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TD 1les ckis et la différenciation des
entérocytes
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Rappel
MigrationDifférenciation
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Rôle important de la Matrice extracellulaire dans la différenciation intestinale.
Mais elle n’est certainement pas le seul stimulus de différenciation
Autre hypothèse: le processus est dirigé par une horloge moléculaire intracellulaire.
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p27(Kip1) is an inducer of intestinal epithelial
cell differentiation.
Quaroni A, Tian JQ, Seth P, Ap Rhys C.
● Section of Physiology, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USA
● Am J Physiol Cell Physiol. 2000 Oct;279(4):C1045-57.
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balance
prolifération différenciation
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Cyclin-dependent kinase inhibitors (CKI)
Il en existe plusieurs: p27 Kip1 (p27), p21 Cip1/WAF1 (p21), p16…
Corrélation entre l’expression de cki et le degré de différenciation.– surexpression de p21 dans les cellules intestinales différenciées
– p27 dans les kératynocytes: l’augmentation de l’expression de p27 est concomittant avec la différenciation. Un oligonucléotide antisens de p27 inhibe la différenciation.
– Rôle de p27 dans la différenciation des cellules intestinales?
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Méthode
● Utilisation de la lignée HIEC6: cellules issues de cryptes
● Surexpression par infection de:● Vecteur seul Adnull● p16 Adp16● p21 Adp21● p27 Adp27
Analyse de la prolifération, des différentes phases du cycle cellulaire,de la morphologie des cellules, de l’expression de marqueurs de différenciation
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Contrôle de l’expression des ckis
Les cellules sont infectées à différentes concentrations d’adenovirus.Après 24 heures analyse des différentes protéines par Western blot
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Contrôle de l’expression des ckis
• Analyse par immunocytochimie de l’expression des ckis
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Conclusions
● L’infection des cellules par l’adenovirus + cDNA exogène induit l’expression des ckis
● La surexpression de P21 entraine l’expression de P27 (P27 sous le contrôle de p21?)
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Ckis et prolifération
Incorporation de thymidine tritiée 24 heures après infection
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Utilisation de la BrdU
Brdu (bromodeoxyuridine)
Ac X-Brdu
Ac X-Ac X-Brdu
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Ckis et prolifération
B: effet dose de l’adenovirus C étude cinétiquesur la prolifération
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Conclusions
● P16, P21 et P27 inhibent la prolifération● de façon dose-dépendante.● Plus d’efficacité pour P27, p21 puis P16● L’effet de P27 est irréversible
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Surexpression des cki et cycle cellulaire
Pic G1-G0
Pic S
Intensité de fluorescenceContenu en ADN
Nom
bre
de c
ellu
les
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Cki et cycle cellulaire
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Conclusions
● P16, P21 et P27 augmentent la quantité des cellules en phase G0/G1et diminue le nombre de cellules en phase S
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Cki et morphologie
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Conclusions
● L’expression des CKI entraîne:● p16: cellules polygonales mais pas de
microvillosité● p27: cellules polygonales avec présence de
nombreuses microvillosités.● p21: 20-40% des cellules sont polygonales avec
des microvillosités.● p27 induit une différenciation morphologique
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cki et expression de la DPP IV
Protéine
ARNm
Activité enzymatique
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cki et expression de la DPP IV
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Conclusions
● p27et dans une moindre mesure p21 induisent l’expression de la DPPIV fonctionnelle. Localisation a la membrane plasmique.
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cki et expression de l’APN
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cki et expression de l’APN
![Page 25: TD 1 les ckis et la différenciation des entérocytes](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022051614/551d9d8d497959293b8c3037/html5/thumbnails/25.jpg)
Conclusions
● p27et dans une moindre mesure p21 induisent l’expression de l’APN.
![Page 26: TD 1 les ckis et la différenciation des entérocytes](https://reader033.vdocuments.net/reader033/viewer/2022051614/551d9d8d497959293b8c3037/html5/thumbnails/26.jpg)
En conclusion
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Autres systèmes cellulaires...Premier article montrant le rôle de p27 dans la différenciation des cellules epithéliales. Et en 2009?Même rôle dans les cellules épithéliales bronchiques
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Comment peut on aller plus loin dans l'étude?
• In vivo…Il existe d’autres facteurs que les CKI. Souris KO pour P21… l’intestin est normal.
• Cancer: dans les carcinomes la P27 est souvent sous-exprimée. Cette sous expression est associée à une augmentation de l’agressivité des cancers.Mêmes résultats pour prostate et estomac.
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Pourquoi la surexpression de P21 induit la différenciation