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Fecundación
JA. Cardé, PhDBiol 3030 – Lab Biología del DesarrolloUniversidad de Puerto Rico - Aguadilla
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Objetivos
• Establecer las finalidades de la fecundación• Repasar las estructuras de los gametos• Repasar la reacción acrosomal• Inducir liberación de gametos en erizos de mar• Incubar gametos de erizos para observar y
estudiar fecundación y desarrollo temprano
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Fecundación
• Proceso por el cual los gametos (óvulo y espermatozoide) se funden
• Comienzo de un nuevo individuo
• Propósitos– Sexo: combinación de genes
provenientes de ambos padres– Reproducción: la generación
de un nuevo organismo
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Fecundación: 4 eventos generales
• Contacto y reconocimiento entre espermatozoide y ovulo (especie-específico)
• Regulación de la entrada del espermatozoide en el óvulo.– polispermia
• Fusión del material genético• Activación del metabolismo del óvulo para
iniciar el desarrollo
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Estructura: Espermatozoide• Cabeza
– Núcleo (n)– Acrosoma (saco de enzimas)– Proceso acrosomal: actina
• Pieza media– Mitocondrias - ATP
• Cola– Flagelos – propulsión– Axonema – (9+2)– Tubulina y dineína– Kartagener Triad
– Capacitación
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Estructura: Ovulo• Citoplasma• Nutrición (VTG)• Síntesis de proteínas
(mRNA, tRNA, rRNA)• Factores morfogenéticos
(TF)• Protección (Filtros UV,
enzimas de reparación, Abs
• Pronúcleo: (n o 2n)
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Ovocito: membrana• Rodea el ovocito• Reconociemiento especie-específica• Proteccion, atracción• Corteza• Actina-microvillosidades• Granulos corticales (enzimas , mucopolisacaridos)• Cumulus (nutricion)• Zona pellucida (matriz) • Corona radiata
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Fecundación
• Quimiotaxis (moleculas solubles)• Exocitosis (acrosomal)• Binding • Paso a traves de la matriz extracelular• Fusión de membranas
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Polispermia como se evita?Reacción Cortical
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Reacción Acrosomal/ Cortical
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Resúmen
• Reacción Acrosomal/Cortical (Animación)
• Reacción Cortical Erizo (Movie)
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Óvulo: Citoplasma:Segmentación
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Segmentación• Holoblastica– Primeras dos
meridionales– Tercera: ecuatorial– Meridional
• Mesomeros (8 cells)• Micromero • Macromeros• Blastula
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Gastrulación
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Inducción - Recolección
• KCl 0.5M• Angulo• Aguja #25, #30• 100-200 ul/pul• Agitar• Colocar en
reposo• Diluciones
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Fecundación
• Gota de óvulos• Gota de espermatozoides• Observar• Documentar
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Desarrollo Temprano
Etapa Tiempo aproximadoMembrana de fecundación
2-5 min
1ra segmentación 50-75 min2da segmentación 75-100 min3ra segmentación 100-145 min
Blastula 6 horasGastrula 12-20 hrs
Larva equinopluteus 24-48 hrs
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Otros
• Tinción vital• Efectos cromosomicos en el Desarrollo– Diluciones y/o Polispermia