Bol. San. Veg. Plagas, 24: 679-686, 1998

Ensayos de laboratorio con una poblaciónde Steinernema carpocapsae (Filipjev) detectadaen larvas de Capnodis tenebrionis L.

C. SANTOS LOBATÓN, J. R. GARCÍA VELA, M. P. LARA LÓPEZ y A. CANALES ROCA

Se ha evaluado el efecto de Steinernema carpocapsae (Filipjev) para conocer su po-tencial de control sobre varias especies de insectos. La cepa (SCG.2) fue obtenida en elmedio natural parasitando larvas de Capnodis tenebrionis L.

Los ensayos se realizaron en placas de Petri, teniendo lugar el 100% de mortandaden los estados preimaginales. En el primer ensayo los cadáveres de los hospedadoresfueron diseccionados para obtener los nematodos que después fueron conservados enuna solución de formol al 0,1% y a 4 °C. Estos nematodos fueron utilizados en un se-gundo ensayo y los cadáveres de los hospedadores fueron depositados en placas dePetri sobre papel de filtro a 20 °C para realizar observaciones intermitentes de la emer-gencia de los nematodos a partir de las 24 horas de la muerte del hospedador.

Los resultados obtenidos en varios imagos indican que éstos pueden servir de me-canismo para la dispersión de los nematodos.

C. SANTOS LOBATÓN: Laboratorio de Zoología Aplicada. Dpto. de Fisiología y BiologíaAnimal. Fac. de Biología. Univ. de Sevilla. Avda. Reina Mercedes, 6. 41012 Sevilla.J. R. GARCÍA VELA, M. P. LARA LÓPEZ L. y A. CANALES ROCA: Rhóne-Poulenc AgroS.U. Centro de Investigación Agrícola. 41209 Torre de la Reina. Sevilla.

Palabras clave: Steinernema carpocapsae, Capnodis tenebrionis, cepa, control, en-sayo, dispersión.

INTRODUCCIÓN

Un número elevado de insectos que cons-tituyen plaga pasan una parte de su ciclo devida en el suelo y éste ofrece un lugar exce-lente para la acción de los Nematodos Ento-mopatógenos (Steinernematidae y Heteror-habditidae) que también pueden actuar en lazona superficial y en las plantas, si las con-diciones son favorables.

Si tenemos en cuenta que el suelo es un re-servorio natural de estos nematodos (KLEIN,1990) comprenderemos que resultan unaatractiva alternativa a la aplicación de pestici-das químicos y un factor muy importante enlos programas de Control Integrado (IPM).En esta línea, existe en la actualidad una ten-dencia progresiva a la utilización de biopesti-

cidas que se estima con un aumento del 15%en los próximos años, frente al descenso del2% en el uso de los pesticidas químicos(LACEY y GOETTEL, 1995) y son muchos losautores que consideran el impacto y la pro-yección de futuro de los nematodos entre losbiopesticidas (BARKER et al, 1994).

Su compatibilidad con muchos pesticidasquímicos que permite su utilización conjun-ta (ROVESTI et al, 1990; COWLES y VlLLA-Nl, 1994) constituye una línea de investiga-ción muy potenciada en la actualidad, des-pertando el interés de la industria porqueademás reúnen otras características tan de-seables como la anterior, tales como su fácilproducción masiva, su eficacia y la posibili-dad de ser aplicados por métodos conven-cionales.

Los principales problemas que plantea lautilización de los nematodos entomopatóge-nos son su efectividad y pervivencia en elsuelo ante factores limitantes o adversosentre los que están los enemigos naturales,fundamentalmente microartrópodos (EPSKYet al, 1988; LEE y WlDDEN, 1996), y lascondiciones del medio, de las que la tem-peratura es el factor limitante con implica-ciones más importantes (HENNEBERRY etal, 1996; BUHLER y GIBB, 1994). Todo estoindica el interés de detectar poblaciones na-turales en suelos cultivados donde el nema-todo está adaptado y además se conoceránnuevas especies o cepas con distintos gradosde patogenicidad. En esta línea estamos rea-lizando actualmente prospecciones en An-dalucía Occidental para conocer los nemato-dos entomopatógenos, estudiar su rango depatogenicidad sobre especies plaga e inten-tar su cría masiva sobre ellas y sobre otrasespecies que permitan elevadas produccio-nes y faciliten su inoculación y propagaciónen el medio donde actuarán como agentescontroladores.

