适合各种应用、样本和rna类型...• 适合日常rna应用的简单方法 •...
TRANSCRIPT
RNA分离和纯化适合各种应用、样本和RNA类型
值得信赖的RNA分离和纯化
继续不断拓展您的研究。近30年来,我们在RNA技术方
面不断创新,一直处于领先地位,我们将为您提供可靠的
RNA试剂盒、值得信赖的RNA工具和经验丰富的技术支
持。
RNA分离是您研究中的关键步骤。
让您正确起步、从一开始时就信心满满。
• 从任意样本类型中分离,适合各种应用领域
• 获取高质量的完整RNA
• 即便是较小的样本量,亦可获得高产量
如需了解更多信息,请登录 thermofisher.com/rnapreps
RNA提取方法 4
RNA和样本类型 5
RNA应用 6
有机萃取法RNA提取 7
离心柱法RNA提取 9
裂解粗产物RNA提取 10
手动和自动RNA提取方案 11
自动化RNA纯化 12
总RNA纯化 14
Phasemaker分层管 15
转录组纯化 16
mRNA纯化 17
MicroRNA和小RNA纯化 18
病毒RNA纯化 19
RNA和FFPE 20
无需RNA纯化的实时荧光定量RT-PCR 22
RNA实验室日常用品 24
避免RNA降解 26
RNA操作技巧 27
RNA支持和服务 28
基因表达解决方案 39
RNA定量 30
RNA分离技术指南 32
订购信息 34
目 录
4
20余年来,我们的科学家开发出了创新且稳定的RNA提取产
品,可使您的研究工作变得更简单。我们的目标是提供独特
且可靠的产品、服务和支持,以帮助研究人员解决RNA研究
中常见的问题。
RNA分离是发现研究中的关键步骤。不论您进行哪种下游应
用,我们的优质产品系列和专业支持都可以让您充满信心。
RNA提取方法适合各种应用、样本和RNA类型
我们的RNA提取产品包括有机试剂、硅胶膜离心柱、裂解
粗产物提取试剂盒和磁珠。值得信赖的RNA分离产品包括
Applied Biosystems™ MagMAX™ 试剂盒;Invitrogen™ Cells-
to-CT™、PureLink™ 和mirVana™ 试剂盒;Invitrogen™ TRIzol™
试剂;以及Gibco™ Dynabeads™ 分离技术。我们的所有RNA
分离产品均可提供最值得您信赖的结果。
哪种产品适合您的研究?哪种产品适合您的研究?
有机试剂 硅胶膜离心柱 裂解粗产物 磁珠
高纯度有机萃取
(需要乙醇沉淀)
快速便捷的硅胶膜离心柱
化学裂解(更快获得qRT-PCR结果)
规模可调且灵活的磁珠形式
产品类型
• TRIzol试剂
• Invitrogen™ Phasemaker™ 分层管
• Thermo Scientific™ GeneJET™ 试剂盒
• PureLink 试剂盒
• Cells-to-CT 试剂盒 • MagMAX 试剂盒
• Thermo Scientific™ KingFisher™ 仪器
手动 自动
5
细菌
病毒
植物
酵母
外泌体
组织
FFPE
血液
液体和无细胞液体
RNA提取产品包括可用于总RNA、转录组RNA、信使RNA
(mRNA)、microRNA (miRNA) 及其他小RNA以及序列特异
性RNA纯化的试剂盒和试剂。我们还可提供纯化的RNA。我
们品种齐全的产品可为研究人员提供他们需要的质量和性
能。我们全套产品由专业科学家和工程师提供鼎立支持,可
用于各种样本类型、通量和起始样本量的RNA的分离和纯
化。
RNA和样本类型RNA提取解决方案
不论您使用的是培养细胞还是组织样本,或者是植物、细菌
或哺乳动物细胞,我们都能根据您的需要提供正确的RNA
提取试剂试剂和试剂盒。
RNA 类型 样本类型
RN
A 和小 RNA
RNA+DN
A
纯化
MicroRNA
总
核酸
RN
A
R
NA
病毒
序
列特异性 总 RNA mR
NA
RNA 类型
6
我们可提供高质量RNA,用于常见下游应用。也提供重复性极佳的RNA提取解决方
案,用于多种分子生物学基础实验。
RNA应用
分子应用 基因表达和测序
• RNA结构和功能
• RNA克隆
• 核糖体RNA去除
• 体外转录和翻译
• 转录组分析
• RNA芯片分析
• qRT-PCR
• 生物标志物开发
• RNA测序
7
TRIzol 试剂
TRIzol产品是一种完全的即用型试剂,可用于提取高质量的总
RNA或者从多种生物样本中同时提取RNA、DNA和蛋白质。这
种酚和异硫氰酸胍单相溶液可用于提取人、动物、植物、酵母
或细菌来源的细胞和组织样本中的纯RNA、DNA和蛋白质,只
需一个小时即可完成。
• 最值得信赖且使用最广泛的用于制备优质完整RNA的试剂
• 适用于复杂样本 (如脂肪组织、血清、病毒、细菌)
• 一步、单相溶液 (酚和异硫氰酸胍)
• 从相同样本中分离DNA和蛋白质的替代实验方案
• 货号:15596018、15596026
如需了解更多详情并订购,请登录 thermofisher.com/trizol
有机试剂法RNA提取 高质量的完整RNA
TRIzol试剂和Phasemaker分层管Phasemaker分层管包含稠厚的液体聚合物胶,将上层的水相TRIzol试剂混合物与下层的有机相分层并充分分离,大大简化了上层水相中的RNA回收。
• TRIzol试剂和Phasemaker分层管
• Phasemaker分层管包含稠厚的液体聚合物胶,将上层的水相TRIzol试剂混合物与下层的有机相分层并充分分离,大大简化了上层水相中的RNA回收。
• Phasemaker胶可在水相和有机相间形成坚固的屏障——即使分层管被振荡、跌落或撞击,仍可轻松回收水相,且无需离心。
有机试剂法RNA提取 TRIzol试剂 + Phasemaker分层管
• 预先分装到2 mL分层管中,满足日常的TRIzol试剂提取RNA需要
• 高产率 — 回收率提高30%
• 方便使用 — 直接用于TRIzol混合物,离心,然后轻松吸取水相
• 高效 — 通过稳固的胶封,研究人员可充分提高每次处理的样本数量,同时不影响相分层
• 随取随用 — 胶预装在2 mL分层管中
• 专品专用 — 仅适用于TRIzol试剂
• 惰性材料 — 不影响RNA完整性或下游实验 (如qPCR)
• 可单独购买Phasemaker分层管,亦可购买Invitrogen™ Phasemaker™ 分层管和TRIzol、TRIzol LS或TRIzol Plus试剂的组合 (货号:A33248、A33250、A33251、A33252、A33253、A33254)
Phasemaker分层管可在TRIzol混合物的水相和有机相间形成牢固可靠的胶封,使研究人员能够轻松移取RNA相。
离心前 离心后
组织、TRIzol试剂、氯仿
Phasemaker 胶
水相 (RNA)
Phasemaker 胶
有机相
5 min12,000–16,000 × G.
