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CLASIFICACION TAXONOMICA
Dominio: Bacteria
Filo: Actinobacteria
Orden: Actinomycetales
Suborden: Corynebacterineae
Familia: Mycobacteriaceae
Gnero: Mycobacterium.
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Caractersticas GeneralesAerobias estrictas (excepto en estado latente)
No mviles
Pared celular rica en lpidosM. tuberculosissu nico hospedero es el humano
Tiempo de replicacin muy lento, 15-20 horas
Clasificacin: Complejo Tuberculoso: Niacina y nitritos positivos,
catalasa a 68C negativa
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CARACTERISTICAS
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PARED CELULAR
PECTIDOGLICANO
POLIMEROS DE ARABINOSA Y GALACTOSA.ACIDOS MICOLICOS
LIPIDOS SUPERFICIALES: Cord factor
Micosidos
Sulfolipidos.
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PARED CELULAR MICOBACTERIAS
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Pared celular micobacterial: 1-lpidos externos, 2-cido miclico,
3-polisacridos (arabinogalactano), 4-peptidoglicano, 5-membrana
plasmtica,
6-lipoarabinomanano (LAM), 7-fosfatidilinositol manosido, 8-paredcelular.
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CARACTERISTICAS GENERALES
BACILOS ACIDOALCOHOL RESISTENTE
AEROBIAS Y NOMOVILES
POSEEN PAREDCELULAR
NO TIENEN:ENDOSPORA,CAPSULA
GLICEROL COMOFUENTE DE CARBONO
EN PRESENCIA DESALES MINERALES
UTILIZAN AMONIACOCOMO FUENTE DE
NITROGENO PARA SUCRECIMIENTO
LA MAYORIA SON DECRECIMIENTO LENTO
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COMPLEJOS
TUBERCULOSISM. tuberculosis
M. bovis
M. africanum
COMPLEJO LEPRAM. Leprae
M. Lepraeemurium
MICOBACTERIAS ATIPICAS
M. kansassi-intermedium-marinum
Scrofulaceum-xenopi-avium-Intracelular
Fortuitum y chelonei-gordonae-szulgai
GENEROS
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Epidemiologa
El mtodo ms efectivo de control de la TB es labsqueda activade casos bacilferos y su
tratamiento, ya que desde el punto de vistaepidemiolgico la infectividad del pacientedisminuye en forma importante a las pocassemanas de iniciado un buen tratamiento, y por el
contrario un paciente bacilfero infecta de 10 a 15personas por ao.
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ANTIGENICIDAD
LIPIDOS Cord factor
PROTEINAS TuberculinaMICOBACTINAS
EXOQUELINAS
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Determinantes de patogenicidad
Factor cordn: Adoptan la forma serpenteante constituido porbacilos que se disponen de manera paralela y compacta, eldesarrollo en cordones puede correlacionarse con la presencia delglucolipido trehalosa 6,6dimicolato.
Sulfatados: Son glicolpidos localizados de forma perifricaresponsables de la reactividad al rojo neutro, aunque lossulfatados no son txicos pero cuando se administran de formasimultanea con el factor cordn potencia de manera sinrgica latoxicidad de este.
Intracelularidad: promover su propia supervivencia dentro delhusped actuando desde el interior de los fagosomas paraprevenir la formacin de los fago lisosomas con lo que evita suexposicin a enzimas hidrolticas ( lizosomicas).
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MYCOBACTERIUM - TUBERCULOSO
CUADRO CLINICO
Se establece en tres fases:INFLAMACION
FORMACION DEL TUBERCULO
CACEIFICACION
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CUADRO CLINICO
ESTADIOS
PRIMO-INFECCION REINFECCION
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Ciclo de vida
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Patognesis Durante la fase de invasin tisular, el transporte de microorganismos
por el macrfago a travs de la pared alveolar, permite el acceso delbacilo a la sangre a travs de la va linftica.
Este perodo de micobacteremia le proporciona al microorganismo elacceso y posibilidad de permanecer en el sistema mononuclearfagoctico y sitios que le proveen un medio ambiente favorable (altapresin de oxigeno) , como es el rea apical de los pulmones y sitios conalto flujo sanguneo como nodos linfticos, riones, epfisis de huesoslargos, cuerpos vertebrales y reas menngeas.
La reactivacintarda de estos focos da origen a la tuberculosisextrapulmonary a la forma pulmonar apical de ms frecuentepresentacin.
