Venenos Volátiles

Mario Ariel Aranda

Que vamos a Ver?

• Generalidades de los Venenos volátiles

• Análisis cualitativos y cuantitativos

• Tipos de muestras para el análisis

• Toma correcta de muestra

• Etanol

• Metanol

• Formaldehido

Análisis Cualitativo

Aislamiento

Cuantificación

Presencia o ausencia del analito positivo

Neg

ativ

o

Pruebas suplementarias o se descarta la presencia del toxico

Aislamiento del Toxico

Ensayos físicos

• Aspecto

• Olor

• pH

Acidosis Metabólica

Ensayos Químicos

Compuesto Reductor Alcoholes, aldehídos y cetonas+- Valor Analítico

Carácter Reductor

Ensayos Químicos cualitativos

Propiedad Oxidante

Acción sobre el Diamino plata

Ensayos Químicos cualitativos

Aldehídos, cloroformo, fenol y paraldehido

Alcoholes

+

-

Identificación de Formaldehído

Reacción con ácido Cromotrópico en sulfúrico 75%

Etanol

Sinonimia: alcohol, alcohol etílico, etanol

Características fisicoquímicas* Líquido incoloro* Punto de ebullición: 78,5 ºC* Densidad : 0,8 g/ml (20ºC)* Miscible con agua y algunos solventes orgánicos

Usos más comunes* Disolvente* Antiséptico

Fuentes del tóxico* Bebidas alcohólicas* Alcohol medicinal* Perfumes* Cosméticos* Antisépticos* Gotas óticas

Administración-Absorción

• Absorción:Vía inhalatoriaDigestivaParenteralRectal

Absorción

Factores que afectan la Absorción gástrica

• Ayuno A mayor contenido graso, mas lento es la absorción

• Tipo de graduación alcohólica:Gasificada Cerveza Whisky• Sexo ADH mas activa en Hombres que en Mujeres

• Edad Desarrollo del metabolismo

• Integridad de la mucosa gástrica Mayor absorción en mucosa dañada

Eyeballing

Tampodka

Metabolismo-Hepático

Agudo

Metabolismo-Hepático

Crónico

Recordar que el ROH esinductor de su propio metabolismo

Mayor cantidad de ROH puede ser metabolizado

Metabolismo

Excreción

* Orina: 5-10% como ETOH* Saliva* Sudor* Bilis* Aire espirado : correlación con laconcentración en sangre* Leche materna* Atraviesa Barrera Placentaria* Eliminación: 30 ml en 3 horas

Relación entre el aire espirado y el contenido en sangre de alcohol

Aparece en sangre 5-10 min desaparece de la sangre: 8-10 hsPico máximo: 30-90 min

Calculo retrospectivo

CCO = CC1 + β x t

Donde:CCO: concentración en el momento del accidente

CC1: concentración en el momento de la toma de muestra

t: tiempo desde el accidente y la toma de la muestra

Β: Factor de Widmark: 0,12 – 0.15 g/dl/hs

Adicción

• Incluye:

Compulsión Deseo de consumo

Tolerancia Efectos producidos a mayores concentraciones

Dependencia Psíquica y física

Alcoholismo

Estado de dependencia al alcohol caracterizado por un consumo anormal y compulsivo de éste, el cual frecuentemente persiste a pesar de las adversas consecuencias personales y sociales y sirve al propósito de experimentar ciertos efectos psíquicos o evitar los efectos adversos provocados por su ausencia

Etanol-Efectos sobre el organismo

• SNC: depresor no selectivo, se pierde el autocontrol y se afecta el comportamiento

• Estomago: gastritis, úlceras

• Corazón: miocardiopatias

• Aparato genito-urinario: infertilidad, impotencia sexual en el hombre

Etanol-Efectos sobre el organismo

• Hígado: hepatitis toxica - cirrosis

• Páncreas: pancreatitis aguda

• Efectos teratogénicos: Síndrome alcohólico fetal

Efectos

Síndrome fetal alcohólico

• Incidencia 1: 300- 1: 2000

Microcefalia y retardo mentalRetraso en el crecimientoDisformismo facialTembloresSucción débil y mal coordinadaDéficit de atención-hiperactividad y problemas de aprendizajeCardiopatía congénita

