: Svedberg (S); S = 10-13 s.
• Čím je hodnota S nižší, tím pomaleji částice sedimentuje.
• Na tomto principu je založena gradientová nebo jinak zonální centrifugace vedoucí k oddělení částic na základě hodnoty jejich sedimentačních koeficientů.
![Page 99: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/99.jpg)
• Hmotnost proteinů může být stanovena přímo z tzv. sedimentační rovnováhy při které se částice centrifugují nízkou rychlostí, tak, že sedimentace je v rovnováze s difůzí.
• Metoda je poměrně přesná a na rozdíl od SDS-PAGE nedenaturační při zachování kvartérní struktury.
Hodnoty S (Svedberg = 10-13 s) a molekulové hmotnosti některých proteinů • Protein Hodnota S Molekulová hmotnost • Cytochrom c 1, 83 12 310 • Myoglobin 1, 97 17 800 • Trypsin 2, 50 23 200 • Malátdehydrogenasa 5, 76 74 900 • Laktátdehydrogenasa 7, 54 146 200
![Page 100: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/100.jpg)
MALDI-TOF MS (Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization-Time-of Flight-Mass Spectrometry)
Princip metody:
• Proteinový vzorek je smíchán s matricí - tvorba krystalů
• Krystaly vystaveny laserovému paprsku – vznik nabitých iontů proteinu
• Ionty analyzovány v analyzátoru doby letu (t ∼ (m/z)1/2)
MATRICE PRO MALDI – organické látky zajišťující ionizaci látek
OH
O
CNOH
OH
OH
OH
O
α-kyano-4-hydroxyskoř icová kyselina 2,5-dihydroxybenzoová kyselina
![Page 101: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/101.jpg)
MALDI-TOF MS (Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization-Time-of Flight-Mass Spectrometry)
0
1000
2000
3000
4000
Inte
ns. [
a.u.
]
20000 40000 60000 80000 100000 120000 140000 160000 180000m/z
Mr=66350
Hovězí sérový albumin
![Page 102: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/102.jpg)
Strukturní typy proteinů
• 1. Primární struktura = sekvence aminokyselin (shodné s peptidy). • 2. Periodické sekundární struktury: α-helix a beta skládaný list, otočky a smyčky. • 3. Terciární struktura. • 4. Kvartérní struktura.
• Ad 2. • Pauling Linus a Corey Robert postulovali v roce 1951 dvě
periodické struktury α-helix a beta skládaný list. Později byly objeveny další, sice neperiodické, ale všeobecně se vyskytující beta otočka a omega smyčka.
![Page 103: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/103.jpg)
Charakteristika α-helixu
• Helikální struktura – šroubovice udržovaná vodíkovými vazbami. • Jeden závit tvoří 3, 6 aminokyselinových zbytků a obsahuje 13 atomů,
počínaje kyslíkem po vodík vodíkové vazby. • Proto označení: 3,613 helix. • Každý aminokyselinový zbytek reprezentuje 0,15 nm. Celková délka
závitu je 0,15 x 3, 6 = 0,54 nm. • Vedlejší skupiny aminokyselin (R) směřují ven ze šroubovice. • Každý peptidový karbonyl je vázán vodíkovou vazbou na vzdálenou NH
skupinu řetězce (i + 4). • Všechny vodíkové vazby jsou paralelní s osou šroubovice. α-helix takto definovaná má:
φ = - 60° ψ v rozmezí – 45° až – 50°
• Peptidová vazba je vzhledem k polarizaci skupin NH a CO dipól. Dipólem
je také celý peptid s pozitivním nábojem na N konci a negativním na C konci.
• Při pohledu shora na šroubovici je směr vinutí shodný se směrem chodu hodinových ručiček – α-helix pravotočivá.
![Page 104: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/104.jpg)
Schematické znázornění α-helixu
![Page 105: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/105.jpg)
Vodíkové vazby v α-helixu. Skupina CO n-té aminokyseliny tvoří vodíkovou vazbu s NH skupinou aminokyseliny n + 4.
