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RFIT-ASY-0124

RFIT-ASY-0125

FilmArray® Respiratory Panel (RP)

Manual de instrucciones

Para su uso con el sistema de carga basado en el vial de inyección

de FilmArray

BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD i

Atención al cliente y soporte técnico para usuarios de EE. UU.

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se puede reproducir ni transmitir de ninguna forma o en ningún medio, ya sea electrónico o mecánico, para ningún

fin, sin el consentimiento expreso otorgado por escrito de BioFire Diagnostics, LCC.

Programa FilmArray, Detector, y los módulos del programa de Metacall © 2002-2016 BioFire Diagnostics, Inc.

BioFire Diagnostics, BioFire, el logotipo de BioFire, FilmArray y LCGreen son marcas comerciales de BioFire

Diagnostics, LLC o BioFire Defense, LLC y son marcas comerciales registradas en Estados Unidos.

El resto de nombres y marcas de productos que aparecen en este manual son marcas comerciales o marcas

comerciales registradas de sus respectivos propietarios.

La adquisición de este producto incluye una licencia limitada no transferible en virtud de reivindicaciones específicas

de una o más patentes estadounidenses que se muestran en el sitio web de BioFire Diagnostics

(http://www.biofiredx.com/LegalNotices/) y que son propiedad de BioFire y la University of Utah Research Foundation

http://www.biofiredx.com/LegalNotices/

BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD ii

TABLA DE SÍMBOLOS

Los siguientes símbolos pueden aparecer en los componentes del kit FilmArray Respiratory Panel o en este Manual

de instrucciones. Utilice las definiciones siguientes como una pauta para interpretar los símbolos.

Tabla de símbolos

Fabricante

Número de catálogo

Fecha de caducidad

(AAAA-MM-DD)

Consulte las

Instrucciones de uso

Código de lote

(número de lote)

Límite de temperatura

Conformidad de la

Unión Europea

Número de serie

n

Contiene suficiente para

<n> pruebas

Producto sanitario

para diagnóstico

in vitro

Mantener alejado de

la luz del sol

No reutilizar

Daño ocular grave,

cat. 1

Toxicidad aguda,

cat. 4 & Irritación

cutánea, cat. 2

No usar si el embalaje

está dañado

Representante autorizado en la Comunidad Europea

BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD iii

ETIQUETADO ELECTRÓNICO

Se puede acceder a la versión en línea del manual de este producto en el sitio web www.online-ifu.com/KEY-CODE.

El código clave del producto (KEY-CODE) se encuentra en la etiqueta exterior del producto al final de la dirección

URL. El código clave (KEY-CODE) para este manual de instrucciones también se incluye a continuación. Además,

puede ponerse en contacto con el servicio de atención al cliente por teléfono, fax, correo electrónico o correo postal

para solicitar una copia en papel.

Kit de 30 y 6 paquetes de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE IVD

(instrucciones de uso)

https://www.online-ifu.com/ITI0040


(guía rápida)



(hoja de información de seguridad)


BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD iv

TABLA DE CONTENIDO

TABLA DE SÍMBOLOS ..................................................................................................................................................................... II

ETIQUETADO ELECTRÓNICO .......................................................................................................................................................... III

TABLA DE CONTENIDO .................................................................................................................................................................. IV

NOMBRE Y USO PREVISTO ............................................................................................................................................................. 2

FILMARRAY RESPIRATORY PANEL ................................................................................................................................................................... 2

RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA....................................................................................................................................... 3

RESUMEN DE ORGANISMOS DETECTADOS ......................................................................................................................................................... 4

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO .................................................................................................................................................................... 6

MATERIALES PROPORCIONADOS ................................................................................................................................................... 7

MATERIALES NECESARIOS PERO NO PROPORCIONADOS ................................................................................................................ 8

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES .................................................................................................................................................. 8

PRECAUCIONES GENERALES ........................................................................................................................................................................... 8

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD ...................................................................................................................................................................... 8

PRECAUCIONES EN EL LABORATORIO ............................................................................................................................................................... 9

PRECAUCIÓN RELATIVA A LA NOTIFICACIÓN A LAS AUTORIDADES DE SALUD PÚBLICA EN LOS ESTADOS UNIDOS ............................................................. 11

ALMACENAMIENTO, MANIPULACIÓN Y ESTABILIDAD DE REACTIVOS ........................................................................................... 11

RECOGIDA Y PREPARACIÓN DEL ESPÉCIMEN ................................................................................................................................ 11

PROCEDIMIENTO ......................................................................................................................................................................... 12

PREPARACIÓN DEL CARTUCHO ..................................................................................................................................................................... 12

HIDRATACIÓN DEL CARTUCHO ...................................................................................................................................................................... 12

PREPARACIÓN DE LA MEZCLA DE MUESTRA ..................................................................................................................................................... 13

CARGA DE LA MEZCLA DE MUESTRA .............................................................................................................................................................. 13

PRUEBA DEL CARTUCHO ............................................................................................................................................................................. 14

CONTROL DE CALIDAD ................................................................................................................................................................. 16

CONTROLES DEL PROCESO ........................................................................................................................................................................... 16

SUPERVISIÓN DEL RENDIMIENTO DEL SISTEMA DE PRUEBA ................................................................................................................................. 17

BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD v

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS ....................................................................................................................................... 17

INTERPRETACIÓN DEL ENSAYO ...................................................................................................................................................................... 17

INTERPRETACIÓN DEL ORGANISMO ............................................................................................................................................................... 18

INFORME DE LA PRUEBA FILMARRAY RP ........................................................................................................................................................ 20

CAMPO CONTROL ..................................................................................................................................................................................... 20

RESULT SUMMARY (RESUMEN DE RESULTADOS) ............................................................................................................................................. 23

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO ........................................................................................................................................... 24

VALORES ESPERADOS .................................................................................................................................................................. 26

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO ........................................................................................................................................... 30

RENDIMIENTO CLÍNICO ............................................................................................................................................................................... 30

LÍMITE DE DETECCIÓN ................................................................................................................................................................................ 42

REACTIVIDAD ANALÍTICA (INCLUSIVIDAD) ....................................................................................................................................................... 43

ESPECIFICIDAD ANALÍTICA (REACTIVIDAD CRUZADA Y EXCLUSIVIDAD) ................................................................................................................... 55

CONTAMINACIÓN CRUZADA Y ARRASTRE ........................................................................................................................................................ 59

REPRODUCIBILIDAD ................................................................................................................................................................................... 60

REPETIBILIDAD .......................................................................................................................................................................................... 82

INTERFERENCIAS ....................................................................................................................................................................................... 83

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO DE FILMARRAY RP EN FILMARRAY 2.0 Y FILMARRAY TORCH ................................................ 85

COMPARACIÓN CLÍNICA .............................................................................................................................................................................. 85

REPRODUCIBILIDAD ................................................................................................................................................................................... 87

REFERENCIAS............................................................................................................................................................................... 89

INFORMACIÓN DE GARANTÍA ...................................................................................................................................................... 90

BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 2

NOMBRE Y USO PREVISTO

FilmArray Respiratory Panel

El FilmArray Respiratory Panel (RP) es una prueba multiplexada de ácido nucleico prevista para utilizar con los

sistemas FilmArray para la detección e identificación cualitativa y simultánea de múltiples ácidos nucleicos de virus y

bacterias respiratorios en frotis nasofaríngeos (FNS) procedentes de individuos con sospecha de infecciones en el

tracto respiratorio. Mediante el FilmArray RP se han identificado los siguientes tipos y subtipos de organismos:

adenovirus, coronavirus 229E, coronavirus HKU1, coronavirus NL63, coronavirus OC43, metapneumovirus humano,

gripe A, gripe A subtipo H1, gripe A subtipo H3, gripe A subtipo H1-2009, gripe B, virus paragripal 1, virus paragripal 2,

virus paragripal 3, virus paragripal 4, rinovirus/enterovirus humano, virus respiratorio sincitial Bordetella pertussis,

Chlamydophila pneumoniae, y Mycoplasma pneumoniae. La detección e identificación de ácidos nucleicos específicos

de virus y bacterias procedentes de individuos que presenten signos y síntomas de una infección respiratoria ayuda al

diagnóstico de la infección respiratoria cuando se usa junto con otra información clínica y epidemiológica. Los

resultados de esta prueba no se deberán usar como la base exclusiva del diagnóstico, del tratamiento o de otras

decisiones de gestión. Los resultados negativos en el marco de una enfermedad respiratoria pueden deberse a

infección por patógenos no detectados mediante esta prueba o bien, que la infección de las vías respiratorias

inferiores no se detecta en un espécimen de frotis nasofaríngeo. Los resultados positivos no descartan una infección

simultánea por otros organismos: el agente o agentes detectados mediante FilmArray RP pueden no ser la causa

precisa de la enfermedad. Cuando se evalúa a un paciente con una posible infección de las vías respiratorias, pueden

ser necesarias pruebas de laboratorio adicionales (p. ej., cultivos de bacterias y virus, inmunofluorescencia y

radiografías).

Debido al bajo número de especímenes positivos recogidos para algunos organismos durante el estudio

clínico prospectivo, las características de rendimiento para Bordetella pertussis, coronavirus 229E,

coronavirus OC43, gripe A H1, gripe A H3, gripe A H1-2009, gripe B, Mycoplasma pneumoniae, virus paragripal

1, virus paragripal 2, y virus paragripal 4 se determinaron principalmente a partir de especímenes clínicos

retrospectivos. Las características de rendimiento para Chlamydophila pneumoniae se determinaron

principalmente mediante especímenes clínicos artificiales.

Debido a la similitud genética entre el rinovirus humano y el enterovirus humano, el FilmArray RP no puede

diferenciarlos con fiabilidad. Un resultado positivo para rinovirus/enterovirus con FilmArray RP deberá confirmarse con

un procedimiento alternativo (p. ej., cultivo celular o análisis de secuencia).

El ensayo FilmArray RP para el coronavirus OC43 puede tener una reacción cruzada con algunos aislados de

coronavirus HKU1. Un resultado positivo doble puede deberse a reactividad cruzada o puede indicar una infección

simultánea.

Las características de rendimiento para la gripe A se determinaron cuando los virus de gripe A H1-2009, A H1 y

A H3 eran los virus de gripe A predominantes en circulación. El rendimiento de detección de la gripe A puede variar si

hay otras cepas de gripe A en circulación, o aparece un nuevo virus de la gripe A. Si se sospecha infección con un

virus de la gripe A nuevo basándose en criterios clínicos y epidemiológicos actuales de cribado recomendados por las

autoridades de salud pública, los especímenes deberán recogerse con las precauciones correspondientes para el

control de infecciones por nuevos virus virulentos de la gripe y enviarse a las autoridades locales o nacionales para su

análisis. No se debe intentar el cultivo del virus en estos casos si no se dispone de una instalación con nivel de

bioseguridad 3+ (BSL 3+) para recibir y cultivar los especímenes.


RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA

Los patógenos respiratorios causan enfermedad aguda local y sistémica de gravedad variable. Los casos más graves

se producen en niños, ancianos e individuos inmunocomprometidos. Los síntomas respiratorios pueden incluir tos,

flujo nasal, congestión, fiebre, respiración con dificultad, dolor de cabeza y mialgia. Debido a la similitud de

enfermedades causadas por muchos virus y bacterias, es difícil realizar un diagnóstico basándose exclusivamente en

los síntomas clínicos. La identificación de los agentes causantes potenciales proporciona datos para ayudar al médico

a determinar el tratamiento adecuado para el paciente y la respuesta de la salud pública para confinar la enfermedad.

El cartucho FilmArray RP está diseñado para la detección e identificación simultánea de los siguientes virus y

bacterias de las vías respiratorias superiores: adenovirus, coronavirus 229E, coronavirus HKU1, coronavirus NL63,

coronavirus OC43, gripe A (con subtipado para los genes de la hemaglutinina H1, H1-2009 y H3), gripe B,

metapneumovirus humano, virus paragripal 1, virus paragripal 2, virus paragripal 3, virus paragripal 4, virus

respiratorio sincitial, rinovirus/enterovirus, Bordetella pertussis, Chlamydophila pneumoniae, y Mycoplasma

pneumoniae. En la Tabla 1 se proporciona un resumen de las características de estos organismos.

Tabla 1. Patógenos respiratorios detectados en el FilmArray Respiratory Panel

Organismo (abreviatura)

Clasificación (Tipo genómico)

Estación de mayor incidenciaa

Población afectada con mayor frecuencia

Adenovirus (AdV) Adenovirus (ADN) Desde finales del invierno hasta principios del verano

[1]

Todas las edades, personas inmunocomprometidas

[1]

Coronavirus (CoV) 229E, HKU1, NL63, OC43

Coronavirus (ARN) Invierno, primavera[2-3]

Niños, adultos[2-3]

Enterovirus (EV) Picornavirus (ARN) Verano, principios del otoño [4]

Todas las edades[5]

Rinovirus humano (RNV) Picornavirus (ARN) Otoño, primavera[6]

Todas las edades[6]

Metaneumovirus humano (MPVh)

Paramixovirus (ARN) Invierno, principios del verano[7]

Niños[7]

Gripe A (Gripe A) (subtipos H1, H1-2009 y H3)

Ortomixovirus (ARN) Invierno [8]

Todas las edades

[8], 5-20% de la

población estadounidense[9]

Gripe B (Gripe B) Ortomixovirus (ARN) Invierno [8]

Todas las edades

[8], 5-20% de la

población estadounidense[9]

Virus paragripal 1 (VP1) Paramixovirus (ARN) Otoño, periodicidad de 1-2 años[10]

Bebés, niños pequeños, personas inmunocomprometidas

[10]

Virus paragripal 2 (VP2) Paramixovirus (ARN) Otoño, periodicidad de 1-2 años[10]


[10]

Virus paragripal 3 (VP3) Paramixovirus (ARN) Primavera, verano[10]


[10]

Virus paragripal 4 (VP4) Paramixovirus (ARN) Desconocido Todas las edades[11]

Virus respiratorio sincitial (VRS)

Paramixovirus (ARN) Invierno, varía con la localización geográfica

[12-13]

Niños, adultos mayores[12-13]

Bordetella pertussis Bacteria (ADN) Sin máximo estacional Todas las edades[14]

Chlamydophila pneumoniae

Bacteria (ADN) Sin máximo estacional Niños mayores, adultos jóvenes, personas inmunocomprometidas

[15]

Mycoplasma pneumoniae

Bacteria (ADN) Brotes más frecuentes en verano, con periodicidad de 4–7 años

Niños mayores, adultos jóvenes

[16-17]

a según las estaciones en Norteamérica


Resumen de organismos detectados

Adenovirus son un grupo diverso de virus de ADN no encapsulados con siete especies (A a G) clasificadas por su

hemaglutinación y aproximadamente 55 serotipos. Todos los serotipos se han asociado con enfermedades en seres

humanos. Los adenovirus de las especies B, C y E causan enfermedad respiratoria aguda. Los brotes se producen en

instalaciones comunitarias, tales como campamentos militares, instalaciones de atención sanitaria a largo plazo y

hospitales pediátricos de cuidados terciarios, debido a las elevadas tasas de transmisión que se producen en

poblaciones cerradas [18-20]. Los adenovirus (especies A, D, F y G) pueden causar una variedad de enfermedades,

entre las que se incluyen cistitis, gastroenteritis y conjuntivitis [1]. Los adenovirus se propagan durante períodos

prolongados de tiempo y persisten sobre las superficies en estado infectivo [20].

Coronavirus 229E, HKU1, NL63, y OC43. Los coronavirus humanos se caracterizaron como patógenos respiratorios

en la década de los 60 del siglo pasado. Inicialmente se caracterizaron dos variantes serológicas (229E y OC43) y,

recientemente, se han identificado dos coronavirus humanos adicionales (HKU1 y NL63) [2, 21-23]. Estos virus están

asociados con mayor frecuencia a infecciones de las vías respiratorias superiores; sin embargo, también se han

detectado en individuos con infecciones de las vías respiratorias inferiores [2-3, 24]. Los coronavirus se han asociado

con difteria y con la reagudización del asma [2, 22]. La infección por coronavirus se produce con más frecuencia en

invierno y parece que existe una periodicidad epidémica de dos a tres años para las cepas 229E y OC43 [3].

Metapneumovirus humano se descubrió en 2001 como patógeno respiratorio en niños [25]. Estudios adicionales

confirmaron infecciones por MPVh en personas de todas las edades [26]. Los metapneumovirus humanos pertenecen

a la familia Paramyxoviridae [7]. La infección de bebés y niños pequeños está asociada frecuentemente a la

bronquiolitis [7]. Los dos genotipos, A y B, pueden estar en circulación a la vez y no parece que existan diferencias en

lo que respecta a la gravedad de la enfermedad [7].

Gripe A y B son virus de ARN que pertenecen a la familia Orthomyxoviridae. Durante la epidemia anual de gripe, el

5-20% de la población se ve afectada por infecciones de las vías respiratorias superiores con una subida rápida de

fiebre [8]. El tipo dominante de virus de la gripe varía frecuentemente debido a deriva antigénica y desplazamiento

antigénico [27]. Durante la temporada de gripe 2009-10, el virus gripe A H1-2009 fue el virus de la gripe predominante

circulante, siendo responsable de aproximadamente el 99% de las infecciones por gripe notificadas [28] (Tabla 2). El

virus de la gripe A se puede subtipar según los genes de la hemaglutinina (H) y la neuraminidasa (N); los subtipos

H1N1 y H3N2 son las cepas que infectan con mayor frecuencia a los seres humanos. Se han asociado una

enfermedad más grave y una mayor mortalidad con el subtipo H3N2 [27]. En la actualidad se dispone de un mínimo

de cuatro medicaciones antivíricas para el tratamiento de la gripe – amantadina, rimantadina, zanamivir y oseltamivir –

con eficacia específica del tipo y farmacorresistencia que procede de la diseminación de nuevas cepas del virus [27,

29]. Las complicaciones derivadas de la neumonía vírica o bacteriana aumentan la mortalidad debido a infecciones

por gripe [30].

Tabla 2. Proporciones de infecciones por gripe en Estados Unidos clasificadas por subtipo (según informe de los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades de EE. UU.)

Estación de gripe Gripe A

% de gripe A

Gripe B H1 H1-2009 H3

2009-20101,2

99,6% 0,1 99,8 0,1 0,4%

2008-2009 89,4% 13,2 79,9 6,9 10,6%

2007-2008 71% 26,2 0,0 73,8 29%


Estación de gripe Gripe A

% de gripe A

Gripe B H1 H1-2009 H3

2006-2007 79,2% 62,3 0,0 37,7 20,8%

2005-2006 79,7% 8,1 0,0 91,9 20,3%

1 Estación para la que se han incluido los datos clínicos prospectivos descritos en este prospecto

2 Resultados acumulados desde el 30 de agosto de 2009 al 22 de mayo de 2010

Virus paragripales. Los virus paragripales son virus de ARN que pertenecen a la familia Paramyxoviridae. En la

década de los 50 del siglo pasado, se descubrió que los virus paragripales eran patógenos respiratorios diferentes de

los virus de la gripe [10]. Los virus paragripales se dividen en cuatro tipos desde el punto de vista antigénico y

genético. El tipo 4 está subtipado adicionalmente en A y B [10]. El virus paragripal 1 causa epidemias bienales durante

el otoño. Aproximadamente el 50% de casos de difteria se atribuyen a este virus [10]. El virus paragripal 2 tiene una

periodicidad epidémica de uno a dos años, que se puede alternar con brotes del virus paragripal 1 [10]. Los niños de

menos de seis meses son especialmente susceptibles a la infección por el virus paragripal 3. Los brotes se producen

en las unidades de cuidados intensivos neonatales, y las epidemias se producen con mayor frecuencia en primavera y

verano [10]. La infección por el virus paragripal 4 afecta a todos los grupos de edades y no se ha establecido una

periodicidad de la infección [11].

Virus respiratorio sincitial es un virus de ARN que pertenece a la familia Paramyxoviridae, relacionado con los

metapneumovirus humanos y con el virus paragripal [12]. El VRS es la causa más frecuente de enfermedades

respiratorias graves en los bebés, siendo la bronquiolitis aguda la causa principal de hospitalización [12]. Se está

investigando una asociación entre el asma y la infección por VRS [12]. El tratamiento o profilaxis con un anticuerpo

monoclonal humanizado dirigido contra la proteína de fusión del VRS ha demostrado una reducción de la enfermedad

en bebés con un riesgo elevado [12].

Rinovirus y Enterovirus son virus relacionados con el ARN pertenecientes a la familia Picornavirus [6]. Existen más

de 100 serotipos de rinovirus humano en función de la serología de la proteína de la cápsida [6]. Se ha indicado que el

rinovirus es la causa del “catarro común”, pero también puede estar implicado en el desencadenamiento de ataques

de asma y complicaciones graves [6]. Los enterovirus se han dividido en cuatro especies que incluyen un total de

89 serotipos. Los serotipos se pueden asociar con diferentes manifestaciones clínicas, incluidas enfermedades

respiratorias no específicas en bebés o adultos [5].

Bordetella pertussis es el agente causante de la tosferina o pertussis, una enfermedad que se puede prevenir

mediante vacuna y de la cual se debe notificar a las organizaciones de salud pública [31-32]. B. pertussis es una

bacteria gram-negativa con una elevada tasa de infectividad que se puede tratar con varios antibióticos [14]. Se ha

demostrado que la inmunidad inducida por la vacuna disminuye tras 5-10 años. La tosferina se produce con mayor

frecuencia en niños, pero también en adolescentes y adultos, y se han documentado brotes en poblaciones bien

vacunadas debido a la desaparición de la inmunidad [14, 33]. La mayor mortalidad debida a tosferina se produce en

bebés y ancianos [14]. La enfermedad tosferínica temprana (catarral) es no específica, y los signos clásicos de la

tosferina (tos paroxismal, inspiración 'sibilante', emesis posterior a la tos, así como apnea o cianosis en bebés) no se

producen hasta pasadas aproximadamente 2 semanas tras la aparición de los síntomas iniciales. Se sabe que los

síntomas de la infección por B. pertussis varían en función de numerosos factores, entre los que se incluyen: edad,

inmunización o infección previas, anticuerpos adquiridos de forma pasiva y tratamiento antibiótico [14]. No se ha

definido un máximo estacional para la infección por B. pertussis.


