Thrombozytenfunktionstestung in der Transfusionsmedizin
Petra Jilma
Klinisches Institut für Labormedizin
AKH-Wien
• Unterschiedliche Messmethoden
• Testung von Spendern
• Untersuchung von Thrombozyten-
konzentraten
• Testung der Empfänger
Thrombozytentransfusionen sollen Hämostase verbessern!
H. Mani et al: Fortschritte in der Thrombozytenfunktionsdiagnostik;Hämostaseoligie 2010
Thrombozytenfunktion
4
1) PFA-100® Plättchenfunktionsanalyser
•Printer
•LCD Bildschirm
•Tastatur
•Behälter für Starterlösung
•Meßzelle
•Kasette für
Meßzelle
•Karusell
Das System
3 unterschiedliche Messzellen, unterscheiden sich druch den zugebenen Aktivator
•Kollagen/Epinephrin: vergleichbare schwächere Aktivierung durch Adrenalin/Kollagen Stress•Kollagen/ADP: relativ starke Aktivierung durch recht hohe Menge ADP•Innovance PFA-P2Y: Aktivierung durch ADP/PGE1 Kollagenstress
Messprinzip
Aufbau der Messzelle
Durch Adhäsion: Verschluss Messgröße: Verschlusszeit (s) = Zeit bis zum Stillstand des Blutflusses
Simulation von Flussbedingungen im arteriellen Stromgebiet
Anwendung
• Aspirin- und Clopidogreleinnahme
• Von Willebrand Disease Diagnostik
• V. a. Thrombasthenie Glanzmann und Bernard
Soullier Syndrom
• Screening bei Patienten mit erhöhtem
perioperativem Blutungsrisiko
ASA 500 mg
i.v.
2) MultiplateEinfaches, standardisiertes und schnelles Testverfahren aus antikoaguliertem Vollblut (Hirudin oder Heparin) • 5 Kanäle für hohen Durchsatz • Hohe Sensitivität • Parallelbestimmung (2 Sensorenpaare) zur Qualitätskontrolle
Testmethode•doppelt ausgeführter thrombogener Sensor, Magnetrührer•die Thrombozyten adhärieren nach Zufabe eines Aktivators (z.Bsp TRAP) und aggregieren auf den Sensoroberflächen und erhöhen den elektrischen Widerstand
Impedanzaggregometrie
3) Lichttransmissionsaggregometrie (Born)(LTA)
Prinzip: Herstellung von PRP und PPP, Zusatz von Agonisten: Kontinuierliche Registrierung der im Verlauf der Aggregation sich ändernden Transmission von Licht
Nachteile: eingeschränkte Standardisierbarkeit, keine physiologischen Bedingungen, kein shear stress, aufwendig, in Speziallabors
4) Thrombelastogramm (TEG)Der Ablauf der Gerinnung und die Verfestigung des Gerinnsels wird aufgezeichnet.
5) FlowzytometrieVorteile:
• Wenig Material notwendig• Messung unterschiedlicher Aspekte der Thrombozyten-
Funktion: z.Bsp: Aktivierung (Expression von P- selectin), Aggregation (Expression der Fibrinbindungsstelle)
• keine Scherkräfte
Nachteile:• Nicht überall verfügbar• personal- und zeitintensiv
6) IMPACT R
High shear 1800-1
percentage of the well surface covered by platelets aggregates (percentage SC): platelet adhesion average size of the aggregates (AS in µm2): platelet aggregation
Testung der Thrombozytenspender
Screening mittels Point of Care-Geräten, z. Bsp: PFA-100, Multiplate, ROTEM1)“High incidence of defective high-shear platelet function
among platelet donors”1)
11% der Spender: CEPI-CT, CADP-CT
durch Einnahme von Cyclooxygenasehemmern
P. Harrison et al. Transfusion 2004;44:764-770
20 % der Spender: CEPI-CT9%: TXB2
Hohe Spendefrequenz: negativer Einfluss auf die Thrombozytenfunktion
2) „Impaired platelet function among platelet donors“
P. Jilma-Stohlawetz et al.: Thromb Haemost 2001:880-6
3) “Influence of multicomponent apheresis on donors’ haematol. and coagulat. parameters and platelet function”
• Untersuchung von 48 Multikomponentenspendern am Tag 0 vor und nach Apherese, Tag 2, 14 und 42.
• Am Tag 2 war die Plättchenfunktion signifikant beeinträchtigt (gemessen mittels Aggregometrie und ROTEM)
• Gerinnungsparameter (PTZ, aPTT, Fibrinogen, D-Dimer, Faktor VIII und vWF) blieben nahezu unverändert.
S. Macher et al. Vox sang. 2012, 194-200
Testung der Thrombozytenkonzentrate
Viele Studien, unterschiedliche Aspekte können untersucht werden, z.Bsp. •Verschiedene Apheresemaschinen•Lagerungsdauer•Einfluss der Lagermedien•Manipulationen, wie Plasmadepletion und Filtration
Aber nicht alle Methoden sind geeignet!!
TRAP-6 induced MEA
inducible aggregation differs between Amicus and Trima/MCS+
TRAP-6 induced LTA
Jilma-Stohlawetz et al.: Transfusion 2009: 1564-68
Vergleich: Apheresemaschinen
Lagerung von Thrombozytenkonzentraten
C. Shams Hakimi et al. Platelets 201526:132-37
In vitro assessment of platelet concentrates with Multiplate
Transfusion 2008:129-35
platelet P-selectin increases during storage, while induced P-selectin declines
Lagerung von Thrombozytenkonzentraten
Einfluss der Plasmadepletion auf die Thrombozytenfunktion
Vox Sang. 2012: 258-60
Testung der Thrombozytenfunktion des Empfängers
• Problematisch, da alle Testsysteme > 100Plt/G benötigen, sonst nur sehr eingeschränkte Aussagekraft
• Nur sehr wenige Studien• am besten Vollblutmethoden
improved in vivo platelet function after PC transfusion
platelet function was determined under high shear conditions by Impact-R: adhesion increased, while the size of aggregates did not change
Horvath M et al. Transfusion 2010: 1036-42
Thromboelastometry in patients with liver cirrhosis before and after platelet transfusion
Tripodi A et al. 2013; Liver: 362-67
Zusammenfassung
• Es gibt keine „beste Methode“, die Testsysteme messen unterschiedliche Aspekte der Thrombozytenfunktion
• Besonders bei Apheresekonzentraten ist die Thrombozytenfunktion des Einzelspenders von großer Bedeutung: stichprobenartige Überprüfung überlegenswert, besonders bei Dauerspendern
• Noch keine Daten, ob die unterschiedliche in vitro Ergebnisse einen Einfluss auf Recovery und Thrombozytenfunktion der Empfänger haben
Vielen Dank für die Aufmerksamkeit !Fragen? Email: [email protected]