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Fijación y decalcificación biopsias médula ósea Blanca Palomeque Castro * , Alfredo Ramos Pastor * , Gima Varona Esquivel ** * Hospital Universitario Príncipe de Asturias (HUPA) Alcal á de Henares. Madrid ESPAÑA ** Hospital Universitario Guadalajara ESPAÑA Resumen Son varios los motivos que nos han llevado a proponer este foro de discusi ón sobre distintos métodos de fijación y decalcificación de biopsias de médula ósea(BMO): - Un buen procesamiento de estas muestras es fundamental para el diagnóstico de las patologías del sistema hematopoyético ( en especial neoplasias). - Cada vez es mayor el número de BMO que llegan a los Servicios de Anatomía Patológica, por lo que es conveniente encontrar un m étodo que, además de eficaz, pueda integrarse lo m ás posible en la rutina del laboratorio. - Es un material escaso sobre el que no es factible realizar "experimentos" sin unas m ínimas garantías de obtener resultados de calidad. - El hecho de tener que aplicar sobre estas biopsias un procedimiento agresivo como es la decalcificaci ón, nos obliga a ser rigurosos durante todo el procesamiento y a realizar las m ínimas manipulaciones necesarias. Por otra parte, la necesidad cada vez mayor de utilizar t écnicas inmunohistoquímicas, restringe las posibilidades, por tener que preservar los ant ígenos. - La fijación y decalcificación de BMO es uno de los procedimientos con mayores variaciones entre los distintos laboratorios, desde kits comerciales basados en fijación en B5 y decalcificación en EDTA, hasta fijación formólica y decalcificación con ácidos orgánicos en "recetas personalizadas". Por tanto, pensamos que puede ser muy útil para todos la puesta en común de los procedimientos usados en nuestros laboratorios, comentando si se ha cambiado de método, el porqué de dicho cambio en su caso, y las ventajas e inconvenientes que apreciamos en los m étodos utilizados. Para comenzar, exponemos la sistem ática utilizada en nuestro laboratorio: Habitualmente se reciben dos muestras de cada paciente: - Un coágulo procedente de aspirado de m édula ósea, que se recibe en formol tamponado; a la recepción se cambia este fijador por B5 comercial, dejándolo fijar 4 horas, posteriormente se pasa a etanol 70 en el que se conserva hasta el momento de su procesado. - La otra muestra es un cilindro óseo extra ído de cresta iliaca de entre 2-4 cm de longitud y 0,1-0,2 cm de diámetro. Se recibe tambi én en formol tamponado y se deja fijar hasta el día siguiente a primera hora en que se sustituye el fijador por una solución decalcificadora (Formol salino-Ac ético) compuesta por: -Agua destilada................ hasta 1l. -Cloruro sódico................ 8.5 gr -Acido acético.................100 ml -Formol puro...................100 ml Al final de la jornada se comprueba el estado de decalcificaci ón de la pieza, pasando a procesarla si es posible. En caso de seguir calcificada, se coloca de nuevo en formol y al d ía siguiente se comienza de nuevo el procedimiento. (También puede dejarse en decalcificador toda la noche, pero a veces el tiempo ha resultado excesivo y se han alterado notablemente las c élulas) Aunque en general se obtienen buenos resultados, tanto en tinciones de rutina como en inmunohistoquímica, los continuos cambios de soluciones y el tener varios cilindros en distintas fases del proceso (pues todos los d ías llegan muestras), hacen engorroso el procedimiento. Otro procedimiento usado ha sido fijar y decalcificar simultáneamente en líquido de Bouin -Acido pícrico a saturaci ón en agua destilada..........750 ml -Formol puro............................ 250 ml -Acido acético glacial................. 50 ml Una vez decalcificada la muestra debe lavarse en etanol 70 hasta que desaparezca el color amarillo. Las muestras pueden mantenerse decalcificando en líquido de Bouin 2 ó 3 días con buenos resultados en t écnicas de rutina, no hemos realizado técnicas inmunohistoquímicas. Presentamos cuatro fotografías de una biopsia seccionada por la mitad en cada uno de los cuales se utiliz ó uno de los métodos expuestos de fijación y decalcificación. Como se puede observar en la muestra fijada en Bouin (fotos 3,4) hay mayor cantidad de material y su calidad también es superior. Pensamos que puede ser debido a una mejor decalcificaci ón y por tanto mayor integridad de la pieza al corte en el microtomo. Esperamos vuestros comentarios, especialmente si teneis experiencia en la aplicación de técnicas inmunohistoquímicas con BMO fijadas y decalcificadas en Bouin. Pá gina 1 de 3 7º Congreso Virtual Hispanoamericano de Anatomí a Patol ó gica 23/10/2005 http://www.conganat.org/7congreso/vistaImpresion.asp?id_trabajo=510

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Page 1: Fijación y decalcificación biopsias médula ósea · Fijación y decalcificación biopsias médula ósea Blanca Palomeque Castro*, Alfredo Ramos Pastor *, Gima Varona Esquivel**

Fijación y decalcificación biopsias médula ósea

Blanca Palomeque Castro*, Alfredo Ramos Pastor *, Gima Varona Esquivel **

* Hospital Universitario Príncipe de Asturias (HUPA) Alcal á de Henares. Madrid ESPAÑA ** Hospital Universitario Guadalajara ESPAÑA

Resumen

Son varios los motivos que nos han llevado a proponer este foro de discusi ón sobre distintos m étodos de fijaci ón y decalcificación de biopsias de m édula ósea(BMO):

