estudo de associação de polimorfismos no gene 5-htt
TRANSCRIPT
Estudo de associação de polimorfismos
no gene 5-HTT (SLC6A4) com a
obesidade
Licínio Manco, Helena Dias, Magdalena Muc, Cristina Padez
Centro de Investigação em Antropologia e Saúde (CIAS),
Departamento de Ciências da Vida, Universidade de Coimbra, Portugal
Introdução
• A prevalência da obesidade tem vindo a aumentar a nível mundial
e deve-se essencialmente a fatores ambientais.
• No entanto, estudos epidemiológicos mostram que a obesidade
tem também uma forte componente genética (40-70% da
variabilidade inter individual do IMC).
• Os recentes estudos de associação genómica GWAS (genome-
wide association studies) identificaram mais de 75 loci associados
a pelo menos um parâmetro de obesidade.
• A associação entre obesidade e genes candidatos relacionados com as
funções serotoninérgicas no sistema nervoso central (SNC) tem vindo a
ser também explorada.
• O gene 5-HTT (SLC6A4; chr: 17q11.2) que codifica o transportador da
serotonina tem vindo a ser associado a diversos distúrbios psiquiátricos
e comportamentais incluindo depressão, ansiedade e suicídio.
• Alguns estudos recentes mostram que a modulação do sistema
serotoninérgico do SNC por polimorfismos no gene 5-HTT pode ser um
fator de suscetibilidade à obesidade.
• O transportador da serotonina
(5-HTT) é uma proteína
membranar localizada nos
neurónios pré-sinápticos, sendo
responsável pela recaptação do
neurotransmissor serotonina (5-
HT) para ser reciclado ou
degradado.
Rot et al. CMAJ (2009) 180:305.
• Foram descritos dois polimorfismos no gene 5-HTT que influenciam a
sua atividade transcricional :
5-HTTLPR: na região promotora, que consiste numa inserção /
deleção de 43 pb com dois alelos comuns, longo (L) e curto (S).
STin2: no intrão 2, que consiste num VNTR (variable number of
tandem repeat) de 17 pb com dois alelos comuns de 10 ou 12
cópias do elemento de repetição e um alelo raro com 9 cópias.
Adaptado de Haddley et al., 2012
• Investigar a associação dos polimorfismos 5-HTTLPR e
STin2 do gene 5-HTT com o excesso de peso e a
obesidade numa amostra de jovens adultos de
naturalidade Portuguesa.
Objetivo
• Amostra de 535 indivíduos :
225 sexo masculino; 310 sexo feminino;
idades 17-36 anos (média 20,8).
Recrutados aleatoriamente entre estudantes da Universidade de
Coimbra de setembro de 2013 a fevereiro de 2014.
Metodologia
Exames antropométricos
• Peso (Kg) e Estatura (cm) para cálculo do IMC (Peso/Estatura2)
e utilizados os intervalos da OMS para definir excesso de peso
e obesidade.
• A percentagem de gordura corporal foi determinada por
bioimpedância elétrica.
• Foram utilizados questionários (IPAQ) para avaliar a atividade
desportiva.
• A extração de DNA foi feita a partir de esfregaço bucal
e os polimorfismos foram genotipados por PCR com
primers específicos.
• Os produtos amplificados foram separados por
eletroforese em geles de agarose ou acrilamida.
Genotipagem
• A associação dos polimorfismos com o excesso de peso / obesidade
foi feita segundo um modelo “caso-controlo”, por regressão logística e
por testes de qui-quadrado no estudo de haplótipos.
• O grupo “controlo” incluiu os indivíduos com IMC<25 Kg/m2 e no
grupo “casos” foram agrupados os indivíduos com excesso de peso e
obesidade (IMC≥25 Kg/m2).
• Análise estatística com o software PLINK version 1.07
(http://pngu.mgh.harvard.edu/~purcell/plink/).
Análise Estatística
Resultados
Características obtidas para a amostra estudada e comparação entre sexos.
Parâmetros Total Sexo Feminino Sexo Masculino
N (%) 535 310 (57.9) 225 (42.1)
Idade média (anos) 20.68 (2.65) 20.56 (2.49) 21.09 (2.84)
Peso (kg) 64.32 (12.64) 58.44 (9.37) 72.04 (12.23)
Altura (m) 1.67 (0.09) 1.61 (0.06) 1.74 (0.07)
IMC (kg/m2) 23.00 (3.60) 22.51 (3.42) 23.67 (3.66)
Gordura corporal (%) 22.81 (7.50) 27.73 (5.18) 16.36 (4.64)
Défice de peso (<18.5 kg/m2 )* 23 (4.3) 18 (5.7) 5 (2.3)
Peso normal (≥18.5 to <25 kg/m2) * 402 (75.1) 242 (78.1) 160 (71.1)
Excesso de peso (≥25 kg/m2 to <30 kg/m2 ) * 88 (16.5) 38 (12.3) 50 (22.2)
Obesidade (≥30 kg/m2) * 22 (4.1) 12 (3.9) 10 (4.4)
Pratica desporto * (~300 min AF vigorosa/semana) 146 (27.3) 57 (18.4) 89 (39.6)
Não pratica desporto * (~80 min AF vigorosa/semana) 389 (72.7) 253 (81.6) 136 (60.4)
An
tro
po
metr
ia
Atividade
física
Dados: média (SD) para variáveis contínuas e N (%) para variáveis categóricas (*).