Chlamydophila pneumoniae es una bacteria intracelular estricta que produce infecciones respiratorias agudas y es

una causa frecuente de neumonía adquirida en la comunidad [34-35]. Los brotes se producen en colegios, barracones

militares y residencias de ancianos [36]. No se ha definido un máximo estacional para las infecciones por C.

pneumoniae.

Mycoplasma pneumoniae es un agente causante de neumonía atípica adquirida en la comunidad, frecuentemente

en situaciones de brotes [17, 37]. El período de incubación para la infección por M. pneumoniae es de

aproximadamente 1 a 4 semanas [16]. M. pneumoniae no tiene definida una sesión de mayor incidencia, pero las

epidemias muestran una periodicidad de 3-7 años [37].

Principios del procedimiento

El cartucho FilmArray RP es un sistema cerrado desechable que aloja todos los productos químicos necesarios para

aislar, amplificar y detectar ácido nucleico procedente de múltiples patógenos respiratorios contenidos en un único

espécimen de FNS. El componente de plástico rígido (accesorio) del cartucho FilmArray RP contiene los reactivos en

forma liofilizada. La parte de plástico flexible del cartucho está dividido en segmentos individuales (burbujas plásticas)

en los que, mediante las interacciones con los actuadores y sensores del instrumento FilmArray, se llevan a cabo los

procesos químicos necesarios. El usuario del FilmArray RP introduce la muestra en el cartucho FilmArray RP, coloca

el cartucho en el instrumento/Module FilmArray e inicia la prueba. El resto de las operaciones son automáticas.

Se indica a continuación un resumen general del procedimiento de la prueba:

1. Extraiga el cartucho FilmArray de su envase sellado al vacío. Puesto que las soluciones se extraen del

cartucho FilmArray RP por vacío, es importante mantener los cartuchos en su envase protector hasta el

momento de uso.

2. Coloque el cartucho FilmArray RP en la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho

FilmArray). La FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray) está diseñada

para evitar errores gracias a la provisión de instrucciones y pistas visuales en forma de flechas codificadas por

colores para garantizar que el cartucho se cargue correctamente.

3. Cargue la Hydration Solution (Solución de hidratación) en el cartucho FilmArray RP. Cuando se introduce la

Hydration Solution (Solución de hidratación) en el cartucho se rehidratan los reactivos liofilizados contenidos

en el accesorio del cartucho.

4. Mezcle el espécimen FNS con el Sample Buffer (Tampón para muestra). El Sample Buffer (Tampón para

muestra) contiene los reactivos que inactivan las ARNasas de la muestra y estimulan la unión de los ácidos

nucleicos a perlas magnéticas para su aislamiento.

5. Cargue la mezcla de muestra/tampón en el cartucho FilmArray RP. Un control de proceso incluido en el

accesorio del cartucho se introduce en la muestra. El control de proceso vigila todos los procesos críticos que

se producen en el cartucho.

6. Transfiera el cartucho al instrumento/Module e inicie el análisis. Para ayudar a introducir correctamente

el cartucho en el instrumento, el programa FilmArray proporciona animaciones en la pantalla que ilustran

los pasos necesarios para iniciar la prueba.

7. Visualice los resultados en el informe de la prueba al finalizar la prueba.


Se indica a continuación un resumen de las operaciones y procesos que tienen lugar durante una prueba FilmArray:

1. Purificación del ácido nucleico: la purificación del ácido nucleico tiene lugar en las tres primeras burbujas

plásticas del cartucho. La muestra se lisa por agitación (homogeneización de perlas) y el ácido nucleico

liberado se captura, lava y eluye mediante tecnología de perlas magnéticas. Estas etapas requieren

aproximadamente diez minutos y el ruido del equipo homogeneizador de perlas se percibe como un chirrido

agudo durante el primer minuto de funcionamiento.

2. Transcripción inversa y 1a etapa de la PCR Multiplex: puesto que muchos de los patógenos identificados

mediante el cartucho FilmArray RP son virus de ARN, se realiza una etapa de Transcripción inversa (RT) para

convertir el ARN vírico en ADNc antes de la amplificación. La solución de ácido nucleico purificada se

combina con una mezcla maestra precalentada para iniciar la etapa de RT y el termociclado posterior para la

PCR múltiple. El efecto de la 1a etapa de la PCR es enriquecer los ácidos nucleicos diana presentes en la

muestra.

3. 2a etapa de la PCR: los productos de la 1

a etapa de la PCR se diluyen y mezclan con reactivos de PCR

nuevos que contienen un colorante de ADN fluorescente de intercalación (LCGreen® Plus, BioFire Diagnostics,

LLC). Esta solución se distribuye en la matriz de la 2a etapa de la PCR. Los pocillos individuales de la matriz

contienen los cebadores de los diferentes ensayos (cada uno por triplicado) dirigidos a las secuencias

específicas de ácido nucleico de cada uno de los patógenos detectados, así como para el control del material

de la plantilla. Estos cebadores están „anidados‟ o internalizados en los productos específicos de la 1a etapa

de la reacción múltiple, que potencia tanto la sensibilidad como la especificidad de las reacciones.

4. Análisis de fusión del ADN: después de la 2a de la PCR, la temperatura aumenta lentamente y se controla la

fluorescencia de cada pocillo, que se analiza para generar una curva de fusión. La temperatura a la que funde

cada producto de la PCR específico (temperatura de fusión o Tm) es consistente y predecible, y el programa

FilmArray evalúa automáticamente los datos de los pocillos replicados de cada ensayo para notificar los

resultados. Para una descripción de la interpretación de los datos y de la notificación, consulte la sección

Interpretación de los resultados de este manual.

El programa FilmArray controla el funcionamiento del instrumento/Module, recoge y analiza los datos y genera

automáticamente un informe de la prueba al final del análisis. El proceso completo tarda aproximadamente una

hora. Se pueden encontrar detalles adicionales sobre cada sistema FilmArray en el Manual del usuario apropiado de

FilmArray.

MATERIALES PROPORCIONADOS

Cada kit contiene reactivo suficiente para ensayar 30 o 6 especímenes:

Cartuchos FilmArray RP envasados individualmente

Frascos de Sample Buffer (Tampón para muestra) de un solo uso (1,0 ml)

Hydration Injection Vials (Viales de inyección de hidratación) (1,5 ml) precargados de un solo uso (azul)

Sample Injection Vials (Viales de inyección de muestra) de un solo uso (rojo)

Transfer Pipettes (Pipetas de transferencia) envasadas individualmente


MATERIALES NECESARIOS PERO NO PROPORCIONADOS

Sistema FilmArray que incluye:

FilmArray, FilmArray 2.0 o FilmArray Torch y programa

FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray)

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES

Precauciones generales

1. Exclusivamente para uso de diagnóstico in vitro.

2. La venta de este dispositivo está restringida a un médico o por orden de un médico, o a un laboratorio clínico.

Su uso está restringido a un médico o por orden de un médico.

3. Un profesional sanitario correctamente formado deberá interpretar cuidadosamente los resultados del

FilmArray RP junto con los signos y síntomas del paciente y los resultados de otras pruebas diagnósticas.

4. Los cartuchos FilmArray RP son de uso exclusivo con los sistemas FilmArray.

5. Las características de rendimiento de FilmArray RP solo se han determinado con especímenes de frotis

nasofaríngeos (FNS).

6. Compruebe siempre la fecha de caducidad del cartucho y no la utilice tras pasar su fecha de caducidad.

7. Los cartuchos de FilmArray se conservan al vacío en envases envueltos individualmente. Para mantener la

integridad del vacío del cartucho y su adecuado funcionamiento, asegúrese de que haya un instrumento/Module

FilmArray disponible y en estado operativo antes de desenvolver y cargar cartuchos.

8. La tos ferina es una dolencia infecciosa que, en EE. UU., se debe notificar en todo el país. Si se detecta

Bordetella pertussis notifíquelo a las autoridades sanitarias locales o nacionales.

Precauciones de seguridad

1. Lleve el Equipo de Protección Individual (EPI) adecuado, incluido (pero sin limitarse a) guantes desechables

exentos de polvo y batas de laboratorio. Proteja la piel, los ojos y las membranas mucosas. Cambie de

guantes frecuentemente cuando manipule reactivos o especímenes.

2. Manipule todos los especímenes y materiales residuales como si pudieran transmitir agentes infecciosos. Siga

las directrices de seguridad, como las detalladas en CDC/NIH Biosafety in Microbiological and Biomedical

Laboratories [38], en el documento M29 del CLSI Protection of Laboratory Workers from Occupationally

Acquired Infections [39], o en otras guías apropiadas.

3. Siga los procedimientos de seguridad de su institución para manipular muestras biológicas.

4. Si se sospecha infección con un virus de la gripe A nuevo basándose en criterios clínicos y epidemiológicos

actuales de cribado recomendados por las autoridades de salud pública, los especímenes deberán recogerse

con las precauciones correspondientes para el control de infecciones por nuevos virus virulentos de la gripe y

enviarse a las autoridades sanitarias locales o nacionales para su análisis. No se debe intentar el cultivo del

virus en estos casos si no se dispone de una instalación con nivel de bioseguridad 3+ (BSL 3+) para recibir y

cultivar los especímenes.

5. Elimine los materiales utilizados en este ensayo, incluyendo reactivos, especímenes y viales de tampón

usados según la legislación nacional, regional o local.


6. El Sample Buffer (Tampón para muestra) ha recibido las siguientes clasificaciones: Toxicidad aguda

(Categoría 4), Lesión ocular grave (Categoría 1), e Irritación cutánea (Categoría 2). De acuerdo con esto, el

Sample Buffer (Tampón para muestra) es peligroso si se ingiere, produce daños oculares graves y causa

irritación cutánea. Deberán seguirse las siguientes precauciones:

Lleve guantes protectores/protección ocular/protección facial.

SI SALPICA EN LOS OJOS: lave los ojos cuidadosamente con agua durante varios minutos. Retire

las lentes de contacto, si se llevan puestas y es fácil hacerlo. Continúe lavando el ojo. Busque

atención médica.

SI SE INGIERE: llame a un CENTRO TOXICOLÓGICO o a un médico si no se siente bien.

Consulte la Ficha de datos de seguridad (SDS) FilmArray Respiratory Panel para obtener más información.

7. El Sample Buffer (Tampón para muestra) formará compuestos y humos peligrosos si se mezcla con lejías u

otros desinfectantes.

ADVERTENCIA: Nunca agregue lejía al Sample Buffer (Tampón para muestra) ni a los residuos de

muestras.

8. La lejía, un desinfectante recomendado, es corrosiva y puede ocasionar una irritación grave o lesiones

oculares o cutáneas. Los vapores o nieblas pueden irritar las vías respiratorias. La lejía es peligrosa si se

ingiere o se inhala. Se recomiendan las siguientes medidas de primeros auxilios.

