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UNIVERSITE D’ANTANANARIVO
FACULTE DES SCIENCES
DEPARTEMENT DE CHIMIE ORGANIQUE Laboratoire de Chimie des Substances Naturelles et de Chimie Organique Biologie (LCSN-COB)
PROJET G/DHD
RAPPORT DE STAGE
en vue de l’obtention du diplôme Master 2
EXTRACTION, ISOLEMENT ET
IDENTIFICATION DES PRINCIPES
ACTIFS DE Vernonia trinervis
Juin 2014 – Octobre 2014
Présenté par :
RAMANANTSOA Nambinina Joseph Patricia
Encadrante : Dr Lovasoa RABESIAKA
Directeur de laboratoire : Dr Herilala Léa RASOANAIVO
REMERCIEMENTS
Je tiens à exprimer mes sincères remerciements aux organismes et personnes, sans qui ce
stage n’aurait jamais abouti.
Au PNUD (Programme des Nations Unies pour le Developpement), qui, par le biais du
projet G/DHD (Gouvernance/ Développement Humain Durable), a contribué à l’appui
financier de ce stage. Votre soutien a permis de mener à bien toutes les activités durant
l’accomplissement de ce stage.
A l’UNESCO (United Nations Educational, Scientific and Cultural Organization),
pour avoir également contribué à l’appui financier de ce stage via le projet G/DHD. Votre
aide a été très bénéfique dans nos travaux de recherche.
Au Comité Scientifique du projet G/DHD pour avoir accordé l’octroi de l’appui
financier par le biais du projet G/DHD, pour les conseils et directives qu’il a émis tout au long
de l’accomplissement de ce stage.
A l’Université d’Antananarivo, notamment l’Equipe G/DHD dirigée par Monsieur le
VPFR pour l’appui et l’importance qu’elle a accordé à notre travail de recherche.
A Madame Herilala Léa RASOANAIVO, Maître de conférences au sein de la Faculté
des Sciences et Directeur du Laboratoire de Chimie des Substances Naturelles et de Chimie
Organique biologie (LCSN-COB), pour m’avoir accueilli comme stagiaire dans son
laboratoire et pour m’avoir conseillé pendant le stage.
A Madame Lovasoa RABESIAKA, Maître de conférences au sein de la Faculté des
Sciences, mon encadrante et maître de stage, pour m’avoir guidé, conseillé et aidé tout au
long de ce stage.
A Monsieur Rivoarison RANDRIANASOLO, Maître de conférences au sein de la
Faculté des Sciences, pour son aide et son dévouement lors des manipulations.
A Madame Amélie RAHARISOLOLALAO, Professeur émérite au sein de la Faculté des
Sciences, pour avoir fait preuve de bienveillance à mon égard. Votre aide et votre appui ont
été essentiels à l’accomplissement de ce stage.
Je tiens également à remercier tous ceux qui, de près ou de loin, ont contribué à
l’accomplissement de ce stage.
Sommaire
I. PRESENTATION DU LABORATOIRE ........................................................................... 2
II. STAGE G/DHD.............................................................................................................. 4
II.1. Objectifs du stage ............................................................................................. 4
II.2 Méthodologie et résultats attendus ....................................................................... 5
Enquête ethnobotanique et récolte .................................................................... 5
Extraction de la matière végétale...................................................................... 7
Criblage phytochimique.................................................................................... 9
Séparation, isolement et purification ................................................................ 9
Test d’activité antioxydante ............................................................................ 12
Détermination structurale ............................................................................... 11
Test d’activité antipaludique ........................................................................... 12
II.3. Bilan du stage : résultats obtenus et perspectives ................................................. 13
LISTE DES FIGURES
Figure 1 : Vernonia trinervis
Figure 2 : Photographie d’un évaporateur rotatif du LCSN-COB
Figure 3 : Photographie d’un évaporateur rotatif du LCO-SM
Figure 4 : Traitement de l’extrait brut par l’hexane
Figure 5 : Profil CCM de l’extrait acétate d’éthyle
Figure 6 : Chromatographie sur colonne de l’extrait acétate d’éthyle
LISTE DES TABLEAUX
Tableau 1 : Liste des produits et réactifs
Tableau 2 : Matériels usuels et verreries courantes
Tableau 3 : Résultats du criblage phytochimique
1
INTRODUCTION
La phytothérapie est un des moyens les plus utilisés par les Malgaches pour se soigner ou
prévenir une maladie [w1]. Toutefois, les plantes locales sont encore mal exploitées et leur
valorisation reste un défi majeur pour les scientifiques. C’est dans ce cadre que nous avons
choisi de mener une étude chimique approfondie sur Vernonia trinervis qui est une plante
endémique de la Grande Ile et utilisée traditionnellement dans le traitement du paludisme, des
fièvres et du diabète.
