effect of salinity on methyl at ion of mercury

8/9/2019 Effect of Salinity on Methyl at Ion of Mercury

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Bull. Environm. Contam. Toxicol. 25,404-408 (1980)

E ff e c t o f S a l in i ty o n M e t h y l a t i o n o f M e r c u r yJames E. Blum and Richard Bartha

Dep artment of Biochem istry a nd Microbiology, Coo k College, RutgersUniversity, New Brunswick, NJ 08903

M o n o m e t h y l a n d d i m e t h y l m e r c u r y a r e p o t e n t n e u r o t o x i n ss u b j e c t t o b i o m a g n i f i c a t i o n i n f o o d w e b s ( N AT I ON A L A C A D E M Y O FS C I E N C E S 1 9 7 8 ) . T h i s f a c t w a s t r a g i c a l l y d e m o n s t r a t e d b y t h eM i n a m a t a a n d N i i g a t a p o i s o n i n g i n c i d e n t s i n J a p a n i n w h i c h 1 6 8p e r s o n s w h o a t e s e a f o o d f r o m m e r c u r y p o l l u t e d w a t e r s w e r e p o i -s o n e d , 5 2 f a t a l l y ( K ATZ 1 9 7 2 , D ' I T R I a n d D ' I T R I 1 s S h o r t l ya f t e r t h e se t w o i n c i d e n t s , w o r k c o n d u c t e d i n f r e s h w a t e r e n v i r o n -

m e n t s b y W E S T O 0 ( 1 9 66 ) a n d J E N S E N a n d J E R N E L O V ( 1 96 9 ) d e m o n s t r a t e dt h e m i c r o b i a l c o n v e r s i o n o f i n o r g a n i c a n d p h e n y l m e r c u r y c o m p o u n d st o m o n o - a n d d i m e t h y l - m e r c u r y . I t h a s b e e n s i n c e w i d e l y a s s u m e dt h a t m i c r o b i a l m e t h y l a t i o n p l a y e d a s i g n i f i c a n t r o l e in t h eJ a p a n e s e p o i s o n i n g i n c i d e n t s , e v e n t h o u g h t h e s e w e r e a s s o c i a t e dw i t h e s t u a r i n e w a t e r s a n d i n v o l v e d s o m e m e t h y l - m e r c u r y a s w e l l a si n o r g a n i c m e r c u r y d i s c h a r g e s , m a k i n g t h e r o l e o f m i c r o b i a l m e t h y -l a t i o n u n c e r t a in . C o n s i d e r a t i o n o f s o m e f r a g m e n t a r y e v i d e n c e f r o mt h e l i t e r a t u r e , h o w e v e r , i n d i c a t e s t h a t t h e r a t e a n d t h e s i g n i f i -c a n c e o f m i c r o b i a l m e t h y l a t i o n o f m e r c u r y i n f r e s h w a t e r a n ds a l t w a t e r e n v i r o n m e n t s m a y n o t b e t h e s a me . YA M A D A a n d T O N O M U R A

( 1 9 72 a , 1 9 7 2 b a n d 1 9 7 2 c ) s h o w e d t h a t s u l f i d e i o n s i n t e r f e r e d w i t ht h e m e t h y l a t i o n o f m e r c u r i c i o n s b y C l o s t r i d i u m c o c h l e a r i u m.S u l f a t e i n t e r f e r e d w i t h m e t h y l a t i o n o f m e r c u r y i n a m i x e da n a e r o b i c c u l t u r e o f m e t h y l a t i n g a n d s u l f a t e - r e d u c i n g b a c t e r i a .S i m i l a r r e s u l t s w e r e r e p o r t e d b y T AL M I a n d M E S M E R ( 19 75 ) .F A G E R S T R O M a n d J E R N E L O V ( 19 71 ) r e p o r t e d v e r y l o w r a t e s o f m e r c u r ym e t h y l a t i o n f r o m H g S a s c o m p a r e d t o H g C I e . B a s e d o n t h e s e r e s u l t s ,o n e m a y s p e c u l a t e t h a t in s u l f a t e - r i c h a n d a n a e r o b i c m a r i n e a n de s t u a r i n e s e d i m e n t s m e r c u r y i s l e s s l i k e l y t o b e m e t h y l a t e d t h a ni n l o w - s u l f a t e f r e s h w a t e r s e d i m e n t s . T h e s a m e a n a e r o b i c c o n d i -t i o ns t h a t a r e c o n d u c i v e t o m e r c u r y m e t h y l a t i o n w i l l g i v e r i s e ,