MATERIAL Y MÉTODOS

Hemos realizado ensayos con una pobla-ción de Steinernema carpocapsae (SCG.2)detectada sobre larvas de Capnodis tene-brionis L. (Col.: Buprestidae) en la provin-cia de Sevilla.

En un primer ensayo obtuvimos los nema-todos en cultivos realizados sobre larvas deC. tenebrionis aisladas del medio natural.Los nematodos obtenidos se conservaron enformol (0,1% a 4-6 °C) para ser utilizadosen un segundo ensayo en el que también seutilizaron individuos obtenidos después deuna rehidratación del medio en el que per-manecían; con este método se recuperarondel 50 al 80% de los individuos.

En el segundo ensayo se utilizaron las for-mas infectivas obtenidas a partir del prime-ro. Para esto, se procedió a un filtrado y fue-ron seleccionados por su aspecto intacto ymotilidad normal de ondulaciones sinusoi-

dales; aspectos observados en un microsco-pio invertido (lOOx) tal como ha sido reali-zado por BADLEY et al (1990).

Los ensayos de mortandad y estudios deproducción de nematodos se realizaronsobre estados preimaginales de C. tenebrio-nis, Spodoptera littoralis Hübner, Spodopte-ra exigua Hübner, Lobesia botrana Den yShiff, Barias insulana Boisduval y Bombyxmorí L.

Los ensayos tuvieron lugar en placas dePetri de 90 mm. de diámetro, mantenidas encámaras de cultivo a 20 ± 1 °C, con una hu-medad relativa del 60-70% y un fotoperiodode 12:12 horas (luz:oscuridad). En cada en-sayo se utilizaron diez placas de Petri paralarvas y diez para pupas, depositando encada caso cinco individuos sobre discos depapel de filtro a los que se había añadidocinco mi. de suspensión acuosa del nemato-do (50 nematodos/ml.). Se realizaron con-troles cada 24 horas para ir recogiendo losindividuos muertos, que eran depositadosindividualmente en placas de Petri, sobrepapel de filtro húmedo, a fin de obtener se-paradamente los nematodos que iban emer-giendo de cada uno de ellos.

También realizamos observaciones direc-tas de la penetración de los nematodos, de-positando en la superficie de las larvas ypupas una gota de agua que contenía uno odos nematodos.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Actividad del nematodo

La mortandad resultó ser del 100% entodas las especies ensayadas y tuvo lugarentre las 24 y 48 horas posteriores a la intro-ducción de los hospedadores en las placas dePetri. En las larvas en la que se observó di-rectamente la penetración de los nematodos,la muerte tuvo lugar entre las 50 y 70 horas.

El porcentaje de mortandad es frecuenteen ensayos de laboratorio tal y como hanmanifestado varios autores que han trabaja-do con distintas especies y cepas, utilizando

concentraciones de 100 nematodos/ml.(GLAZAR, CALPER y SHARON, 1991). Ennuestro caso, hemos obtenido el mismo ín-dice de mortandad con la mitad de concen-tración, resultado que se corresponde conlos de otros autores que lo consiguen conpocos nematodos (MACVEAN y BREVER,1981). Algunos autores como GARCÍA DELPINO (1988) llegan a la conclusión de que elaumento en la concentración sólo influye enel número de días que transcurren hasta laemergencia de las formas infectivas.

En todas las especies ensayadas observa-mos melanización en toda la superficie cor-poral pero se muestra tardíamente en com-paración con otros autores que la encuentranal día siguiente de la inoculación (BLOSSEYy EHLERS, 1991). En nuestros ensayos semostró poco antes de emerger los nemato-dos en Lobesia botrana (Fig. 1); en las últi-mas etapas de la desintegración del cadáver,en C. tenebrionis y B. morí y a partir de las48 horas en las restantes especies. En laFig. 2 observamos los primeros nematodosque emergen, de segunda y tercera genera-ción, a partir de C. tenebrionis sin ser evi-dente la melanización que se muestra mástarde (Fig. 3). No encontramos una zonapreferente de salida aunque lo hicieron enmayores cantidades a través de las membra-nas, en el caso de las pupas (Fig. 4).

Fig. l.-L. Botrana al empezar a emergerlos nematodos.

