dr. sc. sendi kuret, mol.biol. - hdpsmhdpsm.org/wp-content/uploads/st2015-3-kuret.pdfdr. sc. sendi...
TRANSCRIPT
Dr. sc. Sendi Kuret, mol.biol.
Klinički zavod za patologiju, sudsku medicinu i citologiju KBC Split
Split, 29.05.2015.
Nastanak tumora je proces koji se sastoji od niza promjena na genotipskoj i na fenotipskoj razini.
Razumijevanje nastanka patološkog procesa na razini molekularnih promjena osnova je na kojoj bi se trebalo temeljiti sveobuhvatno znanje o nastanku, ali i liječenju određene bolesti, odnosno stanja.
Razvoj molekularne medicine (stanična i molekularna razina) dovodi do otkrića i razjašnjenja mehanizama koji potiču nastajanje i rast tumora.
Rezultat razvoja molekularne medicine- novi terapijski postupci, koji se nazivaju ciljana (biološka) terapija, koja je usmjerena prema specifičnim molekularnim biomarkerima (EGFR, KRAS,BRAF).
Ciljana (biološka ) terapija vodi prema proizvodnji lijekova koji ciljano djeluju na biomarkere,
tzv. “ pametni lijekovi”.
Novi dijagnostički postupci i »pametni« lijekovi za liječenje raka omogućavaju personalizirani pristup u liječenju bolesnika.
Djeluju znatno selektivnije protiv tumorskih stanica, čime ciljana terapija pruža mogućnost veće učinkovitosti i manje toksičnosti ako se uspoređuje sa standardnom kemoterapijom.
- avastin (bevacizumab) -za rak debelog crijeva, dojke, pluća i bubrega - zelboraf (vemurafenib)- za melanom
- gleevec (imatinib mesylate)- za liječenje mijeloične leukemije i gastrointestinalnog stromalnog tumora (GIST)
- herceptin (trastuzumab) -za rak dojke
- iressa (gefinitib) i tarceva (erlotinib) -za rak pluća
- erbitux (cetuksimab) -za rak debelog crijeva, glave i vrata
Budućnost liječenja raka jest u personaliziranoj terapiji koja bi trebala biti prilagođena svakom pacijentu.
Jako je važno uraditi genetske analize prije nego što se krene u terapiju ovim ljekovima da bi se vidjelo kakav će biti odgovor na liječenje
Važna je suradnja onkologa, patologa i molekularnih biologa radi postavljanja točne dijagnoze i uključivanja ciljane i prilagođene terapije svakom pojedincu.
Genetsko profiliranje raka već se obavlja u brojnim laboratorijima diljem svijeta, a jedina prepreka da to postane praksa je cijena takvih analiza.
Ovakav pristup predstavlja odmak od tradicionalnih metoda liječenja kod kojih se koristi „ jedan lijek za sve“ ,
prema liječenju prilagođenom svakom pojedinom pacijentu, „pravi lijek za pravog pacijenta u pravo vrijeme“.
Zahvaljujući pametnim lijekovima, individuliziranoj
terapiji i ranom otkrivanju malignih bolesti, u svijetu je preživljenje danas čak pet puta više nego prije tridesetak godina.
Od 2010.godine radi se molekularno testiranje kojim se utvrđuje genski status KRAS, NRAS, EGFR i BRAF gena u različitim karcinomima (debelo crijevo, pluća, melanom ).
..............
..............
..............
