Lucrri practice Fiziologie I

EXPLORAREA SERIEI ERITROCITAREEritrocitele (hematiile) reprezint, alturi de leucocite i trombocite, elementele figurate ale sngelui. Procesul de formare al eritrocitelor se numete eritropoiez, realizat prin multiplicarea i maturarea precursorilor eritrocitari, expulzia nucleului si eritrodiabaza (trecerea eritrocitelor din mduva hematogen n circulaie). Pentru explorarea corect a seriei eritrocitare este necesar determinarea urmtorilor parametri: - numrul de eritrocite; - hematocritul; - hemoglobina; - indicii eritrocitari.

1. NUMRTOAREA ERITROCITELORPrincipiu Metoda manual - se numr direct la microscop (n camera de numrat) eritrocitele dintr-un volum cunoscut de snge, diluat ntr-o proporie cunoscut (diluarea sngelui se face pentru a putea numra eritrocitele care sunt foarte numeroase i pentru ca sngele s nu coaguleze). Metoda automat - principiul impedanei electrice - o suspensie de eritrocite ntr-un volum cunoscut de reactiv trece printr-un orificiu (fant) prevzut cu electrozi ntre care se aplic un curent constant. Trecerea prin orificiu a fiecrui eritrocit, nonconductor, va determina o scdere brusc de tensiune denumit puls. Pulsurile sunt numrate electronic i exprimate ca numr de eritrocite. Valori normale RBC (red blood cells) = 4 - 5,5 mil/mm3 sau 4 - 5,5 1012/l (valoare medie) brbai = 4,9 0,7 mil/mm3 femei = 4,3 0,6 mil/mm3 Variaii fiziologice poliglobulia definete valorile crescute ale numrului de eritrocite i poate fi ntlnit la persoanele care triesc la mare altitudine. Variaii patologice poliglobulia apare n insuficiena respiratorie, bolile cardio-pulmonare, etc. anemia definete valorile sczute ale numrului de eritrocite, apare n hemoragii, hemoliz, insuficiena mduvei hematogene din intoxicaii, iradiere, infecii, etc.

2. DETERMINAREA HEMATOCRITULUIDefiniie. Hematocritul (Ht) reprezint raportul dintre volumul total al eritrocitelor, dup centrifugare, fa de volumul sangvin total, exprimat n % sau litru/litru. Ht reprezint cea mai precis metod de evaluare a strii de anemie sau poliglobulie. Principiu Metoda automat - utilizeaz aparate electronice. Ht este calculat prin determinarea numrului de eritrocite i a VEM-ului (volum eritrocitar mediu).

1

Lucrri practice Fiziologie I Metoda manual - se realizeaz prin centrifugare, cnd se separ eritrocitele de plasm i se evalueaz raportul volumetric eritrocite/snge.

Materiale necesare centrifug 2 tuburi de hematocrit snge venos recoltat pe anticoagulant (heparin) Tehnica. Se umplu cu snge venos 2 tuburi de hematocrit i se centrifugheaz 30 minute la 3000 de turaii/min. Dac centrifugarea este complet eritrocitele se vor separa de plasm. Leucocitele i trombocitele formeaz un strat ntre acestea i nu reprezint n mod normal mai mult de 1% din volumul total de celule sedimentate. Calcul. Se citete n mm nlimea coloanei de eritrocite (h) i se exprim procentual fa de nlimea total a coloanei de snge (H):

H

h

Ht (%) =

h 100 H

Valori normale (normocitemie): valoare medie: 39-50 % brbai: 45 7 % (0,38 - 0,52 l/l); raport eritro-plasmatic = 45-55 femei : 42 5 % (0,37 - 0,47 l/l); raport eritro-plasmatic = 40-60 Variaii patologice policitemia definete valori crescute ale Ht (cauze: poliglobulie, deshidratare, etc.) oligocitemia definete valori sczute ale Ht (cauze: anemii, hiperhidratare, etc.) Dup o hemoragie acut, nainte de refacerea plasmatic exist normocitemie. Pentru o apreciere corect, rezultatele obinute la determinarea Ht se coreleaz cu cele ale volemiei (Tabelul I): Tabelul I. Corelaia hematocritului cu volemia Volemie Elemente figurate Normovolemie normocitemic oligocitemic policitemic Hipovolemie Hipervolemie normocitemic oligocitemic policitemic normocitemic oligocitemic policitemic Exemple starea fiziologic Anemii fiziologic (de altitudine) patologic (boli cardio-pulmonare) hemoragie acut boli cronice consumptive deshidratare extracelular fiziologic(gravide n trimestrul III) patologic ( HTA) hiperhidratare extracelular HTA cu insuficien respiratorie