CNH
O
CNH
O
NH
C
H
C
O
NH
C
H
CNH
O
C
H
CNH
O
C
H
C
H
C
O
C
H
Ri
Ri+1
Ri+2 Ri+4
Ri+3 Ri+5
![Page 106: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/106.jpg)
A)Stužkové znázornění s α-uhlíky a vedlejšími skupinami aminokyselin. B) Boční kuličkový model znázorňuje vodíkové vazby. C) Pohled shora.
D) Kalotový model.
![Page 107: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/107.jpg)
Znázornění α-helikální struktury. Konkrétní protein je tvořen svazkem α-helixů.
![Page 108: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/108.jpg)
Charakteristika β-skládaného listu • Struktura dostala název podle pořadí ve kterém byla popsána.
• Stéricky jsou obě formy beta listu daleko volnější. Vzdálenost mezi
sousedními aminokyselinami je 3,5 Å, zatímco u helixu jen 1,5Å.
• Vedlejší řetězce sousedních aminokyselin směřují na opačné strany.
• Beta list je tvořen spojením dvou nebo více beta řetězců vodíkovými vazbami. Sousední řetězce mohou jít proti sobě – antiparalelní, nebo souběžně – paralelní.
• V případě antiparalelního beta listu jsou NH a CO skupiny každé aminokyseliny spojeny vodíkovou vazbou s CO a NH skupinami partnerského řetězce přímo.
• V paralelní struktuře je vazba NH skupiny aminokyseliny jednoho řetězce na CO skupinu aminokyseliny sousedního řetězce posunuta.
![Page 109: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/109.jpg)
Struktura beta listu. Vedlejší skupiny (zelené) sousedních aminokyselin směřují na opačnou stranu.
![Page 110: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/110.jpg)
Antiparalelní beta list
![Page 111: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/111.jpg)
Paralelní beta list
![Page 112: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/112.jpg)
Schematický model beta listu
![Page 113: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/113.jpg)
Proteiny obsahují zpětné kličky (beta kličky nebo vlásenkové ohyby). Obvykle je CO skupina i-té aminokyseliny vázána vodíkovou vazbou
s aminokyselinou i + 3. Nazývají se také omega smyčka.
![Page 114: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/114.jpg)
Terciární struktura
• Třírozměrná struktura, obvykle funkčního proteinu. Složena z domén - α-helikální, beta listu a smyček.
• Např. myoglobin – obsahuje neproteinovou složku hem (prosthetická skupina).
• Více než 70 % hlavního řetězce myoglobinu je složeno z 8 α-helixů a zbytek tvoří smyčky mezi helixy.
![Page 115: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/115.jpg)
Kvarterní struktura
• Kvarterní struktura vzniká sdružením polypeptidových řetězců (obvykle kvarterních struktur) do multipodjednotkové struktury.
• Mohou tak vznikat dimery, tetramery atd. Podjednotky mohou být shodné – homomery nebo různé heteromery.
• Příkladem je hemoglobin, který má kvarterní strukturu složenou ze čtyř podjednotek. Dvou α a dvou β. Hemoglobin existuje jako α2β2 teramer.
• Tvorba kvarterní struktury hemoglobinu má význam a funkci při přenosu kyslíku z plic do tkání. Později porovnáme rozdíl mezi přenosovou schopností svalového myoglobinu a krevního hemoglobinu.
![Page 116: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/116.jpg)
Tetramer α2β2 lidského hemoglobinu. Dvě identické podjednotky α (červeně) a dvě identické podjednotky β
(žlutě). Molekula obsahu čtyři skupiny hemu.
![Page 117: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/117.jpg)
Principy určení třírozměrné struktury proteinů pomocí NMR spektroskopie a rentgenové krystalografie.
• Nukleární magnetická resonanční spektroskopie určuje strukturu proteinů v roztoku. Nutné jsou koncentrované roztoky proteinů (např. 1 mM, nebo 15 mg.mL-1 pro 15 kd protein).