8
9
RNA 离心柱Invitrogen™ PureLink™ RNA小量提取试剂盒提供了一种简单、可靠且快速的基于离心柱的方法,适用于各种来源的高质量总RNA提取,且无需使用诸如酚等危险试剂。从动物和植物细胞、组织及血液、细菌、酵母和液体样本中获取高产量、高度完整的RNA。
• 适合日常RNA应用的简单方法
• 适用于各种样本类型
• 快速的20分钟实验方案
• 分离总RNA
• 最高样本起始量 (高达200 mg组织;5 x 108个细胞)
• 最大的柱结合容量,可实现高RNA回收率 (高达1,000 μg总RNA)
• 可用于总RNA、mRNA、总核酸、miRNA、小RNA、纯化RNA、病毒RNA和序列特异性RNA的提取
离心柱法RNA提取 适合各种应用、样本和RNA类型
RNA purification
Invitrogen™ 硅胶模离心柱 1,000 μg 结合容量
供应商Q的硅胶模离心柱 100 μg 结合容量
10
Cells-to-CT试剂盒无需RNA纯化即可扩增,通过qRT-PCR检测相对基因表达。Cells-to-CT试剂盒适用于Applied Biosystems™ TaqMan® 和SYBR™ Green实时荧光定量RT-PCR检测。
裂解粗产物RNA提取无需RNA纯化的实时荧光定量RT-PCR
• 适用于大部分细胞系
• 即使在低细胞起始量水平下,纯化RNA仍然具有较更高的灵敏度
• 从细胞、血液和低起始量的固体组织样本中分析RNA
• 相比其他RNA分离方法,只需极少的样本量即可实现高灵敏度检测
Cells-to-CT 试剂盒
• 快速简单的裂解物取样——将裂解粗产物直接用于RT-PCR分析
• 在7分钟内完成384个孔的逆转录步骤
• 采用相同的工作流程处理从10到100,000个细胞的样本
• 易于自动化操作——只需添加试剂或样本,所有步骤均在室温下进行
• 有TaqMan及SYBR 两步法和一步法 qRT-PCR试剂盒可供选择
两步法工作流程
一步法工作流程
步骤1
一步完成逆转录和RT-PCR
步骤2
细胞裂解 逆转录 (RT) 实时荧光定量 PCR
1. 用磷酸盐缓冲液 (PBS) 冲洗细胞
2. 加入裂解液,混匀并孵育5分钟
3. 加入终止液,混匀并孵育2分钟
1. 将裂解液与RT预混液混匀
2. 在热循环仪上运行RT反应65分钟
1. M将实时荧光定量PCR预混液cDNA混匀
2. 在适当的标准或快速实时荧光定量PCR仪上运行PCR
5´
5´3´
3´
3´ mRNA5´ RT 引物3´5´ cDNA
共7分钟
5x
~ 35 min
5´
5´3´
3´
3´ mRNA5´ RT 引物3´5´ cDNA
共7分钟
5x
~ 35 min
如需了解更多详情并订购,请登录 thermofisher.com/cellstoct
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我们可提供一整套手动和自动提取解决方案,满足您的RNA提取需要。
手动和自动RNA提取方案 简化RNA提取
哪种产品适合您的RNA操作?
手动 自动/半自动
• 手工完成所有裂解、分装、冲洗和离心步骤 • 许多手动步骤由仪器替代完成
TRIzol 试剂 PureLink 试剂盒 KingFisher 仪器 MagMAX 试剂盒
方法 方法
• 有机萃取,如TRIzol试剂
• 基于离心柱的纯化,如PureLink试剂盒
• MagMAX/Dynabeads试剂盒——利用超顺磁性磁珠技术结合并纯化核酸
• 适用于KingFisher仪器的自动化试剂盒
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采用Applied Biosystems™ MagMAX™试剂盒和Thermo
Scientif ic™ KingFisher™磁粒处理仪优化并自动化RNA纯
化流程。革命性的颗粒分离技术-永久磁力棒和独立运动控
制的一次性吸头套-构成了KingFisher™ Flex和KingFisher™
自动化RNA纯化高度通用、高适应性且高度灵活的系统
KingFisher Flex仪器使用可容纳8块反应板的转盘,完成整块反应板的冲洗、孵育和磁珠转移步骤,可处理各种来源的样本。
• 高通量样本处理
• 体积为50–5,000 μL
• 24吸头和96吸头抽吸装置(适用于24和96孔板)
• 可容纳多至8块反应板
Duo Prime仪器的基础。上述处理仪与兼容的磁珠试剂(如
MagMAX试剂盒)结合使用时,可以实现DNA和RNA提取、分
离和纯化步骤的自动化。
欲了解更多信息并索取产品演示,请登录 thermofisher.com/kingfisher
除了总RNA纯化外,KingFisher处理仪还可以进行DNA、蛋白和细胞分离。
采用KingFisher Flex磁粒处理仪实现高通量自动纯化
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采用MagMAX试剂盒和KingFisher处理仪分离总RNA、mRNA、小RNA和病毒RNA。
采用KingFisher Duo Prime纯化系统实现紧凑型的自动纯化该系统体积小巧, 适用于空间有限的实验室。KingFisher Duo Prime使用可容纳2块反应板的转盘,完成部分反应板的冲洗、孵育和磁珠转移步骤,可处理各种来源的样本。
• 紧凑型中等通量样本处理
• 体积为30–5,000 μL
• 6吸头和12吸头抽吸装置(适用于24和96孔板)
• 可容纳至多2块反应板
使用MagMAX试剂盒进行简单、快速分离 当Applied Biosystems™ MagMAX™试剂盒被用于KingFisher Flex处理仪上,实验室就有了一套简单,快速进行RNA纯化的系统,可以应用于如实时PCR和二代测序的应用。
好处在于:• 更高样本起始量的核酸提取
• 从多种样本类型中获取一致性、高质量的核酸
• 有效控制磁珠转移技术中的交叉污染
登陆 thermofisher.com/magmax 选择最适合您的MagMAX试剂盒
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Invitrogen™ TRIzol™试剂是引用次数最多的核酸纯化试剂,被超过70,000篇文献引用过。
使用高质量、完整且纯化的总RNA是许多实验成功的关键,
包括RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、RNA印迹分析、核糖核
酸酶保护实验和RNA测序。我们的选择指南可帮助您选择
适当的产品,从特定的样本类型和样本量中纯化总RNA。
总RNA纯化高质量的完整RNA-简单、高产量的工作流程
“… 我们使用TRIzol试剂优化了共提取方法,该试剂是最值得信赖的总RNA
提取试剂,采用它可以从新鲜组织中分离DNA/RNA并回收。”
Kotorashvili A et al. (2012) Effective DNA/RNA co-extraction for analysis of microRNAs, mRNAs,, and genomic DNA from formalin-fixed paraffin-embedded specimens. PLoS One 7:e34683.
