Raúl Gil OrtsR2 Análisis Clínicos
INTRODUCCIÓN
PrincipiosCitometría de flujo
- ¿Qué podemos analizar?- ¿Qué parámetros?- ¿Cómo funciona?
UF-1000i
Análisis de las células de orina
Interpretación de los resultados
PRINCIPIOS
- Emplea la citometría de flujo para analizar los elementos contenidos en la orina
- Discrimina y clasifica en función del grado de fluorescencia y dispersión de la luz
CITOMETRIA DE FLUJO
Es un método analítico por el que se mide la emisión de múltiples fluorescencias y la dispersión de luz de células o partículas microscópicas, alineadas secuencialmente mediante una corriente líquida laminar, cuando son presentadas de una en una y a gran velocidad frente a un haz de luz láser de longitud de onda adecuada
Nivel molecularProteínas extracelularesSecuenciasde ADN o ARN libresComplejos inmunes circulantes
Nivel SubcelularViriones individualesLiposomasCromosomas aisladosOrgánulos aisladosNúcleos aislados
Nivel CelularBacteriasHongos unicelularesCélulas humanas y animalesProtoplastos vegetales
Nivel supracelularHibridomas y fusiones celularesEsferoidesOrganismos pluricelulares
Parámetros nucleares
Parámetros citoplasmáticos: Proteínas Enzimas
Parámetros de superficie: Moléculas de superficie Pared celular
Parámetros extracelulares: Proteínas secretadas
Fluido células en suspensiónReactivo envolvente Reactivo envolvente
Señal óptica: Luz dispersa Luz Fluorescente
Análisis
DIAGRAMASDISPERSIÓN HISTOGRAMA
S
-Unidad principal
- Muestreador
-Unidad de proceso de la información
SISTEMADE LUZDISPERSAFRONTAL
SISTEMA DE LUZ DISPERSA LATERAL
SISTEMA DE LUZ FLUORESCENTE LATERAL
SE INTRODUCIE UN FLUIDO ENVOLVENTE PRESURIZADO - FORMA UN TÚNEL LÍQUIDO
PERMITE LA ENTRADA DE LAS CÉLULAS - DE UNA EN UNA - EVITA LA FORMACIÓN DE COÁGULOS
ESTOS 2 FLUIDOS NO SE MEZCLAN-MEJORA LA PRECISIÓN Y LA REPRODUCIBILIDAD DEL RECUENTO
- IMPIDE LA CONTAMINACIÓN DE LA CÉLULA DE FLUJO
Evitar
UNIDAD PRINCIPAL
UNIDAD DE PROCESAMIENTO
LUZ DISPERSA FRONTALLUZ DISPERSA LATERALLUZ FLUORESCENTE
DIAGRAMA DE DISPERSIÓN
LUZ DISPERSA FRONTALLUZ FLUORESCENTE
HISTOGRAMA ERITROCITOS LEUCOCITOS
célula
Formas de onda
Análisis -altura - amplitud - inclusiones - otros factores
Información - tamaños celulares-Estado superficie-características tinción
Clasificacion de las células
Principios del análisis
SEÑAL DE LA LUZ DISPERSALATERAL
La señal de la luz refleja el estado de la superficie de las células
SEÑAL DE LALUZ FLUORESCENTE
La señal de la luz dispersa frontal refleja la información sobre el tamaño de las partículas
SEÑAL DE LA LUZ DISPERSA FRONTAL
Refleja la intensidad y la longitud de la tinción del núcleo citoplasma membranas bacterias
Parámetros de análisis (Elementos formados) RBC: Eritrocito WBC: Leucocito EC: Célula epitelial CAST: Cilindro BACT: Bacteria
Parámetros de aviso y estudio (elementos cuantitativos) X´TAL: Cristal YLC: Célula levaduriforme SRC: Célula redonda pequeña Path. CAST: Cilindro patológico MUCUS: Mucosidad SPERM: Espermatozoides Cond.: Conductividad
La intensidad de la luz dispersa frontal y de la luz fluorescente se combinan con el número de células de la orina clasificadas
RBC-Generalmente no se requiere comprobar el recuento con microscopia manual-En caso de discrepancia con la tira: verificar si densidad o la conductividad son bajas. Posible lisis- Interferencias de X´TAL contados como RBC: verificar diagrama dispersión.
Comprobar si UF ha mostrado alarma de baja fiabilidad RBC/X´TAL- Interferencias de YLC clasificadas como RBC: verificar diagrama dispersión. Comprobar si UF ha mostrado alarma de baja fiabilidad RBC/YLC- Cut-off: 25 RBC/microL
WBC:-Generalmente no se requiere comprobar el recuento con microscopia manual-En caso de discrepancia con la tira: verificar si densidad o la conductividad son bajas. Posible lisis-En recuentos elevados se pueden presentar fragmentos de WBC por lisis parcial que pueden clasificarse como BACT o YLC-Cut-off: 40 WBC/microL
EC/SRC-Recuento elevado de SRC: proceder a microscopía manual.-EC sin alarma de SRC, no provee valor diagnóstico y puede indicar baja calidad de la muestra, por ejemplo por contaminación. Da información sobre poca fiabilidad del recuento de BACT.
CAST/Path CAST
-En caso de PRO elevadas en la tira sin alarma de CAST en el UF: revisar al microscopio-Los CAST hialinos pueden verse interferidos por el MUCUS
BACT
-Recuentos son específicos del canal de BACT, sin embargo se pueden encontrar otras partículas que pueden ser fuente de interferencia: verificar el diagrama de dispersión -Comprobar si UF ha mostrado alarma de baja fiabilidad RBC/BACT.
YLC-Si se observan recuentos elevados en comparación con la microscopía: verificar en el diagrama de dispersión la existencia de solapamiento con el área de RBC; verificar la excesiva extensión del área OTHERS.
X´TAL
-En caso de posible interferencia con RBC, verificar el diagrama de dispersión.
GRACIAS