Contacto ocular: mantenga el ojo abierto y lávelo con agua durante 15-20 minutos. Retire las lentes

de contacto después de 5 minutos y continúe lavando el ojo. Busque atención médica.

Contacto cutáneo: enjuague inmediatamente la piel con agua abundante durante al menos 15 minutos.

Si aparece irritación, busque atención médica.

Ingestión: no induzca el vómito. Beba un vaso de agua. Si aparece irritación, busque atención médica.

Para más información, consulte la Ficha de datos de seguridad (SDS) que sea adecuada.

Precauciones en el laboratorio

1. Evitar la contaminación biológica

Debido a la naturaleza sensible del FilmArray RP, es importante protegerlo de la contaminación de la zona de

trabajo siguiendo esta guía:

Los trabajadores del laboratorio pueden estar infectados por los patógenos respiratorios habituales y

contaminar inadvertidamente la muestra que se está procesando. Para evitarlo, el procesamiento de los

especímenes y la carga de los cartuchos deberá llevarse a cabo en una cabina de bioseguridad. Si no se

utiliza una cabina de bioseguridad durante la preparación de los especímenes, deberá utilizarse una caja

hermética (p. ej., una estación de trabajo AirClean PCR), una máscara antisalpicaduras (p. ej., Bel-Art

Scienceware Splash Shields), o una protección facial completa.

En la preparación de los especímenes y la carga de cartuchos no se deberá utilizar una cabina de

bioseguridad que se haya utilizado para realizar cultivos víricos y bacterianos.


Antes de procesar un espécimen, limpie correctamente tanto la zona de trabajo como la FilmArray Pouch

Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray) con un limpiador adecuado, como por ejemplo

lejía al 10% recientemente preparada o un desinfectante similar. Para evitar la acumulación de residuos y

la posible inhibición de la PCR, pase un trapo con agua sobre la superficie desinfectada.

Algunas vacunas acelulares de Bordetella pertussis (es decir, Pentacel®, Daptacel

®, y Adacel

®) incluyen

ADN que se puede detectar mediante la PCR. La contaminación de los especímenes o los materiales de

ensayo con la vacuna puede ocasionar resultados falsos positivos de B. pertussis. No se deberán recoger

ni procesar especímenes en zonas que hayan estado expuestas a material de vacuna de B. pertussis y se

deberán tomar precauciones especiales durante la recogida y manipulación de especímenes para evitar la

contaminación (http://www.cdc.gov/pertussis/clinical/diagnostic-testing/diagnosis-pcr-bestpractices.html).

Los especímenes y los cartuchos deberán manipularse uno por uno.

Use guantes limpios para retirar los materiales de las bolsas de embalaje a granel y vuelva a sellar las

bolsas de embalaje a granel cuando no se estén usando.

Cambie de guantes y limpie la zona de trabajo cada vez que prepare un espécimen de un paciente

diferente.

Los trabajadores del laboratorio que presenten síntomas respiratorios activos (secreciones nasales, tos)

deberán llevar una mascarilla quirúrgica convencional (o equivalente) y deberán evitar tocar la mascarilla

durante la preparación de los especímenes.

2. Evitar la contaminación por amplicones

Una preocupación frecuente en los ensayos basados en la PCR es la aparición de resultados falsos positivos

producidos por la contaminación del área de trabajo por un amplicón de la PCR. Puesto que el cartucho

FilmArray RP es un sistema cerrado, el riesgo de contaminación por amplicones es bajo, siempre que los

cartuchos permanezcan intactos tras la finalización de la prueba. Siga la siguiente guía para evitar la

contaminación por amplicones:

Deseche los cartuchos usados en un recipiente para materiales con riesgo biológico adecuado

inmediatamente después de completar la prueba.

Evite la manipulación excesiva de los cartuchos tras la prueba.

Evite exponer los cartuchos a bordes afilados, o cualquier objeto que pueda ocasionar una perforación.

ADVERTENCIA: Si se observa líquido en el exterior de un cartucho, tanto el líquido como el

cartucho deben confinarse inmediatamente y desecharse en un recipiente para materiales con

riesgo biológico. El instrumento/Module y la zona de trabajo deben descontaminarse como se

describe en el Manual del usuario de FilmArray.

NO REALICE PRUEBAS ADICIONALES HASTA QUE LA ZONA SE HAYA DESCONTAMINADO.

http://www.cdc.gov/pertussis/clinical/diagnostic-testing/diagnosis-pcr-bestpractices.html


Precaución relativa a la notificación a las autoridades de salud pública en los Estados Unidos

La normativa loca, estatal y federal sobre notificación de enfermedades notificables se actualiza continuamente e

incluye numerosos organismos para vigilancia e investigación de brotes [40-41]. Además, los Centros para el

Control y la Prevención de Enfermedades (CDC) recomiendan que cuando se detecten patógenos de

enfermedades notificables mediante una prueba diagnóstica de cultivo independiente (CIDT), el laboratorio deberá

facilitar la obtención de los materiales clínicos o de aislamiento para remitirla al laboratorio de salud pública

adecuado para ayudar en la detección del brote y en las investigaciones epidemiológicas. Los laboratorios son

responsables de cumplir la normativa de su estado y/o localidad y deberán consultar la lista de laboratorios de

salud pública locales y/o estatales para obtener directrices sobre el envío de aislados y/u de muestras clínicas.

ALMACENAMIENTO, MANIPULACIÓN Y ESTABILIDAD DE REACTIVOS

1. Guarde el kit de prueba, incluidos los tampones y los cartuchos de reactivos, a temperatura ambiente

(15–25 ºC). NO REFRIGERAR.

2. Evite el almacenamiento de los materiales cerca de salidas de calefacción o refrigeración, o de la luz solar

directa.

3. Compruebe siempre la fecha de caducidad y no utilice los reactivos una vez pasada la fecha de caducidad

impresa en el cartucho o kit.

4. Todos los componentes del kit se deben almacenar y usar juntos. No use componentes de un kit con los de

otro kit.

5. No extraiga los cartuchos de su envase hasta que la muestra esté lista para la prueba. Una vez que se ha

abierto el envase del cartucho, este deberá cargarse lo antes posible (en un plazo de aproximadamente

30 minutos).

6. Una vez que se ha cargado el cartucho, la prueba deberá comenzar lo antes posible (en un plazo de 60 minutos).

RECOGIDA Y PREPARACIÓN DEL ESPÉCIMEN

Esta sección describe los requisitos de recogida, preparación y manipulación del espécimen que ayudarán a

garantizar resultados precisos de la prueba.

Recogida de frotis nasofaríngeos: los especímenes de FNS se deberán recoger según la técnica

normalizada y colocarse inmediatamente en un medio de transporte para virus (VTM).

Volumen mínimo de muestra: para el análisis se requieren – 0.3 ml (300 μl) de muestra.

Transporte y almacenamiento: los especímenes introducidos en el VTM deberán procesarse y ensayarse lo

antes posible. Si se requiere almacenamiento, los especímenes introducidos en el VTM se pueden mantener a

temperatura ambiente (18–30 ºC) durante hasta 4 horas, a temperatura de nevera (2-8 °C) durante hasta

3 días, o a temperatura de congelador (<-15 °C) durante hasta 30 días.


PROCEDIMIENTO

Consulte la Guía rápida de utilización del FilmArray Respiratory Panel, el vídeo de formación para el FilmArray

o el Manual del usuario de FilmArray adecuado para ver representaciones más detalladas y pictóricas de estas

instrucciones.

Cuando se manipulan los cartuchos y los especímenes se deben utilizar guantes y demás Equipos de Protección

Individual (EPI). Solo debe introducirse un cartucho FilmArray RP a la vez. Una vez introducido el cartucho,

deberá transferirse rápidamente al instrumento/Module para iniciar la prueba. Una vez finalizada la prueba,

el cartucho deberá desecharse en un recipiente para materiales con riesgo biológico.

Preparación del cartucho

1. Limpie cuidadosamente la zona de trabajo y la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del

cartucho FilmArray) con lejía al 10% recientemente preparada (o un desinfectante adecuado), seguido por un

aclarado con agua.

2. Extraiga el cartucho FilmArray RP de su envase herméticamente cerrado rasgando o cortando el envase

exterior ranurado y abriendo el recipiente de aluminio protector.

3. Coloque el cartucho FilmArray en la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho

FilmArray). Para hacerlo, sujete el cartucho de forma que la etiqueta del código de barras esté hacia arriba y

se pueda leer y a continuación deslice la parte de la película flexible del cartucho dentro de la estación de

carga. En la configuración correcta, los puertos de entrada de ambos extremos de la pieza de plástico rígido

del cartucho estarán orientados hacia arriba y las etiquetas de color rojo y azul del cartucho estarán alineadas

con las flechas de color rojo y azul situadas en la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del

cartucho FilmArray).

4. Coloque un Hydration Injection Vial (Vial de inyección de hidratación) con un tapón de color azul en el pocillo

azul de la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray).

5. Coloque un Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra) con un tapón de color rojo en el pocillo rojo

de la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray).

Hidratación del cartucho

1. Gire y suba el Hydration Injection Vial (Vial de inyección de hidratación) dejando el tapón azul en el pocillo de

la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho).

2. Introduzca la punta de la cánula en el puerto del cartucho situado directamente bajo la flecha azul de la

FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray). Muévala hacia delante

enérgicamente con un movimiento firme y rápido hasta escuchar un “pop” y sienta una disminución en la

resistencia. El volumen correcto de líquido se extraerá del cartucho mediante vacío.

NOTA: Si el sello del envase al vacío del envoltorio del cartucho está dañado, todavía se

puede utilizar el cartucho. Intente hidratar el cartucho siguiendo los pasos a continuación.

Si la hidratación es satisfactoria, continúe la prueba. Si la hidratación falla, deseche el

cartucho y utilice un cartucho nuevo para analizar la muestra.


3. Compruebe que el cartucho ha quedado hidratado.

4. Baje la etiqueta del código de barras y compruebe que el fluido ha entrado en los pocillos de reactivo (situados

en la base de la pieza rígida de plástico del cartucho). Pueden verse burbujas pequeñas de aire. Si el cartucho

no queda hidratado (los reactivos secos tienen el aspecto de aglomerados de color blanco), repita el paso 2

para comprobar que el sello del puerto está roto o coja un cartucho nuevo y repita los pasos a partir del paso 2

de la sección Preparación del cartucho.

Preparación de la mezcla de muestra

1. Sujete el frasco del Sample Buffer (Tampón para muestra) de manera que la punta mire hacia arriba.

2. Pellizque suavemente la pestaña plastificada situada en el lateral del frasco hasta que se rompa el precinto.

3. Invierta el frasco sobre el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra) con un tapón de color rojo y

recoloque el pulgar y el índice para sujetar la parte inferior del frasco. Dispense el Sample Buffer (Tampón

para muestra) apretando lentamente pero con fuerza y, a continuación, vuelva a apretar. Apretar el frasco más

veces generará demasiadas burbujas. Esto es algo a evitar.