TRIzol试剂是即用型酚和异硫氰酸胍单相溶液,可用于提取总RNA,且不含有DNA和蛋白质(表1)。提取采用Chomczynski和Sacchi开发的经过改进的一步法RNA提取方法,1小时内即可完成。
表1. TRIzol系列试剂。
产品 描述 主要样本类型 实验方案
TRIzol15596-026 100 ml
组织和细胞 1 mL试剂用于100 mg组织或107个细胞15596-018 200 ml
TRIzol LS10296-010 100 ml
液体样本,如血清和病毒制备液 0.75 mL试剂用于5 x 106个细胞10296-028 200 ml
TRIzol Max细菌RNA提取试剂盒
16096-020 100 ml和增强试剂细菌样本
0.2 mL Max细菌增强试剂和1.0 mL TRIzol用于108个细菌细胞
16096-040 200 ml和增强试剂
请登录 thermofisher.com/totalrna,查看全套产品系列。
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处理培养细胞? 您是否知道可以直接进行qRT-PCR,而无需RNA纯化?
请登录 thermofisher.com/cellstoct 了解更多信息。
PureLink试剂盒适用于各种起始材料
参照制造商提供的说明书,使用PureLink RNA小量提取试
剂盒和Qiagen™ RNeasy™试剂盒从大鼠肝脏、脾和脑部纯化
总RNA。在上述各种情况下,PureLink RNA小量提取试剂盒
的产量均与Qiagen试剂盒相当或更高。
请登录 thermofisher.com/rnaselection,使用我们的在线试剂盒选择指南。
哪种产品适合您的研究?
TRIzol试剂 PureLink试剂盒 MagMAX试剂盒 Cells-to-CT试剂盒
处理大量组织 从各种样本中快速分离RNA 高通量的RNA和DNA纯化 处理细胞用于基因表达
制备时间 60分钟 <20分钟 45分钟 10分钟
样本类型大多数样本,尤其是难以裂解的样本
细菌、液体、血液、细胞、酵母、植物、组织
细胞、血液、植物 培养的细胞
起始材料 100 mg组织或107个细胞108个细胞、200 mg组织、250 mg植物、0.2 mL血液、5 x 108酵母、109细菌
100 mg组织或5 x106个细胞 1–100,000个细胞
产量1 x 106个上皮细胞:8–15 μg,烟草叶:73 μg
至多350μg 取决于样本 不适用
高通量兼容性 — √ √ √
技术 有机萃取 硅胶模离心柱/过滤板 磁珠 裂解粗产物
0
1
2
3
4
5
6
7
Liver Spleen Brain
µg R
NA
/mg
tis
sue
Tissue type
PureLinkRNA Mini Kit
Qiagen RNeasy Kit
16
分离高质量的RNA是在成功的转录组分析过程中重要的第一步。转录组的富集和浓缩为无数下游应用提供了样本,这些应用包括RNA-seq,芯片分析,文库构建和qRT-PCR。
Invitrogen™ RiboMinus™转录组分离试剂盒通过去除总RNA样品中较大的核糖体RNA分子来富集RNA转录本。这种独特的技术可以提供:
• 无核糖体 RNA,全转录本样本
• 代表了更多的RNA转录本物种
• 多种样本形式(人/小鼠、酵母和细菌)
转录组纯化全面、真实代表RNA转录谱
图2. Invitrogen™ RiboMinus™技术显示了超过95%的rRNA被去除。(A)从Hela细胞中分离人总RNA。(B)从小鼠肝脏中分离小鼠总RNA。(C)从大肠杆菌中分离细菌总RNA。(D)从酿酒酵母里分离酵母总RNA。所有样本都通过Agilent™ 2100 Bioanalyzer™仪器分析。
迁移时间
荧光信号
Total RNA28S
18S
迁移时间
荧光信号
Total RNA
RiboMinus RNA
28S18S
迁移时间
荧光信号
Total RNA
RiboMinus RNA
RiboMinus RNA
23S
16S
迁移时间
荧光信号
Total RNA
RiboMinus RNA25/26S
16S
迁移时间
荧光信号
Total RNA28S
18S
迁移时间
荧光信号
Total RNA
RiboMinus RNA
28S18S
迁移时间
荧光信号
Total RNA
RiboMinus RNA
RiboMinus RNA
23S
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迁移时间
荧光信号
Total RNA
RiboMinus RNA25/26S
16S
迁移时间
荧光信号
Total RNA28S
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迁移时间
荧光信号
Total RNA
RiboMinus RNA
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迁移时间
荧光信号
Total RNA
RiboMinus RNA
RiboMinus RNA
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迁移时间
荧光信号
Total RNA
RiboMinus RNA25/26S
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迁移时间
荧光信号
Total RNA28S
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迁移时间
荧光信号
Total RNA
RiboMinus RNA
28S18S
迁移时间
荧光信号
Total RNA
RiboMinus RNA
RiboMinus RNA
23S
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迁移时间
荧光信号
Total RNA
RiboMinus RNA25/26S
16S
A
C
B
D
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您知道吗?