Les travaux de recherche menées sur Vernonia trinervis ont été effectués lors d’un stage
intitulé : « Extraction, isolement et identification des principes actifs de Vernonia trinervis»,
en vue de l’obtention du Diplôme Master. Ce stage s’est déroulé du mois de Juin au mois
d’Octobre 2014, au Laboratoire de Chimie des Substances Naturelles et de Chimie Organique
Biologie (LCSN-COB). L’objectif principal de ce stage a été de nous initier aux travaux de
laboratoire, notamment aux techniques et matériels utilisés dans les laboratoires de chimie
organique. Pour cela, notre mission était d’isoler un ou plusieurs constituant(s) chimiques de
la plante, les identifier et éventuellement de déterminer une activité biologique des produits
obtenus.
Ainsi, afin de mieux comprendre le déroulement de ce stage, le présent rapport sera divisé en
deux grandes parties :
Une première partie traite sur la présentation du laboratoire, son secteur d’activité ainsi
que ses objectifs.
La seconde partie sera consacrée au descriptif du stage, aux méthodes utilisées et
résultats attendus, les problèmes rencontrés ainsi que les solutions apportées, et le bilan du
stage notamment les résultats obtenus et les perspectives.
2
I. PRESENTATION DU LABORATOIRE et du stage
L’Université d’Antananarivo est la plus grande université publique à Madagascar. Elle
comprend trois Grandes Ecoles et quatre Facultés dont la Faculté des Sciences. Cette dernière
est composée de douze Départements parmi lesquels le Département de Chimie Organique
qui est composé à son tour par sept laboratoires de recherche. Parmi ces laboratoires figure le
Laboratoire de Chimie des Substances Naturelles et de Chimie Organique Biologie ou LCSN-
COB. Le diagramme à la page suivante permet de situer le laboratoire au sein de la hiérarchie
[w2].
Compte tenu de la richesse de la biodiversité de la Grande Ile et de ses nombreuses
utilisations traditionnelles, le laboratoire s’est fixé comme objectif de valoriser la faune et la
flore malgache du point de vue chimique en isolant leurs constituants, et de valoriser par la
suite les produits isolés par leurs activités biologiques. Les recherches au sein du laboratoire
sont donc axées sur l’étude chimique des animaux ou plantes malgaches, notamment
l’extraction, l’isolement et l’identification des molécules organiques qu’ils contiennent.
Toutefois, l’étude des animaux reste très limitée à cause de leur rareté ou du problème
d’extinction d’espèce.
Le laboratoire est actuellement dirigé par le Docteur Herilala Léa RASOANAIVO, Maître de
conférences au sein de la Faculté des Sciences. L’équipe de recherche permanente est
composée d’un Professeur émérite et de trois Maîtres de conférences qui sont également
membres de l’équipe pédagogique de la mention « Chimie » au sein de la Faculté. Cependant,
des stagiaires de tous niveaux s’ajoutent à ce nombre : actuellement, deux stagiaires en
Doctorat et quatre stagiaires en Master, dont je fais partie, dans le parcours « Chimie des
Substances Naturelles » y font leurs stages. LCSN-COB peut également accueillir des
stagiaires de niveau Licence, BTS ou des stagiaires qui désirent uniquement approfondir leurs
connaissances.
J’ai choisi d’intégrer cette équipe pour faire mon stage pour l’obtention du Diplôme Master.