4. Mediante la Transfer Pipette (Pipeta de transferencia) proporcionada en el kit de ensayo, extraiga muestra

(FNS en VTM) hasta la tercera línea (aproximadamente 0,3 ml). Añada la muestra al Sample Injection Vial

(Vial de inyección de muestra) de color rojo. Cierre bien la tapa del Sample Injection Vial (Vial de inyección de

muestra).

5. Retire el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra) de la FilmArray Pouch Loading Station (Estación

de carga del cartucho FilmArray) e invierta suavemente el vial al menos tres veces para mezclar.

6. Vuelva a poner el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra) en la FilmArray Pouch Loading Station

(Estación de carga del cartucho FilmArray).

Carga de la mezcla de muestra

1. Gire lentamente el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra) para aflojarlo de su tapón de color rojo

y espere 3-5 segundos. Suba el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra), dejando el tapón de

color rojo en el pocillo de la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray).

2. Introduzca la punta de la cánula en el puerto del cartucho situado directamente bajo la flecha roja de la

FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray). Muévala hacia delante

enérgicamente con un movimiento firme y rápido hasta que escuche un “pop” y sienta una disminución en la

resistencia. El volumen correcto de líquido se extraerá del cartucho mediante vacío.

3. Compruebe que la muestra se ha cargado. Deslice hacia abajo la etiqueta con el código de barras para ver si

el líquido ha entrado en el pocillo de reactivos situado junto al puerto de carga de la muestra. Si el cartucho no

puede extraer muestra del Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra), el cartucho deberá

desecharse. Coja un cartucho nuevo y repita los pasos a partir del Paso 2 de la sección Preparación del

cartucho.

NOTA: Tenga mucho cuidado y evite tocar la punta durante la manipulación, ya que

puede introducir contaminación.

NOTA: NO utilice la Transfer Pipette (Pipeta de transferencia) para mezclar la muestra tras

introducirla en el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra).


4. Deseche el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra) y el Hydration Injection Vial (Vial de inyección

de hidratación) en un recipiente adecuado para materiales con riesgo biológico.

5. Registre la Sample ID (ID de la muestra) en la zona prevista para ello en la etiqueta del cartucho (o pegue una

Sample ID [ID de la muestra] provista de código de barras) y extraiga el cartucho de la FilmArray Pouch

Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray).

Prueba del cartucho

El programa FilmArray incluye instrucciones paso a paso en pantalla que guiarán al operador para realizar una

prueba. A continuación se ofrecen breves instrucciones para los sistemas FilmArray, FilmArray 2.0 y FilmArray

Torch. Consulte el Manual del usuario de FilmArray adecuado para conocer instrucciones más detalladas.

FilmArray y FilmArray 2.0

1. Compruebe si el sistema FilmArray está encendido y el programa se ha iniciado.

2. Abra la tapa de un instrumento disponible (si aún no está abierta).

3. Introduzca el cartucho en el instrumento.

Coloque el cartucho de forma que la matriz esté a la derecha con la película dirigida hacia abajo en el

instrumento FilmArray. Las etiquetas roja y azul del cartucho deberán estar alineadas con las flechas roja y

azul del instrumento FilmArray. El cartucho hará clic al introducirse en su sitio Si se ha introducido

correctamente, el código de barras será visible y la etiqueta de la parte superior del cartucho se podrá leer. El

instrumento y el programa deberán detectar el cartucho introducido correctamente antes de continuar con el

próximo paso.

4. Escanee el código de barras del cartucho FilmArray mediante el lector de código de barras.

La identificación del cartucho (Lot Number [Número de lote] y Serial Number [Número de serie]), el Pouch

Type (Tipo de cartucho) y el Protocol (Protocolo) están preprogramados en el código de barras rectangular

situado en el cartucho FilmArray. La información se introducirá automáticamente al escanear el código de

barras. Si no es posible escanear el código de barras, el Lot Number (Número de lote), el Serial Number

(Número de serie) el Pouch Type (Tipo de cartucho) y el Protocol (Protocolo) del cartucho se pueden

introducir manualmente en los campos correspondientes a partir de la información proporcionada en la

etiqueta del cartucho. Para reducir los errores de introducción de datos, se recomienda que la información del

cartucho se introduzca escaneando el código de barras.

5. Introduzca la Sample ID (ID de la muestra). La Sample ID (ID de la muestra) se puede introducir manualmente,

o bien escanearse mediante el lector de código de barras si se utiliza una Sample ID (ID de la muestra)

incluida en un código de barras.

NOTA: Si el cartucho no se desliza con facilidad al interior del instrumento, deslice

suavemente la tapa del instrumento hacia atrás para garantizar que está completamente

abierta.

NOTA: El código de barras no se puede escanear antes de colocar el cartucho en el

instrumento.

NOTA: Una luz de color verde constante en la parte delantera del instrumento indica que

está disponible.


6. Si es necesario, seleccione y/o confirme un protocolo en la lista desplegable Protocol (Protocolo).

7. Introduzca un nombre de usuario y una contraseña en los campos Name (Nombre) y Password (Contraseña).

8. Cierre la tapa del instrumento FilmArray.

9. Haga clic en el botón Start Run (Iniciar prueba) en la pantalla.

Tras iniciarse la prueba, la pantalla muestra una lista de las etapas que el instrumento está llevando a cabo y

el número de minutos que faltan para finalizar la prueba.

10. Tras finalizar la prueba, siga las instrucciones de la pantalla para abrir el instrumento y extraer el cartucho.

11. Deseche inmediatamente el cartucho en un recipiente para materiales con riesgo biológico.

12. Los resultados se muestran automáticamente en la sección de informe de la pantalla.

Seleccione Print (Imprimir) para imprimir el informe, o bien Save (Guardar) para guardar el informe en

un archivo.

FilmArray Torch

1. Asegúrese de que el sistema FilmArray Torch esté encendido.

2. Seleccione un Module disponible en la pantalla táctil.

3. Escanee el código de barras del cartucho de FilmArray mediante el lector de código de barras.

La identificación del cartucho (Lot Number [Número de lote] y Serial Number [Número de serie]), el Pouch

Type (Tipo de cartucho) y el Protocol (Protocolo) están preprogramados en el código de barras rectangular

situado en el cartucho de FilmArray. La información se introducirá automáticamente al escanear el código

de barras. Si no es posible escanear el código de barras, el Lot Number (Número de lote), el Serial Number

(Número de serie) el Pouch Type (Tipo de cartucho) y el Protocol (Protocolo) del cartucho se pueden

introducir manualmente en los campos correspondientes a partir de la información proporcionada en la

etiqueta del cartucho. Para reducir los errores de introducción de datos, se recomienda que la información

del cartucho se introduzca escaneando el código de barras.

4. Introduzca la Sample ID (ID de la muestra). La Sample ID (ID de la muestra) se puede introducir manualmente,

o bien escanearse mediante el lector de código de barras si se utiliza una Sample ID (ID de la muestra)

con código de barras.

5. Introduzca el cartucho en el Module.

Asegúrese de que la etiqueta del accesorio del cartucho quede plana sobre la parte superior del cartucho,

no doblada. Al insertar el cartucho, el Module lo introducirá dentro de la cámara.

6. Si es necesario, seleccione y/o confirme un protocolo en la lista desplegable Protocol (Protocolo).

7. Introduzca un nombre de usuario y una contraseña de operador y, a continuación, seleccione Next (Siguiente).

NOTA: El ruido del equipo homogeneizador de esferas se percibe como un ruido

(chirrido) agudo durante el primer minuto de funcionamiento.

NOTA: El color de fuente del nombre de usuario y la contraseña es rojo hasta que

el nombre de usuario sea reconocido por el programa.


8. Revise la información introducida sobre la prueba en la pantalla. Si es correcta, seleccione Start Run

(Iniciar prueba).

Tras iniciarse la prueba, la pantalla muestra una lista de los pasos que el instrumento está llevando a cabo

y el número de minutos que faltan para finalizar la prueba.

9. Al final de la prueba, el estado del Module cambia a Finished (Finalizado) y se expulsará parcialmente

el cartucho.

10. Seleccione el Module con estado Finished (Finalizado) en la Dashboard (Consola del instrumento) para

ver el informe.

Seleccione Print (Imprimir) para imprimir el informe, o bien Save (Guardar) para guardar el informe en un

archivo.

11. Saque el cartucho del Module y tírelo inmediatamente a un recipiente para materiales con riesgo biológico.

CONTROL DE CALIDAD

Controles del proceso

Se han incluido dos controles del proceso en cada cartucho:

1. RNA Process Control (Control de proceso de ARN)

El ensayo RNA Process Control (Control de proceso de ARN) se dirige a un transcripto de ARN procedente de

la levadura Schizosaccharomyces pombe. La levadura se encuentra en el cartucho en forma liofilizada y se

rehidrata cuando se carga la muestra. El material de control experimenta todas las etapas del proceso de la

prueba, incluyendo la lisis, la purificación del ácido nucleico, la transcripción inversa, la 1a etapa de la PCR, la

2a etapa de la PCR y la fusión del ADN. Un resultado de control positivo indica que todas las etapas

realizadas en el cartucho FilmArray RP fueron correctas.

2. PCR2 Control (Control PCR2)

El ensayo PCR2 Control (Control PCR2) detecta un ADN diana que está liofilizado en los pocillos de la matriz

junto con sus correspondientes cebadores. Un resultado positivo indica que la 2a etapa de la PCR fue correcta.

Ambos ensayos de control deben ser positivos para que la prueba se considere como aprobada. Si uno de los

controles no es correcto, el campo Controls (Controles) del informe de la prueba (esquina superior derecha) mostrará

el mensaje Failed (Fallido) y los resultados se mostrarán como Inválido. Si hay un fallo en los controles, la muestra se

debe analizar de nuevo en un cartucho nuevo.

NOTA: El ruido del equipo homogeneizador de esferas se percibe como un ruido

(chirrido) agudo durante el primer minuto de funcionamiento.

NOTA: Una vez extraído el cartucho, el informe se puede ver solamente mediante

la función Browse Runs (Explorar pruebas).


Supervisión del rendimiento del sistema de prueba

Es posible calcular la tendencia de los valores Tm procedentes de los ensayos de RNA Process Control (Control de

proceso de ARN) y del PCR2 Control (Control PCR2) y mantener registros como es habitual en la práctica

normalizada del control de calidad en laboratorios [42-43]. El programa FilmArray determinará automáticamente un

fallo de prueba si la Tm del RNA Process Control (Control de proceso de ARN) y del PCR2 Control [Control PCR2]

está fuera del intervalo de valores aceptable (80,6-84,6 para el RNA Process Control (Control de proceso de ARN) y

74,5-78,5 para el PCR2 Control [Control PCR2]). Deberá investigarse cualquier variación en la tendencia. Póngase en

contacto con el soporte técnico para obtener ayuda con los valores que estén fuera de intervalo.

