etude de l’activité antifongique

5/13/2018 Etude de l activit antifongique - slidepdf.com

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ARTICLE ORIGINAL/ORIGINAL ARTICLE

Étude de l’activité antifongiquede divers extraits de cannelle

Antifungal activity of different cinnamon extracts

O. Senhaji a,*, M. Faid b, M. Elyachioui c, M. Dehhaoui b

a Laboratoire de recherche et d’analyses médicales de la gendarmerie royale, avenue Ibn-Sina-Agdal,Rabat 101008087, Rabat Marocb Institut agronomique et vétérinaire Hassan-II, PO Box 6202 Rabat, Marocc Université Ibn-Toufail, faculté des sciences de Kenitra, PO Box 133, Kenitra, Maroc

Reçu le 28 juin 2005 ; accepté le 11 juillet 2005

MOTS CLÉSCannelle ;Activité antifongique ;

Aspergillus ;Candida ;Penicillium

RésuméObjectif. – L’activité antifongique de divers extraits aqueux, hexanique, méthanolique etéthanolique de cannelle est étudiée sur diverses souches de champignons lévuriformes et

filamenteux. Matériel et méthodes. – La cannelle est extraite cinq fois par épuisements. Les extraitsde cannelle sont testés en utilisant trois techniques différentes ; la technique de dilutionen gélose pour la détermination des extraits actifs, une microméthode de dilution enmilieu liquide pour déterminer les concentrations minimales inhibitrices (CMI) des ex-traits sur la croissance des levures et enfin, une macrométhode de dilution en milieuliquide permettant l’évaluation des extraits sur la production de la masse mycélienne dessouches filamenteuses.Résultats. – Les résultats obtenus montrent que tous les extraits ont une activité sur leslevures. Par ailleurs, la détermination des CMI des extraits a mis en évidence des niveauxd’action variables. La CMI n’a pas été influencée par le nombre d’épuisement et l’extrait5 était aussi inhibiteur que l’extrait 1. L’analyse statistique révèle que l’extrait hexani-que est le plus actif avec des CMI comprises entre 2 % (v/v) et 6,2 % (v/v), suivi de l’extraitméthanolique et l’extrait aqueux pour lesquels les CMI se situent entre 2,5 % (v/v) et12,5 % (v/v), et enfin l’extrait éthanolique avec des CMI variant entre 5 % (v/v) et 12,5 %(v/v). Par ailleurs, les essais préliminaires montrent que presque tous les extraits ont uneactivité sur les moisissures. L’évaluation des effets des extraits sur la productionmycélienne montre que l’extrait hexanique est le plus actif. En effet, l’extrait hexanique,utilisé à la concentration de 10 % (v/v) induit une inhibition totale de la croissance desmoisissures testées. L’analyse statistique de la variance révèle que Penicillium cyclopiumest la moisissure la plus sensible suivie d’ Aspergillus parasiticus, A. niger et enfin A. flavus.Conclusion. – Parmi les différents extraits de cannelle étudiés, les extraits hexaniquesprésentent la meilleure activité antifongique sur les levures et moisissures testées.© 2005 Publié par Elsevier SAS.

* Auteur correspondant. Adresses e-mail : [email protected] (O. Senhaji), [email protected] (M. Faid).

Journal de Mycologie Médicale 15 (2005) 220–229

http://france.elsevier.com/direct/mycmed/

1156-5233/$ - see front matter © 2005 Publié par Elsevier SAS.doi: 10.1016/j.mycmed.2005.07.002



KEYWORDSCinnamon;Antifungal activity;

Aspergillus;

Candida;Penicillium

AbstractObjective. – This study was undertaken to determine the antifungal activity of cinnamonbark.

Material and methods. – Extract from cinnamon with water, hexan, methanol andethanol were tested on fungi using the method of microtitration assay. Cinnamon wasextracted with water, hexan, methanol and ethanol five times and the extracts of eachsolvent were tested separately for their antimicrobial activity. The minimal inhibitoryconcentration (MIC) was determined. The extracts were tested on fungal strains usingthree different techniques; the agar dilution test for the determination of the activeextracts, a microtitration method to determine the minimal inhibitory concentration(MIC) of the extracts on growth of yeasts and finally a macrodilution test allowing theevaluation of the extracts on the mycelial mass production by the fungal strains.Results. – The results showed that all the extracts displayed antifungal activity on yeasts.In addition, the determination of the MIC of the active extracts revealed different levelsof action. However, the MIC was not influenced by the number of extractions and the fifthextract was as inhibiting as the first one. Finaly, statistical analysis revealed that thehexanic extract was the most active with the MIC varying from 2% (v/v) to 6.2% (v/v),followed by the methanol and water extracts whose the MIC ranged from 2.5% (v/v) to

12.5% (v/v), and the ethanolic extract whose MIC ranged from 5% (v/v) to 12.5% (v/v).Preliminary tests showed that almost all the extracts displayed antifungal activity onmoulds. Evaluation of the effects of mycelial production showed that the hexanic extracthad the best antifungal effect with a concentration of 10%, and that all 5 extracts wereable to totally inhibit the growth of all the species tested. These observations wereconfirmed by a statistical analysis of variance which revealed that Penicillium cyclopiumwas the most sensitive mould followed by Aspergillus parasiticus, A. niger and finally A.

flavus.Conclusion. – Among the different extracts of cinnamon studied, hexanic extracts wereshown to be the most active on the yeasts and moulds tested.© 2005 Publié par Elsevier SAS.