Uzorci za testiranje mutacija
- Uzorci tumorskog tkiva
fiksirani u formalinu,
uklopljeni u parafin (FFPE)
- citološki uzorci
Dijagnostički protokol I
BIOPSIJA PHD dijagnostika
DNA ekstrakcija mol. testiranje
Dijagnostički protokol II
Citološka punkcija
CITOLOGIJA DNA ekstrakcija mol. testiranje
EUROPSKO DRUŠTVO ZA PATOLOGIJU
Predlaže dva testa ( za kliničku upotrebu-CE):
-TheraScreen kit (7 mutacija)
-KRAS LightMix kit (9 mutacija)
Test Disease
cobas® BRAF Mutation Test* Metastatic Melanoma
cobas® KRAS Mutation Test* Colorectal Cancer
cobas® EGFR Mutation Test* Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC)
cobas® PIK3CA Mutation Test* Breast Cancer
Brzina - Rezultati ispitivanja dostupani u kratkom vremenu
Točnost - Visoka osjetljivost i specifičnost
Pouzdanost - Dosljedan tijek rada
Automatizacija - Automatiziran PCR, interpretacija rezultata
i izvještaj
1.Priprema uzoraka – (cobas® DNA Sample Preparation Kit)
2.Amplifikacija i detekcija
cobas® Mutation Test
cobas® EGFR Mutation Test
1. Mutation Detected: Exon 18 G719X
2. Mutation Detected: Exon 19 Deletion
3. Mutation Detected: Exon 20 T790M
4. Mutation Detected: Exon 20 S768I
5. Mutation Detected: Exon 20 Insertion
6. Mutation Detected: Exon 21 L858R
7. Invalid (sample out of range/control failure)
8. Failed (hardware/software failure)
cobas® EGFR Mutation Test v2
cobas® 4800 System, v2.1
cobas® cfDNA Sample Preparation Kit
cfDNA Sample Preparation Kit
cobas® DNA Sample Preparation Kit
cobas® EGFR Mutation Test v2
NEW separate sample preparation kit
UPDATED tests both tissue
and blood
SAME cobas® 4800 PLATFORM
v2
cobas® EGFR Test v2 for Use with Tissue & Blood
• Amplification and Detection Kit
42 MUTATIONS
DETECTED
AMPLIFICATION MMX
TARGET
MMX1 EX19Del; S768I; EX28/IC
MMX2 L858R; T790M; EX28/IC
MMX3 v.2 L861Q; G719A/C/S; EX20Ins; EX28/IC
NEW REAGENT
Od 1. siječnja 2013. do 31. prosinca 2014. godine 147 tumora (parafinskih blokova) upućeni su na genetsku molekularnu analizu.
U 15 (13,5 %) bolesnika utvrđena je mutacija EGFR, dok u 111 bolesnika nije bilo mutacije EGFR . U 21 bolesnika nakon izolacije nije bilo dovoljno DNK za molekularnu analizu.
Rezultati analize po tipu mutacije EGFR prikazani su na slici.
0
2
4
6
8
10
12
exon 18 G719X exon 19 del exon 20 ins exon 21 L858R
ODREĐIVANJE TERAPIJE NA OSNOVI REZULTATA TESTIRANJA EGFR MUTACIJA
NEMA MUTACIJA NEMA PODATAKA O
OSJETLJIVOSTI NA INHIBITORE TIROZIN KINAZA (TKI)
PRISUTNE
MUTACIJE
DELECIJA U EKSONU 19 (bilo
koje vrste)
L858R
DOKAZANA OSJETLJIVOST NA
DJELOVANJE INHIBITORA TIROZIN
KINAZA (TKI)
G719S/A/C
ili bilo koja druga
substitucija na toj
poziciji
L861Q
DUPLE MUTACIJE
S7681
INSERCIJE U EKSONU 20
T790M
DRUGI TIP MUTACIJA
90 %
7%
3%
OGRANIČENI PODACI O
OSJETLJIVOSTI NA DJELOVANJE INHIBITORA
TIROZIN KINAZA (TKI)
TRENUTNO NEMA PODATAKA O
OSJETLJIVOSTI NA DJELOVANJE
INHIBITORA TIROZIN KINAZA (TKI)
IZVJEŠTAJ
O
TIPU
MUTACIJE
I
NJENOM
ZNAČENJU
Test Detected Mutations
cobas®
KRAS
LightMix
NRAS
KRAS exon 4
Exon 2 Exon 3
12 13 59 61
Exon 2 Exon 3 Exon 4
12 13 59 61 117 146
Exon 4
117 146
K-ras mutacija
Lijek se primjenjuje
lijek se ne primjenjuje
N-ras mutacija
The cobas® 4800 BRAF V600 Mutation Test- real-time PCR test dizajniran za detekciju V600E (T1799A) mutacije.
Izazovi ispitivanja molekularnih biomarkera Mnoge varijable i potencijal za pogreške
Method Many choices – benefits /drawbacks unclear
Specimen Variable quality and quantity of specimen
Laboratory Undefined pre-analytical steps contribute to different results
Reagents Multi-source reagents, inconsistent quality
Platform and results Non-validated platforms, manual analysis and reporting
U svakodnevnom radu s oboljelima od karcinoma treba implementirati rutinsko testiranje za poznate biomarkere (EGFR, KRAS, NRAS, BRAF), ali i za nove,
koji će biti povezani sa specifičnom terapijom.