2

Lucrri practice Fiziologie I

3. DOZAREA HEMOGLOBINEI SANGUINE. METODA DRABKINDefiniie. Hemoglobina (Hb) reprezint elementul principal pentru realizarea funciei respiratorii a eritrocitului. Eritrocitul conine: 60% ap, 33-35% Hb, 5-7% alte substane (enzime, pompe ionice de Na+/K+, de Ca+2, schimbtori ionici de Cl-/HCO3-). Exist 3 tipuri de Hb: Hb embrionar, Hb fetal, Hb de tip adult . Principiu. Hb n prezena unei soluii de cianur de potasiu i fericianur de potasiu se transform n cianmethemoglobin de culoare galben-rocat. Intensitatea culorii este proporional cu concentraia de Hb i se determin spectrofotometric. Materiale necesare reactiv Drabkin (conine cianur i fericianur de potasiu); snge proaspt sau recoltat pe anticoagulant (EDTA-Na2); spectrofotometru. Tehnica n dou eprubete se introduc: Reactivi Reactiv Drabkin (ml) Snge (l) Eprubeta Prob 5 20 Eprubeta Martor 5 -

se omogenizeaz coninutul eprubetei prob se las n repaus la temperatura camerei 20 minute se citete extincia probei fa de martor la 540 nm concentraia de Hb, corespunztoare extinciei, se determin din tabele

Valori normale valoare medie: 13-17 g/dl brbai: 15 2 g/dl femei: 14 2 g/dl VARIAII PATOLOGICE poliglobulia definete valorile crescute ale Hb. anemie definete valorile sczute ale Hb.

4. INDICII ERITROCITARIValorile Hb, Ht i ale numrului de eritrocite stau la baza calculrii indicilor eritrocitari, utili pentru studiul eritrocitelor n funcie de mrime i coninutul n Hb, ct i pentru diagnosticul morfologic al anemiei (Tabelul.II). 4.1. VOLUMUL ERITROCITAR MEDIU (VEM, MCV, mean corpuscular volume) Definiie: VEM indic volumul mediu al eritrocitului. Formula de calcul: Ht(%) 10 VEM (m3) = E (mil / mm 3 ) Valori normale: 80 - 100 m3 sau fl (femtolitri) = normocite.3

Lucrri practice Fiziologie I

Variaii patologice: valori mai mici dect 80 m3 (fl) caracterizeaz microcitele (n cazul anemiei prin deficit de Fe, microsferocitoz) valori mai mari de 100 m3 (fl) caracterizeaz macrocitele (n cazul anemiei prin deficitt de acid folic i vitamina B12, anemia Biermer, anemia megaloblastic) 4.2. CONCENTRAIA MEDIE DE Hb ERITROCITAR (CHEM, MCHC - MEAN CORPUSCULAR HEMOGLOBIN CONCENTRATION) Definiie: CHEM reprezint concentraia medie de Hb/100 ml eritrocite. Formula de calcul:CHEM = Hb( g / dl ) 100 Ht (%)

Valori normale: 32 - 36 g Hb/100 ml eritrocite (normocromie). Variaii patologice: valori < 31 g Hb/100ml eritrocite definesc hipocromia. 4.3. HEMOGLOBINA ERITROCITAR MEDIE (HEM, MCH - MEAN CORPUSCULAR HEMOGLOBIN) Definiie: HEM reprezint cantitatea de Hb coninut de un eritrocit. Formula de calcul:HEM = Hb( g / dl ) 10 E (mil / mm 3 )

Valori normale: 20 - 34 pg. Variaii patologice: valori mai mici dect 20pg definesc hipocromia. 4.4. INDICELE DE DISTRIBUIE ERITROCITAR (RDW RED CELL DISTRIBUTION WIDTH) Definiie: RDW reprezint deviaia standard a mediei volumelor eritrocitare raportate la VEM i se determin cu ajutorul histogramelor curbe de distribuie % a mrimii celulelor. Valori normale: 11,5 - 14,5 %. Variaii patologice: variabilitatea crescut a volumului eritocitelor definete anizocitoza (RDW crescut). Astfel, cu ct RDW va fi mai mare, cu att anizocitoza este mai marcat.