Introduction

Les candidoses sont des maladies dues au dévelop-pement, chez l’homme ou l’animal, de levures dugenre Candida dont l’espèce la plus connue et laplus redoutable pour l’homme est Candida albi-cans. Au cours de la dernière décennie, un grandintérêt a été réservé à l’étude des candidoses, tantde point de vue biologique, que de point de vuenosologique et thérapeutique. Cette importancedonnée à l’étude des candidoses fait suite à l’appa-rition de la résistance des souches aux médica-

ments les plus communément utilisés [2,11,18,20]et aux complications que ces germes produisentchez des patients à profil clinique particulier [7].Ainsi les candidoses autrefois qualifiées de banales,sont maintenant classées parmi les infections gra-ves pouvant engendrer un taux élevé de mortalitéet de morbidité chez les immunodéprimés et lesdiabétiques. La chimiothérapie antifongique amontré une grande efficacité contre les candidosessuperficielles. Cependant, les atteintes profondesrestent les plus difficiles à traiter compte tenu de lacytotoxicité des antifongiques systémiques. On as-

siste ces dernières années à un regain d’intérêtpour les plantes médicinales et aromatiques et pourleurs extraits, face à la méfiance accrue suscitée

par l’usage des produits chimiques, aussi bien dansle domaine thérapeutique que dans le domainealimentaire. L’activité antimicrobienne de nom-breuses plantes et de la cannelle en particulier,très connue pour son effet antimicrobien [9,19].

L’utilisation des plantes ou de leurs extraitspourrait constituer une excellente alternative auxproblèmes de résistance et de cytotoxicité desantifongiques. Aussi, le but de ce travail est decontribuer à l’étude du pouvoir antifongique desextraits aqueux et organiques de cannelle.

Matériel et méthodes

Préparation des extraits de cannelle

Extraits organiquesDes extractions successives avec des solvants orga-niques (50 ml) de polarité croissante (hexane, étha-nol et méthanol) sont réalisées sur les broyats desécorces de cannelle (10 g). Après trois heures demacération sous agitation, le mélange est filtré surpapier Wattman no 4. Le gâteau restant est récu-

péré et l’opération est renouvelée cinq fois afin deréaliser cinq épuisements pour chaque solvant quenous avons gardés séparément.

221Étude de l’activité antifongique de divers extraits de cannelle



Les extraits obtenus sont stockés à 4 °C et àl’abri de la lumière jusqu’au moment de leur utili-sation.

Extrait aqueuxParallèlement, un extrait aqueux est préparé parmacération d’un broyat de cannelle à chaud dansde l’eau distillée pendant 15 minutes. Nous avonsprocédé de la même manière que pour les extraitsorganiques.

Les extraits obtenus sont stockés à 4 °C et àl’abri de la lumière jusqu’au moment de leur utili-sation.

Microorganismes testés

L’activité antifongique des différents extraits decannelle est évaluée sur les souches suivantes : C.albicans HSZ01, C. albicans IP4872, C. albicans,Candida glabrata, Aspergillus flavus IP1202-1, As-

pergillus. niger ATCC16404, Aspergillus parasiticusNRRL2999 et Penicillium cyclopium IP1231-80.

Ces souches ont été obtenues auprès des labora-toires de bactériologie de l’hôpital des spécialitésotoneuroophtalmologie de Rabat, de microbiologiede l’institut national d’hygiène (Rabat) et de micro-biologie alimentaire et biotechnologie de l’institutagronomique et vétérinaire Hassan-II (Rabat).

Préparation des suspensionsdes microorganismes

Les suspensions de levures sont préparées à partirdu bouillon d’enrichissement « Yeast Extract Su-crose » (YES) (Bio-Rad, Marnes-la-Coquette,France) des différentes souches incubées pendant24 heures à 30 °C. À 9 ml d’eau physiologiquestérile, on ajoute 100 ll du bouillon d’enrichisse-ment. Pour les moisissures, les suspensions sontpréparées à partir d’une culture de 10 jours sur

milieu yeast extract glucose (YEG) (Bio-Rad). Lessuspensions sont préparées dans de l’eau physiolo-gique contenant du tween 80 et ajustée à105 conidies/ml pour les moisissures et106 cellules/ml pour les levures après comptage àla cellule de Malassez.

Tests préliminaires sur l’étudede la composition chimique de l’écorcede cannelle

Les essais phytochimiques ont été menés selon les

techniques classiques décrites par Paris et Moyse[17], Bouquet [3] et Debray et al. [4]. Ces essaisconsistent à mettre en évidence la présence d’un

certain nombre de groupes chimiques réputés pourleurs effets antimicrobiens.

