f focar de infectii nosocomiale cu klebsiella pneumoniae de infectii nosocomiale cu...
TRANSCRIPT
FFocar de infectii nosocomiale cu Klebsiella
pneumoniae la nou-nascuti: valoarea investigatiei microbiologice
moleculare
Brindusa-Elena Lixandru1, Codruta Romanita Usein1, Maria Condei1, Daniela Cristea1, Elena-Carmina Dragulescu1, Ileana Luminita Coldea1,
Felicia Antohe2, Irina Codita1,3
1INCDMI Cantacuzino, Bucuresti2IBPC “N. Simionescu”, Bucuresti
3UMF “Carol Davila”, Bucuresti
Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013
Klebsiella pneumoniae : introducere Klebsiella pneumoniae : introducere Caracteristici :
> Enterobacteriaceae
> Bacili Gram-negativi
> Oxidaza-negativi
Aero-anaerob
Imobil
Tractul digestiv al omului (30%) si al animalelor
3 subspecii: subsp. pneumoniae, ozenae, rhinoscleromatis
Testarea sensibilitatii la antibiotice :« Grupul 2 » de Enterobacterii: producerea naturala de penicilinaza de nivel scazut (SHV-1 cromozomala) inhibata de acidul clavulanic si tazobactam
Rezistenta naturala la: aminopeniciline (ampicilina, amoxicilina) carboxipeniiline (ticarcilina), ureidopeniciline (piperacilina)
Fara rezistenta naturala la C1G, C2G, carbapeneme, aminoside, quinolone, TE, C, SXT
Klebsiella pneumoniae : impactul clinicKlebsiella pneumoniae : impactul clinic infectii oportuniste la pacientii imunocompromisi, diabet,
alcoolism, pacienti cu dispozitive invazive, nou nascuti
Tractul urinar si respirator: cele mai frecvente situsuri de infectie
Raspandire rapida prin mainile personalului medical
A -2 a cauza a septicemiilor dupa E. coli
Rata de mortalitate crescuta
Focare cu tulpini rezistente (BLSE), diseminare clonala
Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013
Klebsiella pneumoniae: mecanisme de rezistenta la Klebsiella pneumoniae: mecanisme de rezistenta la beta-lactaminebeta-lactamine Producerea de β-lactamaze: mecanismul principal de rezistenta
la β-lactamine la bacteriile Gram-negative. plasmide cu gene de rezistenta BLSE (beta-lactamaze cu spectru extins):
Prima BLSE descrisa la o tulpina de K. pneumoniae (1983) BLSE derivate din penicilinze TEM, SHV, prin modificarea 1 sau 2 aa din
situsul activ al enzimei Dupa 2000 CTX-M un grup nou BLSE cu raspandire modiala E. coli ++++, K
pneumoniae, Salmonella typhimurium, Proteus mirabilis
Cefalosporinaze plasmidice (ex: CMY-2): achizitia de gene de tip AmpC prin intermediul plasmidelor de la speciile natural producatoare (Enterobacter, Serratia, Morganella, Citrobacter freundii)
Carbapenemaze: KPC+++, VIM,NDM, OXA-48
Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013
Obiectiv:
Investigarea unor tulpini izolate dintr-un focar de infectii nosocomiale intr-o sectie de nou-nascuti
Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013
Material si metode
• 8 izolate clinice8 izolate clinice• Provenienta Provenienta
– 2 nou- nascuti 2 nou- nascuti • Prelevate clinice: Prelevate clinice:
– Hemocultura Hemocultura – Secretie pulmonara/traheobronsicaSecretie pulmonara/traheobronsica– Secretie nazalaSecretie nazala– Exsudat faringian Exsudat faringian
Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013
Material si metode• Confirmare diagnosticConfirmare diagnostic
Metode conventionale: teste biochimice “in Metode conventionale: teste biochimice “in house”house”
Metoda automata VITEKMetoda automata VITEK Testarea sensibilitatii la antibiotice:Testarea sensibilitatii la antibiotice:Metoda disc difuziei Kirby Bauer (CLSI): Metoda disc difuziei Kirby Bauer (CLSI):
amoxilcilina, amoxicilina+ acid clavulanic, ticarcilina, piperacilina, piperaclina + tazobactam, cefalexin, cefuroxim, cefixim, cefotaxim, ceftazidim, aztreonam, ertapenem, imipenem, gentamicina, tobramicina, amikacina, acid nalidixic, ofloxacin, ciprofloxacin, tetraciclina, cloramfenicol, trimetoprim / sulfametoxazol
Test de sinergie dublu-discTest de sinergie dublu-discDetectare gene prin PCR : Detectare gene prin PCR :
blaCTX-MblaCTX-MblaTEMblaTEMblaSHVblaSHV
Material si metode
Tipizare : – Metode fenotipice:
• Lizotipare• Antibiotipare
– Metode moleculare:• Electroforeza in camp pulsator (pulsed field gel
electrophoresis = PFGE) a fragmentelor de ADN genomic obtinute cu enzima de restrictie XbaI
Rezultate - teste fenotipice
Toate cele 8 tulpini au fost confirmate ca fiind K. pneumoniae
Toate tulpinile au prezentat acelasi pattern de sensibilitate / rezistenta: R: AMX, TIC, PRL, CXM, KF, CTX, CN, SXT I: AMC, CFM, CAZ, NA S: TZP, IMP, ETP, ATM, AK, TOB, CIP, OFX, C, TE
Fenotip BLSE
Toate tulpinile au fost lizorezistente (netipabile prin lizotipie)
Rezultate - teste moleculare
CTX grup1 (CTX-M-15++++?)
SHV TEM
Rezultate PCR1 2 3 4 5 6 7 8 M+ 1 2 3 4 5 6 7 8 M+ 1 2 3 4 5 6 7 8 M+
Legenda1-8– tulpini K. pneumoniae 9- martor pozitiv10–martor negativ 11- apa12- marker greutate moleculara
Rezultate-teste moleculare
Legenda:1,6,11-Salmonella ser..Braenderup H9812
2 - 5, 7 -10- tulpini K.pneumoniae
Rezultate PFGE
Similaritate 100% a profilurilor obtinute - clonalitatea si inrudirea epidemiologica a tulpinilor
Concluzii
• Utilizarea metodelor fenotipce si moleculare a permis confirmarea unui focar de infectie nosocomiala care a evoluat intr-o sectie de reanimare nou-nascuti.
• Analiza PFGE reprezinta ”gold standard” pentru demonstrarea clonalitatii tulpinilor din focar