您的mRNA纯化流程可在KingFisher磁粒处理仪上自动完成。
一般在哺乳动物细胞中,poly(A) RNA或mRNA只占总RNA的1–5%。我们可提供高效技术,直接从起始样本或分离的总RNA中纯化mRNA。下表将帮助您选择适合您的技术。
m RNA 纯化快速、高产量的纯mRNA分离
哪种mRNA纯化产品适合您的研究?
DynabeadsmRNA纯化试剂盒
Dynabeads mRNADIRECT纯化试剂盒
Dynabeads mRNADIRECT微量提取试剂盒
mRNA Catcher Plus纯化试剂盒
从总RNA中快速纯化mRNA
无需纯化,直接从原始样本中提取mRNA 从微量样本中提取mRNA
从总RNA中直接提取或富集高通量mRNA
制备时间 15分钟 15分钟 15分钟 90分钟
从原始样本中分离 — √ √ √
从总RNA中富集 √ — — —
样本类型 总RNA液体、RNA、FFPE和固定、酵母、血液、组织、病毒、植物、细胞
液体、RNA、FFPE和固定、酵母、血液、组织、病毒、植物、细胞
总RNA、血液、哺乳动物组织和细胞
起始材料 75μg总RNA 2 x 107个细胞,2–200 mg组织,4–400 mg植物
1 x 104个细胞,5 mg组织或植物
100至1 x 106个细胞,4 mg组织,40 μL全血,100ng–100μg总RNA
高通量兼容性 √ √ √ √
技术 磁珠 磁珠 磁珠 Oligo dT亲和力
两种不同的mRNA纯化方法 • 提取总RNA,然后富集mRNA。这可以实现总RNA样本的保存,该方法可与
mRNA Catcher PLUS试剂盒结合使用。
• 裂解细胞,然后直接纯化mRNA。该方法较第一种方法更快速,可与Dynabeads mRNA DIRECT试剂盒结合使用。
Dynabeads mRNA纯化已被超过5,000篇文献引用过。
18
MicroRNA和其他小RNA对包括基因表达在内的生物学过程具有实质性影响。但是,传统RNA分离方法无法足量回收这些较小的RNA。我们的RNA专家开发出了RNA提取试剂盒,
MicroRNA和小RNA纯化小RNA的快速定量回收
图3. 从两个供体血清中分离RNA,利用qRT-PCR检测出五种microRNA水平。MagMAX mirVana总RNA提取试剂盒是一种全新的基于磁珠的技术,将其与金标准的Invitrogen™ Ambion™ mirVana™ PARIS™ RNA试剂盒进行比较。
22
30
34
Let7c miR16 miR221 miR21 miR26a
Ave
rag
e C
t val
ues
血清供体 1
MagMAX mirVana mirVana PARIS
22
26
30
34
Let7c miR16 miR221 miR21 miR26a
Ave
rag
e C
t val
ues
血清供体 2
MagMAX mirVana mirVana PARIS
22
30
34
Let7c miR16 miR221 miR21 miR26a
Ave
rag
e C
t val
ues
血清供体 1
MagMAX mirVana mirVana PARIS
22
26
30
34
Let7c miR16 miR221 miR21 miR26a
Ave
rag
e C
t val
ues
血清供体 2
MagMAX mirVana mirVana PARIS
哪种产品适合您的研究?
mirVana miRNA分离试剂盒
MagMAX mirVana总RNA提取试剂盒
TaqMan microRNA Cells-to-CT试剂盒
在30分钟内实现大部分样本的提取 高通量、纯化、浓缩microRNA 整套试剂盒,从细胞到qPCR
制备时间 30分钟 <60分钟 10分钟
样本类型 细菌、细胞、酵母、植物、组织、病毒 血浆/血清、全血、组织、细胞、尿液 细胞
起始材料 250 mg组织或107个细胞 100 mg组织或5 x106个细胞 10–100,000个细胞
高通量兼容性 — √ √
技术 有机萃取和硅胶膜离心柱 磁珠 (不含酚) 裂解粗产物
可以从各种类型的样本中快速定量回收小RNA,只需10分钟。下表将帮助您选择合适的产品,纯化小RNA,用于特定的应用领域。
高通量Applied Biosystems™ MagMAX™ mirVana™总RNA提取试剂盒可获得出众的性能
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成功进行病毒分析的第一步是分离高纯度的浓缩病毒RNA和DNA。我们先进的生物(动物、昆虫、植物、真菌和细菌)和环境(水、空气和食物)样本核酸纯化技术可以保证您完成灵敏的下游实时荧光定量PCR和RNA印迹分析。
我们的病毒核酸分离技术提供了出众的:
• 回收率-即便是在低浓度条件下,一般亦>50%
• 灵敏度和可重复性
• 高通量兼容性及与自动化平台的整合
病毒RNA纯化从无细胞生物液体中实现快速高效的纯化
采用Invitrogen™ PureLink™病毒RNA/DNA小量提取试剂盒进行腺病毒DNA纯化可提供出众的回收率和灵敏度
图4. 在血清样本(200 μL)中加入标示PFU的腺病毒DNA,然后使用PureLink病毒DNA/RNA小量提取试剂盒或Q公司试剂盒,遵循制造商建议的步骤进行DNA提取。
腺病毒量 (PFU)
2 x 103 2 x 104 2 x 105 2 x 1062 x 102
Ct
45
40
25
30
35
20
15
10
5
0
Qiagen 试剂盒
PureLink 试剂盒
20
选择适合您的研究的病毒RNA提取试剂盒,请登录 thermofisher.com/viralrna
新鲜或冷冻的无细胞
生物液体
环境和生物液体
样本
PureLink病毒 RNA/
DNA 试剂盒
MagMAX病毒 RNA提取试剂盒
高通量兼容性
高通量兼容性
高质量纯化分离 低病毒浓度
30–45 分钟制备时间
30 分钟制备时间
查看全部病毒RNA和DNA采集和纯化工具以及qRT-PCR和qPCR分析产品,请登录thermofisher.com/viral
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平均
RN
A产
量 (
ng
)
Qiagen AllPrep kit
10,000
9,000
8,000
7,000
6,000
5,000
4,000
3,000
2,000
1,000
0
MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra Kit
2,500
2,000
1,500
1,000
500
0
平均
DN
A产
量 (n
g)
Qiagen AllPrep kit MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra Kit
100
75
50
25
MagMAXkit
肺癌 乳腺癌 黑素瘤 结直肠癌
QiagenAllPrep
QiagenAllPrep
QiagenAllPrep
QiagenAllPrep
MagMAXkit
MagMAXkit
MagMAXkit
0
FFPE 组织块