i n s u l f a t e - r i c h s e d i m e n t s , t o H 2 S t h a t w i l l t i e u p m e r c u r i c i o n sa n d m a k e t h e m l e s s a v a i l a b l e f o r m i c r o b i a l m e t h y l a t i o n . I na d d i t i on , s u l f a t e m a y i n t e r f e r e w i t h m e t h y l a t i o n o f m e r c u r yt h r o u g h i t s e f f e c t o n t h e r e d o x p o t e n t i a l . R e d u c t i o n o f s u l f a t eo c c u r s a t r e d o x p o t e n t i a l s l e s s n e g a t i v e ( ~ - 2 0 0 m V ) t h a n t h o s er e q u i r e d f o r r e d u c t i o n o f C 0 2 ( ~ - 4 0 0 m V ) . C o n s e q u e n t l y ,

T h e w o r k r e p o r t e d i n t h i s p a p e r o f t h e J o u r n a l S e r i e s ,N e w J e r s e y A g r i c u l t u r a l E x p e r i m e n t S t a t io n , R u t g e r s U n i v e r s i t y ,N e w B r u n s w i c k , N J , w a s s u p p o r t e d b y t h e U . S . D e p a r t m e n t o fC o m m e r c e , N O A A , S e a G r a n t f u n d s .

0007-4861/80/0025-0404 $01.009 1980 Springer-Verlag New York Inc.


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s i g n i f i c a n t m e t h a n o g e n e s i s d o e s n o t o c c u r u n t i l a l l a v a i l a b l es u l f a t e i s r e d u c e d ( L E X M O N D e t a l . 1 9 7 6 ) . S u l f a t e b e i n g a m a j o ra n i o n i n s e a w a t e r ( T A I T a n d D E S A N T O 1 9 7 2 ) , e s t u a r i n e s e d i m e n t sa r e g e n e r a l l y r i c h i n s u l f a t e w h i l e m o s t f r e s h w a t e r e n v i r o n m e n t sa r e n o t . R e g a r d l e s s o f i t s e x a c t m e c h a n i s m , a d e m o n s t r a t e dr e l a t i o n s h i p b e t w e e n m e r c u r y m e t h y l a t i o n r a t e s a n d w a t e r s a l i n i t yw o u l d g r e a t l y i n f l u e n c e o u r t h i n k i n g a b o u t m e r c u r y p o l l u t i o ne f f e c t s i n m a r i n e v e r s u s f r e s h w a t e r e n v i r o n m e n t s . S i n c e w e w e r eu n a b l e t o l o c a t e p u b l i s h e d r e p o r t s o n t h i s s u b j e c t , w e h a v e u n d e r -t a k e n t o i n v e s t i g a t e t h e i n f l u e n c e o f s a l i n i t y o n t h e r a t e o fm e r c u r y m e t h y l a t i o n i n a n e s t u a r i n e s e d i m e n t .

E X P E R I M E N T A L

S a m p l e P r e p a r a t i o n a n d I n c u b a t i o n . E s t u a r i n e s e d i m e n tu s e d i n t h e s e s t u d i e s w a s c o l l e c t e d f r o m u n d e r a t y p i c a l S p a r t i n aa l t e r n i f l o r a s t a n d o n t he b a n k o f t h e C h e e s e q u a k e C r e e k ,