• Princip: Technika je založena na skutečnosti, že jádra určitých atomů vykazují magnetické vlastnosti, spin. Obvykle se měří protonová spektra nebo spektra 13C. Spiny těchto atomových jader jsou ovlivňovány okolím. Provedení a interpretace výsledků je velmi složité a přístrojově náročné. (1 Å = 10-8 m)
• Rentgenostrukturní analýza (krystalografie) vyžaduje protein v podobě
monokrystalu, zdroj rentgenových paprsků a detektor. • A) Krystalovat proteiny je velmi náročná a složitá záležitost. Např. myoglobin
krystaluje z roztoku 3 M síranu amonného. • B) Zdroj rentgenového paprsku o vlnové délce 1,54 Å se získá působením rychlých
elektronů na měděnou destičku. • C) Paprsek procházející rotujícím krystalem vytváří difrakční obrazec, který se
zachytí detektorem. • Z hustoty a intenzity difrakčních stop se sestavuje obrazec třírozměrné
struktury proteinu.
• Do současnosti je známa struktura více jak 10 000 proteinů. Koordináty struktur se shromažďují v Protein Data Bank (www.rcsb.org/pdb).
![Page 118: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/118.jpg)
Krystaly myoglobinu
![Page 119: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/119.jpg)
Rentgenový difrakční snímek myoglobinu
![Page 120: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/120.jpg)
Část mapy elektronové hustoty myoglobinu – hem
![Page 121: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/121.jpg)
Chaotropní látky – chaotropy.
• Chaotropní látky ruší třírozměrnou (3D) strukturu proteinů a nukleových kyselin.
• Destabilizací a rušením vodíkových vazeb dochází k denaturaci makromolekul.
• Močovina v koncentraci od 6 – 8 Mol/L • Thiomočovina 2 Mol/L • Chloristan lithný 4,5 Mol/L • Guanidinium chlorid (GndCl) 6 Mol/L
![Page 122: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/122.jpg)
Základní pojmy imunologie
• Imunologické metody slouží k purifikaci proteinů, jejich lokalizaci v buňce a kvantifikaci.
• Imunologie je založena na tvorbě protilátky proti specifickému proteinu.
• Protilátka (také imunoglobulin, Ig) je protein syntetizovaný živočichy jako odezva na přítomnost cizí látky zvané antigen.
• Tento proces slouží jako obrana živočichů před infekcí. • Protilátky vyvolávají tvorbu specifických antigenů. • Antigeny mohou být proteiny, polysacharidy a nukleové kyseliny. • Protilátka rozpoznává specifické skupiny aminokyselin na velké
molekule antigenu. Toto místo se nazývá antigenní determinant nebo epitop.
• Malé cizí molekuly jako syntetické peptidy mohou také vyvolávat tvorbu protilátek. Nazývají se hapteny.
![Page 123: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/123.jpg)
Struktura protilátky IgG se skládá ze čtyř řetězců. Dvou těžkých (heavy, H) a dvou lehkých (light, L) spojených disulfidovými vazbami. Těžké a lehké řetězce tvoří
doménu, která má na koncích vazebná místa pro antigen.
S S
S SSS
Lehký řetězec (L) Těžký řetězec (H)
Vazebné místo antigenu
Vazebné místo antigenu
![Page 124: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/124.jpg)
Polyklonální a monoklonální protilátky. Většina antigenů má více epitopů. Polyklonální protilátky jsou proto
heterogenní směsí protilátek, kde je každá specifická na různé epitopy antigenu. Monoklonální protilátky jsou všechny identické produkované klony
jednotných protilátky produkujících buněk. Rozpoznávají jeden epitop.
![Page 125: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/125.jpg)
Využití tvorby protilátek ke kvantifikaci proteinů na bázi testů ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)
• A) Nepřímá ELISA se využívá k detekci přítomnosti protilátek (např. k detekci infekce HIV).