肺癌 乳腺癌 黑素瘤 结直肠癌
FFPE 组织块
肺癌 乳腺癌 黑素瘤 结直肠癌
FFPE 组织块
肺癌 乳腺癌 黑素瘤 结直肠癌
FFPE 组织块
百分
比
均匀度% 末端-末端读数% 覆盖目标区域读数%
100
75
50
25
MagMAXkit
QiagenAllPrep
QiagenAllPrep
QiagenAllPrep
QiagenAllPrep
MagMAXkit
MagMAXkit
MagMAXkit
0
映射% 覆盖目标区域读数 %
百分
比
RNA 和 FFPE顺序RNA分离
图4. MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra试剂盒提供了出众的RNA产量。在KingFisher Flex纯化系统上使用MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra试剂盒及Qiagen AllPrep试剂盒,从四个FFPE肿瘤切除块的连续1 x 5 μm切片中分离DNA和RNA。使用Invitrogen™ Quant-iT™ DNA和RNA分析试剂盒定量样本的 (A) DNA和 (B) RNA产量。
图5. MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra试剂盒提供了相当或更佳的测序结果。使用MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra试剂盒和Qiagen AllPrep试剂盒,从相同的FFPE切片中分离DNA和RNA。使用Ion AmpliSeq™ Cancer Hotspot Panel v2生成 (A) DNA和 (B) RNA文库,采用Ion Chef™ 系统制备,采用Ion PGM™ 系统测序。利用Torrent Suite™ 软件分析数据。
Applied Biosystems™ MagMAX™ FFPE DNA/RNA Ultra试剂盒利用磁珠技术,可以从福尔马林固定石蜡包埋的 (FFPE) 组织样本中依次分离DNA和RNA (图4)。从同一样本中同时回收DNA和RNA (包括microRNA),可以对样本中所有重要的生物标志物进行分析和比较,如热点突变、拷贝数变异、基因融合和插入缺失。分别在不同的洗脱物中回收DNA和RNA——它
们适用于多种应用领域,包括实时荧光定量PCR和下一代测序 (图5)。
MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra试剂盒采用简单、快速的实验方案,可以手动提取,也可以在KingFisher纯化系统上自动完成。
AA
BB
22
Invitrogen™ Ambion™ Cells-to-CT™试剂盒无需RNA纯化,可通过实时荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)直接从培养细胞、血液或单细胞样本中检测相对基因表达。Cells-to-CT试剂盒有TaqMan™和SYBR™ Green形式可供选择,提供了:
• 极其简单且快速 ─ 在<10分钟内完成96个样本的qRT-PCR
• 无需繁琐的RNA纯化 ─ 无需使用分离柱、加热或离心
• 出众的性能 ─ 可以从10–100,000个细胞中获得一致的准确性、可重复性和灵敏度
• 已经过验证的试剂盒工作流程 ─ 已经过预先优化的全套高效试剂,即取即用
无需RNA纯化,不影响性能Invitrogen™ Ambion™ Cells-to-CT™ 1-Step TaqMan试剂盒的性能与采用纯化RNA的传统方法密切相关。
Cells-to-CT 1-Step TaqMan试剂盒的灵敏度优于采用纯化RNA的传统方法。
无需RNA纯化的实时荧光定量RT-PCR出众的基因表达检测速度和准确度
图5. 72种分析数据比较Cells-to-CT 1-Step TaqMan试剂盒与采用纯化RNA的传统方法的性能。从16,500个Jurkat细胞中制备裂解物,在Applied Biosystems™ 7900HT Fast实时荧光定量PCR系统上进行qRT-PCR。
图6. 使用Cells-to-CT 1-Step TaqMan试剂盒处理HeLa细胞(10至100,000)或采用RNA离心柱方法纯化RNA,重复三次。在7900HT系统上使用Invitrogen™ Ambion™ Cells-to-CT™对照试剂盒,通过qRT-PCR分析各组样本的β-肌动蛋白(ACTB)和XenoRNA™ 靶点。
Purified RNA average Ct values
y = 0.9465x + 1.5865R2 = 0.97682
10
40
35
30
24
20
15
1015 20 25 30 35 40
TaqMan Assay Correlation
Cel
ls-t
o-C
T av
erag
e C
t val
ues
log (number of HeLa cells per lysis)
Ave
rage
Ct
0 1 2 3 4 5 6
y = —3.669x + 36.879R2 = 0.99972
y = —3.5328x + 37.427R2 = 0.99864
Xeno Cells-to-CT KitXeno purified RNAACTB Cells-to-CT KitACTB purified RNA
35
33
31
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27
25
23
21
19
17
请登录 thermofisher.com/cellstoct,了解更多信息并订购。
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在下列情况下,您可以选择一步法试剂盒: • 无需保存cDNA
• 有许多包含一个或几个靶点的样本
• 使用移液自动化系统
• 需要降低交叉污染的几率
• 需要缩短获得结果的时间如需了解如何实现Cells-to-CT工作流程自动化,请登录 thermofisher.com/autocellstoct
Cells-to-CT技术指南
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RNA是一种很难处理的分子,极易被各种环境中无处不在的RNA酶降解,如细菌和真菌以及脱落的皮肤和毛发。RNA酶是极其稳定的酶,在室温下甚至是冻融和高压蒸汽灭菌后仍可维持功能。因此许多去污方法无法去除RNA酶,通常需要强刺激性的化学方法方可从表面和溶液中将其去除。
但是一些基本的预防措施,包括使用不含RNA酶的塑料和试剂,维持清洁的工作表面并适当稳定组织样本后再保存,将可以最大程度地降低实验不一致性和失败率。Invitrogen™ Ambion™ RNA日常用品可以在实验室中处理RNA,帮助世界各地的研究人员获得可信赖的结果。
RNA实验室日常用品避免RNA酶污染及RNA酶检测和抑制
RT 1 周
4˚C1个月
37˚C 1 天
– p53
– GAPDH
– 28S rRNA
– 18S rRNA
肝 脾 肾 肝 脾 肾 肝 脾 肾