3
UNIVERSITE
D’
ANTANANARIVO
Faculté de
Droit, de
Gestion et
de
Sociologie
Faculté des
Lettres et
des
Sciences
Humaines
Faculté
de
Médecine
Faculté
des
Sciences
Ecole
Normale
Supérieure
Ecole
Supérieure
Polytechnique
Ecole
Supérieure des
sciences Agronomiques
Département de Biochimie
Fondamentale et
Appliquée
(DBFA)
Département de Biologie
Animale
(DBA)
Département de Biologie
et Ecologie Végétale
(DBEV)
Département de Chimie
Minérale et Chimie
Physique
(DCMCP)
Département de Chimie
Organique
(DCO)
Département
d’Entomologie
(Dent)
Département de
Mathématique et
Informatique
(DMI)
Département de
Paléontologie et
Anthropologie Biologique
(DPAB)
Département de
Physiologie Animale et
Pharmacologie
(DPAP)
Département de Physique
(DPhy)
Département des Sciences
de la Terre
(DST)
Département de
DIdactique et
COmmunication en
Sciences
DiCoS
Laboratoire de Chimie des
Substances Naturelles et
de Chimie Organique
Biologie
(LCSN-COB)
Laboratoire de Chimie
Organique-Spectre de
Masse
(LCO-SM)
Laboratoire de Chimie et
de Valorisation des
Produits Naturels
(LCVPN)
Laboratoire de Chimie
Appliquée aux Substances
Naturelles
(LaCASN)
Laboratoire des Produits
Naturels et de
Biotechnologie
(LPNB)
Laboratoire de Chimie
Moléculaire
(LCM)
Laboratoire International
Associé
(LIA)
4
II. STAGE G/DHD
Le thème de mon mémoire porte sur la « Contribution à l’étude
phytochimique de Vernonia trinervis » qui est une plante
utilisée traditionnellement dans le traitement du paludisme, des
fièvres et du diabète. En effet, ces trois maladies, surtout le
paludisme, concernent de nombreux cas dans les pays en voie
de développement comme Madagascar ou d’autres pays
africains: selon l’OMS, le paludisme tue un enfant africain
toutes les 30 secondes [w3]. Pourtant, les traitements restent
encore inaccessibles pour la plupart de la population faute de
moyens financiers.
C’est pourquoi nous avons choisi d’effectuer des recherches sur Vernonia trinervis afin de
valoriser cette plante sur le plan chimique et éventuellement biologique. Mon stage, intitulé :
« Extraction, isolement et identification des principes actifs de Vernonia trinervis » a pour
mission d’extraire, isoler et identifier quelques produits issus de cette plante. Le thème a été
choisi car il met en avant la recherche de principes actifs éventuels qui pourrait servir à la
lutte contre le paludisme en plus de valoriser la flore malgache. Cette démarche est située
dans le domaine de Gouvenance/ Developpement Humain durable. C’est dans ce cadre qu’il a
bénéficié de l’appui financier octroyé par le PNUD et l’UNESCO en partenariat avec
l’Université d’Antananarivo, par le biais du projet G/DHD.
II.1. Objectifs du stage
L’objectif principal de ce stage a été de me familiariser avec les matériels et différentes
techniques utilisés en laboratoire de chimie organique des substances naturelles. Plus
précisément, les missions qui m’ont été assignées durant le stage étaient de :
Savoir exploiter les données bibliographiques pour les travaux expérimentaux,
Acquérir les techniques d’extraction à partir d’un matériel végétal,
Maîtriser les techniques de séparation, d’isolement et de purification de produits,
Etre capable d’identifier la structure d’une molécule à partir de spectres RMN.
Figure 1 :
Vernonia trinervis
5
II.2 Méthodologie et résultats attendus
Pour atteindre les objectifs fixés précédemment, la méthodologie adoptée s’est déroulée en 5
étapes :
Enquête ethnobotanique et récolte
L’enquête ethnobotanique a débuté vers la fin du mois de Mai. Elle a consisté à poser des
questions sur l’utilisation traditionnelle de la plante [w4]. Elle a été faite sur des guérisseurs,
des paysans, des marchands de « tapa-kazo » et de simples citoyens. Un questionnaire sous
forme de tableau a été établi pour faciliter la collecte des informations et à chaque donnée, il
suffisait de cocher la case correspondante. Un nombre total de dix personnes a été soumis au
questionnaire et les informations reçues ont permis de déterminer le lieu où la récolte serait
effectuée. En effet, il fallait prendre en compte de tous les paramètres : les parties utilisées, les
saisons de récolte, l’éloignement des lieux de récolte et surtout de l’accessibilité des lieux de
récolte.