• Princip: Antigen (virový protein) se naváže na stěny zkumavky. Pacientovo sérum obsahující protilátky se nechá navázat na antigen. Přidají se specifické protilátky (živočišné) proti lidským protilátkám obsahující navázaný enzym (křenová peroxidasa). Nakonec se přidá substrát enzymu a vyvolá se barevná reakce.
• B) Sendvičová ELISA umožňuje jak detekci, tak kvantifikaci antigenu.
• Princip: Na stěny zkumavky se naváže protilátka. Po přídavku krevního séra obsahujícího antigen. Antigen se naváže na protilátku. Přidáme druhou protilátku proti antigenu na které je navázán enzym (obvykle křenová peroxidasa). Po přídavku substrátu se objeví zbarvení úměrné množství přítomného antigenu.
![Page 126: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/126.jpg)
![Page 127: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/127.jpg)
Metoda Western blotting umožňuje detekovat malá množství proteinů gelovou elektroforézou. Po elektroforéze se zkopírují proteiny na list
polymeru, kde reagují s radioaktivní protilátkou. Pás odpovídající proteinu na který se navázala protilátka se objeví na autoradiogramu.
![Page 128: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/128.jpg)
Předmět a obor biochemie
• Definice: • Biochemie studuje biologické objekty chemickými
metodami. Molekulární úroveň. • Etapy vývoje biochemie: • A) Biochemie statická – řešení struktur biologických
objektů (proteiny, sacharidy, lipidy,…….) • B ) Biochemie dynamická – metabolismus (intermediární
metabolismus). Studium reakcí a vzájemných vztahů sloučenin v rámci buňky a celého organismu (bazální metabolismus). Převratná role enzymů.
• C) Přenos informace, regulace metabolických pochodů. Odštěpení „Molekulární biochemie, molekulární genetiky“.
![Page 129: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/129.jpg)
• Vztah a souvislost biochemie s ostatními chemickými, biologickými a medicínskými obory.
• Chemie • Anorganická chemie (Bioanorganická chemie) • Organická chemie • Fyzikální chemie • Analytická chemie • Biologie • Biologie buňky • Fyziologie (bakteriální, savčí, rostlinná, obecně živočišná,
atd.) • Genetika • Biochemie podle předmětu zkoumání: Lékařská, klinická,
potravinářská, atd.
![Page 130: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/130.jpg)
Kořeny biochemie
• F. Wöhler – 1828 – syntéza močoviny z anorganických látek
• Bratři Eduard a Hans Buchnerové – 1897 –bezbuněčný extrakt z kvasinek katalyzuje fermentaci (reakce „in vitro“.).
• J. B. Sumner -1926 – krystaluje enzym ureasu, protein z luštěniny Canavalia ensiformis
• Současný rozvoj biologie buňky • Historický pohled na úlohu deoxyribonukleové kyseliny
(DNA) v buňce • Objev 1869 F. Miescher; 1953 – James Watson a
Francis Crick – struktura DNA – start molekulární biologie.
![Page 131: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/131.jpg)
Friedrich Wöhler (31. červenec 1800 Eschersheim u Frankfurtu – 23. září 1882 Göttingen)
![Page 132: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/132.jpg)
Friedrich Wöhler • Friedrich Wöhler (31. červenec 1800 Eschersheim u Frankfurtu – 23. září 1882
Göttingen) byl významný německý chemik, známý hlavně svou syntézou močoviny. • V roce 1823 dokončil svá studia medicíny v Heildebergu a díky Leopoldu Gmelinovi
(tamním profesor chemie, biologie a objevitel kyanoželezitanu draselného) potom působil pod Jönsem Jacobem Berzeliem (švédský anorganický chemik, představitel vitalistické teorie) ve Stockholmu. Následně pracoval a vyučoval chemii na polytechnice v Berlíně (konkrétně od 1825 do 1831). Potom byl až do roku 1836 umístěn na vyšší polytechnickou školu v Casselu a později se stal profesorem chemie na Univerzitě v Göttingenu (Georgia Augusta University of Göttingen), kde pracoval až do své smrti.