 - Un buen procesamiento de estas muestras es fundamental para el diagnóstico de las patolog ías del sistema hematopoy ético ( en especial neoplasias).  - Cada vez es mayor el n úmero de BMO que llegan a los Servicios de Anatomía Patológica, por lo que es conveniente encontrar un m étodo que, adem ás de

eficaz, pueda integrarse lo m ás posible en la rutina del laboratorio.  - Es un material escaso sobre el que no es factible realizar "experimentos" sin unas m ínimas garantías de obtener resultados de calidad.  - El hecho de tener que aplicar sobre estas biopsias un procedimiento agresivo como es la decalcificaci ón, nos obliga a ser rigurosos durante todo el

procesamiento y a realizar las m ínimas manipulaciones necesarias. Por otra parte, la necesidad cada vez mayor de utilizar t écnicas inmunohistoqu ímicas, restringe las posibilidades, por tener que preservar los ant ígenos.

- La fijación y decalcificación de BMO es uno de los procedimientos con mayores variaciones entre los distintos laboratorios, desde kits comerciales basados en fijación en B5 y decalcificaci ón en EDTA, hasta fijaci ón formó lica y decalcificaci ón con ácidos orgánicos en "recetas personalizadas".

   Por tanto, pensamos que puede ser muy útil para todos la puesta en común de los procedimientos usados en nuestros laboratorios, comentando si se ha

cambiado de m étodo, el porqué de dicho cambio en su caso, y las ventajas e inconvenientes que apreciamos en los m étodos utilizados.    Para comenzar, exponemos la sistem ática utilizada en nuestro laboratorio: Habitualmente se reciben dos muestras de cada paciente:   - Un coágulo procedente de aspirado de m édula ósea, que se recibe en formol tamponado; a la recepción se cambia este fijador por B5 comercial, dejándolo

fijar 4 horas, posteriormente se pasa a etanol 70 en el que se conserva hasta el momento de su procesado. - La otra muestra es un cilindro óseo extra ído de cresta iliaca de entre 2 -4 cm de longitud y 0,1-0,2 cm de di ámetro. Se recibe tambi én en formol

tamponado y se deja fijar hasta el d ía siguiente a primera hora en que se sustituye el fijador por una solución decalcificadora (Formol salino-Ac ético) compuesta por:               -Agua destilada................ hasta 1l. 

-Cloruro sódico................ 8.5 gr -Acido acético.................100 ml -Formol puro...................100 ml

  Al final de la jornada se comprueba el estado de decalcificaci ón de la pieza, pasando a procesarla si es posible. En caso de seguir calcificada, se coloca de

nuevo en formol y al d ía siguiente se comienza de nuevo el procedimiento. (También puede dejarse en decalcificador toda la noche, pero a veces el tiempo ha resultado excesivo y se han alterado notablemente las c élulas) Aunque en general se obtienen buenos resultados, tanto en tinciones de rutina como en inmunohistoquímica, los continuos cambios de soluciones y el tener varios cilindros en distintas fases del proceso (pues todos los d ías llegan muestras), hacen engorroso el procedimiento.

   Otro procedimiento usado ha sido fijar y decalcificar simultáneamente en l íquido de Bouin  

-Acido pícrico a saturaci ón en agua destilada..........750 ml -Formol puro............................ 250 ml -Acido acético glacial................. 50 ml

    Una vez decalcificada la muestra debe lavarse en etanol 70 hasta que desaparezca el color amarillo. Las muestras pueden mantenerse decalcificando en

l íquido de Bouin 2 ó 3 d ías con buenos resultados en t écnicas de rutina, no hemos realizado t é cnicas inmunohistoquímicas.   Presentamos cuatro fotografías de una biopsia seccionada por la mitad en cada uno de los cuales se utiliz ó uno de los métodos expuestos de fijación y

decalcificaci ón. Como se puede observar en la muestra fijada en Bouin (fotos 3,4) hay mayor cantidad de material y su calidad tambi én es superior. Pensamos que puede ser debido a una mejor decalcificaci ón y por tanto mayor integridad de la pieza al corte en el microtomo. Esperamos vuestros comentarios, especialmente si teneis experiencia en la aplicación de técnicas inmunohistoqu ímicas con BMO fijadas y decalcificadas en Bouin.

 

Página 1 de 37º Congreso Virtual Hispanoamericano de Anatomía Patológica

23/10/2005http://www.conganat.org/7congreso/vistaImpresion.asp?id_trabajo=510

Page 2: Fijación y decalcificación biopsias médula ósea · Fijación y decalcificación biopsias médula ósea Blanca Palomeque Castro*, Alfredo Ramos Pastor *, Gima Varona Esquivel**

  Fotografía 1: Corte de médula osea fijada en formol-acético. Tinci ón hematoxilina -eosina.

  Fotografía 2: Corte de médula osea fijada en formol-acético. Tinci ón de giemsa.

Página 2 de 37º Congreso Virtual Hispanoamericano de Anatomía Patológica

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Page 3: Fijación y decalcificación biopsias médula ósea · Fijación y decalcificación biopsias médula ósea Blanca Palomeque Castro*, Alfredo Ramos Pastor *, Gima Varona Esquivel**

 

  Fotografía 3: Corte de médula osea fijada en liquido de Bouin. Tinción de hematoxilina-eosina.

  Fotografía 4: Corte de médula osea fijada en liquido de Bouin. Tinción de giemsa.

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Página 3 de 37º Congreso Virtual Hispanoamericano de Anatomía Patológica

23/10/2005http://www.conganat.org/7congreso/vistaImpresion.asp?id_trabajo=510