C h e e s e q u a k e S t a t e P a r k , N J . C o l l e c t i o n w a s m a d e a t l o w t i d e ,u s i n g a h a n d - o p e r a t e d c o r e S a m p l e r . C o r e s e c t i o n s f r o m 5 0 t o2 0 c m i n d e p t h w e r e s l u r r i e d w i t h w a t e r f r o m a f r e s h w a t e r p o n d i na 2 : 1 f i n a l s e d i m e n t : w a t e r r a t i o , u s i n g a S e r w a l l O m n i M i x e r u n d e ra n i t r o g e n a t m o s p h e r e . W i t h o u t a d d i t i o n o f s a l t s , t h i s s l u r r y h a da s a l i n i t y r e a d i n g o f 0 . 1 % a s d e t e r m i n e d b y a Y S I M o d e l 3 3 s a l i n e -m e t e r . S e a s a l t s w e r e a d d e d f r o m c o n c e n t r a t e d s t o c k s o l u t i o n s o fS e v e n S e a s M a r i n e M i x ( U t i l i t y C h e m i c a l C o . , P a t e r s o n , N J ) i n p o n dw a t e r . F i n a l s a l i n i t i e s o f t h e s l u r r i e s w e r e a d j u s t e d , a f t e re q u i l i b r a t i o n , u s i n g t h e s a l i n o m e t e r . T e n p p m ( b a s ed o n d r ys e d i m e n t ) o f m e r c u r y w a s a d d e d a s H g C I 2 . W h i l e s t i r r i n g u n d e r a

n i t r o g e n s t r e a m i n o r d e r t o a s s u r e h o m o g e n e i t y b u t m i n i m i z e o x y g e ne x p o s u r e , 3 0 g a m o u n t s o f t h e s l u r r y w e r e d i s p e n s e d i n t o t a r e d7 5 m l t e s t t ub e s . T h e t u b e s w e r e f l u s h e d w i t h n i t r o g e n , w e r et i g h t l y c l o s e d w i t h T e f l o n - l i n e d s c r e w c a p s a n d w e r e i n c u b a t e d i nt h e d a r k a t 2 8 ~ C o n t r o l s o f t w o k i n d s w e r e i n c l u d e d : t u b e sw i t h o u t a d d e d m e r c u r y a n d t u b e s w i t h m e r c u r y p l u s 0 . 2 % N a N 3 t os u p p r e s s m i c r o b i a l m e t h y l a t i o n . A t a p p r o p r i a t e t i m e i n t e r v a l s ,t u b e s w e r e s a c r i f i c e d f o r a n a l y s i s . T h e c o n t e n t s o f t h e t u b e tob e s a c r i f i c e d w e r e h o m o g e n i z e d u s i n g a v o r t e x m i x e r . H a l f o f t h es a m p l e w a s u s e d f o r a n a l y s i s o f m e t h y l m e r c u r y , t h e o t h e r h a l f w a sd r i e d o v e r n i g h t a t I0 5 ~ t o d e t e r m i n e t h e a c t u a l d r y w e i g h t o f t h e

s e d i m e n t i n t h e i n d i v i d u a l s a m p l e s .

A n a l y t i c a l P r o c e d u r e s . A n a l y s i s o f m e t h y l m e r c u r y( m o n o m e t h y l a n d d i m e t h y l m e r c u r y c o m b i n e d ) w a s p e r f o r m e d a c c o r d i n gt o L O N G B O T T O M e t a l . ( 1 9 7 3) . I n p r e c i s e l y w e i g h e d s e d i m e n ts a m p l e s ( ~ 1 5 g ) a l l m e t h y l m e r c u r y w a s c o n v e r t e d t o C H 3 H g B r a n ds u b s e q u e n t l y e x t r a c t e d i n t o t o l u e n e . A f t e r c l e a n - u p b y s o d i u mt h i o s u l f a t e t r e a t m e n t , C H 3 H g + w a s c o n v e r t e d t o t h e i o d i d e f o r ma n d w a s e x t r a c t e d i n t o b e n z e n e . A f t e r d r y i n g o f t h e e x t r a c t b ya n h y d r o u s N a z S O ~ , C H 3 H g l w a s a n a l y z e d b y g a s c h r o m a t o g r a p h y u s i n ga T r a c e r M o d e l M T - 2 2 0 i n s t r u m e n t w i t h a 6 a N i e l e c t r o n c a p t u r e

d e t e c t o r a n d o n - c o l u m n i n j e c t i o n o f 5 ~ i s a m p l e s . A 1 8 3 c m 1 0 n g