Celule normale

Reticulocitoz crescut

4

Lucrri practice Fiziologie I

5. DIAGNOSTICUL DIFERENIAL AL ANEMIILOR

Tabelul II. Diagnosticul diferenial al anemiilor.INDICI VEM CHEM HEM Cauze Valori normale 80-100 m3 32-36 g% 20-34 pg Anemie hipocrom microcitar Anemia feripriv (deficit de Fe2+ ) Anemie normocrom normocitar N N N Anemia aplastic (insuficiena mduvei osoase hematogene) Anemie normocrom macrocitar N N Anemia megaloblastic (deficit de B12 i acid folic)

6. VITEZA DE SEDIMENTARE A HEMATIILORncepnd cu anul 1924, cnd Westergreen a standardizat metoda de determinare ce-i poart numele, viteza de sedimentare a hematiilor (V.S.H.) s-a rspndit ca un test paraclinic nespecific utilizat n diagnosticul unor variate stri patologice.

Principiu. n sngele recoltat pe anticoagulant, lsat n repaus, se produce separarea plasmei de elementele figurate care sedimenteaz, n virtutea gravitaiei (Fig.nr.1).n sngele circulant elementele figurate se gsesc n suspensie, dispersate n plasm. Meninerea hematiilor n suspensie i implicit valorile V.S.H.-ului sunt determinate de: Factori globulari: - ncrctura electronegativ a eritrocitelor, care determin respingerea acestora; - vscozitatea sngelui condiionat de masa eritrocitar; astfel scderea numrului de hematii (anemie) determin accelerarea V.S.H.-ului, iar creterea numrului de eritrocite (poliglobulie) determin scderea V.S.H.-ului. Factori plasmatici: - raportul albumine/globuline. Albuminele, care prezint un grad mare de disociere ionic, determin creterea numrului de sarcini electronegative care se opun sedimentrii. n schimb, globulinele i fibrinogenul, cu un grad de disociere ionic mult mai redus, favorizeaz sedimentarea. Astfel, scderea raportului albumine/globuline fie prin scderea concentraiei de albumine, fie prin creterea concentraiei de globuline sau fibrinogen va accelera sedimentarea i va crete valoarea V.S.H.-ului. - creterea fibrinogenului plasmatic favorizeaz sedimentarea prin fenomenul de pseudoaglutinare.

5

Lucrri practice Fiziologie I

Materiale necesare: sering de 2 cm3 i ac de puncie venoas; pipete Westergreen cu stativul corespunztor; citrat de sodiu 3,8%, soluie steril; materiale necesare recoltrii sngelui prin puncie venoas. Tehnica se aspir n sering soluie de anticoagulant cu care se cltete seringa, reinndu-se 0,4ml; se puncioneaz vena, dup dezinfectare, i se aspir snge n sering pn la 2 ml; coninutul seringii se amestec prin cteva micri de rsturnare; proba se trece apoi ntr-o eprubet din care se aspir cu pipeta Westergreen (Fig.nr.1) pn la diviziunea 0, astfel nct coloana de snge s fie continu; se plaseaz pipeta n stativ n poziie perfect vertical; citirea se face dup o or, iar rezultatul se exprim n mm coloan de plasm separat de eritrocite n decurs de o or (mm/or). Valori normale: brbat: 1 10 mm/or; femeie: 2 13 mm/or; nou-nscut: 0,5 mm/or (datorit poliglobuliei). Variaii fiziologice: la femei, V.S.H.-ul crete n timpul menstruaiei; la femei, V.S.H.-ul crete n sarcin (mai ales n ultimele luni). Variaii patologice: Creterea V.S.H.-ului apare n boli infecioase sau inflamatorii (pneumonii, reumatism articular acut, tuberculoz activ, septicemie, pielonefrite), n anemii, infarct miocardic, leucemii, neoplasme, etc. Scderea V.S.H.-ului apare n poliglobulii, etc.Pentru a evita rezultatele eronate trebuie respectate urmtoarele condiii: sngele se recolteaz dimineaa pe nemncate determinarea se face imediat dup recoltare (n primele 2-3 ore); conservarea sngelui, crete V.S.H.-ul se utilizeaz ca anticoagulant citratul de sodiu deoarece oxalatul de sodiu crete V.S.H.-ul poziia pipetei trebuie s fie perfect vertical, nclinarea acesteia crescnd V.S.H.-ul temperatura camerei trebuie s fie cuprins ntre 20 i 27C deoarece creterea temperaturii crete V.S.H.-ul s se evite hemoliza

Fig.nr.1. Determinarea V.S.H. prin metoda Westergreen. 1. P.M. sex masculin V.S.H. = 8 mm/or (normal) 2. S.I. sex feminin V.S.H. = 40 mm/or (patologic)6

Lucrri practice Fiziologie I

BULETINE DE INTERPRETARES se interpreteze urmtoarele hemograme:

