evaluación de la inmunidad inmunodeficiencias hipersensibilidad autoinmunidad
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Evaluación de la Inmunidad
INMUNODEFICIENCIASHIPERSENSIBILIDAD
AUTOINMUNIDAD
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EvaluaciónInmunidad humoral
• Medición de la concentración Ig en suero
• Linfocitos B CD19 y CD20
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Inmunidad celular(CMI)
• Pruebas cutanéas de hipersensibilidad Paperas, PPD, candida, toxoide tetánico, toxoide
diftérico
• Estimulación in vitro de linfocitos PHA, PWM, Con A, antígenos, superantígenos, células alogénicas, anticuerpos anti CD3, CD2, CD43, (CD11a,CD18). Linfocitos activados con PMA, ionomicina, CD40L
• Fagocitos Ingestión de partículas Prueba de reducción del NBT
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OTROS
Sangre: leucocitos totales
Médula ósea: biopsia
Biopsia: intestinal, piel, timo
Complemento
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TÉCNICAS (FUNDAMENTOS)
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EIAAplicaciones Ig, CD, Citocinas
Ag - Ab + E S P desarrollo color
2oAb S S PP
2oAb
antiCD4 - CD4 + antiCD4 -E S P desarrollo color
SS PP
2oAb
anti1L-12 - IL12 + antiIL-12 -E S P desarrollo color
SS PP
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Hemólisis Localizada en Gel
• La Técnica de Jerne demuestra la funcionalidad de las células plasmáticas antígeno específicas
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SEPARACIÓN DE CÉLULAS
MONONUCLEARES
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SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES POR GRADIENTE
5 mL + Heparina
Diluir 1:2 con BSS
2.5 mL sangre + 3 mL Ficoll-Hypaque
1500 rpm x 45 min
Estratificar
Plasma
Células mononucleares
Ficoll-Hypaque
GR y Granulocitos
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EVALUACIÓN DE LA INMUNIDAD
• El sistema inmunológico se evalúa mediante pruebas que permiten su identificación, cuantificación y caracterización funcional
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INMUNIDAD CELULAR
• Pruebas cutáneas• Cuantificación de linfocitos T y B• Respuesta proliferativa a mitógenos
(fitohemaglutinina, concanavalina A)• Pruebas para macrófagos y neutrófilos
(Fagocitosis : movilidad, quimiotaxis, reconocimiento, ingestión, digestión, muerte intracelular)
• Expresión y producción de citocinas
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3 ml BSS
1500 rpm x 10 min
resuspender con 3 mL BSS
resuspender en 0.5 mL BSS
Se cuenta y se ajusta 4 x 106
cel/ml
desechar sobrenadante
1500 rpm x 10 min
0.25 mL de células 4x106 + 0.25 mL GRC al 1%
500 rpm x 3 min
37 C x 3 min 4 C, 4 horas OBSERVAR LA FORMACIÓN DE ROSETAS
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INMUNOFLUORESCENCIACITOMETRÍA DE FLUJO
FACS APLICACIONES: CD, MHC,
CITOCINAS INTRACELULARES
Permite identificar células individuales por sus Ag superficiales
Marcaje flujo laser detección CPU histograma
continuo desviación luz #
emisión eventos
fluorescencia
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SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES POR GRADIENTE
DE DENSIDAD Y ENSAYOS DE PROLIFERACIÓN
+ proliferación
C mononucleares microplaca PHA
3HTdr
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FAGOCITOS
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Fagocitosis
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PRUEBA DE REDUCCIÓN DEL NBT
Prueba funcional. Capacidad para producir anión superóxido
NBT compuesto amarillo Formazan
oxidado reducido
hidrosoluble
PMA
LPS
Partículas O2 + NBT Formazan
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1.Where are macrophages found in the human body? 2.What cells carry out phagocytosis? 3.What is a phagosome? 4.What is in a lysosome? 5.How is a phagolysosome formed? 6.What happens during an “oxygen burst”? 7.What are the end products of phagocytosis? 8.What happens to the products of phagocytosis?