Síndrome fetal alcohólico

El Bebe lo que tú Bebes

Etanol-Efectos sobre el organismo

• Altera el metabolismo de Glúcidos:

Hipoglucemia

Hiperlacticidemia

• Altera el metabolismo de los lípidos:

Aumenta la síntesis de ácidos grasos y Tg

Cetonemia y cetonuria

Deposito de grasas en tejidos

Etanol

ETANOL Y COMPORTAMIENTO

Concentración de

Etanol en sangre (g/l)

Efectos

0,22 Cambio de carácter

Empeoramiento de la

coordinación motora

0,50 Empeoramiento de la atención

Aumento del riesgo de

accidentes automovilísticos

1,00 Ataxia intoxicación

2,20 Pérdida de la conciencia

5,00 Muerte

Etanol- Muestras

CUANTIFICACIÓN DE ETANOL* Muestra: sangre entera, plasma, suero- Jeringa sin cámara de aire- Tubo sin cámara herméticamente cerrado* Anticoagulante:citrato, fluoruro de sodio, (heparina, EDTA)

Métodos para análisis

1- Métodos Químicos: Microdifusión

2- Métodos enzimáticos

3- Método Cromatografía gaseosa (CG-FID)

Método Químico- Microdifución

Muestra a investigar

Solución Cr2O7K2 0,4N (SO4H2 10N)

Sol. Sat. CO3K2

Cr2O7= reducido (Cr3+)

Valoración por retorno

Tiempo2 horas: 50ºC6 horas: 37ºC10 horas: 25ºC

Procesar un blanco en forma paralela

Cr2O7= reducido (Cr3+)

Valoración : + IK 3N Titilación: S2O3Na2 0.1N (+Almidón)

FUNDAMENTO de la TITULACIÓN

Método de Winnick:

ESPECIFICIDAD de los MÉTODOS QUÍMICOS

• NO SON ESPECÍFICOS

• INTERFIEREN: otros alcoholes, aldehídos, cetonas y compuestos reductores

• NO INTERFIEREN: cloroformo, benceno, Tetracloruro de carbono, tricloroetileno

Métodos Enzimáticos

Kirk

Teller

Leric

ESPECIFICIDAD DE MÉTODOS ENZIMÁTICOS

• NO SON ESPECÍFICOS

• Otros alcoholes son sustrato con menor velocidad de reacción

Método Cromatografía gaseosa (CG-FID)

Método Head-space

[EtOH] gas ~ área del pico

Muestra Biológica + ClNa

Equilibrio a 37ºC durante 30 minutos1- Metanol 5- t-butanol (St.I.)2- Etanol 6- Metil etil cetona3- Acetona 7- 2-butanol4- Isopropanol

Método sensible y especifico

Para no marearnos

Métodos Ventajas Desventajas

Microdifusión Bajo costo

Limitado Nº de muestras

Baja sensibilidad

Tiempo

Interferentes

Métodos

Enzimáticos

Alta sensibilidad

Menos interferentes

Alto costo reactivo

Vencimiento del Kit

AxSym

(Inmunológicos)

Alto Nº de muestras

Menos interferentes

Alto costo reactivos

Consignación Equipo

CG-FID Alta sensibilidad

Específico

Curva de calibración

Analista capacitado

Alto Costo Equipo

Tiempo

Toma de muestra para Cuantificación Legal de Etanol en

sangre

• Muestra de elección: Sangre

• Tubo seco Suero

• Nunca usar Alcohol como antiséptico

• Sin cámara de aire o cerrado herméticamente

Hepatitis alcohólica

Aparecen después de una intoxicación aguda importante. Se caracteriza por una lesión inflamatoria con infiltración del hígado por leucocitos, necrosis hepatocelular y balonización de células. La clínica es muy variable, existen formas asintomáticas y formas muy agudas que pueden abocar en una insuficiencia hepática letal. Los signos clínicos simulan a los de las hepatitis virales o tóxicas: anorexia nauseas, malestar general, dolores abdominales, enflaquecimiento. Puede haber fiebre en la mitad de los casos. La hepatoesplenomegalia se puede encontrar en un tercio de los casos. También puede aparecer ictericia. En ocasiones ascitis y síndrome hemorrágico cutaneo mucoso y encefalopatia con una mortalidad del 60-80%. La citolisis se traduce por una elevación de las transaminasas, colostasis ictérica o anictérica manifestada con aumento de la bilirrubina, de las fosfatasas alcalinas, de la gamma-GT, también alargamiento del tiempo de Quick y del factor V, hipoalbuminemia, hiperleucocitosis.