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Patognesis
Las vas de entrada del bacilo tuberculoso al organismo sonla inhalacin, ingestin e inoculacindirecta. La msimportante es la inhalacin de partculas infectantesexpulsadas por medio de la tos de un paciente bacilfero.Partculas mayores de 10 m son filtradas en la nariz y
menores de 5 m evitan las barreras mecnicas y puedenpenetrar y depositarse en la superficie respiratoria.
La respuesta inmune celular efectiva, cura la lesinprimaria espontneamente con calcificacin del foco
parenquimatoso (Foco de Gohn y ndulos hiliares)constituyendo el complejo de Ranke.
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Patognesis
Los linfocitos T, sensibilizados con antgenos delM. tuberculosis
determinan la aparicin del fenmeno de hipersensibilidad retardadamedida a travs de la prueba de tuberculina.
Los linfocitos (especficamente CD4) de individuos con fuertehipersensibilidad retardada, son capaces de producir linfoquinas queactivan la capacidad microbicida del macrfago y junto con el linfocito
organizan el granuloma, el cual sirve para detener la infeccin, reducirel crecimiento del bacilo y restringir la movilidad de los macrfagosinfectados, evitando la diseminacin de la infeccin.
En individuos con inmunodeficiencia como la producida por infeccinpor VIH,hay falta de formacin de granuloma y no se restringe la
movilizacin del macrfago infectado, resultando en la tuberculosismiliar o de diseminacin hematgena.
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Manifestaciones
clnicas. Debilidad
Malestar general
Perdida de peso
Perdida del apetito
Fiebre de predominio visceral
Sudoracin nocturna
El compromiso particular pulmonar
caractersticamente se asocia a tos hemoptoica(tos con expectoracin y presencia de sangre)Dolor Torxico
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Formas Clnicas
La entrada del bacilo al organismo produce la PRIMO-INFECCION TUBERCULOSA, con lesiones generalmentelimitadas, pero con persistencia de bacilos en formalatente, sin multiplicacin, pero que se expresan en unaprueba de tuberculina positiva en pacientes asintomticos.
Estas lesiones pueden permanecer inactivasel resto de lavida, o sufrir reactivacinposterior cuando el estadoinmune del husped lo permita.
La mayor parte de los casos de ENFERMEDADTUBERCULOSA son producidos por la reactivacinendgena y menos frecuentemente por nueva infeccin oinfeccin exgena, la cual puede ser reconocida por lacaracterizacin del genotipo delM.tuberculosis.
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Presentaciones clnicas Tuberculosis pulmonar.
Tuberculosis menngea.
Tuberculosis extra pulmonar.
Tuberculosis milliar.
Tuberculosis linftica.
Tuberculosis genitourinaria.
Tuberculosis gastrointestinal.
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Formas Clnicas
L a forma pulmonar es a mas frecuente, pero el compromiso extrapulmonares la mas frecuente en pacientes con algn factor de inmunosupresin.
Las manifestaciones clnicas de la tuberculosis pueden ser:
Sistmicasrelacionadas con la infeccin por s misma (fiebre, malestargeneral, prdida de peso, diaforesis nocturna, anorexia, adinamia, anemia,leucocitosis o leucopenia.
Localesdeterminadas por el rgano o sistema comprometido.
Metablicascomo hiponatremia por secrecin inapropiada de hormonaantidiurtica y anormalidades neurosicolgicas como depresin.
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Patognesis en Tuberculosis
10% de personas que se infectan con Tb y tienen unsistema inmune normal desarrollarn Tb en algnmomento de su vida
Pacientes con HIV tienen el mayor riesgo dedesarrollar Tb, 7-10% cada ao
Otras patologas tambin incrementan el riesgopara que la infeccin progrese a enfermedad.
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El Panorama Actual de la Tuberculosis en el
Mundo
Un tercio de la poblacin mundial est infectado conel baciloM. tuberculosis.
