estudo da velocidade da reação enzimática e como ela se ... · atividade enzimática é afetada...
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Estudo da velocidade da reação
enzimática e como ela se altera em
função de diferentes parâmetros
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Parâmetro mais importante para
comparar a atividade e o tipo de reação
das enzimas é a concentração do
substrato
Importante abordagem para o
entendimento do mecanismo de ação
de uma enzima.
Vários fatores afetam a atividade de uma
enzima – pH, temperatura e substrato
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Atividade enzimática é afetada pelo pH
O pH pode influenciar a atividade de uma enzima através de maneiras
distintas. Primeiramente, o pH pode levar à desnaturação proteica.
O pH também pode interferir na atividade de uma enzima alterando o
padrão de cargas de um determinado sítio ativo ou catalítico, ou alterando
a conformação geral da proteína.
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Atividade enzimática é afetada pela temperatura
O aumento de temperatura aumenta a taxa de reação enzimática devido
ao aumento de energia cinética das moléculas participantes da reação.
A temperatura pode interferir nas interações que mantém as estruturas
secundárias e terciárias (pontes de hidrogênio e interações hidrofóbicas),
podendo levar à desnaturação protéica.
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enzima
A concentração do substrato afeta a velocidade das
reações catalisadas por enzimas
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Curva que relaciona [S] e V0 é uma hipérbole
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Concentrações
baixas de
substrato ocorre
aumento linear
entre
Velocidade(V0) e o
Substrato [S]
[S] V0
aumenta cada vez
menos até atingir
um patamar (Vmax)
Curva relacionando [S] e V0 pode ser expressa algebricamente
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Constante de Michaelis
Equação de Michaelis-Menten
TAREFA – Fazer para entregar a dedução da equação de Michaelis-Menten
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O que é Km ? É a concentração do substrato
onde se obtém metade da
velocidade máxima da reação
TAREFA – Demonstrar algebricamente o que é Km usando a equação de
Michaelis-Mentem e a definição de Km.
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Km e a Vmax varia de enzima para enzima caracterizando-
as e pode variar também com o substrato
Km não é uma medida de afinidade da enzima
pelo substrato mas sim a concentração do
substrato onde se obtém a metade da
velocidade máxima da reação
Rubisco
•Km CO2 - 9μM
•Km O2 - 350 μM
Hexoquinase Glicose Km - 0,05 μM
Frutose Km -1,5 μM
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Transformações da equação de Michaelis-Menten
Equação de Lineweaver-Burk ou duplo-recíproco
Inversão dos dois lados da equação de Michaelis-Menten
Separação dos componentes do lado direito.
Equação de Michaelis-Menten
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Equação de Lineweaver-Burk ou duplo-recíproco
Km
1 y a x b = +
inverter
Separar
componentes e
resolver
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y
x
Com essa
transformação
matemática passa-se
a trabalhar com uma
reta e não com uma
hipérbole, mais fácil.
Várias informações
podem ser obtidas
com esse gráfico
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y=0
x = 0
a = coeficiente angular
b = coeficiente linear
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y = 0
x = 0
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Através da análise da cinética da reação pode-se descobrir qual
o mecanismo de ação da reação com relação ao substrato
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A atividade de todas as enzimas pode ser
inibida por determinadas moléculas
Inibidores enzimáticos
São moléculas que interferem com a
catálise diminuindo ou interrompendo a
reação enzimática
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Como são classificados os inibidores de
acordo com seu mecanismo de ação?
Reversíveis Irreversíveis
Inibição competitiva
Inibição incompetitiva
Inibição mista ou não competitiva
Como eles atuam?
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Reversíveis - Inibição competitiva
Inibidor tem estrutura molecular semelhante à do substrato
Inibidor compete com o substrato pelo sitio ativa da enzima
[S] deslocar inibidor do
sítio ativo e manter Vmax
V max é constante na presença do inibidor devido à
grande quantidade de substrato
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Reversíveis - Inibição incompetitiva
Inibidor se liga em um
sítio diferente do centro
ativo, impede a reação do
complexo ES.
Independente da concentração do substrato o Km e a
Vmax estão alterados
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Reversíveis - Inibição mista ou não competitiva
Inibidor se liga tanto ao
complexo ES como à
enzima, em um sítio
diferente do centro ativo
Independente da concentração do substrato o
Km e a Vmax estão alterados
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Inibição irreversível
Inibidor se liga de maneira estável ou covalente
com um grupo funcional importante para a
atividade enzimática
Utilizados experimentalmente para definir os
aminoácidos essenciais do centro ativo das
enzimas
Inativar determinadas enzimas em situações
biológicas importantes
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Reagem com o resíduo S1 de serino-enzimas, formando um complexo irreversível.
Uma das enzimas altamente sensível a esses compostos é a
acetilcolinesterase, responsável pela metabolização do neurotransmissor
acetilcolina em neurônios centrais e periféricos (envenenamento por
organifosforados)
Este é o mecanismos de ação dos inseticidas organofosforados, como o
malathion e o parathion.
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Salicina, extraída da casca do Salgueiro Branco ou Chorão (Salix alba) - hoje sintetizada
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No metabolismo celular
grupos de enzimas
trabalham em conjunto
onde o produto de uma é
o substrato da outra
Via metabólica
Nessas vias existe
sempre uma enzima que
determina a velocidade
com que o grupo vai
trabalhar – enzimas
reguladoras
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•Regulam a velocidade das reações metabólicas
•São reguladas por determinados sinais
•Tipos:
Enzimas alostéricas
Enzimas reguladas por modificações
covalentes reversíveis
Enzimas reguladas por proteólise
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Sofrem modificações
conformacionais em
resposta à ligação do
modulador (positivo ou
negativo)
Enzimas alostéricas
•Possui sítios reguladores
para a ligação do
modulador especifico
•Maiores e mais
complexas que as não
alostéricas (mais que uma
cadeia polipeptídica)
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Enzimas reguladas por modificações
covalentes reversíveis
•Diferentes grupos podem se ligar á
molécula enzimática e regular sua atividade
•Grupos ligados covalentemente e
removidos pela ação de outras enzimas
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Enzimas reguladas por proteólise
Enzimas proteolíticas – mecanismo de proteção
Bothrops (Jararacas)
87% acidentes no
Estado de SP – janeiro
a abril – sexo
masculino
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1 - Procurar o mecanismo de ação do
glifosato e descrever como esse
herbicida exerce sua função sobre a
atividade da 5-enolpiruvilshiquimato-3-
fosfato sintase (EPSPS), que tipo de inibição
é essa.
TAREFA
TAREFA – Fazer para entregar a dedução da equação de Michaelis-Menten
TAREFA – Demonstrar algebricamente o que é Km usando a equação de
Michaelis-Mentem e a definição de Km.