Fig. 2.-Emergencia de nematodos en C. tenebrionis,sin melanización.

Fig. 3.-Fuerte melanización en C. tenebrioniscon nematodos emergiendo. Fig. 4.-Detalle en pupa de S. littoralis.

No apreciamos diferencia entre la efecti-vidad de los nematodos encontrados en elmedio natural y las siguientes generacionesobtenidas a partir de éstos y que fueron con-servados en formol o recuperados despuésde rehidratarlos. La recuperación de los con-servados en formol resultó ser del 85% y lade los rehidratados del 50-80% lo que nosproporciona buenas espectativas para la rea-lización de ensayos en campo con esta cepa.

Producción de nematodos

El mayor número de nematodos obtenidofue a partir de B. morí, seguido de C. teñe-brionis (Fig. 5). Fig. 5.-Nematodos obtenidos (%) en las distintas

especies.

Fig. 6.-Hembra de Ia generación con los individuosinfectivos fuera.

El número de nematodos obtenido puederesultar superior si se espera la emergenciade las formas infectivas a partir de las hem-bras localizadas en procesos de «endotoquiamatricida» (Figs. 6 y 7) que eran separadaspor filtrados. Algunas de estas hembras fue-ron localizadas en las tapas de las placas dePetri junto con individuos en distintas eta-pas del ciclo y machos, todos habían ascen-dido por evaporación (Fig. 8) y eran recogi-dos al mismo tiempo que los que estabansobre el hospedador , en el papel de filtro yen el fondo de la placa.

Fig. 7.-Hembras de 2a generación con formasinfectivas en su interior.

Fig. 8.-Nematodos desplazados en la tapade una placa de Petri.

Fig. 10.-5. Carpocapsae (SCG.2) en un hilo de seda.

Fig. 9.-Nematodos obtenidos en los ensayos con B. morí.

En B. morí, donde fueron repetidos losensayos para infectar todas las etapas delciclo, se comprobó que el nematodo actúaen todas salvo en la fase de huevo, resultan-do más elevada la producción en la etapa depupa y superior a ésta la procedente de con-

taminar capullos cerrados (Fig. 9). Los ne-matodos no tuvieron dificultad en acceder alinterior del capullo, deslizándose con facili-dad por los hilos de seda (Fig. 10). Los ca-pullos fueron abiertos en el momento de de-tectar la salida masiva de formas infectivas(Fig. 11).

Todos los ensayos nos muestran una posi-bilidad de obtener grandes cantidades de ne-matodos sobre estados preimaginales y con-servarlos para su posterior utilización. Los¡magos infectados, directamente o porqueeclosionaron en los momentos iniciales dela infestación pueden ser tenidos en cuentapor la posibilidad de actuar como vectores yla limitada supervivencia después de la con-taminación evitaría una propagación no de-seada del nematodo.

INT.

EXT

Fig. 11 .-Emergencia masiva en capullos de B. morí.

ABSTRACT

SANTOS LOBATÓN, C ; GARCÍA VELA, J. R.; LARA LÓPEZ, M. P. y CANALES ROCA,A., 1998: Bioassays with a strain of Steinernema carpocapsae (Filipjev) detected onCapnodis tenebrionis L. Larvae. Bol. San. Veg. Plagas, 24(4): 679-686.

The efect of Steinernema carpocapsae (Filipjev) was evaluated for its potential tocontrol several insect species . The strain (SCG.2) was obtained from natural medio pa-rasiting larvae and pupae of Capnodis tenebrionis L.

Bioassays was carried out using Petri plates and caused 100% of mortality on inma-ture individuals. In the first assay hosts cadavers were disected in order to obtain nema-todes and they were disected in order to obtain nematodes and they were conservatedin 0,1 formaldehide solution at 4 °C. These nematodes were used in a second assay andthe cadavers were stored on moist filter paper in Petri plates at 20 ± 1 °C for intermi-tent observations on the hatching of nematodes up 24 hours after the host died.

Results obtained on several imagoes indicates that they could serve as a mechanismfor this nematode dispersal.

Key words: Steinernema carpocapsae, Capnodis tenebrionis, strain, control, bioas-say, dispersal.

REFERENCIAS

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(Recepción: 12 enero 1998)(Aceptación: 21 mayo 1998)