![Page 1: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/1.jpg)
Molekulska spektroskopija
APSORPCIONA Vidljiva UV IR
EMISIONA Fluorimetrija
![Page 2: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/2.jpg)
Fluorimetrija
Molekulska emisiona spektroskopija u UV i vidljivoj oblasti
![Page 3: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/3.jpg)
Rastvori koji pod UV svetlošću fluoresciraju u vidljivoj oblasti
![Page 4: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/4.jpg)
UVOD - LUMINESCENCIJA
fenomen u kome se supstanca pobuđuje nekom vrstom spoljašnje energije, a zatim se apsorbovana energija emituje u formi svetlosti;
svetlost ne podrazumeva samo elektromagnetne talase u vidljivoj oblasti, već i u bliskoj UV i bliskoj IR.
Fenomen se pominje 1500 godina pre n.e. (svici); Aristotel, 4. vek pre n.e. (ribe); Termin luminescenca (lat. lumen - svetlost) je prvi
uveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu.
![Page 5: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/5.jpg)
UVOD – FLUORESCENCIJA
Reč fluorescenca je uvedena da opiše pojavu karakterističnu za mineral fluorit (CaF2), kod koga je prvi put uočen kratki sjaj nakon ultraljubičaste ekscitacije;
traje koliko i ozračivanje (osvetljavanje)
![Page 6: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/6.jpg)
UVOD –FOSFORESCENCIJA
fosforescenca se odnosila na dugotrajnu emisiju koja može trajati i satima nakon prestanka pobuđivanja;
traje i posle osvetljavanja.
![Page 7: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/7.jpg)
Kako pobuđeni molekul oslobađa apsorbovanu energiju?
Neradijacioni prelazi – emituje se toplota Radijacioni prelazi - emituje se svetlost
![Page 8: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/8.jpg)
Fluorofore
Teoretski sve supstance koje apsorbuju UV i VIS bi mogle da fluoresciraju
Većina, ipak, ne fluorescira, jer imaju strukturu koja omogućava neradijativne (brže) puteve relaksacije
Fluorofore su grupe atoma ili molekuli odgovorni za pojavu fluorescencije
![Page 9: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/9.jpg)
Jedinjenja koja mogu da fluoresciraju
Nezasićena jedinjenja Konjugovana jedinjenja Policiklični aromatični ugljovodonici
Jedinjenja koja nemaju sposobnost fluoresciranja mogu se obeležavati fluorescirajućim agensima ili podvrgnuti hemijskim reakcijama u kojima će se dobiti
njihovi fluorescirajući derivati
![Page 10: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/10.jpg)
Fluorimetar
![Page 11: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/11.jpg)
Fluorimetar
![Page 12: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/12.jpg)
Osnovni delovi fluorimetra
izvor zračenja primarni (ekscitacioni) monohromator uzorak sekundarni (emisioni) monohromator detektor
Pravac upadnog (ekscitacionog) i emitovanog (emisionog) zračenja je pod uglom od 90o To omogućava osvetljavanje detektora samo emitovanom svetlošću (ne upadnom ili reflektovanom sa uzorka).
![Page 13: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/13.jpg)
IZVORI ZRAČENJA (200-900 nm)
Lampe (deuterijumova, vodonična) Ksenonska lampa daje intenzivan, relativno
kontinualan spektar između 200 i 800 nm
LED diode Laseri
![Page 14: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/14.jpg)
PRIMENA
Kvalitativna analiza (indentifikacija nepoznatih supstanci) poređenjem maksimuma talasne dužine
emisionog zračenja nepoznate supstance sa podacima iz baze
![Page 15: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/15.jpg)
Kvantitativna analiza
Niska granica detekcije posledica direktnog merenja inteziteta
proporcionalnog koncentraciji
Nepoznata koncentracija se određuje metodom kalibracione krive
![Page 16: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/16.jpg)
PRIMENA
neorganska hemija, organska hemija, biohemija... detekcija sastojaka u tragovima u biološkim i ekološkim
uzorcima detekcija u hromatografiji i elektroforezi određivanje vitamina (B1, B2) u biološkim ekstraktima DNA sekvenciranje izučavanje vezivanja liganda u biološkim sistemima... luminescentne materijale sadrže televizori, monitori
računara, fluorescentne lampe, medicinski uređaji za rendgensko snimanje, laseri…
![Page 17: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/17.jpg)
Prednosti fluorimetrije nad UV-Vis spektroskopijom
Visoka osetljivost (1000 puta niže koncentracije nego UV- Vis) Velika specifičnost (neznatna interferencija
drugih komponenti)
![Page 18: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/18.jpg)
LUMINESCENCIJA
različite pojave emisije svetlosti nakon pobuđivanja supstance različitim vrstama energije, bez zagrevanja.
Prefiks u nazivu vrste luminescencije ukazuje upravo na metod kojim je izazvano pobuđivanje.
Fotoluminescencija – apsorpcija elektromagnetnog zračenja (fluorescencija i fosforescencija)
Hemiluminescencija - pobuđeni molekul se formira u hemijskoj reakciji
Bioluminescencija - proces se odvija u živim organizmima, energijom metaboličkih reakcija.
![Page 19: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/19.jpg)
Luminescencija
![Page 20: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/20.jpg)
Luminescencija u forenzici
![Page 21: Vidljiva UV IRinstrumentalne.tmf.bg.ac.rs/Predavanja/3. Fluorimetrija.pdfuveo nemački naučnik Wiedemann 1888. godine, kao zajednički naziv za fluorescencu i fosforescencu. UVOD](https://reader031.vdocuments.net/reader031/viewer/2022021917/5e45daee2f7bc961a008e401/html5/thumbnails/21.jpg)
Bioluminescencija