Factores de la coagulación Marcadores de daño hepáticos

Tratamiento

• Sintomático o de soporte

• No hay antídoto

• Hemodiálisis en casos muy graves

• Dar solución glucosada para la hipoglucemia

Dos borrachos en un auto, caen de un precipicio y mueren.

 Camino al otro lado, uno le dice al que manejaba: - ¿no viste el cartel? -

Sí, lo ví clarito, decía: FERNET BRANCA......

 - Nooooooooooo... tarado!!! Decía: FRENE, BARRANCA !!!!!

METANOL

Sinonimia: alcohol metilico, alcohol de la madera

Características fisicoquímicas* Líquido incoloro* Punto de ebullición: 64,7 ºC* Densidad : 0,791 g/ml (20ºC)* Miscible con agua y algunos solventes orgánicos

Usos más comunes* Disolvente Industrial* Solvente para Lacas, Pinturas, Barnices* Componente de Removedores* Limpiadores de vidrio* Adulterante de Bebidas Alcohólicas

CAMBIO DE ETANOL POR METANOL

Intoxicación masiva por metanol:Argentina (Febrero 1993) vinos Soy Cuyano Adulteración de vinos con metanol 43 muertos, cientos de afectado

INTOXICACIÓN POR METANOL* ES GRAVE* RIESGO DE MUERTE* SECUELAS IRREVERSIBLES

Dosis tóxica: 10 a 30 ml (0,4 ml /Kg en niños)Dosis letal: > 60 ml (0,8 ml/Kg en niños)

Absorción-Metabolismo

• Absorción:

Vía inhalatoria

Digestiva: rápida absorción

Cutánea

Metabolismo

Eliminación

• Orina 5-10% inalterado

• Aire espirado

• Metabolitos

Intoxicación

• Periodo de latencia: 12-24 hs• Depresor del SNC• Trastornos digestivos: nauseas , vómitos• Dificultad respiratoria• Acidosis metabólica severa (anion gap )• Alteraciones visuales: daño en la retina y atrofia

del nervio óptico• Secuelas permanentes: neuropatías y

encefalopatias

Manifestaciones Clínicas

La intoxicación por metanol se caracteriza por el desarrollo de tres estadios progresivos.

El primer estadio se presenta con una mínima disminución de la actividad del sistema nervioso central, debilidad, sensación vertiginosa y náuseas. Tras un periodo de latencia que es asintomático

Aparece una segunda fase, que coincide con el desarrollo de una acidosis metabólica que se caracteriza por vómitos, dolor abdominal, desorientación y alteraciones visuales con fotofobia, visión borrosa, midriasis bilateral arreactiva a a la luz y ceguera ocasional.

En la tercera fase, en relación directa con el grado de acidosis metabólica alcanzada, se produce lesión neuronal, con necrosis retiniana y de los ganglios basales del encéfalo. En esta fase hay hipotensión, coma profundo y respiración de Kussmaul. El desarrollo de apnea y convulsiones aparece en la etapa final

Tratamiento

• Tratamiento de soporte o sintomatico

• Antidoto: Etanol oral o endovenoso 4-metil pirazol inhibidor de la ADH

• Monitorizar etanolemia ( 1- 1,5 g/l)

• Hemodiálisis en casos graves

Etanol

Metanol Etilenglicol

Glicolaldehído

Ác.GlicólicoAcetaldehído

CO2 + H2O

Formaldehído

Ác.Fórmico

ADH

Tratamiento intoxicación por Metanol:ETILTERAPIA

Diagnostico de laboratorio

• Metanol en sangre• Metanol en orina• Formiato en orina• Estado acido base: pH < 7,20• Brecha anionica• Anion gap: (Na++K+)-( Cl-+HO3-)