图7. 采用Invitrogen™ Ambion™ RNAlater™稳定溶液处理的组织RNA的RNA印迹。在室温下,将切开的组织浸没于约5倍体积的RNAlater溶液中。样本可在37°C下保存1天,室温下(25°C)保存1周,或者4°C保存1个月。与p53和GAPDH探针杂交的RNA印迹(上图凝胶)证明了从采用RNAlater溶液处理并在不同温度下保存的组织提取的RNA的完整性。
RNA酶含量较高的器官-亦可稳定保存在RNAlater溶液中,不会破坏后续RNA提取过程中获得的RNA的品质或数量。
25
不含RNA酶的枪头和试管移液器吸头和试管极易成为被忽视的RNA酶污染源。
我们可提供各种不含RNA酶的塑料移液器枪头、PCR管、微量离心管和锥形管。每个批次的Invitrogen™ Ambion™枪头和试管均已经过严格的检测,不含RNA酶。查看产品请登录 thermofisher.com/nucleasefreeplastics
无核酸酶水使用适当级别的水制备试剂并重悬沉淀RNA是获得稳定的实验结果的关键,也是常被忽视的第一步。即便是纯化的水也可能具有高pH值和矿物质,会对某些类型的反应造成干扰。
我们提供了几种级别的无核酸酶水-焦碳酸二乙酯(DEPC)处理的水、无核酸酶水(未经DEPC处理)和RT-PCR级水-均已经过严格的非特异性核酸内切酶、核酸外切酶和RNA酶活性检测。如需了解更多信息请登录 thermofisher.com/nucleasefreewater
去除表面污染可以说大部分实验室表面都存在RNA酶污染,它们暴露在环境细菌、真菌、脱落的皮肤和毛发上。不幸的是,即便是少量RNA酶也会降低体外转录反应的产量,导致RNA纯化过程中的RNA降解和qRT-PCR结果的变化。
幸运的是,现已存在一套值得信赖的产品能可靠地去除实验室表面的RNA酶污染,包括Invitrogen™ Ambion™ RNaseZap™去污溶液和Invitrogen™ Ambion™ RNase AWAY™去污试剂。查看并订购全部溶液,请登录 thermofisher.com/surfacedecontamination
样本稳定为分离高质量的RNA,应在组织收集后立即进行处理、速冻或稳定化,以保护RNA的完整性,使之适合保存。
我们提供了几种Invitrogen™ Ambion™ RNAlater™产品,可以在收集时或收集后稳定并保护RNA的质量。更多信息,请登录 thermofisher.com/stabilizeRNA
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RNA酶是最稳定的酶之一,可降解RNA。其在大部分环境中大量存在,包括人的手上。以下是有助于避免样本出现RNA降解的一些常用小技巧:
• 操作时始终佩戴手套,如果不小心碰到皮肤或其他污染表面,切记更换手套
• 使用不含RNA酶的塑料制品,如试管和枪头
• 如果使用玻璃器皿,高压灭菌不足以去除RNA酶——玻璃器皿必须在180°C以上干烤几个小时,或者使用诸如RNaseZap产品进行处理
• 配制缓冲液时,使用不含核酸酶或DEPC处理的水
• 划出低流通和远离通气孔的专用RNA工作区域
• 利用试剂 (如RNAlater稳定溶液) 保护样本,或置于不含RNA酶的缓冲液中于–80°C保存
避免RNA降解 获取高质量的完整RNA
如需了解更多详情并订购,请登录 thermofisher.com/rnabasics
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RNA操作技巧 保护您的RNA
酚提取分离时,去除核酸样本中的蛋白质,在酶反应结束后纯化核酸 (如在转录模板制备过程中去除限制酶)。
乙醇冲洗在盐/EtOH沉淀步骤后进行乙醇冲洗,去除核酸沉淀中残留的盐。冲洗液为70–80% EtOH,可以溶解盐但不溶解核酸。
二次抽吸在沉淀后去除最后的EtOH上清液。这是第二次快速离心和抽吸,确保去除可影响实验方案下游步骤的沉淀上清液 (如管壁上)。
重溶RNA沉淀在RNA分离和纯化过程中,通常需要沉淀样本。重溶RNA沉淀非常耗时,而且蛋白质或其他污染物的存在也使该过程变得复杂。尽可能使用最大体积的溶质,以提高溶解度。较潮湿的沉淀更易于溶解。
如需了解更多详情并订购,请登录 thermofisher.com/rnahandlingtips
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我们可作为您的重要资源,为您的所有核酸纯化和分析需要提供支持。通过以下链接在DNA和RNA支持类别中进行导航,获取相关技术信息,查看开始实验的技巧和窍门,查找日常问题的解决方案。
RNA支持和服务 收集、保护、分离和基因表达
如需了解更多详情并订购,请登录 thermofisher.com/rnabasics
支持thermofisher.com/napsupport
thermofisher.com/technicalresources
Email us at [email protected]
网络资源thermofisher.com/prepforsuccess
thermofisher.com/rnapreps
thermofisher.com/rnabasics
thermofisher.com/rnaselection
thermofisher.com/rnahandlingtips
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这是针对基因表达研究的一站式购物资源。我们提供了全套基因表达解决方案,包括样本采集、稳定、RNA分离、逆转录酶、基因表达分析和定量。此外,我们还可为基因表达研究提供全面、出色的端对端支持。立即了解我们如何为您提供帮助,使您获取值得信赖的结果。
基因表达解决方案 一站式基因表达产品和支持
样本采集 稳定 RNA分离 cDNA 合成 实时荧光定量 PCR
• 标本采集容器
• 样本特异性的产物
• 稳定试剂
• 去除表面污染
thermofisher.com/surfacedecontamination
thermofisher.com/stabilizerna
• 有机萃取
• 基于离心柱的试剂盒
• 基于磁珠的试剂盒
• 特定样本类型试剂盒
• 逆转录酶
• 合成试剂盒
• qRT-PCR试剂盒
• 基因表达分析
• 实时荧光定量PCR
• qPCR仪器
thermofisher.com/sampletransport
thermofisher.com/nucleasefreewater
thermofisher.com/rnaisolation
thermofisher.com/superscript
thermofisher.com/qpcr