Recherche des substances stéroliques

La recherche est fondée sur la réaction deLieberman-Burchard. Trois grammes de broyat deplante sont mis à macérer dans 15 ml de chloro-forme pendant 20 minutes. Le mélange est ensuitefiltré, puis concentré à 2 ml. Un millilitre d’anhy-dride acétique, puis 1 ml d’acide sulfuriqueconcentré sont successivement additionnés. La pré-sence de composés stéroliques donne une colora-tion rouge-brune virant au brun-violacé.

Recherche des saponosides

Elle est effectuée selon la technique décrite dans lapharmacopée française (IX éd), se fondant sur ladétermination de l’indice de mousse. Dans unefiole conique de 500 ml, on introduit 100 ml d’eaubouillante et 2 g de broyât de plante. L’ébullitionest maintenue pendant 30 minutes. Le mélange estfiltré, refroidi et ajusté à 100 ml.

Dans une série de dix tubes à essai, sont intro-duits successivement 1, 2, 3, 4,...10 ml du décocté,tous les tubes sont complétés à 10 ml avec de l’eaudistillée et agités vigoureusement pendant 15 se-condes. Après un repos de 15 minutes, la hauteurde la mousse est mesurée. Si cette dernière est

égale à 1 cm, la dilution de la substance dans cetube correspond à l’indice de mousse recherché. Unindice supérieur à 100 est considéré comme uneréaction positive témoignant d’une richesse de laplante en saponosides.

Recherche des coumarines

Un infusé à 10 % ou un extrait alcoolique est exa-miné à la lumière UV. Une fluorescence bleutéeindique une réaction positive.

Remarque : d’autres composés présentent égale-

ment une fluorescence nette aux UV. Cette mise enévidence ne correspond donc qu’à une indication,et non une identification.

Recherche des flavonoïdes

Deux millilitres d’infusé sont ajoutés à 2 ml d’alcoolchlorhydrique et 0,2 g de poudre de magnésium.Une coloration orange à rouge apparaît en présencedes flavonoïdes.

Recherche de flavanes

Deux millilitres d’infusé à 10 % sont mélangés dansl’acide chlorhydrique concentré renfermant 2 % de

222 O. Senhaji et al.



vanilline. L’apparition d’une coloration rouge indi-que une réaction positive.

Recherche des anthocyanes

Deux millilitres d’infusé sont ajoutés à 2 ml d’acidechlorhydrique 2 N. L’apparition d’une colorationrose-rouge qui vire au bleu-violacé par additiond’ammoniac indique la présence d’anthocyanes.

Recherche des proanthocyanidols

À 2 ml d’infusé sont additionnés 2 ml d’acide chlo-rhydrique concentré ; le tout est laissé pendantcinq minutes dans un bain-marie bouillant ; l’appa-rition d’une coloration rouge indique une réaction

positive.

Évaluation de l’activité antifongique

Technique de diffusion en géloseL’étude de l’activité antifongique est réalisée parla technique décrite par Grange et Davery [6]. Unmillilitre de chaque extrait de la plante est ajouté à9 ml de gélose de Sabouraud (Becton Dickinson,Royaume-uni) maintenu à 45 °C. Le mélange estensuite versé dans des boîtes de Pétri. Ces derniè-res sont mises à sécher pendant 15 minutes à 37 °C.Cent microlitres de la suspension de microorganis-mes à 105 conidies/ml pour les moisissures et106 cellules/ml pour les levures, sont ensemencéspar inondation en surface de la gélose nutritive. Lesboites de pétri sont incubées à 30 °C pendant48 heures pour les levures et 72 heures pour lesmoisissures. Sont considérées positives les culturesoù il y a une croissance fongique visible à l’œil nu.

Les témoins négatifs ont été préparés par ajoutdes souches testées aux milieux adéquats sans inhi-biteur.

Effet sur la croissance des levures

(microméthode)Pour chaque extrait la CMI est déterminée commeétant la concentration minimale de l’extrait quiinhibe totalement la croissance du champignontesté.

La détermination des CMI des extraits de plantesvis-à-vis des souches de Candida sp. est réaliséeselon la technique de microtitration sur plaquesstériles à fond plat (Bio-Rad), décrite par Eloff etal. [5], en utilisant le tétrazolium (MTT : 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5diphenyltetrazolium bro-mide (Sigma, Saint-Louis, MO) comme indicateur de

viabilité. On dépose 100 ll de RPMI 1640 à 2 % deglucose tamponné à pH 7 dans chaque puits.Quatre-vingt dix microlitres du produit à tester ou

de dilutions successives de demi en demi sont alorsajoutés à chacun des puits.

Chaque puits est ensuite ensemencé par 10 ll dela suspension microbienne à 106 cellules/ml. À la

fin de la période d’incubation à la températureadéquate, le MTT est préparé extemporanément à0,4 mg/ml dans de l’eau physiologique stérile. Dixmicrolitres de la solution MTT sont rajoutés danschaque puits. La plaque est réincubée pendant 10 à30 minutes à 37 °C. Les puits où une croissance a eulieu montrent une couleur bleu-violette.