• Největší význam má Wöhlerova práce v oblasti organické chemie, roku 1828 se mu podařilo syntetizovat zahříváním kyanatanu amonného močovinu, látku pomocí níž vylučují savci ze svého těla nepotřebný dusík, což je dnes považováno za milník konce vitalistických představ. V tehdejší době převládal názor označovaný jako vitalismus, který tvrdil, že ke vzniku organických látek je třeba jakási vitální síla (lat. vis vitalis, fran. Élan vital) a nelze je z tohoto důvodu uměle připravit v laboratoři. Mezi zastánce této teorie patřili Jöns Jacob Berzelius a francouzský chemik Gerhardt. Berzelius tento názor vyslovil ve svém díle z roku 1807 a jako první se pokusil shrnout tehdejší poznatky a vysvětlit odlišnosti látek izolovaných z živé přírody. Vitalistická teorie byla v souladu s tehdejším převládajícím názorem, v němž dominovala církevní ideologie a lidskému poznání nedostupné síly. Ale již v roce 1783 se Scheelemu podařilo připravit kyanovodík a Gay-lussacovi dikyan, z něhož pak Wöhler připravil roku 1824 kyselinu šťavelovou – v podstatě lze říct, že
![Page 133: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/133.jpg)
• syntetizovat organické látky bylo možné již před Wöhlerovou syntézou močoviny, a tak se vitalisté museli bránit proti každému experimentu, který prokazoval nesprávnost jejich teorie. Po Wöhlerově úspěchu se dokonce uchýlili k tvrzení, že močovinu nelze považovat za „pravou organickou“ sloučeninu, jelikož jde jen o odpadní produkt živého organismu. Nicméně ani sám Wöhler, který sice připisoval syntéze močoviny značný význam, ale spíš díky skutečnosti, že šlo o syntézu organické sloučeniny z anorganické látky, ji nepovažoval za dostatečný argument vyvracející platnost vitalistické teorie. Ke konečnému odmítnutí vitalistické teorie tak došlo později v důsledku syntéz dalších organických sloučenin jako byla např. syntéza kyseliny octové provedená Kolbem roku 1845 nebo Berthelotovy syntézy methanu, kyseliny mravenčí, ethynu a benzenu během let 1855 až 1867.
• Zjištěním, že kyanatan amonný se může přeměnit na močovinu vnitřní změnou struktury atomů bez změny hmotnosti, Wöhler prokázal jeden z prvních a nejlepších příkladů izomerie. Dva roky po syntéze močoviny, v roce 1830, Wöhler publikuje společně s Justem von Liebigem výsledky výzkumu o kyselině kyanurové, kyanaté a močovině. Berzelius ji ve své zprávě pro Královskou švédskou akademii věd shledal nejvýznamnějším výzkumem toho roku. Výsledky byly na tehdejší dobu trochu nečekané a podaly další důkazy ve prospěch izomerie.
• Wöhler spolu s Liebigem zkoumal také benzoylové sloučeniny. Jejich práce objasnily teorii radikálů a substituce v chemických sloučeninách.
• Wöhler byl také spoluobjevitelem beryllia, křemíku, karbidu vápníku a mnoha dalších prvků. Za zmínku stojí jeho objev hliníku. Wöhler ho získal z oxidu hlinitého, přestože se před ním o to samé bez úspěchu pokoušeli Davy, Oerstedt a Berzelius. Dále se mu podařilo izolovat yttrium, beryllium a zjistil, že křemík může být z získán ve formě krystalů. V dalších letech přispěl svými pokusy k objevu titanu, vanadu, niobu, tantalu i uranu. Dále uspěl při pokusu získat čistý nikl a se dvěma svými přáteli založil v Casselu továrnu na jeho výrobu. Studoval také chinony, alkaloidy i acetylen.