4 0 5


3/5

0 . 7 3 c m O D g la s s c o l u m n p a c k e d w i t h 1 0 % S i l a r 1 0 - C o n 8 0 / 1 0 0 m e s hG a s C h r o m Q w a s u s e d u n d e r t h e f o l l o w i n g o p e r a t i n g c o n d i t i o n s :9 5 % a r g o n , 5 % m e t h a n e c a r r i e r a t 9 0 m l / m i n , i n l e t 2 1 0 ~ o v e n2 0 0 ~ d e t e c t o r 2 8 0 ~ P e a ks w e r e q u a n t i t a t e d b y m e a n s o f a d i s ci n t e g r a t o r a n d a p p r o p r i a t e m e t h y l m e r c u r i c i o d i d e ( M a t h e so n ,C o l e m a n a n d B e l l , N o r w o o d , O H ) s t a n d a r d s . D e t e c t i o n l i m i t w a s0 . 0 1 ~ g m e r c u r y / g s e d i me n t . R e c o v e r y o f m e t h y l m e r c u r y f r o m s p i k e ds e d i m e n t s a m p l e s w a s 9 5 % ~ 7%. A l l m e t h y l m e r c u r y v a l u e s w e r e r e -c o r d e d a s ~ g H g p e r g r a m o f d r y s e d i m e n t .

R E S U LT S A N D D I S C U S S I O N

T h e r a t e a n d e x t e n t o f m i c r o b i a l m e t h y l a t i o n o f H g + +i o n s i n a n a e r o b i c a l l y i n c u b a t e d e s t u a r i n e s e d i m e n t s a m p l e s( Fi g . i ) w a s c l e a r l y i n a n i n v e r s e r e l a t i o n s h i p t o s a l i n i t y .

M e t h y l a t i o n w a s m o s t r a p i d a t t h e l o w e s t s a l i n i t y ( 0 . 1% ). I nt h i s c a s e , 2 . 3 % o f t h e a d d e d m e r c u r i c i o n w a s p r e s e n t a s m e t h y l -m e r c u r y a f t e r 1 5 d a y s o f i n c u b a t i o n a s c o m p a r e d t o 0 . 0 5 % a t 3 %s a l i n i t y . A n i n c r e a s e i n s a l i n i t y b e y o n d 2 % h a d c o m p a r a t i v e l yl i t t l e a d d i t i o n a l e f f e c t o n m e t h y l a t i o n . T h e r e w a s a m a r k e dd e c l i n e i n m e t h y l m e r c u r y c o n c e n t r a t i o n s a f t e r 1 5 - 2 0 d a y s o f i n c u -b a t i o n . M e a s u r e m e n t s o n m o n o - a n d d i m e t h y l m e r c u r y - s p i k e de s t u a r i n e s e d i m e n t s a m p l e s , n o t r e p o r t e d h e r e in d e t a i l , s u g g e s tt h a t t h e s e d e c l i n e s w e r e a c o n s e q u e n c e o f m i c r o b i a l d e m e t h y l a t i o n .A n a e r o b i c d e m e t h y l a t i o n o f m e r c u r y i s k n o w n t o o c c u r ( S PA N G LE R e ta l . 1 9 7 3a , 1 9 7 3 b ; B I L L E N e t a l . 1 9 7 4 ) . T h e p a t t e r n o f i n i t i a li n c r e a s e a n d s u b s e q u e n t d e c l i n e i n m e t h y l m e r c u r y w a s c o n s i s t e n ti n o u r e x p e r i m en t s , a n d v e r y s i m i l a r p a t t e r n s w e r e o b s e r v e d p r e -

v i o u s l y i n s e d i m e n t s a m p l e s b y O L S O N an d C O O P E R ( 1 97 6 ) . Wei n t e r p r e t t h e s e p a t t e r n s a s c o n s e q u e n c e s o f m i c r o b i a l s u c c e s s io n ,e i t h e r i n r e s p o n s e t o t h e m e t h y l m e r c u r y b u i l d - u p , o r t o s o m e o t h e rc h a n g i n g e n v i r o n m e n t a l p a r a m e t e r . I t i s n o t c l e a r a t t h i s s t a g e ,h o w e v e r , w h e t h e r t h e s e p a t t e r n s w o u l d o c c u r i n n a t u r e , o r w h e t h e rt h e y ar e a r t i f a c t s o f s a m p l e p r e p a r a t i o n a n d i n c u b a t i o n p r o c e d u r e s .