Les témoins négatifs ont été préparés dans despuits isolés par ajout des souches testées aux mi-lieux adéquats sans inhibiteur.

Effet sur la croissance mycélienne

(macrométhode)L’effet antifongique des différents extraits sur lacroissance des champignons filamenteux a été éva-lué par une macrométhode en milieu liquide, rap-portée par Jong-Gyu et al. [10]. Dans des flaconscontenant le milieu yeast extract sucrose (YES) etle produit à tester à différentes concentrations,nous ensemençons 0,1 ml de la suspension fongiquecontenant 105 conidies/ml. Le volume final de cha-que flacon est de 20 ml. Après 14 jours d’incubationà 28 °C, chaque échantillon est filtré puis auto-clavé, le poids sec du mycélium est ensuite déter-

miné. La CMI relative à chaque extrait est détermi-née comme étant la plus faible concentration del’extrait qui inhibe totalement la croissance fongi-que.

Analyses statistiques

L’objectif de ces analyses est de vérifier si l’effetobservé est : souche dépendant et/ou extrait dé-pendant.

L’analyse appropriée est une analyse de la va-riance à trois critères de classification modèle

croisé mixte (logiciel SAS).Il est à noter que l’influence du facteur « filtra-tion » n’a pas été étudiée car considérée commealéatoire et a de ce fait servi comme facteur« bloc ».

Résultats

Effet des extraits de cannelle sur les levures

Les résultats émanant des tests par la méthode de

dilution en gélose ont montré que presque tous lesextraits sont doués d’une activité inhibitrice sur C.albicans à l’exception de la quatrième filtration de




chaque extrait et de la troisième filtration éthano-lique qui sont sans effet au niveau des souches deCandida testées.

Par ailleurs, la détermination des CMI relativesaux extraits actifs a mis en évidence des niveauxd’activité antifongique variables selon l’extrait uti-lisé. Ainsi, l’extrait aqueux montre des CMI del’ordre de 1/40 = 2,5 % (v/v) à 1/8 = 12,5 % (v/v).Pour les extraits organiques, nous remarquons quel’extrait hexanique est le plus actif ; en effet, lesCMI sont de l’ordre de 1/50 = 2 % (v/v) à1/16 = 6,2 % (v/v), suivi de l’extrait méthanoliquedont les CMI varient de 1/40 = 2,5 % (v/v) à1/8 = 12,5 % (v/v) et enfin, l’extrait éthanoliquedont les CMI vont de 1/8 = 12,5 % (v/v) à1/20 = 50 % (v/v) (Tableau 1).

Les résultats retranscrits dans le Tableau 2 sug-

gèrent que l’interaction est non significative

( p = 0,9413 > 5 %), le facteur « souche » s’est avérénon significatif ( p = 0,5439 a > 5 %). En revanche,le facteur extrait s’est révélé significatif( p = 0,0155 < 5 %). Pour affiner davantage l’ana-lyse dans le but d’identifier l’extrait le plus actif,une comparaison particulière des moyennes par laméthode de Student Newman et Keuls a été réali-sée. Cette comparaison a révélé que l’extrait hexa-nique est le plus actif (Fig. 1).

Effet des extraits de cannellesur la croissance des moisissures

Les différents extraits ont été également testés surcertaines espèces de moisissures pathogènes ouopportunistes. L’essai d’inhibition sur milieu solidea montré que presque tous les extraits ont uneactivité antifongique, hormis quelques filtrations,comme la cinquième filtration de l’extrait métha-nolique et la quatrième filtration de l’extraitaqueux.

Tableau 1 Effet inhibiteur des extraits de cannelle sur la croissance de Candida

Table 1 Inhibitory effect of different extracts of cinnamon on Candida growth.

Extrait C. albicans C. albicans IP4872 C. albicans HSZ01 C. glabrata

Extrait hexanique F1 1/40 = 2,5 % 1/40 = 2,5 % 1/40 = 2,5 % 1/50 = 2 %

F2 1/32 = 3,1 % 1/32 = 3.1 % 1/32 = 3,1 % 1/40 = 2,5 %F3 1/16 = 6,2 % 1/16 = 6,2 % 1/16 = 6,2 % 1/30 = 3,3 %F4 R R R 1/16 = 6,2 %F5 1/16 = 6,2 % 1/16 = 6,2 % 1/16 = 6,2 % 1/30 = 3,3 %

Extrait méthanolique F1 1/32 = 3,1 % 1/32 = 3,1 % 1/32 = 3,1 % 1/40 = 2,5 %F2 1/8 = 12,5 % 1/8 = 12,5 % 1/8 = 12,5 % 1/40 = 2,5 %F3 1/8=12,5 % 1/8 = 12,5 % 1/32 = 3,1 % 1/16 = 6,2 %F4 R R R RF5 1/16 = 6,2 % 1/16 = 6,2 % 1/16 = 6,2 % 1/8 = 12,5 %