Las buenas prácticas de laboratorio recomiendan realizar con regularidad controles externos tanto positivos como

negativos. Utilice medio de transporte para virus como control negativo externo y muestras positivas anteriormente

caracterizadas o muestras negativas enriquecidas con organismos bien caracterizadas como controles externos

positivos. Los controles externos deben usarse de acuerdo con los organismos acreditadores adecuados, según sea

aplicable.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

El programa FilmArray analiza e interpreta automáticamente los resultados del ensayo y muestra los resultados finales

en un informe de la prueba (consulte la Guía rápida de utilización del FilmArray Respiratory Panel para ver un ejemplo

de un informe de la prueba). Se describen a continuación los análisis realizados mediante el programa FilmArray y los

detalles del informe de la prueba.

Interpretación del ensayo

Cuando haya finalizado la 2a etapa de la PCR, el instrumento/Module FilmArray lleva a cabo un análisis de alta

resolución de fusión del ADN sobre los productos de la PCR y mide la señal de fluorescencia generada en cada

pocillo (para obtener más información, consulte el Manual del usuario apropiado de FilmArray. El programa FilmArray

realiza a continuación varios análisis y asigna un resultado final al ensayo.

Análisis de las curvas de fusión. El programa FilmArray evalúa la curva de fusión del ADN para cada pocillo de la

matriz de la 2a etapa de la PCR para determinar si aparece en dicho pocillo un producto de la PCR. Si el perfil de

fusión indica la presencia de un producto de la PCR, entonces el programa de análisis calcula la temperatura de

fusión (Tm) de la curva. El valor de la Tm se compara a continuación de nuevo con el intervalo de RM esperado para

el ensayo. Si el programa determina que la fusión es positiva y que el pico de fusión está comprendido en el intervalo

de Tm específico del ensayo, la curva se considera positiva. Si el programa determina que la fusión es negativa o no

está en el intervalo de Tm adecuado, la curva se considera negativa.

Análisis de réplicas. Una vez identificadas las curvas de fusión, el programa evalúa las tres réplicas de cada ensayo

para determinar el resultado del ensayo. Para que un ensayo se considere positivo, al menos dos de las tres curvas

de fusión asociadas al ensayo deben considerarse positivas y la Tm de al menos dos de las tres curvas positivas debe

ser similar (en 1°C). Los ensayos que no cumplen estos criterios se consideran negativos.

NOTA: Las tendencias de los dos ensayos de control (RNA Process Control [Control de proceso de

ARN] y PCR2 Control [Control PCR2]) se deberán rastrear en gráficas de control independientes, ya

que los valores de Tm esperados para ambos controles son diferentes.


Interpretación del organismo

Para la mayoría de organismos detectados por el FilmArray RP, el organismo se considera Detected (Detectado) si un

único ensayo correspondiente es positivo. Por ejemplo, el metapneumovirus humano tendrá como resultado del

informe de la prueba Human Metapneumovirus Detected (Metapneumovirus humano detectado) si al menos dos de

las tres réplicas de uno de los ensayos de metapneumovirus humano tiene picos de fusión positivos similares con

valores de la Tm comprendidos dentro del intervalo de Tm específicos del ensayo. Los resultados de la prueba para

adenovirus, el grupo de rinovirus/enterovirus humano y gripe A dependen de la interpretación de los resultados de

varios ensayos. Se indican a continuación la interpretación y las pruebas de seguimiento para estos tres resultados:

Grupo de rinovirus/enterovirus

El cartucho FilmArray RP contiene seis ensayos diferentes (HRV1, HRV2, HRV3, HRV4, Entero 1, Entero 2)

para la detección de rinovirus/enterovirus. Aunque estos virus son muy diferentes, están estrechamente

relacionados entre sí. Por tanto, los seis ensayos no son realmente capaces de diferenciar entre rinovirus y

enterovirus. El programa FilmArray interpreta cada uno de los seis ensayos independientemente (como se ha

descrito anteriormente) y los resultados se combinan en un resultado de la prueba final para el virus o los

virus. Si alguno de los seis ensayos es positivo, el resultado del informe de la prueba será Human

Rhinovirus/Enterovirus Detected (Rinovirus/enterovirus humano detectado). Si los seis ensayos son negativos,

el resultado del informe de la prueba será Human Rhinovirus/Enterovirus Not Detected (Rinovirus/enterovirus

humano no detectado). Un resultado positivo para rinovirus/enterovirus humano con FilmArray RP deberá

confirmarse con un procedimiento alternativo (p. ej. cultivo del virus o análisis de secuencia).

NOTA: A pesar de sus nombres, los ensayos HRV (1-4) y Entero (1-2) no son específicos para la detección

del rinovirus o enterovirus humano, específicamente. No se pueden utilizar los resultados individuales del

ensayo para diferenciar entre estos dos virus.

Adenovirus

El cartucho FilmArray RP contiene dos ensayos diferentes (Adeno, Adeno2) para la detección de adenovirus.

El programa FilmArray interpreta cada uno de estos ensayos independientemente (como se ha descrito

anteriormente) y los resultados se combinan en un resultado de la prueba final para el virus. Si cualquiera o

ambos ensayos son positivos, el resultado del informe de la prueba será Adenovirus Detected (Adenovirus

detectado). Si ambos ensayos Adeno y Adeno2 son negativos, el resultado del informe de la prueba será

Adenovirus Not Detected (Adenovirus no detectado).

Gripe A

Los ensayos del FilmArray RP están diseñados tanto para detectar la gripe A como para diferenciar entre los

subtipos de hemaglutinina que aparecen frecuentemente. Para llevarlo a cabo, el FilmArray RP usa dos

ensayos para la gripe A, (FluA-pan-1 y FluA-pan-2) y tres ensayos de subtipado dirigidos al gen de

la hemaglutinina (FluA-H1-pan, FluA-H1-2009 y FluA-H3). El ensayo FluA-H1-pan está diseñado para detectar

tanto la gripe A H1 como la variante de la gripe A H1-2009. Cada uno de los ensayos individuales se

interpreta de forma independiente (como se ha descrito anteriormente) y el resultado de la prueba notificado

para la gripe A está basado en los resultados combinados de los cinco ensayos, como se detalla en la Tabla 3.

En general, la gripe A se considera Detected (Detectado) si al menos uno de los dos ensayos FluA-pan es

positivo y un ensayo de subtipado también es positivo. Si ninguno de los ensayos FluA-pan es positivo, pero

uno de los ensayos de subtipado es positivo, entonces el resultado se considera Equivocal (Dudoso) para ese

subtipo específico y la muestra se debe volver a analizar. Si uno de los ensayos FluA-pan es positivo y

ninguno de los ensayos de subtipado es positivo, el resultado es Equivocal (Dudoso) para la gripe A, y el

espécimen se debe volver a analizar. Todos los resultados Equivocal (Dudoso) se deben volver a analizar.


Tabla 3. Posibles resultados del ensayo para la gripe A y su correspondiente interpretación

Ensayo

Resultado final

Ensayos

FluA-pan

(n=2)

FluA-H1-

pan

FluA-H1-

2009 FluA-H3

Se requiere

seguimiento

Influenza A Not Detected

(Gripe A no detectado) Negativo Negativo Negativo Negativo

Ninguno Influenza A H1 (Gripe A H1) ≥1 positivo Positivo Negativo Negativo

Influenza A H3 (Gripe A H3) ≥1 positivo Negativo Negativo Positivo

Influenza A H1-2009

(Gripe A H1-2009) ≥1 positivo

Cualquier

resultado Positivo Negativo

Influenza A H1 and

Influenza A H3

(Gripe A H1 y Gripe A H3)

≥1 positivo Positivo Negativo Positivo

Las

infecciones

múltiples son

posibles,

pero rarasa,

repita la

prueba para

confirmar el

resultado b

Influenza A H1-2009 and

Influenza A H3

(Gripe A H1-2009 y Gripe A H3)

≥1 positivo Cualquier

resultado Positivo Positivo

Influenza A (no subtype detected)

(Gripe A [ningún subtipo

detectado])

2 positivos Negativo Negativo Negativo Véase más

adelante

Influenza A Equivocal

(Gripe A dudoso) 1 positivo Negativo Negativo Negativo

Repita la

prueba

Influenza A H1 Equivocal

(Gripe A H1 dudoso) Negativo Positivo Negativo Negativo

Influenza A H3 Equivocal

(Gripe A H3 dudoso) Negativo Negativo Negativo Positivo

Influenza A H1-2009 Equivocal

(Gripe A H1-2009 dudoso) Negativo

Cualquier

resultado Positivo Negativo

a El sistema FilmArray RP puede detectar simultáneamente varios virus de la gripe contenidos en la vacuna de la gripe

nasal FluMist® (consulte la sección “Interferencias” más adelante).

b Múltiples positivos repetidos deberán confirmarse adicionalmente mediante otras pruebas de subtipado para la gripe

autorizadas por el organismo federal estadounidense responsable de fármacos y alimentos (FDA).

Gripe A (ningún subtipo detectado)

Si ambos ensayos FluA-pan son positivos, pero ninguno de los ensayos de subtipado de la hemaglutinina es

positivo, entonces la interpretación es Influenza A (no subtype detected) (Gripe A [ningún subtipo detectado]).

Este resultado puede suceder si el título de virus en el espécimen es bajo y no se detecta en el ensayo de

subtipado. Este resultado también podría indicar la presencia de una nueva cepa de la gripe A. En ambos

casos, se debe volver a repetir la prueba de la muestra en cuestión. Si la segunda prueba proporciona un

resultado diferente, vuelva a realizar una prueba más para garantizar el resultado. Si la prueba adicional

proporciona el mismo resultado, entonces debe verificarse el funcionamiento de los cartuchos RP realizando

un análisis con los materiales de control externo adecuados (muestras positivas conocidas de la gripe A H1,

gripe A H3 y gripe A H1-2009), así como una prueba de un control negativo para determinar la contaminación

del producto de la PCR. Si el FilmArray RP identifica con precisión los controles externos y negativos,

póngase en contacto con las autoridades sanitarias correspondientes para realizar una prueba de

confirmación.


Informe de la prueba FilmArray RP

El informe de la prueba FilmArray RP se muestra automáticamente al finalizar una prueba, e incluye tres secciones, el

Run Summary (Resumen de la prueba), el Results Summary (Resumen de resultados) y los Run Details (Detalles de

la prueba) (consulte la Guía rápida de utilización del FilmArray Respiratory Panel para ver un ejemplo del informe de

la prueba). El informe de la prueba se puede guardar en un archivo o bien imprimirse.

La sección Run Summary (Resumen de la prueba) del informe de la prueba proporciona la Sample ID (ID de la

muestra), la hora y fecha de la prueba, los resultados de los controles y un resumen general de los resultados de la

prueba. Todas las dianas con resultados Detected (Detectado) o Equivocal (Dudoso) se relacionarán en el

correspondiente campo del resumen. Si todas las pruebas fueron negativas, entonces se mostrará None (Ninguno) en

el campo Detected (Detectado). Los controles se relacionan como Passed (Aprobado), Failed (Fallido) o Invalid

(Inválido). Consulte la sección Campo Control que se encuentra más adelante para ver más información acerca de la

interpretación de los controles y del seguimiento adecuado si se produce un fallo de control.