7.5 millones de casos nuevos por ao
Se presentan 2,8 millones de muertes por ao
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Problema Actual
Aumento en el nmero de casos
Fallas en los programas de salud pblica que manejan lavigilancia de casos y controles
La no supervisin del tratamiento (TAS-DOTS)
Retardo en el diagnstico tanto clnico comomicrobiolgico
Aumento de la resistencia a medicamentos tradicionales
Disminucin de las posibilidades teraputicas
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MDR - XDR
MDR: aislamiento resistente al menos a isoniazida yrifampicina
XDR: aislamiento MDR con resistencia a la quinolona (ofloxacina, ciprofloxacina) y algunos de losinyectables: kanamicina, amikacn o capreomicina
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Plan Nacional de Salud pblicaColombia 2007-2010
Estrategias para disminuir los riesgos para las
enfermedades transmisibles y las zoonosis:
Implementar el Plan EstratgicoColombia Libre de TB 2006-2015
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Metas Mundiales y Adoptadas en losNiveles Nacionales
2005:
Diagnosticar al 70% de los casos TBP Bk+
Curar al 85% de los casos TBP Bk+
2015 (objetivos de desarrollo del milenio)
Disminuir de forma significativa la prevalencia ymortalidad
2050
Eliminar la TB como un problema de saludpblica (
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Desafos del Control de TB
Pobreza Desnutricin
Poblaciones vulnerables
Indgenas
Desplazados
Poblacin carcelaria y penitenciaria
Coinfeccin TB/VIH MDR- XDR TB
Reformas del sector salud
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Niveles de LaboratorioNivel I:
Recoge muestras y realiza baciloscopia y remite muestras a nivelsuperior.
Nivel II: Realiza baciloscopia
Cultivos en medios a base de huevo
IdentificaM. tuberculosis
Pruebas de sensibilidad a primera lnea
Nivel III: Mismos procesos del nivel II mas:
Mtodos de cultivo diferentes a a LJ O OK
Identificacin de MNT
Sensibilidad a medicamentos de primera y segunda lnea
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DIAGNOSTICO
PRUEBA DE
TUBERCULINA
RADIOGRAFIA DE
TORAX
MICROBIOLOGIA
Baciloscopia
Cultivo
Tcnicas moleculares
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Elementos en el Diagnstico de
Tuberculosis
SINTOMTICOS RESPIRATORIOS
Historia Clinica
Examen fisico
tuberculina
Estudios radiolgicos
Baciloscopia: Examen directo con coloracin parabacilos cido alcohol resistentes
Cultivo
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Proceso de la Muestra en el Laboratorio
+
CDMGIT
Centrifugacin 4C
Incubacin
IdentificacinFenotpica-Genotpica
MGIT LJ
AR
PulmonaresDescontaminacin:
NaOH 4%Mucoltico: N-acetyl cistena
Estriles siembradirecta
Sedimento
Inocular
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PulmonaresDecontaminacin +
CD MGIT
Extra-pulmonares
Muestra
Centrifugacin
Incubacin
Identificacin
MGIT LJAR
AR
Proceso de las muestras
KY
Incubacin 36C
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Adenosin Deaminasa (ADA)
Citoquinas
Enzima producida por linfocitos Evaluada extensamente en tuberculosis pleural, peritoneal,
meningitis
Citoquinas: Interferon y TNF
Mtodos rpidos, simples, no invasivos Poca precisin si se utilizan como nica prueba
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PRUEBA DE TUBERCULINA
INYECCCION INTRADERMICA:
SU POSITIVIDAD INDICA:
Seguridad de proteccin
Vacunacin previa
Riesgo de desarrollar enfermedad por reactivacin
INDURACION MAYOR DE 10 mm de dimetro, consintomatologa Enfermedad actual.
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DIAGNOSTICO
POSITIVA +10 mm
DUDOSO 5-9 mm
Tiempo de
Lectura 72 horas
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MUESTRAS PARA INVESTIGAR
Mycobacterium ESPUTO
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
ORINA BIOPSIAS
MUESTRAS DE PIEL
ASPIRADOS BROCOALVEOLARES
OTROS LIDQUIDOS ORGANICOS
PIEL
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MEDIOS DE CULTIVO
INVESTIGACION DE MICOBATERIAS
LOWENSTEIN JENSEN
OGAWA KUDOH STONENENBRING
MIDDLEBROOK
AGAR y CALDOS 7H9 -7H10 Y 7H11.