I t w o u l d b e d e s i r a b l e t o r e l a t e o u r l a b o r a t o r y e x p e r i -m e n t s t o r e p o r t e d f i e l d o b s e r v a t i o n s . O L S O N a n d C O O P E R ( 1 9 7 4)m e a s u r e d i n s i t u m e r c u r y m e t h y l a t i o n a c t i v i t y i n S a n F r a n c i s c o B a ye s t u a r i n e s e d i m e n t s . T h e y n o t e d m e t h y l a t i o n a c t i v i t y f a r b e l o w

t h e l e v e l s r e p o r t e d b y J E N S E N a n d J E R N E L O V ( 1 9 6 9) , FA G E R S T R O M a n dJ E R N E L O V ( 1 97 1 ) a n d S PA N G L E R e t a l. ( 1 9 7 3b ) f o r f r e s h w a t e r s e d i -m e n t s i nc u b a t e d u n d e r l a b o r a t o r y c o n d i t i o n s . O L S O N a n d C O O P E R( 19 76 ) a l s o c o m p a r e d m e t h y l a t i o n o f m e r c u r y i n s e d i m e n t s a m p l e sc o l l e c t e d f r o m t h r e e l o c a t i o n s i n S a n F r a n c i s c o B a y. T h e s e d i m e n tc o l l e c t i o n p o i n t s r a n g e d f r o m s h a l l o w , n e a r s h o r e a r e a s to d e e pw a t e r . P r e s u m a bl y , t h e n e a r s h o r e s e d i m e n t s a m p l e h a d a l o w e rs a l i n i t y t h a n t h e d e e p w a t e r o ne . M e r c u r y m e t h y l a t i o n a c t i v i t yw a s f o u n d t o b e h i g h e s t i n t h e n e a r s h o r e a n d l o w e s t i n t h e d e e pw a t e r s e d i m e n t s a m p l e . H o w e v e r , t h i s l o w e r a c t i v i t y w a s n o ta t t r i b u t e d t o s a l i n i t y , n o r w a s t h e a c t u a l s a l i n i t y o f t h e S a n

4 0 6


4/5

F r a n c i s c o B a y s e d i m e n t s r ep o r t e d . W h i l e t h e m e t h y l a t i o n r a t e sr e p o r t e d b y O L S O N a n d C O O P E R ( 1 9 74 , 1 9 7 6 ) a p p e a r t o b e c o n s i s t e n tw i t h o u r f i n d i n g s , t h e r e i s a c l e a r n e e d f o r f u t u r e c o m p a r i s o n so f i n s i t u m e t h y l a t i o n i n s e d i m e n t s w i t h v a r y i n g l e v e l s o f k n o w ns a l i n i t y .

S % .

9 I 0

0 2 0 9

.3o / \&0 .2

V

I I : ~ o . i

00 5 I 0 15 2 0 2 5

TIME(days)F i g u r e i . E f f e c t o f s a l i n i t y o n t h e a n a e r o b i c m e t h y l a t i o n o f i 0p p m H g + + ( as H g C I 2 ) i n a n e s t u a r i n e s e d i m e n t . S a l i n i t i e s ( S % 0 ~s e e k e y ) w e r e a d j u s t e d f r o m i t o 3 0 p a r t s p e r t h o u s a n d . M e t h y l -m e r c u r y c o n c e n t r a t i o n s [ H g ( p g / g )] a r e p l o t t e d o n t h e Y a x i s a sp g m e t h y l m e r c u r y - H g p e r g d r y s e d i me n t . C o n t r o l s w i t h o u t H g C I 2a n d a ls o w i t h H g C I 2 p l u s 0 . 2 % N a N 3 w e r e i n c l u d e d a t s e v e r a ls a l i n i t y l e v e l s . S i n c e n o n e o f t h e s e c o n t r o l s s h o w e d d e t e c t a b l em e r c u r y m e t h y l a t i o n , f o r c l a r i t y o n l y a s i n g l e c o n t ro l c u r v ei s s h o w n .

