Download - VIRUSI PROKARIOTA
VIRUSI PROKARIOTA
mr Petar Knežević
Novi Sad, 2007.
UNIVERZITET U NOVOM SADU
PRIRODNO MATEMATIČKI FAKULTETDEPARTMAN ZA BIOLOGIJU I EKOLOGIJU
MORFOLOGIJA
ADSORPCIJA
• RECEPTORI: transportni proteini, glikokaliks, tejhojne kiseline, peptidoglikan, itd.
• Prvo se reverzibilno vežu za primarne receptore, a zatim ireverzibilno za sekundarne
• Efikasnost povećavaju Mg2+ i Ca2+,a inhibiraju ugljenohidrati, žuč i dr.
• Gubitak receptora→ rezistencija na infekciju → mutacija faga → infekcija
PENETRACIJA I DEKAPSIDACIJA
• Kontrakcija omotača repa i ubacivanje NK
• Enzimska razgradnja površinskih struktura
• Zaštita NK- cirkulatorna forma, proteini i neuobičajeni nukleotidi
EKLIPSA
• EKSPRESIJA RANIH VIRUSNIH PROTEINA
• SINTEZA NK• EKSPRESIJA KASNIH VIRUSNIH
PROTEINA • INTRACELULARNO SKLAPANJE I
AKUMULACIJA
LIBERACIJA
• LIZA, RETKO PUPLJENJE• HOLINI PRAVE OTVORE NA MEMBRANI
BAKTERIJE, ŠTO OMOGUĆAVA DA ENDOLIZINI DOĐU DO ĆEL. ZIDA
• ENDOLIZINI:– Endo- β- N glukozaminidaza i N-
acetilmuraminidaza- glavne veze u peptidoglikanu– endopeptidaze deluju na transpeptidne mostove– N- acetilmuramil- L alanin amidaze (ili samo
amidaze) deluju na amidne veze koje povezuju šećerne i peptidne komponente peptidoglikana
• KOD MALIH ssDNK I RNK FAGA- AMURINI- aktiviraju autolizine
• KOD T4 OKO 100 VIRIONA/ĆELIJI• CEO CIKLUS TRAJE OKO 25 MIN.
• LITIČKI CIKLUS• LIZOGENI CIKLUS (LIZOGENI ILI
UMERENI FAGI)– U FORMI EPIZOMA (PROFAG) ILI
CIRKULARNE DNK– REPRESORNI PROTEIN JEDINI
AKTIVAN– UV INDUCIBILNI ILI NE– ZNAČAJNI U TRANSDUKCIJI
ZNAČAJ
• NAJBROJNIJI MO- preko 1030
• EKOLOGIJA BAKTERIJA• LIZOGENA KONVERZIJA- patogeni• INDIKATORI U SANITARNOJ
MIKROBIOL.• MODELI ZA ANIMALNE VIRUSE• KLONIRANJE- vektori• POLJOPRIVREDA I INDUSTRIJA• MEDICINA- dijagnostika i terapija
U sanitarnoj mikrobilogiji enterični virusi su od najvećeg značaja (enterovirusi, astrovirusi, enterični adenovirusi, ortoreovirusi, rotavirusi, kalcivirusi i hepatitis A i E virusi)
Karakteriše ih dugo preživljavanje u vodi, umerena rezistencija na hlor i visoka relativna infektivnost
Troškovi, dugo vreme inkubacije (3-12 dana) i opšta kompleksnost metoda onemogućavaju rutinsko praćenje njihovog prisustva u vodi
Indeks organizmi su bakteriofagi, zbog velike sličnosti sa humanim virusima
Koriste se:KOLIFAGI (somatski i FRNK fagi) iFAGI Bacteroides fragilis-a
Kolifagi
Somatski kolifagi široko rasprostranjeniF RNK kolifagi inficiraju samo F+ bakterije; specifični
za crevni traktz ljudi i životinja (10% ljudi, 45% goveda, 60% svinja i 70% živine) Postoje IV serotipa (I i IV animalni, III humani)
Fagi Bacteroides fragilis-a
Specifični za crevni traktdomaćin anaeroban i nisu univerzalno prisutniOdsustvo faga ne znači obavezno odsustvo enteričnih
virusa; značaj pri dezinfekciji
ODREĐIVANJE BROJNOSTI
• DIREKTNO- EM• INDIREKTNO-
METODOM PLAKA– EFIKASNOST OKO 50%– PFU- PLAKE FORMING
UNIT– 106/PLAK– MUTNE PLAKE-
LIZOGENI
ZADATAK
• ODREDITI BROJNOST KOLIFAGA U VODI DUNAVA METODOM PLAKA– RASTOPITI POLUTEČNU PODLOGU SA 0.7%
AGARA– DODATI 100μl KULTURE BAKTERIJE KADA
TEMPERATURA PODLOGE PADNE NA OKO 500C
– DODATI UZORAK:• 1. I 2. KLUPA 1ml• 3. I 4. KLUPA 100μL• 5. I 6. KLUPA 10μL
– BLAGO PROTRESTI EPRUVETU NEKOLIKO SEKUNDI I RAVNOMERNO PRELITI PLOČU SA MPA PODLOGOM
– NA PLOČU NAPIATI GRUPU I ZAPREMINU UZORKA
UZORAK ZAPREMINA
UZORKA
BR.
PLAKA
BR. FAGA
/ml
DUNAV
1ml
100μL
10μL
PROSEČAN BROJ KOLIFAGA/ml