Ensuite, après analyse de tous les paramètres, la plante a été récoltée dans le fokotany de
Mandrangobato, Commune rurale d’Alasora. La partie aérienne a été coupée à l’aide de
couteaux et de ciseaux, puis transportée dans des sacs en plastique. Elle a été sechée et les
feuilles ont été réduites en poudre dans un laboratoire partenaire : LaCASN (Laboratoire de
Chimie Appliquée aux Substances Naturelles). Parallèlement à cela, un échantillon a été
emmené au Parc Botanique et Zoologique de Tsimbazaza (PBZT) pour l’identification de la
plante. Cette poudre de plante constitue le matériel végétal utilisé lors des recherches
postérieures.
Outre le matériel végétal, de nombreux produits chimiques et réactifs ont été utilisés pendant
les travaux de laboratoire en plus des matériels non consommables tels que les matériels
usuels et les verreries courantes. La liste exhaustive des produits et réactifs [1] employés
durant les travaux de laboratoire est rapportée dans le tableau 1 et celle des matériels non
consommables [1] dans le tableau 2.
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Tableau 1 : Liste des produits et réactifs
DESIGNATION UTILISATION
P
R
O
D
U
I
T
S
Gel de Silice Kieselgel 60 Chromatographie sur colonne ou CLBP
Gel de Silice 60 sur support en aluminium
Chromatographie sur couche mince CCM
Hexane, acétate d’éthyle, éthanol 80%, acétone
Solvants
Iode Révelateur
R
E
A
C
T
I
F
S
HCl 12%, HCL 2N
Réactif de Wagner
Réactif de mayer
Réactif de Dragendorff
Screening des alcaloides
HCl concentré
Graines de tournure de magnésium
Alcool isoamylique
Screening des flavonoides et leucoanthocyanes
NaCl 10%
Gélatine à 1%
Gélatine salée
FeCl3 à 10% dans MeOH
Screening des tanins et polyphenols
Anhydride acétique
H2SO4 concentré
Acide picrique
FeCl3 10% dasn H2O
Screening des steroides et terpénoides
EtOH Screening des polysaccharides
7
Tableau 2 : Matériels usuels et verreries courantes
APPAREILS FONCTION
Balance de précision de marque KERN 770/GS/GJ (portée maximale : )
Pesée
Evaporateurs rotatifs (rotavapor) de marque
BUCHI Evaporation des solvants
Lampe UV (254 et 365 nm) Révélation des plaques CCM
Etuve Séchage
Plaque chauffante Chauffage
VERRERIES
baguettes de verre
ballons à fond rond et à fond rodé
cristallisoirs
éprouvettes graduées
erlenmeyers
entonnoirs
flacons
tubes à essais
béchers
réfrigérants à boules
ampoule à décanter
Extraction de la matière végétale
Cette extraction s’est faite en 3 étapes :
La macération : il s’agit de laisser séjourner à température ambiante les végétaux
finement divisés dans un liquide pour extraire les composés solubles. Cette macération a
8
été effectuée dans un mélange EtOH/H2O 80/20 (V/V). Un mélange solide-liquide a été
obtenu à l’issu de ces 10 jours.
La filtration : Le mélange a été filtré sur coton pour séparer la phase solide et la solution
hydroalcoolique.
L’évaporation : la solution hydroalcoolique a été évaporée sous pression réduite à l’aide
d’un évaporateur rotatif (figure 2) pour obtenir l’extrait brut. L’évaporateur rotatif du
laboratoire n’était pas fonctionnel, alors l’évaporation a été faite dans le Laboratoire de
Chimie Organique et Spectrométrie de Masse (LCO-SM) appartenant au même
Département de Chimie Organique. Cet extrait, autrement appelé extrait hydroalcoolique
servirait pour l’isolement et l’identification de produits. En effet, il renferme en principe
tous les composants chimiques que la partie aérienne de la plante contient.
Figure 2 : Photographie d’un évaporateur rotatif au LCSN-COB
Figure 3 : Photographie d’un évaporateur rotatif au LCO-SM
La mission principale de cette étape était de maîtriser les différentes techniques liées à
l’extraction ainsi que tous les matériels de laboratoire utilisés tels que l’évaporateur rotatif.