1. , 18 ani (RBC) Nr E = 3,3 mil/mm3 (HGB) Hb = 10 g/dl (HCT) Ht = 30 % (MCV) VEM = 90 fl (MCHC) CHEM = 33,3 g% (MCH) HEM = 30 pg RDW = 12 %

2. , 25 ani Nr E = 3 mil/mm3 Hb = 7 g/dl Ht = 27 % VEM = 110 fl CHEM = 34 g% HEM = 32 pg RDW = 17 %

3. , 20 ani Nr E = 2,8 mil/mm3 Hb = 5 g/dl Ht = 20 % VEM = 70 fl CHEM = 25 g% HEM = 18 pg RDW = 16 %

TESTE (CU UN SINGUR RSPUNS CORECT)1. Valorile normale ale eritrocitelor sunt: A. La femei 4 - 5,5 mil/mm3 B. La brbai 4,2 - 5,6 mil/mm3 C. 5000 - 9000/mm3 D. 4 - 5,5 x 1012/l 2. Alegei afirmaiile corecte de mai jos : A. Creterea nr. RBC definete poliglobulia i apare n insuficiena mduvei hematogene B. Creterea nr. RBC definete poliglobulia i nu apare n insuficiena respiratorie C. Poliglobulia apare ca urmare a scderii nr. de eritrocite D. Anemia semnific o scdere a nr. de eritrocite sub 4 mil/mm3 3. Anemia se caracterizeaz prin: A. Scderea numrului de eritrocite, Ht i Hb sub limita inferioar a normalului B. Creterea concentraiei de hemoglobin medie (CHEM) > 36 g Hb/100ml C. Hipovolemie cu oligocitemie D. HEM > 32 pg 4. Pe frotiul de snge periferic putem ntlni: A. Anizocromie = variaii de volum eritrocitar B. Anizocitoza = variaii de volum eritrocitar C. Poichilocitoza = variaii de ncrcare cu hemoglobin aeritrocitelor D. Poichilocitoza = variaii de numr a eritrocitelor 5. Urmtoarea afirmaie este fals: A. Hemoglobina se poate determina pe principiul spectrofotometriei B. RDW reprezint deviaia standard a mediei volumelor eritrocitare raportate la VEM C. VEM indic volumul mediu al unui eritrocit i este normal < 80 fl D. Dozarea hemoglobinei se poate face prin metoda Drabkin 6. Despre V.S.H. (viteza de sedimentare a hematiilor) se poate afirma c: A. Reprezint un test paraclinic nespecific B. n anemie scade V.S.H.-ul C. Valorile normale sunt: la femeie 1 - 10 mm/or iar la brbat 2 - 15 mm/or D. Poliglobulia duce la creterea V.S.H.-ului7

Lucrri practice Fiziologie I 7. Alegei afirmaia corect de mai jos: A. Eritrocitul conine 40% ap, 30 - 32% Hb, 5 - 7% alte substane B. Exist 3 tipuri de Hb: embrionar, fetal, de tip senil C. Hb, Ht i VEM-ul nu stau la baza calculrii indicilor eritrocitari D. VEM > 100 fl caracterizeaz macrocitele ntlnite n anemia prin deficit de acid folic i vitamina B12 8. Variaiile Ht (hematocritului) definesc: A. Policitemia dac valoarea Ht > 0,52 l/l la brbat i > 0,47 l/l la femeie B. Oligocitemia dac valoarea Ht > 0,52 l/l la brbat i > 0,47 l/l la femeie C. Policitemia dac valoarea Ht este 0,38 - 0,52 l/l la brbat i 0,37 - 0,47 l/l la femeie D. Dup o hemoragie acut, nainte de refacerea plasmatic exist anemie 9. Alegei afirmaia corect de mai jos: B. Indicele de distribuie eritrocitar (RDW) se utilizeaz la aprecierea anizocitozei C. Indicele de distribuie eritrocitar (RDW) se utilizeaz la aprecierea hipocromie D. Indicele de distribuie eritrocitar (RDW) nu are valoare normal ntre 11,5 i 14,5 E. Toate afirmaiile de mai sus sunt adevrate 10. V.S.H.-ul reprezint: A. Un parametru nespecific folosit pt determinarea nr. de eritrocite din sngele circulant B. Un parametru specific folosit pt. determinarea nr. de eritrocite din sngele circulant C. Un test paraclinic nespecific folosit n diagnosticul unor variate stri patologice D. Nici o afirmaie nu este corect

Rspunsuri: 1-D, 2-D, 3-A, 4-B, 5-C, 6-A, 7-D, 8-A, 9-A, 10-C.

8