Extrait éthanolique F1 1/10 = 10 % 1/10 = 10 % 1/10 = 10 % 1/20 = 5 %F2 1/8 = 12,5 % 1/8 = 12,5 % 1/8 = 12,5 % 1/16 = 6,2 %F3 R R R RF4 R R R R

F5 1/10 = 10 % 1/10 = 10 % 1/10 = 10 % 1/16 = 6,2 %Extrait aqueux F1 1/16 = 6,2 % 1/16 = 6,2 % 1/16 = 6,2 % 1/40 = 2,5 %F2 1/8 = 12,5 % 1/8 = 12,5 % 1/8 = 12,5 % 1/20 = 5 %F3 1/8 = 12,5 % 1/8 = 12,5 % 1/8 = 12,5 % 1/20 = 5 %F4 R R R RF5 1/16 = 6,2 % R 1/16 = 6,2 % 1/16 = 6,2 %

Les résultats correspondent aux CMI exprimées en v/v ; R : souche résistante aux plus fortes concentrations testées.

Tableau 2 Analyses statistiques de l’effet antilevures desextraits de cannelle ( p > F). Analyse de la varianceTable 2 Statistical analysis of effects of different extractsof cinnamon on the growth of yeasts. Variance analysis.

Source devariation

Carrésmoyens

Degré deliberté

p > Fa

Souches delevures (F1)

402,80 3 0,5439

Extraits (F2) 2080,08 3 0,0155Interaction :F1 × F2

209,31 9 0,9413

a

Le test est significatif si ( p > F) < 5 %. The test is signifi-cant if (P > F) < 5%. Figure 1 Évolution de la moyenne des sommes des CMI en

fonction de l’extrait.Figure 1 Evolution of the MIC sum as a function of the extract.




L’évaluation des effets des extraits sur la pro-duction de la masse mycélienne des moisissures(Tableaux 3–6) montre que l’extrait hexanique pos-sède le meilleur effet antifongique. À la concentra-tion de 10 % (v/v) et pour toutes les filtrations, ilinhibe totalement la croissance de toutes les espè-ces de moisissures testées. À la concentration de1 % et pour la première filtration, il réduit lacroissance mycélienne d’ A. niger , d’ A. flavus, d’ A.

parasiticus et de Penicillium cyclopium respective-ment de 96, 30, 25 et 17 %. En revanche, à laconcentration de 4 % et pour la cinquième filtra-

tion, le pourcentage d’inhibition de la croissancemycélienne est compris entre 54 % et 71 %.

À la concentration de 2 % et pour la premièrefiltration, l’extrait méthanolique diminue la massemycélienne d’ A. parasiticus, d’ A. flavus, de P.cyclopium et d’ A. niger respectivement de 100, 58,56 et 35 %.

À la concentration de 1 % et pour la premièrefiltration, un effet modéré a été obtenu par l’utili-sation de l’extrait aqueux. Les pourcentages d’inhi-bition de la croissance mycélienne sont comprisentre 11 et 29 %.

À la concentration de 4 % pour la première filtra-tion les différents extraits montrent une inhibitionde 100 % de toutes les moisissures testées.

Ces observations sont analysées par une étude devariance (Tableau 7). Il y a un effet souche( p = 0,0000 < 5 %). Le facteur extrait est significatif( p = 0,0014 < 5 %). La comparaison des moyennespar le test de Newman-Keuls fait ressortir quatregroupes différents, c’est-à-dire que la sensibilité desquatre moisissures vis-à-vis des différents extraitsn’est pas la même. Ainsi, le champignon le plus sensi-ble est P. cyclopium suivi d’ A. parasiticus, A. niger et enfin, A. flavus. Ces résultats concordent avecceux rapportés par Beraoud (1990).

Concernant l’interaction moisissure extrait, on

remarque que vis-à-vis de P. cyclopium, l’extraithexanique est le plus actif, suivi des extraits mé-thanolique, aqueux et éthanolique.

Pour A. parasiticus, l’extrait le plus actif estl’extrait aqueux suivi des extraits hexanique, étha-nolique et méthanolique.

Pour A. niger l’extrait hexanique est le plus actifpuis les extraits éthanolique, aqueux et méthanolique

Enfin, pour A. flavus, on note que l’extrait hexa-nique est le plus efficace suivi des extraits métha-nolique, éthanolique et aqueux. Ainsi l’extrait leplus actif et la moisissure la plus sensible sont

respectivement l’extrait hexanique et Penicilliumcyclopium. Ces observations sont confirmées parles Figs. 2 et 3.

Tableau 3 Effet des extraits de cannelle sur la croissance d’ Aspergillus niger

Table 3 Effect of different extracts of cinnamon on the growth of Aspergillus niger .