• Brecha osmolar Gap osmolar: osmolaridad medida- osmolaridad calculada

Toxicodinamia del MetanolELIMINACIÓN* Orina: 5-10% inalterado* Aire espirado

INTOXICACIÓN AGUDA:* Depresión del SNC: cefalea, vértigo, confusión* Trastornos digestivos: nauseas , vómitos* Acidosis metabólica severa* Dificultad respiratoria: respiración en boca de pescado* Alteraciones visuales, daño en la retina y atrofia delnervio óptico Secuelas permanentes: ceguera, encefalopatía, parkinsonismo, polineuropatía

Concentración en sangre

0-0,20 g/l Usualmente

0,20-0,50 g/l Requiere tratamiento

> 0,8 g/l Potencialmente fatal

Niveles >0,20 g/l sontóxicos requieretratamiento

Cuantificación de Metanol

Muestra: sangre entera, plasma, suero- Jeringa sin cámara de aire- Tubo sin cámara, herméticamente cerrado* Anticoagulante: Citrato, fluoruro de sodio

Metodologías:* 1- Métodos Químicos: Desproteinización y Microdifusión* 2- Método Cromatografía gaseosa (CG-FID)

1- METODO QUÍMICO: Oxidación con KMnO4

Aislamiento: DesproteinizaciónMÉTODO DE WILLIAMS

Fundamento:El metanol es oxidado por el KMnO4 a formaldehido, elcual forma complejo coloreado con el ácido cromotrópico

Interferentes: EDTA, heparinaDesproteinización con ácido Tricloroacético en solución sulfúrica al 10% p/v

Método de Williams

1- Muestra

2- Desproteinizante TCA en H2SO4 10% v/vTransferir a otro tubo sobrenadante

3- KMnO4 5% p/v

4-Eliminar exceso de KMnO4 (Na2SO3)

5-Ácido cromotrópico 0.5% + H2SO4 cc6-BM hirviente 5 minutos7-Espectrofotómetro a 570 nm8-Comparar con curva de calibración

Sensibilidad: 0,03 g/lInterferencias: Heparina, EDTA, Formalina

Reacción de Williams

* Blanco de Reactivos* Blanco de Muestra: NO KMnO4

* Muestra

Fundamento de la Cuantificación

COMPLEJO COLOREADO con el ÁCIDO CROMOTRÓPICO

METODO QUÍMICO: Oxidación con KMnO4

Aislamiento: Microdifusión

Método de Feldstein-Klendshoj: + reacción con ácido cromotrópico

Rvo Fijador: H2SO4 10%

Rvo Liberador: CO3K2 sol sat

Cuantificación de etanol y metanol cuando están presentes enla misma muestra de sangre

Deben realizarse las pericias por los vinos adulterados Soy Cuyano,donde en forma intencional se le adicionó alcohol de quemar,provocando la intoxicación de varias personas con los siguientessíntomas: visión borrosa, confusión mental y debilidad, muchos deellos presentaron marcada acidosis metabólica y se les efectuó etilterapia

* Microdifusión etanol

metanol+

* Técnica de Williams metanol

Como se hace?

Mediante la técnica de etanol por microdifusión calculamos los Eq. totales (etanol + metanol)

Mediante la técnica de Williams para metanol se obtiene la concentración en g/l

Una vez obtenidos los equivalentes de metanol, por diferencia se sacan la concentración de Etanol (g/l)

N S2O32- = 0,1199

VB = 1,52 ml VM = 0,3 ml Vsangre = 0,5 ml

Mediante la técnica de etanol por microdifusión calculamos los Eq. totales (etanol + metanol)

Eq. Totales = 0,29 eq/lCálculo de los equivalentes

Mediante la técnica de Williams para metanol se

obtiene la concentración en g/l

Cc= 0.74 g/l

deben ser transformados a eq./l de la siguiente manera

Una vez obtenidos los equivalentes de metanol

Eq. Totales = Eq. Etanol + Eq. MetanolEq. Etanol = Eq. Totales Eq. Metanol

Eq. Etanol = 0,29 - 0,09 = 0,20 eq/l etanol

pasar los eq./l de etanol a g/l de la siguiente manera

RESULTADO FINAL: 2,30 g/l de etanol 0,74 g/l de metanol