9
Criblage phytochimique
Le criblage phytochimique est un ensemble de tests permettant de détecter les principales
familles de substances naturelles présentes dans un végétal. Ces tests sont généralement basés
sur des réactions de précipitation et/ou de coloration [2].
Une partie de l’extrait brut obtenu précedemment est prélevée et le criblage des alcaloïdes,
des flavonoïdes et leucoanthocyanes, des tanins et polyphénols, des stéroïdes et terpénoïdes,
des saponines et des polysaccharides a été effectué sur cet extrait par le biais de divers tests. A
l’issu de ces différents tests, les produits naturels présents dans le matériel végétal devraient
être détectés et mis en évidence.
Séparation, isolement et purification
A partir de l’extrait hydroalcoolique, j’ai procédé à une série d’extraction
liquide-liquide avec un solvant apolaire : l’hexane et un solvant
moyennement polaire : l’acétate d’éthyle. Une extraction avec de
l’hexane a été effectuée sur l’extrait brut dans une ampoule à decanter,
puis la solution hexanique est récupérée et concentrée dans un
évaporateur rotatif. Ensuite, la même opération est reprise avec le résidu
d’extraction en utilisant cette fois de l’acétate d’éthyle. Deux extraits ont
été ainsi obtenus appelés : « extrait hexanique » et « extrait acétate
d’éthyle ». Par exemple, la figure 3 ci-contre nous montre le traitement
par l’hexane de l’extrait brut dans une ampoule à décanter. Cette
technique utilisant l’ampoule à décanter est appelée : partage liquide-
liquide.
Les manipulations sont assez simples, de plus, les principes ont déjà été acquis auparavant
lors des séances de travaux pratiques durant les enseignements.
Chaque extrait est soumis à des analyses en chromatographie sur couche mince pour savoir
ses constituants et voir lequel est le plus intéressant du point de vue chimique.
D’après les données bibliographiques et les résultats de la chromatographie sur couche mince
(CCM), c’est l’extrait acétate d’éthyle qui présenterait les composants chimiques intéressants
(figure 5). Cet extrait acétate d’éthyle a donc été soumis à une chromatographie sur colonne
Figure 4 : Traitement de l’extrait brut
par hexane
10
ou chromatographie liquide à basse pression dans le but de séparer davantage ou même
jusqu’à isoler ses constituants. Le choix du solvant à utiliser a été fait après en avoir essayé
plusieurs en chromatographie sur couche mince ou CCM. Durant cette manipulation, la
première colonne présentait une surface non plane, ce qui rendait la séparation très difficile,
voire impossible. Une autre colonne a dû être de nouveau montée afin de régler ce problème
et pour éviter de gaspiller le solvant. J’ai ainsi pu acquérir les techniques
chromatographiques : CCM et chromatographie sur colonne. La figure 6 montre par exemple
la photographie de la chromatographie sur colonne de l’extrait acétate d’éthyle.
Figure 5 : Profil CCM de l’extrait acétate d’éthyle
11
Figure 6 : Chromatographie sur colonne de l’extrait acétate d’éthyle
174 fractions ont été obtenues par la chromatographie sur colonne. Certaines de ces fractions
présentent, après analyse en CCM, des constituants chimiques similaires. Elles ont été
regroupées et notées Pa, Pb et Pc. Ces dernières ont été choisies pour être purifiées.
En effet, les fractions Pa et Pb ont été dépigmentées par traitement à l’acétate d’éthyle : elles
ont été ajoutées d’un petit volume d’acétate d’éthyle puis celui-ci est retiré à l’aide d’une
pipette pasteur, pour laisser respectivement les produits purs P1 et P2. La fraction Pc a été
soumise à une CCM préparative pour en isoler un composant purifié noté P3. De ce fait, j’ai
pu maîtriser les méthodes de purification telles que la dépigmentation et la CCM préparative.