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全新的Invitrogen™ Qubit™ RNA IQ分析试剂盒和Invitrogen™ Qubit™ 4荧光计结合使用,只需两步即可准确地确定RNA样本是否降解。无需特殊操作、繁琐的样本制备,亦无需等待结果——只需加入含有0.5–1.5 μg/μL RNA的1 μL样本,每个样本一般4秒内即可获得结果。Qubit RNA IQ分析采用两种独特的染料——其中一种结合较大的完整和/或结构RNA,另一种选择性地结合较小的降解RNA (图9)。两者相结合可以快速评估RNA样本的质量和完整性。使用时,只需将您的样本加入RNA IQ工作液,然后使用Qubit 4荧光计检测。结果以总的数值表示RNA样本的完整性和质量或RNA IQ#,并计算样本中较大和较小的RNA % (图9a)。
RNA 定量快速、准确的RNA质量和完整性评估
如需了解更多详情并索取产品演示,请登录 thermofisher.com/qubit
图9. RNA IQ试剂对较大和较小的RNA的选择性。在Qubit 4荧光计上使用Qubit RNA IQ分析试剂盒 (货号:Q33221、Q33222) 检测含有100 ng/mL rRNA (大肠杆菌) 和不同量的siRNA (0至50 ng/μL) 的三份样本。绘制这些样本的相对荧光单位 (RFU) (A) 和IQ# (B)。
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较大的RNA (%)
0% 15% 30% 45% 55% 70% 85% 100%
样本中较大的RNA (%)
较大和/或结构RNA (%)
60% 70% 80% 90% 100%
RN
A IQ
10.5
9.5
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8.5
8.0
7.5
7.0
光信号
光信号
ng/µL siRNA (样本中较大的RNA保持恒定 100 ng/µL )
较大的RNA通道
0 10 20 30 40 50
较小的RNA通道较大的RNA通道 较小的RNA通道
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较大和/或结构RNA (%)
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光信号
ng/µL siRNA (样本中较大的RNA保持恒定 100 ng/µL )
较大的RNA通道
0 10 20 30 40 50
较小的RNA通道较大的RNA通道 较小的RNA通道A B
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图10. 含有不同量较大和较小RNA的溶液的Qubit RNA IQ荧光反应和IQ#。在Qubit 4荧光计上使用Qubit RNA IQ分析试剂盒 (货号:Q33221、Q33222) 检测含有100 ng/mL总RNA的三份样本,其中包含较小的RNA (Invitrogen™ Silencer™ Select GAPDH siRNA) 和较大的RNA (rRNA,大肠杆菌)。绘制这些样本的相对荧光单位 (RFU) (A) 和IQ# (B)。
RNA IQ#与其他RNA质量评分类似,以1到10表示,其中高IQ#表示样本大部分为较大和/或结构RNA。相反,低IQ#表示样本中主要包含较小的RNA,三级结构有限 (图10)。
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较大的RNA (%)
0% 15% 30% 45% 55% 70% 85% 100%
样本中较大的RNA (%)
较大和/或结构RNA (%)
60% 70% 80% 90% 100%
RN
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光信号
光信号
ng/µL siRNA (样本中较大的RNA保持恒定 100 ng/µL )
较大的RNA通道
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较小的RNA通道较大的RNA通道 较小的RNA通道
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样本中较大的RNA (%)
较大和/或结构RNA (%)
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光信号
ng/µL siRNA (样本中较大的RNA保持恒定 100 ng/µL )
较大的RNA通道
0 10 20 30 40 50
较小的RNA通道较大的RNA通道 较小的RNA通道A B
Invitrogen™ Qubit™ RNA XR (大范围) 和HS (高灵敏度) 分析试剂盒提供了简单且准确的RNA定量。Qubit RNA XR分析可准确地检测初始浓度为1 ng/μL至10 μg/μL的样本,Qubit RNA HS分析可用于低丰度RNA样本检测 (250 pg/μL至100 ng/μL)。这两种分析均对RNA具有高选择性,且无法定量双链DNA。
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RNA分离技术指南 利用我们的各种RNA提取方法从任意样本类型中纯化RNA。高RNA产量、纯度和完整性有助于确保在所有下游研究应用中获得高质量的准确结果。
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订购信息
产品 规格 货号
RNA自动纯化
KingFisher Flex磁粒处理仪 (带有24深孔头) 1 台系统 5400640
KingFisher Flex磁粒处理仪 (带有96深孔头) 1 台系统 5400630
KingFisher Duo Prime磁粒处理仪 1 台系统 5400110
总RNA纯化试剂盒
TRIzol试剂100 mL 15596026
200 mL 15596018
TRIzol LS试剂100 mL 10296010
200 mL 10296028
TRIzol Plus RNA纯化试剂盒 50次 12183555
Phasemaker分层管10管 A33249
100管 A33248
TRIzol试剂 + Phasemaker分层管套装100 mL, 100管
A33250
TRIzol试剂 + Phasemaker分层管套装200 mL, 200管
A33251
TRIzol LS试剂 + Phasemaker分层管套装100 mL, 100管
A33252
TRIzol LS试剂 + Phasemaker分层管套装200 mL, 200管
A33253
TRIzol Plus RNA纯化试剂盒 + Phasemaker分层管套装
50次制备 A33254
TRIzol Max细菌RNA提取试剂盒100次 16096020
200次 16096040
PureLink RNA小量提取试剂盒 50次 12183018A
MagMAX-96总RNA提取试剂盒50次 AM1830
96次 A27828
MagMAX mirVana总RNA提取试剂盒 96次 AM1830
转录组纯化试剂盒
RiboMinus转录组分离试剂盒,酵母 6次 K155003
RiboMinus转录组分离试剂盒,细菌 12次 K155004
mRNA纯化试剂盒