Aspergillus niger ATCC16404Poids du mycélium

Concentration 10 % 4 % 2 % 1 %mg/20 ml Pourcentage

inhibition(%)

mg/20 ml Pourcentageinhibition(%)



Extraithexanique

F1 0 100 0 100 198 36 299 96F2 0 100 89 71 245 21 315 0F3 0 100 95 69 304 2 325 0F4 0 100 108 65 322 0 335 0F5 0 100 124 60 335 0 340 0

Extraitméthanolique

F1 0 100 0 100 201 35 325 0F2 0 100 0 100 225 27 352 0F3 0 100 125 60 341 0 366 0F4 0 100 201 35 352 0 365 0F5 314 0 320 0 360 0 366 0

Extraitéthanolique

F1 0 100 0 100 102 67 286 8F2 0 100 0 100 203 34 298 4F3 0 100 123 60 315 0 342 0F4 0 100 245 21 356 0 389 0F5 0 100 302 3 389 0 401 0

Extrait aqueux F1 0 100 0 100 132 57 214 31F2 0 100 112 64 233 25 288 7F3 0 100 135 56 289 7 322 0F4 189 39 265 15 321 0 402 0F5 0 100 255 18 356 0 425 0

Contrôle 310




Tableau 4 Effet des extraits de cannelle sur la croissance d’Aspergillus flavusTable 4 Effect of extracts of cinnamon on the growth of Aspergillus flavus.

Aspergillus flavus IP 1202-1

Poids du mycélium


inhibition(%)




Extraithexanique

F1 0 100 0 100 102 76 305 30F2 0 100 0 100 154 64 402 7F3 0 100 76 82 204 53 425 2F4 0 100 132 69 356 18 455 0F5 0 100 124 71 366 16 460 0


F1 0 100 0 100 181 58 294 32F2 0 100 0 100 267 38 300 31F3 0 100 140 68 276 36 402 7F4 155 64 298 31 325 25 425 2F5 205 53 300 31 402 7 465 0

Extraitéthanolique

F1 0 100 0 100 292 33 325 25F2 0 100 0 100 302 30 322 26F3 0 100 269 38 386 11 386 11F4 0 100 298 31 425 2 465 0F5 0 100 325 25 475 0 478 0


Contrôle 435

Tableau 5 Effet des extraits de cannelle sur la croissance d’ Aspergillus parasiticus

Table 5 Effects of different extracts of cinnamon on the growth of Aspergillus parasiticus.

Aspergillus parasiticus NRRL 2999Poids du mycélium


inhibition(%)




Extraithexanique

F1 0 100 0 100 0 100 190 25F2 0 100 0 100 190 50 286 25F3 0 100 0 100 260 32 376 1F4 0 100 114 70 325 14 425 0F5 0 100 148 61 386 0 478 0


F1 0 100 0 100 0 100 214 44F2 0 100 0 100 0 100 298 21F3 0 100 196 48 258 32 325 14F4 245 35 300 21 326 14 478 0F5 265 30 325 14 386 2 489 0

Extraitéthanolique

F1 0 100 0 100 0 100 264 30F2 0 100 0 100 180 52 286 2F3 0 100 0 100 148 61 376 1F4 0 100 264 30 296 22 389 0F5 0 100 284 25 324 15 425 0

Extrait aqueux F1 0 100 0 100 0 100 232 13F2 0 100 0 100 0 100 325 14F3 0 100 0 100 199 48 399 0F4 189 50 235 38 287 24 405 0

F5 0 100 0 100 223 41 415 0Contrôle 380




Discussion

La gravité des candidoses, couplée à l’insuffisanceen médicaments efficaces, nous a conduits à nousintéresser à l’inépuisable source de produits natu-rels à vertu thérapeutique : les plantes médicina-les. À côté des médicaments synthétiques prescritsdans le traitement des candidoses, de nombreuxproduits naturels ont été testés dans le but de

trouver un antifongique efficace, sans effet néfaste

et moins cher [13–16,21,22]. C’est dans cette opti-que que des extraits de cannelle ont été testéscontre la croissance de levures du genre Candida.

Ainsi les résultats émanant des tests d’inhibitiondes Candida sp. montrent que tous les extraitstestés ont une activité antifongique. Concernantl’extrait aqueux nous remarquons qu’il a une acti-vité inhibitrice très prononcée. En effet, Beraoud(1990) a effectué une analyse chimique de l’extraitaqueux de cannelle et a mis en évidence la pré-sence de cinnamaldhyde et d’eugénol qui sont les

Tableau 6 Effet des extraits de la cannelle sur la croissance de Penicillium cyclopium

Table 6 Effect of different extracts of cinnamon on the growth of Penicillium cyclopium.

Penicillium cyclopium IP 1231-80poids du mycélium


inhibition(%)




Extraithexanique

F1 0 100 0 100 87 61 187 17F2 0 100 0 100 86 62 209 7F3 0 100 0 100 91 59 256 0F4 0 100 98 56 104 54 276 0F5 0 100 103 54 165 27 287 0


F1 0 100 0 100 98 56 104 54F2 0 100 0 100 103 54 123 45F3 89 61 112 50 124 45 226 0F4 102 55 125 44 153 32 236 0F5 135 40 146 35 163 27 276 0

Extraitéthanolique

F1 0 100 0 100 0 100 190 15F2 0 100 0 100 167 26 190 15F3 125 44 146 35 205 10 264 0F4 135 40 163 27 234 0 286 0F5 0 100 147 35 265 0 298 0


Contrôle 225

Tableau 7 Résultats des analyses statistiques de l’effet anti-moisissures des extraits de cannelle ( p > F) analyse de lavarianceTable 7 Statistical analysis of effects of different extractsof cinnamon on the growth of fungal. Variance analysis.