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F u r t h e r w o r k w i l l b e n e c e s s a r y t o p r o v e t h a t t h eo b s e r v e d s a l i n i t y e f f e c t i s i n d e e d d u e t o t h e s u l f a t e c o m p o n e n to f s e a s al t s , a n d i f s o, t h e m e c h a n i s m o f i n t e r f e r e n c e w i l l n e e dt o b e d e f in e d . H o w e v e r , t h e i n v e r s e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n s a l i n i t ya n d m e r c u r y m e t h y l a t i o n i s c l e a r f r o m t h e w o r k a c c o m p l i s h e d t od a t e , a n d t h i s f i n d i n g s h o u l d h a v e s o m e s i g n i f i c a n t p r a c t i c a li m p l i c a t i o n s . I f i t c a n b e c o n f i r m e d t h a t c o n v e r s i o n o f i n o r g a n i cm e r c u r y t o m e t h y l m e r c u r y i s l o w e r i n s a l t w a t e r t h a n i n f r e s h w a te re n v i r o n m e n t s , t h i s c o u l d a f f e c t t h e s i t i n g o f i n e v i t a b l e s o u r c e so f m e r c u r y p o l l u t i o n a nd , p e rh a p s , r e s u l t i n d i f f e r e n t i a l m e r c u r yp o l l u t i o n s t a n d a r d s f o r f r e s h w a t e r a n d s a l t w a t e r e n v i r o n m e n t s .

R E F E R E N C E S

B I L L E N , G . , C. J O I R I S a n d R . W O L L A S T: Wa t e r R e 8 . ~ , 2 1 9 ( 1 9 7 4 ) .

D ' I T R I , P. A . a n d F. M . D ' I T R I : E n v i r o n . M a n a g e . ~ ( i ) , 3 ( 1 9 7 8 ) .

FA G E R S T R O M , T. a n d A . J E R N E L O V : Wa t e r R e s . ~ , 1 2 1 (1 9 71 ) .

J E N S E N , S . a n d A . J E R N E L O V: N a t u r e 2 3 3 , 7 5 3 ( 1 9 6 9 ) .

K AT Z , A . : C . R . C . C r i t . R e v. E n v i r o n . C o n t r o l ~ , 5 1 7 ( 1 9 7 2 ) .

L E X M O N D , T . M . , F . A. M . D E H A A N a n d M . J . F R I S S E L : N e t h . J . A g r i c .S c i . 2 4 , 7 9 ( 1 9 7 6 ) .

L O N G B O T T O M ,J . E . , R . C . D R E S S M A N a n d J .J . L I C H T E N B E R G : J . A 8 8 o c .

O f f . A n a l . C h e m . 5 6 , 1 2 9 7 ( 1 9 7 3 ) .

N AT I O N A L A C A D E M Y O F S C I EN C E S : " A n A s s e s s m e n t o f M e r c u r y i n t h eE n v i r o n m e n t " , N . A . S . , Wa s h i n g t o n , D . C . ( 1 9 7 8) .

O L S O N , B . H . a n d R . C . C O O P E R :

O L S O N , B . H . a n d R . C . C O O P E R :

N a t u r e 2 5 2 , 6 8 2 ( 1 9 7 4 ) .

Wa t e r R e s . 1 0 , 11 3 ( 1 9 7 6 ) .

S PA N G L E R, W. J . , J . L . S P I G A R E L L I , J . M . R O S E , R . S . F L I P P I N a n d H . M .M I L L E R : A p p l . M i c r o b i o l . 2 5 , 4 8 8 ( 1 9 7 3 a ) .

S PA N G L E R , W. J . , J . L . S P I G A R E L L I , J . M . R O S E a n d H . M . M I L L E R :S c i e n c e 1 8 0 , 1 9 2 ( 1 9 7 3 b ) .

TA I T, R . V. a n d R . S . D E S A N T O : " E l e m e n t s o f M a r i n e E c o l o g y " ,S p r i n g e r Ve r l a g , N e w Yo r k , H e i d e l b e r g , B e r l i n , 1 9 7 2. p . 7 3.

W E S T O 0 , G . : A c t a C h e m . S c an d . 2 0 , 2 1 3 1 ( 1 9 6 6 ) .

YA M A D A , H . a n d K . T O N O M U R A : J . F e r m e n t . Te c h n o l . 5 0 , 1 5 9 ( 1 9 7 2 a ) .

YA M A D A , M . a n d J . T O N O M U R A : J . F e r m e n t . Te c h n o l . 5 0 , 8 9 3 ( 1 9 7 2 b ) .

YA M A D A , M . a n d K . T O N O M U R A : J . F e r m e n t . Te c h n o l . 5 0 , 9 0 1 ( 1 9 7 2 c ) .

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effect of salinity on methyl at ion of mercury

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