Produtos da amplificação por PCR separados por eletroforese em gel de
agarose (2%) mostrando os genótipos comuns do polimorfismo 5-HTTLPR.
LL LS LL SS LS M
529 pb
465 pb
500 pb
300 pb
200 pb
Genótipos do polimorfismo 5-HTTLPR
Genótipos do polimorfismo STin2
300 pb
266 pb
249 pb
500 pb
300 pb
200 pb
12
09
12
09
12
10
12
10
10
10
12
12 M
Produtos da amplificação por PCR separados por eletroforese em gel de
acrilamida (10%) mostrando os genótipos mais comuns do polimorfismo STin2.
Frequências genotípicas, alélicas e haplotípicas para os dois polimorfismos, 5-HTTLPR
e STin2 na amostra estudada.
Polimorfismos Genótipos
N (freq)
Alelos
N (freq)
P HWE
5-HTTLPR
(N=530)
LL: 170 (0.321)
LS: 249 (0.470)
SS: 111 (0.209)
L: 0.556
S: 0.444
0.308
STin2
(N=523)
12-12: 197 (0.376)
12-10: 233 (0.446)
10-10: 87 (0.166)
12-09: 5 (0.010)
10-09: 1 (0.002)
12: 0.604
10: 0.390
09: 0.006
0.243
Haplotypes
5-HTTLPR/STin2
(N=518)
L 12: 252 (0.243)
S 12: 371 (0.358)
L 10: 319 (0.308)
S 10: 88 (0.085)
L 09: 6 (0.006)
Grupos Locus
(N)
Alelos Normal
N (freq)
OB/OW
N (freq)
OR
(95% CI)
Pa Pb
Amostra total 5-HTTLPR
(530)
S
L
384 (0.46)
456 (0.54)
87 (0.40)
133 (0.60)
0.78
(0.58-1.05)
0.11 0.32
STin2
(517)
10
12
309 (0.38)
507 (0.62)
98 (0.45)
120 (0.55)
1.32
(0.98-1.77)
0.07 0.14
Pratica
desporto
5-HTTLPR
(146)
S
L
92 (0.41)
134 (0.59)
32 (0.48)
34 (0.52)
1.43
(0.79-2.06)
0.23 0.27
STin2
(139)
10
12
82 (0.39)
130 (0.61)
26 (0.39)
40 (0.61)
1.03
(0.60-1.77)
0.92 0.90
Não pratica
desporto
5-HTTLPR
(384)
S
L
292 (0.48)
322 (0.52)
55 (0.36)
99 (0.64)
0.64
(0.45-0.91)
0.01 0.05
STin2
(378)
10
12
227 (0.38)
377 (0.62)
72 (0.47)
80 (0.53)
1.47
(1.03-2.09)
0.03 0.15
Valores de OR estimados para o alelo minor e P-values não-ajustados (Pa) e ajustados para a idade e sexo (Pb).
Associação dos polimorfismos 5-HTTLPR e STin2 com o risco de excesso de peso / obesidade.
Associação dos haplótipos combinando os dois polimorfismos 5-HTTLPR/STin2 com
o risco de excesso de peso/obesidade.
Grupos Haplótipo Groupo Normal Group OB/OW χ2 Pa χ2 Pb
Amostra total S10 0.114 0.111 0.01 0.904 0.014 0.90
L10 0.268 0.339 4.2 0.041
S12 0.344 0.284 2.8 0.093
L12 0.274 0.267 0.04 0.837
Pratica desporto S10 0.134 0.129 0.01 0.91 2.062 0.56
L10 0.252 0.264 0.04 0.84
S12 0.281 0.355 1.34 0.24
L12 0.333 0.251 0.33 0.21
Não pratica
desporto
S10 0.107 0.107 0.0002 0.988 8.786 0.03
L10 0.273 0.367 5.1 0.024
S12 0.366 0.248 7.4 0.006
L12 0.254 0.278 0.4 0.544
P-values obtidos para cada haplótipo (Pa) e para o conjunto dos haplótipos (Pb).
• Foram encontradas evidências de associação entre polimorfismos do
gene 5-HTT e o excesso de peso / obesidade, nomeadamente para
os alelos 5-HTTLPR (L) e Stin2 (10).
• O estudo mostrou que a inatividade física acentua a influência dos
fatores genéticos 5-HTT no risco da obesidade, evidenciando
interação entre genes e ambiente (GXA) no risco para obesidade.
Conclusões
OBRIGADO!