La sección Results Summary (Resumen de resultados) del informe de la prueba relaciona los resultados de cada

diana ensayada en el panel. Los resultados posibles son Detected (Detectado), Not Detected (No detectado),

Equivocal (Dudoso) o Invalid (Inválido). Consulte la sección Results Summary (Resumen de resultados) que se

encuentra más adelante para ver más información acerca de la interpretación de los resultados de la prueba, del

seguimiento adecuado si se producen resultados Invalid (Inválido) o Equivocal (Dudoso). Los resultados ensayo-por-

ensayo para cada diana están disponibles en una 2a página opcional del informe. Para acceder a la 2

a página del

informe, seleccione el botón Details (Detalles) situado en la parte inferior de la pantalla de informes, o bien pulse en

Print All (Imprimir Todo) para obtener un informe impreso. La 2a página del informe proporciona los resultados de cada

ensayo, sin tener en cuenta los resultados de los controles del cartucho.

La sección Run Details (Detalles de la prueba) proporciona información adicional sobre la prueba, que incluye:

información del cartucho (Tipo, Número de lote y Número de serie), Run status (Estado de la prueba) (Completed

[Completado], Incomplete [Incompleto], Aborted [Detenida], Instrument Error [Error del instrumento], Instrument

Communication Error [Error de comunicación del instrumento], o Software Error [Error de programa]), los protocolos

utilizados para realizar la prueba, la identidad del operador que ha realizado la prueba y el instrumento usado para

llevarla a cabo.

Tras finalizar la prueba, es posible editar la Sample ID (ID de la muestra). Si esta información ha cambiado, se

agregará al informe de la prueba una sección adicional denominada Change History (Historial de cambios). Esta

sección de Change History (Historial de cambios) relaciona el campo que ha variado, la entrada original, la entrada

revisada, el operador que ha realizado el cambio y la fecha en la que fue realizado. La Sample ID (ID de la muestra)

es el único campo del informe que se puede cambiar.

Campo Control

El campo Control del informe de la prueba se mostrará como Passed (Aprobado), Failed (Fallido) o Invalid (Inválido).

El campo Control mostrará Passed (Aprobado) solamente si la prueba se ha completado correctamente (sin errores

del instrumento ni del programa) y los ensayos de control del cartucho (RNA Process Control [Control del proceso de

ARN] y PCR2 Control [Control PCR2]) se realizaron correctamente. El campo Control mostrará Failed (Fallido) si la

prueba se ha completado correctamente (sin errores del instrumento ni del programa), pero uno o ambos de los

ensayos de control del cartucho fueron fallidos (0 o 1 réplicas de positivo para cada uno de los controles, cada uno de

los cuales se analiza por triplicado). Si el resultado del control es Failed (Fallido), entonces el resultado de todas las

pruebas del panel se muestran como Invalid (Inválido) y el espécimen debe volver a analizarse en un nuevo cartucho.

La Tabla 4 proporciona un resumen y una explicación de los posibles resultados del control y las acciones de

seguimiento.


FilmArray vigila cada prueba para garantizar que el instrumento funciona dentro de las especificaciones y para

detectar errores de hardware y del programa que puedan comprometer la precisión del informe de la prueba.

Si el instrumento detecta un estado fuera de las especificaciones, o un error significativo, detendrá automáticamente

la prueba. Si esto sucede, o si el usuario detiene la prueba, entonces el campo Control del informe mostrará Invalid

(Inválido) y todos los resultados de las pruebas en el Result Summary (Resumen de resultado) también se mostrarán

como Invalid (Inválido). Para determinar la razón por la que una prueba no ha conseguido completarse, anote los

códigos específicos de error que se muestren en la pantalla y consulte los Run Status (Estado de la prueba) en la

sección Run Details (Detalles de la prueba) del informe. El Run Status (Estado de la prueba) mostrará Incomplete

(Incompleto), Aborted (Detenida), Software Error (Error de programa), Instrument Error (Error del instrumento), o

Instrument Communication Error (Error de comunicación del instrumento). Consulte el Manual del usuario FilmArray o

póngase en contacto con el Soporte técnico para recibir ayuda. El espécimen deberá volverse a analizar tras corregir

el error o usando un instrumento/Module FilmArray alternativo.

Tabla 4. Interpretación del Campo Control en el informe de la prueba de FilmArray RP

Resultado del control Explicación Acción requerida Resultado

Passed (Aprobado)

La prueba se ha completado correctamente

Y

Ambos controles del cartucho fueron correctos

Ninguno Notifique los resultados proporcionados en el informe de la prueba

Failed (Fallido) La prueba se ha completado correctamente

PERO

Al menos uno de los controles del cartucho ha fallado.

Repita la prueba con un cartucho nuevo.

Acepte los resultados de la prueba repetida. Si el error persiste, póngase en contacto con el Soporte técnico para recibir ayuda.


Resultado del control Explicación Acción requerida Resultado

Invalid (Inválido)

Los controles son inválidos debido a que la prueba ha fallado.

(Habitualmente, se trata de un error de hardware o del programa)

Anote los códigos de error mostrados durante la prueba en el campo Run Status (Estado de la prueba) en la sección Run Details (Detalles de la prueba) del informe Consulte el Manual del usuario de FilmArray adecuado o póngase en contacto con el Soporte técnico para recibir ayuda.

Tras solucionar el error, repita la prueba, o bien repita la prueba con otro instrumento.

Si el error se ha producido en los primeros 30 segundos de la prueba, se puede usar el mismo cartucho para la repetición de la prueba (en un plazo de 60 minutos desde la carga del cartucho) con el mismo instrumento/Module o con otro, según esté disponible.

Si el error se produce más adelante en la prueba, o no está seguro cuando se ha producido el error, vuelva a la muestra original para cargar un nuevo cartucho. Repita la prueba con el nuevo cartucho en el mismo instrumento/Module o en otro, según esté disponible.

Acepte los resultados válidos de la prueba repetida. Si el error persiste, póngase en contacto con el Soporte técnico para recibir ayuda.


Result Summary (Resumen de resultados)

Los resultados de la prueba para los organismos incluidos en FilmArray RP se proporcionan en dos ubicaciones del informe. La sección Result Summary (Resumen de resultados) proporciona una lista completa de los resultados de la prueba. Los resultados posibles incluyen Detected (Detectado), Not Detected (No detectado), Equivocal (Dudoso) e Invalid (Inválido). Los resultados Positivo (Detected) (Detectado) y Equivocal (Dudoso) también se muestran en la sección Run Summary (Resumen de la prueba). La Tabla 5 proporciona una explicación de cada interpretación y el seguimiento necesario para obtener un resultado final.

Tabla 5. Interpretación de los resultados incluidos en el informe de la prueba de FilmArray RP

Resultado del organismo

Explicación Acción

Detected (Detectado)


Y

Los controles del cartucho son correctos (Passed [Aprobado])

Y

Los ensayos del organismo fueron POSITIVOS (es decir, se cumplen los requisitos de un resultado positivo descritos en la sección anterior Interpretación del ensayo)

Notifique los resultados.

Not Detected (No detectado)


Y


Y

Los ensayos del organismo fueron NEGATIVOS (es decir, no cumplen los requisitos de un resultado positivo descritos en la sección anterior Interpretación del ensayo)

Notifique los resultados.

Equivocal (Dudoso)

(Gripe A solamente)


Y


Y

La combinación de resultados positivos y negativos del ensayo para la gripe A no permitió llegar a ninguna conclusión (consulte la Tabla 3)

Vuelva a ensayar el espécimen original con un cartucho nuevo y notifique los resultados de la prueba repetida.

Invalid (Inválido) Los controles del cartucho no son correctos (Failed [Fallido])

O

La prueba no fue correcta (Run Status [Estado de la prueba] mostrado como: Aborted [Detenida], Incomplete [Incompleto], Instrument Error [Error del instrumento], Software Error [Error de programa] o Instrument Communication Error [Error de comunicación del instrumento])

Consulte la Tabla 4, Interpretación del Campo Control del informe de la prueba FilmArray para recibir instrucciones.


LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

• Solo se debe usar con prescripción

• El rendimiento de FilmArray Respiratory Panel solamente se ha determinado en los sistemas FilmArray, FilmArray 2.0 y FilmArray Torch.

• Esta prueba es cualitativa y no proporciona un valor cuantitativo del virus y/o bacteria(s) detectado(s) en el espécimen.

• El comportamiento de la prueba se ha evaluado para su uso exclusivo con especímenes de procedencia humana.

• Esta prueba no se ha validado para ensayar especímenes distintos al frotis nasofaríngeo (FNS).

• El comportamiento de esta prueba no se ha determinado en individuos inmunocomprometidos.

• El comportamiento de la prueba no se ha determinado para pacientes que carecen de signos y síntomas de infección respiratoria.

• Los resultados de esta prueba deberán correlacionarse con el historial clínico, datos epidemiológicos y otros datos disponibles para el médico responsable de la evaluación del paciente.

• Pueden persistir in vivo ácidos nucleicos víricos y bacterianos independientemente de la viabilidad del organismo. La detección de diana(s) de organismo(s) no implica que los correspondientes organismos sean infecciosos o sean los agentes causantes de los síntomas clínicos.

• La detección de ácidos nucleicos víricos y bacterianos depende de la correcta recogida, manipulación, transporte, almacenamiento y preparación del espécimen. Si no se observan los procedimientos correctos en alguno de estos pasos, se pueden producir resultados incorrectos. Existe un riesgo de valores falsos positivos o valores falsos negativos resultantes de especímenes incorrectamente recogidos, transportados o manipulados.

• Un resultado negativo de FilmArray RP no excluye la posibilidad de infección vírica o bacteriana. Se pueden producir resultados negativos de la prueba debidos a la presencia de variantes de secuencia en la región a la que se dirige el ensayo, a la presencia de inhibidores, errores técnicos, mezclado de la muestra, o una infección causada por un organismo no detectado por el panel. Los resultados de la prueba también pueden verse afectados debido a tratamiento antivírico/antibacteriano concurrente, o bien a niveles de organismos del espécimen que se encuentran por debajo del límite de detección de la prueba. Los resultados negativos de esta prueba no se deberán usar como la base exclusiva del diagnóstico, del tratamiento o de otras decisiones de gestión. Los resultados negativos en el marco de una enfermedad respiratoria pueden deberse a infección por patógenos no detectados mediante la prueba o bien que la infección de las vías respiratorias inferiores no se detecta en un espécimen de frotis nasofaríngeo.

• Los valores predictivos positivos y negativos son fuertemente dependientes de la prevalencia. Los resultados falsos negativos también son más probables durante un máximo de actividad cuando la prevalencia de la enfermedad es elevada. Los resultados falsos positivos también son más probables en los períodos en que la prevalencia es de moderada a baja.

• La contaminación por los organismos y por los amplicones puede ocasionar resultados erróneos para la prueba. Debe prestarse atención especial a las Precauciones en el laboratorio indicadas en la sección Advertencias y precauciones.

• Existe un riesgo de valores falsos positivos como resultado de la contaminación cruzada entre organismos diana, sus ácidos nucleicos o su producto amplificado o debido a señales no específicas del ensayo.