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Factor CordnM.tuberculosis
Agar CDFactor CordnM.tuberculosis
Colonia MTB en LJ
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Colonia MTB en LJ
Niacina
+ -
Reduccin de Nitratos
+ -+
Cat 68CPirazinamidasa
Pruebas bioqumicas
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Mtodos para Deteccin Rpida de
M. tuberculosisa partir de la Muestra
Amplificacin de cidosnuclecos Sistemas capaces de detectar
pequeas cantidades de materiagentico (secuencias de DNA
PCR (IS6110) Secuenciacin (gen 16S rRNA) Sondas. Genes de resistencia (rpoB, Kat G)
Roche: AmplicorMycobacteriumtuberculosis test
The Gen-Probe AmplifiedMycobacterium tuberculosis Direct Test(MTD)
The BD ProbeTec (multiplex strand
displacement system) INNO-LIPA PCR casera Otros genes de resistencia:MBP64, rpob,
hsp65
PCR sensibilidad en muestras Bk +: 90100% y en muestras Bk-: 6070%
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TRATAMIENTOFARMACOS
ISONIAZIDARIMFAMPICINA
PIRAZINAMIDA
ESTREPTOMICINA
ETHAMBUTOL
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Pruebas de Sensibilidad
Mtodo de las
proporciones
Directa
Indirecta
MGIT 960
Bactec 460*
Alamar Azul
Nitrato Reductasa
Dx Molecular
Genes de resitencia:
Rpob: Rifampicina
KG: Isoniazida
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Mtodo Proporciones directasM. tuberculosis , INH (R), RIF (R), 8 Das
ACD+PNB
ACD+INH ACD+RIF
ACD
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Proporciones Indirecto
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Proporciones Indirecto
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Micobacterifagos Micobacterifagos (D29) s una
metodologa rpida que puedeser aplicada directamente a la
muestra, no requiere deinfraestructura especial y su
costo es bajo. Adems ha sidoaplicado con xito en ladeteccin de resistencia,
especialmente la resistencia arifampicina
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Nuevas Pruebas para el Diagnstico de
Tuberculosis Activa
Las limitaciones de la microscopa y el lentocrecimiento en los medios tradicionales para hacer
diagnstico de infeccin por M. tuberculosis, hahecho que todas las herramientas nuevas estnenfocadas en buscar un a metodologa ideal:
La prueba ideal sera aquella que permitiera una
identificacin temprana del bacilo y el diagnsticorpido de su sensibilidad especialmente laidentificacin de los aislamientos MDR
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PRESENCIA DE BAAR Y PMN
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Mtodos para Aislamiento de
Micobacterias Coloracin para BAAR:
Auramina Rodamina (AR) Kinyoun
Cultivo: Lowenstein-Jensen (LJ) Middlebrook 7H11
(capa delgada: CD) Sistema MGIT:
Positivos: Subcultivos a CD Coloracin para BAAR
32C - 37C
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MICOBACTERIAS ATIPICAS
MYCOBACTERIAS
ATIPICAS
CARACTERISTICAsMORFOLOGIA COLONIASPRODUCCION DE PIGMENTO
VELOCIDAD DE CRECIMIENTO
CUADRO CLINICOINFECCION PULMONARADENITIS CERVICALES
INFECCIONES EN PIEL
INFECCIONES TEJIDOS
BLANDOS
DIAGNOSTICOCLINICO
RADIOLOGICO
MICROBIOLOGICO
MOLECULAR
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PARAMETROS PARA CLASIFICACION
1. MORFOLOGIA DE COLONIAS
2. PRODUCCION PIGMENTO FOTO Y ESCOTO
3. VELOCIDAD DE CRECIMIENTO
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Grupos Establecidos
GRUPO I Fotocromogenas GRUPO II Escotocromogenas
GRUPO III No fotocromogenas
GRUPO IV Crecedores rapidos
Crecedores lentos.
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Clasificacin de Micobacterias segn el riesgo de