Source devariation

Carrésmoyens

Degré deliberté

p > Fa

Souches demoisissu-res(F1)

151300,17 3 0,0000

Extraits (F2) 21293,67 3 0,0014Concentration(F3)

1375332,13 3 0,0000

Interaction :F1 × F2

8143,17 9 0,0324

Interaction :F1 × F3

26688,92 9 0,0000

The test is significant if (P > F) < 5%.a Le test est significatif si ( p > F) < 5 %

Figure 2 Évolution de la somme du poids du mycélium en

fonction de l’extrait.Figure 2 Evolution of the weight sum of mycelia as function ofthe extract.




composés majeurs, ce qui laisse supposer que l’ef-fet antifongique de cannelle est dû en partie, au

passage de ces deux composés dans l’extrait aucours de l’infusion.Le même auteur a mis en évidence la présence

des tannins dans l’extrait aqueux, et a démontréqu’ils ont un effet antifongique. Pour les extraitsorganiques l’extrait hexanique est le plus actif(Fig. 1). Cette efficacité serait liée au pouvoir dusolvant à solubiliser plusieurs composés contenusdans le broyat de la plante [12]. Concernant lacinquième filtration de tous les extraits qui estaussi inhibitrice que la première filtration, le phé-nomène peut être expliqué par le fait qu’il y a des

composés qui sont actifs, mais qui sont solubilisésaprès un certain temps de contact avec le solvant.Ainsi, l’activité antifongique est non seulementfonction de nature chimique de l’extrait [25], maisaussi de la méthode d’étude utilisée [12,23].

Concernant l’effet des extraits de cannelle sur lacroissance des moisissures, nous remarquons que lacannelle est douée d’une forte activité antifongi-que [12]. Ainsi, à une concentration de 1 % lesdifférents extraits sont toujours actifs, et à uneconcentration de 10 % il y a une inhibition totale detous les champignons testés avec toutes les filtra-

tions.Nos résultats concordent avec ceux rapportéspar Bachmann [1] qui a démontré que la cannelleest efficace sur trois genres de moisissures : Alter-

naria, Penicillium et Aspergillus. Hitokoto et al. [8]ont étudié l’effet de 13 plantes aromatiques et septépices sur la croissance des espèces suivantes : A.

parasiticus, A. flavus et A. versicolor . Sur les 20échantillons testés, l’écorce de cannelle a inhibétotalement la croissance fongique.

Hitokoto [8] et Beraoud (1990) ont étudié l’effetantifongique des extraits aqueux des épices ; ils ont

rapporté que l’extrait aqueux de cannelle à 20 % apu inhiber totalement la croissance et la toxinoge-nèse d’ A. pararsiticus, A. flavus et A. versicolor.

Enfin Beraoud (1990) a trouvé aussi que sur huitépices étudiées, la cannelle est celle qui présentele pouvoir antifongique le plus puissant.

En comparant l’effet de la cannelle sur la crois-sance des moisissures testées, nous avons observéque A. niger est plus résistant que A. flavus, alorsque A. parasiticus et P. cyclopium sont plus sensi-bles.

Ces activités antifongiques des différents ex-traits peuvent être dues aux composés biologique-ment actifs qu’ils contiennent. Le criblage phyto-

chimique des écorces de cannelle (Tableau 8) amontré l’absence de coumarines. En revanche, cesécorces contiennent, entre autres, des substancesstéroliques, flavonoïdes, des flavanes, saponines,anthocyanes et leucoanthocyanes ; ces substancesont été identifiées comme produits antimycotoxi-ques et/ou antifongiques. En effet, les saponines sesont montrées capables d’inhiber la croissance fon-gique [24].

D’une manière générale, aussi bien pour les levu-res que pour les moisissures, l’extrait le plus actifest l’extrait hexanique. Cette efficacité serait liée

au pouvoir du solvant à solubiliser un ou plusieurscomposés chimiques contenus dans le broyat de laplante.

Conclusion

Les résultats obtenus sont encourageants et confir-ment l’intérêt de l’utilisation des extraits de can-nelle en médecine locale comme agent antifongi-que et en biotechnologie comme agentconservateur. Il est donc intéressant de continuer

cette étude dans le but de déterminer le moded’action des extraits de cannelle sur les levures etles moisissures.

Figure 3 Évolution du poids moyen du mycélium en fonction dela moisissure.Figure 3 Evolution of the weight sum of mycelia as function ofthe moulds.

Tableau 8 Détermination de la composition chimique desécorces de cannelleTable 8 Chemical composition of cinnamon barks.

Substances chimiques Broyats des écorces de cannelle

Substances stéroliques +Flavonoïdes +Flavanes +Coumarines (UV) –Anthocyanes +Leucoanthocyanes +Dérivées quinoniques –Saponines +Polyphénols +Tanins +

+ : présence, – : absence.+: presence, –: absence.