Dynabeads mRNA纯化试剂盒 2 mL 61006
Dynabeads mRNA DIRECT纯化试剂盒5 mL 61011
10 mL 61012
Dynabeads mRNA DIRECT小量纯化试剂盒 2 mL 61021
mRNA Catcher Plus纯化试剂盒96 次 K1570-02
960 次 K1570-03
MicroRNA和小RNA纯化试剂盒
mirVana miRNA分离试剂盒 (含苯酚) 40次 AM1560
MagMAX mirVana总RNA分离试剂盒 96次 A27828
TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒 100次 4391848
产品 规格 货号
病毒RNA纯化试剂盒
PureLink病毒RNA/DNA小量提取试剂盒 50 次 12280050
PureLink Pro 96病毒RNA/DNA纯化试剂盒 4 块 280096A
MagMAX病毒RNA分离试剂盒 50 次 AM1939
Cells-to-CT 试剂盒
Cells-to-CT 一步法TaqMan试剂盒
20 次 A25605
100 次 A25603
400 次 A25602
TaqMan基因表达Cells-to-CT试剂盒
40 次 4399002
100 次 AM1728
400 次 AM1729
TaqMan微量RNA Cells-to-CT试剂盒 100 次 4391848
TaqMan快速Cells-to-CT试剂盒 100 次 4399003
Cells-to-CT一步法Power SYBR Green试剂盒
20 次 A25601
100 次 A25600
400 次 A25599
Power SYBR Green Cells-to-CT试剂盒
40 次 4402953
100 次 4402954
400 次 4402955
快速SYBR Green Cells-to-CT试剂盒100 次 4402956
400 次 4402957
单细胞Cells-to-CT qRT-PCR试剂盒50 次 4458237
400 次 4458236
Cells-to-CT终止液 1 mL 4402960
Cells-to-CT大量裂解试剂 2,500 次 391851C
稳定的Blood-to-CT核酸制备试剂盒,用于qPCR,与PAXgene或Tempus血液RNA采集管兼容
50 次 4449079
稳定的Blood-to-CT核酸制备试剂盒,用于qPCR,与PAXgene或Tempus血液RNA采集管兼容
200 次 4449080
SYBR Green Cells-to-CT对照试剂盒 100 次 4402959
TaqMan Cells-to-CT对照试剂盒 100 次 4386995
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产品 规格 货号
RNA 实验必备产品
不含RNA酶枪头 (200 μL) 10架(8 x 12) AM12650
不含RNA酶枪头 (1,000 μL) 10架(8 x 12) AM12660
带滤芯枪头 (10 μL) (与Eppendorf移液器兼容)
10架(8 x 12) AM12635
带滤芯枪头 (20 μL) 10架(8 x 12) AM12645
带滤芯枪头 (100 μL) 10架(8 x 12) AM12648
带滤芯枪头 (200 μL) 10架(8 x 12) AM12655
带滤芯枪头 (1,000 μL) 10架(8 x 12) AM12665
薄壁,磨砂盖,不含RNA酶PCR管 (0.2ml) 1,000 只 AM12225
PCR管和盖,不含RNA酶(0.2ml,8只一条) 125 条 AM12230
薄壁,圆顶盖,不含RNA酶PCR管 (0.5ml) 1,000 只 AM12250
薄壁,磨砂盖,不含RNA酶PCR管 (0.5ml) 1,000 只 AM12275
不含RNA酶离心管 (0.5ml) 1,000 只 AM12300
不挂壁,不含RNA酶离心管 (0.5ml) 500 只 AM12350
不含RNA酶离心管 (1.5ml) 500 只 AM12400
不含RNA酶离心管 (2ml) 500 只 AM12425
尖底离心管 (15ml) (架) 500 只 AM12500
尖底离心管 (50ml) (架) 200 只 AM12501
DEPC处理水
10 x 50 mL AM9906
1 x 100 mL AM9915G
5 x 100 mL AM9916
1 x 500 mL AM9920
1 x 1,000 mL
AM9922
4 x 1,000 mL
4387937
无核酸酶水 (非DEPC处理)
10 x 50 mL AM9937
1 x 100 mL AM9938
5 x 100 mL AM9939
1 x 500 mL AM9930
1 x 1,000 mL
AM9932
4 x 1,000 mL
4387936
RT-PCR级别水 10 x 1.5 mL AM9935
超纯无DNA酶/RNA酶灭菌水500 mL 0977015
10 x 500 mL 0977023
产品 规格 货号
RNA实验必备产品 (续)
RNaseZap去RNA酶污染剂溶液
250 mL AM9780
6 x 250 mL AM9782
4 L AM9784
RNaseZap去RNA酶污染剂湿巾 100 张 AM9786
RNaseZap去RNA酶污染剂湿巾 300 张 AM9788
RNase AWAY去RNA酶清洗液 250 mL 0328011
RNAlater稳定溶液
50 x 1.5 mL AM7022
20 x 5 mL AM7023
1 x 100 mL AM7020
1 x 250 mL AM7024
1 x 500 mL AM7021
RNAlater-ICE冻存组织转运溶液25 mL AM7030
10 x 25 mL 4427575
RNA储存液10 x 1 mL AM7000
50 mL AM7001
Tempus血液RNA采集管 50 只 4342792
LeukoLOCK总RNA分离系统 20 次 AM1923
RNA定量
Qubit 4荧光计 一台 Q33216
Qubit 4定量Starter试剂盒 一套 Q33217
Qubit RNA HS分析试剂盒100次反应 Q32852
500次反应 Q32855
Qubit RNA BR分析试剂盒100次反应 Q10210
500次反应 Q10211
Qubit microRNA分析试剂盒100次反应 Q32880
500次反应 Q32881
逆转录
SuperScript IV逆转录酶
2,000个单位 18090010
10,000个单位
18090050
SuperScript IV第一链合成系统50次反应 18091050
200次反应 18091200
SuperScript IV VILO预混液含ezDNase50次反应 11766050
500次反应 11766500
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