infeccin en humanos*
Grupo Riesgo IM. gordonae M. tokaiense M. flavescens
M. smegmatis M. gastri, M. terrae
M. mucogenicum M. chitae M. parafortuitum
M. hassiacum M. triplex M. phlei
M. hiberniae M.triviale M. obuense
M. hodleri M. vaccae. M. confluentis.
M. nonchromogenicum, M. porcinum ,M. cookii
M. Interjectum M. branderi M. gilvum
M. aurum M. madagascariense M. sphagniM. Moriokaense M. neoaurum . M.gadium
Grupo Riesgo II M. celatum ,M. chelonae ,M. fortuitum ,M. avium,M. abscessus, M. xenopi, M. malmoense,
M. intracellulare, M. haemophilum, M. kansasii
M. paratuberculosis, M. genavense
M. marinum, M. ulcerans, M. peregrinum,M. scrofulaceum, M. szulgai
Grupo Riesgo IIIM. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti,
M leprae
*Pract ical handbook fo r the phenotypic and genotyp ic ident i f icat ion of mycob acter ia
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Toma de Muestra Muestras recomendadas:
Biopsias En tubo tapa rosca y estril (seco)
Material obtenido por puncin Tubo tapa rosca y estril
Muestras No recomendadas
Aplicadores de algodn
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Recomendaciones Confirmar diagnstico de infeccin por MNT
siempre con cultivos, con la identificacin de laespecie
Correlacionar los resultados del laboratorio conotros hallazgos (epidemiologa, clnica,histopatologa)
Realizar pruebas de sensibilidad
Terapia con antibiticos especfica + drenaje y/oreseccin
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Clasificacin Fenotpica:
Tiempo de crecimiento Caractersticas morfolgicas
Produccin de pigmento
Morfologa de colonia Reacciones bioqumicas HPLC (perfil de cidos miclicos)
Genotpica: Deteccin de regiones altamente conservadas dentro del genoma
Deleciones, inserciones que son especie especficas Clasificacin por secuenciacin del gen 16S rRNA PCR del gen hsp 65con Enzimas de restriccin (PRA)
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Lesiones
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Toma de Muestras
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Microcolonias NT
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Identificacin Fenotpica
Mic
rocolonias
M.fortui tum M.chelonae
M.tuberculosis
M.avium
M.tuberculosis
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Cromatografa Lquida de Alta Presin
HPLC HPLC analiza la
composicin de los cidosmiclicos de la pared de la
micobacteria, cada especietiene un perfil especficode cidos miclicos. Es un
mtodo con altasensibilidad y
especificidad. Sulimitacin los altos costosdel equipo y personal
altamente especializado.
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Identificacin inicial
Tiempo decrecimiento
No cromgeno:No produce pigmento
Fotocromgeno:Produce pigmento en presencia de luz
>7 das: LENTO< 7 das: RPIDO
Escotocromgeno:Produce pigmento en luz y oscuridad
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Identificacin FenotpicaArylsulfatasa
Positiva Negativa
R. Nitratos
Positivos Negativos
NaCl
Positivo Negativo
Manitol
Positivo negativo
M. peregrinum M. fortut i tum
Positivo
M. chelonae
M. abscessu s
Cto. 45C
Positivo Negativo
M. smegmatis M. chitae
Cto. 32C
Crecedores Rpidos-No pigmentados
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Identificacin FenotpicaNitratr Reduction
Positive Negative
UreaseGrow NaCl
Negative
M. gordonae
Positive
M. scrofulaceum
Grow 45Cpositive
M. xenopi
Negative
Positive
M. flavesc ens*
M. szulg ai
Crecedor Lento - Escotocromgeno
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Identificacin Fenotpica
Nitrate Reduction
Positive Negative
Urease
Positive Negative
M. asiat icumTween H
Positive Negative
M. marinum M. simiae
Tellurite R
Positive Negative
M. Szulgai* M. kansasii
Crecedor Lento - Fotocromgeno
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Identificacin Fenotpica
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Cultivos Rpidos en Medio Lquido Estos sistemas miden cambios en la presin de gases como la
produccin de dioxido de carbono, el consumo de oxigeno. Hacen un monitoreo continuo del cultivo
Multiples estudios han mostrado las ventajas de estos sistemas en elaumento en el porcentaje de recuperacin La disminucin en el tiempo de crecimiento Disminucin de el % de contaminacin.
Septi-Chek
MGIT 960 (Tubo Indicador de Crecimiento de Micobacterias) MGIT manual Bactec 460 * BACTEC 9000MB. MB/BacT
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Mtodos para Realizar Diagnstico de Infeccin
por Micobacterias Coloracin para BAAR: (Se:45-70%)
ZN Kinyoun Auramina-Rodamina
Cultivos: Medios a base de huevo (LJ- OK) Medios con frmula definida:
(Middlebrook: 7H9-7H10-7H11-7H12*)
Sistemas automatizados Bactec 460*- MGIT (Becton Dikison)
Hemocultivos HPLC
Moleculares Sondas PCR
http://127.0.0.1:1818/chaps/17FF5 -
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GRACIAS POR SU
ATENCION.