Références

[1] Bachman FM. The inhibiting action of certain spices on thegrowth of microorganisms. J Indust Eng Chen 1961;8:623–1620.

[2] Balkis MM, Leidish SD, Mukheryei PK, Ghannoun MA. Mecha-nism of fungal resistance. Drugs 2002;62:1025–140.

[3] Bouquet M. Travaux et documents de l’Orstom. 1971(Paris, no 13).

[4] Debray M, Jacquemin H, Razafindrambo R. Travaux etdocuments de l’Orstom. 1971 (Paris, no 8).

[5] Eloff JNA. Sensitive and quick microplate method to deter-mine the minimal inhibitory concentration of plantextracts for bacteria. Planta Med 1998;64:711–3.

[6] Grange JM, Devey RW. J R Soc Hyg 1990;83:159–60.[7] Hirsch HA, Gynakol R. Vulvovaginal candidosis: definition

of the disease and its special problems and treatment inpregnancy. J Clin Microbio 1985;25:5–11.

[8] Hitokoto H, Morozumz S, Wauke T, Sakai S, Ueno I. Inhibi-tory effects of condiments and herbal drugs on the growthand toxin production of toxigenic fungi. Micopathologia1978;66:167–1161.

[9] Hsieh PC. Antimicrobial effect of cinnamon extract. Tai-wanese J Agric Chem Food Sci 2000;38:184–93.

[10] Jong-Gyu K, Yong-Wook L, Pan-Gyi K, Woo-Sup R, Hide-haru S. Reduction of aflatoxins by Korean paste and itseffect on cytotoxicity and reproduction of toxicity -part I:Inhibition of growth and aflatoxinsproduction of Aspergil-lus parasiticus by Korean soybean paste (Doen-jang) andidentification of the active component. J food Prot 2000;63:1295–8.

[11] JuJ Y, Polhamus C, Marr KA, Holland SM, Bennett JE.Efficacies of Fluconozole, Caspofungin and Amphotericin Bin Candida glabrata infected p 47-phox-1-knochout mice.Antimicro Agents Chemother 2002;46:1240–5.

[12] Kalemba D, kunicka A. Antibacterial and antifungal prop-erties of essential oils. Curr Med Chem 2003;10:829–1813.

[13] Kundu B, Srinivasan T, Kesarwani A, Batras Shukle PK.Identification of novel antifungal monopeptides throughthe screening of Candida spp isolated from the oral cavi-ties. Bioorg Med Chem Lett 2002;12:1473–6.

[14] Lene J, Ammeenah GF, Anne A. Antibacterial and antifun-gal activity of medicinal plants of Mauritius. Pham Biol1998;36:153–61.

[15] Liu Y, Ryan ME, Lee HM, Larzor G, Leung MK, Golub LM. Achemically modified tetracycline (CMT-3) is new antifungal

agent. Antimicrob Agents Chemother 2002;46:1447–54.[16] Namik F, Mir-Babayev, Roger DW. Plants of the Republic of

Azerbaijan with potential medicinal applications. Part II.Pharm Biol 1997;35:190–3.

[17] Paris R, Moyse H. Précis de matière médicinale. Paris:Masson; 1969.

[18] Ramage G, Bachmann S, Patterson TF, Wickes RL, Lopez-Ribot JL. Investigation of multidrug afflux pumps in rela-tion to fluconazol resistance in C albicans biofilms. JAntimicrob Chemother 2002;49:973–80.

[19] Renée J, Grayer, Bakhy K, Achad M, Tantaoui-Elaraki A.Almond paste: physicochemical and microbiological char-acterization and preservation with sorbic acid and cinna-mon. J Food Prot 1995;58:550–1547.

[20] Rodero L, Cuenca-Estrella M, Cordora S, Rodriguez-Tudela JL. Translent fungemia caused by an amphotericinB resistant isolate of C Haemulonii. Caries Res 2002;36:93–100.

[21] Singh VK, Anwar Ali Z, Siddiqui MK. Medicinal plants usedby forest ethnics of Gorakhpur district, India. InternationalJournal of Pharmacognosy 1997;35:194–206.

[22] Soroush S, Gholamera A, Ronald M, Mohsen D. Phytophar-maceuticals. Part I. Antifungal activity of selected Iranianand Canadian plants. Pharm Biol 1998;6:8–80.

[23] Suhr KI, Nielsen PV. Antifungal activity of essential oilsevaluated by two different application techniques againstrye bread spoilage fungi. J Appl Microbiol 2003;94(suppl4):74–665.

[24] Turner RB, Lindsey DL, Bishop RD. Isolation and identifica-tion of 5,7 dimethoxyisoflavone. An inhibitor of Aspergillus

flavus from peanuts. Mycopathologie 1975;57:39–40.

[25] Viollon C, Chaumont JP. Antifungal properties of essentialoils and their main components upon Cryptococcus neofor-mans. Mycopathologia 1994;128(suppl 3):3–151.


etude de l’activité antifongique

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