Détermination structurale
Les produits P1, P2 et P3 ont été envoyés dans un laboratoire étranger pour être analysés par
spectroscopie de RMN (Résonance Magnétique Nucléaire). Néanmoins, leur envoi n’a pas été
facile car le laboratoire d’analyse avait demandé à ce que les produits arrivent chez eux avant
la fin du mois de septembre. Or, les transitaires ont exigé des papiers attestant que les produits
sont non toxiques et non dangereux. L’établissement de ces documents nécessitait environ
deux semaines alors que je n’avais qu’une semaine pour expédier les produits. J’ai donc pris
l’initiative d’aller voir les responsables au sein du Ministère de l’élevage et de l’IMRA pour
12
leur demander les pièces justificatives nécessaires. Mes investigations ont porté ses fruits car
j’ai pu obtenir les papiers en quelques jours.
Une partie des spectres RMN (spectres RMN de proton 1H et COSY) des produits P1, P2 et
P3 sont arrivés au début du mois d’Octobre et Le reste, notamment les spectres RMN de
carbone 13C et les spectres de corrélation en deux dimensions ont été obtenus vers le début du
mois de Novembre. L’identification des produits a été faite en partenariat avec tous les
membres du laboratoire LCSN-COB.
Test d’activité antioxydante
Les extraits hexanique et acétate d’éthyle ont été choisis pour effectuer un test d’éventuelles
activités antioxydantes. Pour ce faire, ils sont soumis à un test DPPH•, le seul disponible au
laboratoire.
Le protocole est le même pour les deux extraits : ils sont d’abord développés en
chromatographie sur couche mince dans un système hexane/AcOEt 80/20 (V/V) pour l’extrait
hexanique et dans un système hexane/AcOEt 10/90 (V/V) pour l’extrait acétate d’éthyle. Une
solution de DPPH est préparée en dissolvant 6mg de DPPH dans 3 ml de Méthanol. Cette
solution est ensuite pulvérisée sur les plaques CCM des extraits et le changement de
coloration de la solution est observé après 5 mn. Le test est positif pour un produit lorsque la
couleur de la tache correspondante s’est transformée en jaune [3].
Test d’activité antipaludique
Il était prévu que les produits isolés seraient soumis à des tests d’activité antipaludique.
Pourtant, à cause de leur faible quantité, la totalité de ces produits a été envoyée pour
l’analyse spectroscopique. Ce serait donc les extraits souches, extraits hexanique et acétate
d’éthyle, qui seront choisi pour être soumis au test à la place de ces produits. Ces extraits
devraient être envoyés dans un laboratoire partenaire pour effectuer les tests. Cependant, seuls
deux laboratoires sont capables de faire ce test à Madagascar. Pour l’un de ces laboratoires, le
délai pour effectuer le test est très long, il peut s’étendre sur plusieurs mois. Pour l’autre, le
matériel nécessaire pour effectuer le test vient d’être livré, il faut donc attendre jusqu’à la fin
13
de l’année en cours pour assurer la mise en marche du matériel. J’ai opté pour cette seconde
option.
II.3. Bilan du stage : résultats obtenus et perspectives
Résultat de l’extraction
L’extraction a permis d’obtenir un extrait sec hydroalcoolique de masse égale à 34,5065 g.
Le rendement de cette extraction est de 13,8 %
Résultat du criblage phytochimique
Les principaux produits naturels présents et mis en évidence dans le matériel végétal sont
rapportés dans le tableau 3 suivant :
Tableau 3 : Résultats du criblage phytochimique
Familles chimiques à détecter Résultats
Alcaloïdes Absence d’alcaloïdes
Flavonoides
et
Leucoanthocyanes
Présence de flavonols
Présence de flavones
Absence de leucoanthocyanes
Absence d’anthocyanes
Tanins
et
Polyphénols
Présence de polyphénols
Présence de tanins
Présence de tanins hydrolysables (galliques ou ellagiques)
Steroides
et
Terpénoides
Présence de stéroides
Absence de stérols insaturés
Absence de stéroides lactoniques
Présence de desoxy-2-sucre
Saponines Absence de saponines
Polysaccharides Absence de polysaccharides
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Résultat de la séparation, isolement et purification
Cette étape a permis d’obtenir un extrait hexanique de masse 4,7150 g et un extrait acétate
d’éthyle de masse 15,0060 g. Les rendements correspondants à chaque extrait sont
respectivement de 1,8% et de 6,0%.