• Wöhler se navíc zabýval výzkumem meteoritů. Provedl analýzu mnoha z nich a zjistil, že několik z nich obsahuje organické látky. Vlastnil velmi rozsáhlou soukromou sbírku meteoritů a mnoho let psal o meteoritech pro Jahresbericht der Chemie.
![Page 134: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/134.jpg)
Friedrich Wöhler
• Během stáže u Berzelia ve Stockholmu se Wöhlerovi podařilo připravit sloučeninu kyanatan stříbrný. V téže době jeho krajan a později nejlepší přítel Liebig připravil během stáže v Paříži třaskavou sloučeninu, kterou příhodně nazval fulminan stříbrný (fulminare je latinsky blýskati se). Analýzou pak zjistil, že jeho molekula obsahuje stejný počet stejných atomů jako Wöhlerův kyanatan! Dnes víme, že kyanatan a fulminan (izokyanatan) jsou chemické izomery, tedy sloučeniny ze stejného množství a druhu atomů, ale jinak uspořádaných (první má vzorec AgOCN, druhý AgNCO). Tehdy to byla záhada.
![Page 135: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/135.jpg)
Friedrich Wöhler
• Wöhler, v tu dobu již učitel berlínské průmyslové školy, se tedy pouští do dalšího výzkumu svých kyanatanů stříbrných a snaží se z nich všelijak vyrobit Liebigův třaskavý izomer. Když se počátkem roku 1828 pokouší z kyanatanu stříbrného a chloridu amonného získat kyanatan amonný, získává zcela mu nepodobné třpytivě bílé krystalky, ve kterých identifikuje svou starou známou z dob studií - močovinu... Vida, ze sloučeniny anorganické vznikla látka organická !
NH4OCN ONH2
NH2CH4ON2
Kyanatan amonný močovina
![Page 136: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/136.jpg)
Současnost a budoucnost
• Konstrukce první knihy života. • V únoru 2008 americký biochemik Craig Venter oznámil, že se
jeho týmu (pěti stovkám špičkových odborníků) podařilo syntetizovat genom, tedy kompletní dědičnou informaci bakterie Mycoplasma genitalium. Genom tohoto jednoduchého organismu obsahuje asi 580 000 písmen genetického kódu, každé z těchto písmen (nukleotidů) sestává ze šesti molekul (čtyř organických a dvou anorganických). Jak to venterovci dokázali? Samo sebou napřed ten genom důkladně přečetli. Pak syntetizovali z jednotlivých nukleotidů články dlouhé asi 6 000 písmen. Ty potom spojovali ve stále delší řetězce, až dostali čtyři už dlouhé úseky DNA. Ty vnesli do těla kvasinky, která je zkompletovala v úplný, ale umělý genom mykoplazmy. Dalším Venterovým cílem - prozatím - zřejmě bude vytvořit v přírodě se nevyskytující mikroorganismy. S člověku užitečnými vlastnostmi - tyto umělé bakterie budou třeba rozkládat vodu na vodík a kyslík nebo zkvašovat biologický odpad na butylalkohol k pohonu spalovacích motorů.
![Page 137: Proteiny, peptidy a aminokyseliny - Webcastyibiochemie.upol.cz/WebGraphics/biochemie/download/Modul-01A.pdf · Asparagin Asn N Glutamin Gln Q C COO NH 3 + H CH 2 OH-C COO NH 3 + H](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022020100/5aca15f77f8b9aa3298d5d74/html5/thumbnails/137.jpg)
J. Craig Venter (born John Craig Venter October 14, 1946, Salt Lake City, Utah)
• Venter is currently the president of the J. Craig Venter Institute, which conducts research in synthetic biology. In June 2005, he co-founded Synthetic Genomics, a firm dedicated to using modified microorganisms to produce clean fuels and biochemicals. In July 2009, ExxonMobil announced a $600 million collaboration with Synthetic Genomics to research and develop next-generation biofuels. Venter used his sloop (člun Čaroděj II), Sorcerer II, in the Global Ocean Sampling Expedition to help assess genetic diversity in marine microbial communities.