Résultat de la détermination structurale
Les spectres RMN (Annexe 1, 2 et 3) ont permis de déterminer les structures des produits
purs. Après analyse des spectres obtenus, il a été conclu que les produits P1 et P2 sont les
mêmes et le produit P3 n’a pas été identifié à cause de la complexité des spectres
correspondants. La structure des produits P1 et P2 a été élucidée donnant ainsi le 2-(3,4-
dihydroxyphényl)-5,7-dihydroxy-6-méthoxychromèn-4-one qui est une molécule déjà conue
sur le marché international.
Résultat du test antioxydant
Le test antioxydant effectué sur les extraits hexanique et acétate d’éthyle a permis de
déterminer que certains produits non distincts à l’œil nu pour l’extrait hexanique et un produit
constituant de l’extrait acétate d’éthyle possèdent en effet une activité antioxydante, mise en
évidence par l’absorption de la coloration violette sur les taches correspondant aux produits.
Bilan du stage et perspectives
Ce stage m’a permis de mettre en pratique tous les acquis durant les enseignements antérieurs,
notamment les techniques utilisées dans les travaux de laboratoire en chimie organique. Plus
particulièrement, il m’a permis de maîtriser les méthodes d’extraction, d’isolement, de
purification et d’identification de produits à partir d’une plante.
Personnellement, je trouve les travaux en laboratoire très enrichissants mais les produits
chimiques et réactifs sont encore très coûteux, surtout pour des pays en voie de
développement comme Madagascar. Nous avons eu la chance de bénéficier de l’appui
financier octroyé par le PNUD et l’UNESCO pour mener à bien ce stage. Pour la suite des
activités, l’accomplissement du test d’activité antipaludique est encore à prévoir pour
compléter les résultats déjà obtenus. De plus, les recherches peuvent aller plus loin avec les
autres produits contenus dans le matériel végétal, notamment leur isolement, leur
identification ainsi que l’étude de leurs activités biologiques.
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CONCLUSION
Mon stage au sein du Laboratoire de Chimie des Substances Naturelles et de Chimie
Organique Biologie LCSN-COB a commencé en Juin 2014. Ma mission principale a été
d’extraire, isoler et identifier quelques constituants chimiques de Vernonia trinervis. Une
majeure partie de mes objectifs a été atteinte car j’ai pu mettre en application les méthodes
théoriques d’extraction, de séparation et de purification que j’ai apprises lors des
enseignements théoriques et lors de mes recherches bibliographiques. Dans l’attente des
derniers résultats d’analyse spectroscopique et les analyses biologiques, je m’active à la
détermination structurale et à la rédaction de mon mémoire de Master 2.
En bref, je peux dire que ce stage m’a été très bénéfique car j’ai pu acquérir toutes les
techniques mises en œuvre durant les travaux de laboratoire. J’ai également appris à
m’adapter à chaque situation et trouver une solution aux différents problèmes que j’ai
rencontrés. Cependant, la détermination structurale et les tests d’activité antipaludique restent
encore à voir pour la finalisation du stage.
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
1. RAHARINIRINA Harisoa Armandine, 2013, Dihydronaphthoquinone-1,4 isolé des
feuilles de Dianella ensifolia (L.) Redouté (LILIACEAE)-Activité antioxydante des
extraits de la plante.
2. Yemoa A.L.Gbenou J.D.Johnson R.C.Djego J.G.Zinsou C. Moudachirou M.Quetin-
Leclercq J.Bigot A. Portaels F, Identification et étude phytochimique de plantes utilisées
dans le traitement traditionnel de l’ulcère de Buruli au Bénin.
3. Hariliva RAMIARISON, 2013, Caractérisations, identification des constituants de l’huile
essentielle des feuilles de Calea urticifolia Mill. D.C. (Asteraceae) et travaux biologiques.
REFERENCES WEBOGRAPHIQUES
w1- http://sante-medecine.commentcamarche.net/contents/805-phytotherapie-principes-et-
precautions
w2- http://www.univ-antananarivo.mg/Departements-Laboratoires
w3- http://www.who.int/mediacentre/news/releases/2003/pr33/fr/
w4- http://www.jdmmontagnes.org/?page=demarche
ANNEXE 1 : Spectres RMN du produit P1
ANNEXE 2 : Spectres RMN du produit P2
ANNEXE 3 : Spectres RMN du produit P3