• La reactividad cruzada con organismos de las vías respiratorias diferentes a los relacionados en la sección Especificidad analítica siguiente pueden ocasionar resultados erróneos.


• El ensayo FilmArray RP para adenovirus puede mostrar una detección variable con serotipos no respiratorios de la especies A, D, F y G.

• Los ensayos de subtipado FilmArray RP para la gripe A solo se dirigen al gen de la hemaglutinina de la gripe A. FilmArray RP no detecta ni diferencia el gen de la neuraminidasa de la gripe A.

• La especificidad clínica fue establecida cuando la gripe A H1-2009 era el virus de la gripe A predominante en circulación. Cuando aparezcan otros virus de la gripe A, la especificidad clínica puede variar.

• Debido al bajo número de especímenes positivos recogidos para algunos organismos durante el estudio clínico prospectivo, las características de rendimiento para Bordetella pertussis, coronavirus 229E, coronavirus OC43, gripe A H1, gripe A H3, gripe A H1-2009, gripe B, Mycoplasma pneumoniae, virus paragripal 1, virus paragripal 2, y virus paragripal 4, se determinaron principalmente a partir de especímenes clínicos retrospectivos. Las características de rendimiento para Chlamydophila pneumoniae se determinaron principalmente mediante especímenes clínicos artificiales. El rendimiento de esta prueba no se ha establecido para vigilar el tratamiento de las infecciones estacionales de gripe A H1, A H3, A H1-2009 o VRS.

• El rendimiento de esta prueba no se ha determinado en la criba de sangre o hematoderivados para determinar la presencia de la gripe A H1, A H3 o A H1-2009 estacional.

• El rendimiento de esta prueba no se ha determinado con medicamentos potencialmente interferentes para el tratamiento de los virus de la gripe o del resfriado. El efecto de las sustancias interferentes solo se ha evaluado para las relacionadas en la etiqueta. La interferencia debida a sustancias diferentes de las descritas en la sección “Interferencia” siguiente puede llevar a resultados erróneos.

• El rendimiento de FilmArray RP no se ha determinado en individuos que hayan recibido recientemente la vacuna de la gripe. La administración reciente de una vacuna nasal contra la gripe puede causar resultados falsos positivos para la gripe A y/o la gripe B.

• Debido a la similitud genética entre el rinovirus humano y el enterovirus humano, el FilmArray RP no puede diferenciarlos con fiabilidad. Un resultado positivo para rinovirus/enterovirus con FilmArray RP deberá confirmarse con un procedimiento alternativo (p. ej. cultivo celular o análisis de secuencia).

• El ensayo del coronavirus OC43 puede reaccionar de forma cruzada con el coronavirus HKU1. Como resultado, cuando HKU1 y OC43 se detectan en el espécimen del mismo paciente, el resultado se puede deber a reactividad cruzada del ensayo. También es posible una infección simultánea con ambos virus.

• El FilmArray RP puede no ser capaz de distinguir entre cepas víricas existentes y las nuevas variedades que puedan aparecer. Por ejemplo, FilmArray RP puede detectar gripe A H3N2v (reconocida por primera vez en agosto de 2011), pero no será capaz de distinguir esta variante de la gripe A H3N2 estacional.

• Los resultados de FilmArray RP para el ensayo B. pertussis pueden no concordar con resultados de los ensayos para Bordetella realizados mediante PCR que tienen como diana las secuencias de inserción multicopia (IS481) debido a las diferencias en la sensibilidad y la especificidad. IS481 es una diana multicopia y está presente en varias especies de Bordetella (B. pertussis, B. holmesii y B. bronchiseptica). El ensayo FilmArray RP para B. pertussis tiene como diana la región del promotor de una única copia del gen de la toxina tosferínica y está diseñado para tener una elevada especificidad para la detección de B. pertussis. Aunque no se ha observado reactividad cruzada con especies de Bordetella en el estudio clínico o en la prueba de especificidad analítica de una variedad de cepas a 1 x 10

6 UFC/ml, se pueden producir casos de

reactividad cruzada con niveles mayores (por encima de 1 x 106 UFC/ml) o con variantes de secuencia raros

de otras especies de Bordetella tales como B. bronchiseptica y B. parapertussis.


VALORES ESPERADOS

NOTA: Los valores esperados presentados en esta sección se obtuvieron antes de añadir un segundo ensayo para

adenovirus al FilmArray RP.

En la primera fase del estudio clínico prospectivo con FilmArray RP, se recogieron 853 especímenes de frotis

nasofaríngeos (FNS) candidatos, que se ensayaron en tres centros de EE. UU. entre diciembre de 2009 y mayo de

2010. Se llevó a cabo una segunda fase del estudio clínico prospectivo con FilmArray RP para obtener especímenes

positivos adicionales para los virus paragripales 1, 2 y 4. Durante el máximo estacional anticipado de la temporada de

los virus paragripales 1 y 2 (de septiembre de 2010 hasta enero de 2011), se recogieron otros 264 especímenes

candidatos, que se ensayaron en dos de los tres centros. El número y porcentaje de casos positivos determinados por

el FilmArray RP calculados por centro de prueba o por grupo de edad se presentan en las siguientes tablas:

Tabla 6. Resumen de valores esperados (determinados por el FilmArray RP) por centro para la primera fase de la evaluación clínica prospectiva (diciembre 2009–mayo 2010)

Organismo

Global (n=853) Centro 1 (n=275) Centro 2 (n=333) Centro 3 (n=245)

Número Valor esperado

Número Valor

esperado Número

Valor esperado

Número Valor

esperado

Adenovirus 38 4,5% 5 1,8% 11 3,3% 22 9,0%

Gripe A 11 1,3% 10 3,6% 1 0,3% 0 0%

Gripe A H1 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%

Gripe A H3 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%

Gripe A H1-2009 11 1,3% 10 3,6% 1 0,3% 0 0%

Gripe B 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%

Virus paragripal 1 1 0,1% 0 0% 0 0% 1 0,4%

Virus paragripal 2 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%

Virus paragripal 3 33 3,9% 1 0,4% 1 0,3% 31 12,7%

Virus paragripal 4 8 0,9% 0 0% 4 1,2% 4 1,6%

Virus respiratorio sincitial 139 16,3% 4 1,5% 86 25,8% 49 20,0%

Coronavirus 229E 14 1,6% 5 1,8% 3 0,9% 6 2,4%

Coronavirus HKU1 25 2,9% 9 3,3% 13 3,9% 3 1,2%

Coronavirus NL63 23 2,7% 4 1,5% 9 2,7% 10 4,1%

Coronavirus OC43 8 0,9% 2 0,7% 6 1,8% 0 0%

Metapneumovirus humano 94 11,0% 12 4,4% 41 12,3% 41 16,7%

Rinovirus/enterovirus humano

225 26,4% 36 13,1% 92 27,6% 97 39,6%

Bordetella pertussis 4 0,4% 2 0,7% 1 0,3% 1 0,4%

Chlamydophila pneumoniae 1 0,1% 0 0% 0 0% 1 0,4%

Mycoplasma pneumoniae 2 0,2% 2 0,2% 0 0% 0 0%


Tabla 7. Resumen de valores esperados (determinados por el FilmArray RP) por centro para la segunda fase de la evaluación clínica prospectiva (septiembre 2010–enero 2011)

Organismo

Global (n=264) Centro 2 (n=180) Centro 3 (n=84)

Número Valor

esperado Número

Valor esperado

Número Valor esperado

Adenovirus 15 5,7% 11 6,1% 4 4,6%

Gripe A 5 1,9% 0 0% 5 6,0%

Gripe A H1 0 0% 0 0% 0 0%

Gripe A H3 5 1,9% 0 0% 5 6,0%

Gripe A H1-2009 0 0% 0 0% 0 0%

Gripe B 1 0,4% 1 0,6% 0 0%

Virus paragripal 1 1 0,4% 0 0% 1 1,1%

Virus paragripal 2 9 3,4% 4 2,2% 5 5,7%

Virus paragripal 3 5 1,9% 0 0% 5 5,7%

Virus paragripal 4 2 0,7% 1 0,6% 1 1,1%

Virus respiratorio sincitial 31 11,7% 11 6,1% 20 23,8%

Coronavirus 229E 0 0% 0 0% 0 0%

Coronavirus HKU1 0 0% 0 0% 0 0%

Coronavirus NL63 1 0,4% 1 0,6% 0 0%

Coronavirus OC43 11 4,2% 1 0,5% 10 11,9%

Metapneumovirus humano 4 1,5% 0 0% 4 4,6%

Rinovirus/enterovirus humano 125 47,3% 91 50,6% 34 39,1%

Bordetella pertussis 3 1,1% 3 1,6% 0 0%

Chlamydophila pneumoniae 0 0% 0 0% 0 0%

Mycoplasma pneumoniae 2 0,8% 1 0,5% 1 1,2%

Tabla 8. Resumen de valores esperados (determinados mediante FilmArray RP) por grupo de edad para la primera fase de la evaluación clínica prospectiva (diciembre 2009–mayo 2010)

Organismo Total

(Valor esperado) ≤ 5 años 6-21 años 22-49 años ≥ 50 años

Adenovirus 38 (4,5%) 32 2 3 1

Gripe A 11 (1,3%) 1 1 7 2

Gripe A H1 0 (0%) 0 0 0 0

Gripe A H3 0 (0%) 0 0 0 0

Gripe A H1-2009 11 (1,3%) 1 1 7 2

Gripe B 0 (0%) 0 0 0 0

Virus paragripal 1 1 (0,1%) 0 1 0 0

Virus paragripal 2 0 (0%) 0 0 0 0



Virus respiratorio sincitial 139 (16,3%) 127 3 4 5

Coronavirus 229E 14 (1,6%) 6 2 5 1

Coronavirus HKU1 25 (2,9%) 12 1 8 4

Coronavirus NL63 23 (2,7%) 17 2 2 2

Coronavirus OC43 8 (0,9%) 4 0 2 2

Metapneumovirus humano 94 (11,0%) 76 4 10 4

Rinovirus/enterovirus humano 225 (26,4%) 161 24 29 11

Bordetella pertussis 4 (0,4%) 2 1 0 1


Organismo Total


Chlamydophila pneumoniae 1 (0,1%) 1 0 0 0

Mycoplasma pneumoniae 2 (0,2%) 0 0 2 0

Tabla 9. Resumen de valores esperados (determinados mediante FilmArray RP) por grupo de edad para la segunda fase de la evaluación clínica prospectiva (septiembre de 2010–enero de 2011)

El número y porcentaje de casos de infección simultánea determinados por el FilmArray RP calculados por grupo de

edad se presentan en las siguientes tablas:

Tabla 10. Resumen de valores esperados (infecciones simultáneas determinadas por el FilmArray RP) por grupo de edad para la primera fase de la evaluación clínica prospectiva (diciembre de 2009–mayo de 2010)

Infección simultánea Total (Valor

esperado) ≤ 5 años 6-21 años 22-49 años ≥ 50 años

VRH/VE + VRS 21 (2,46%) 20 0 1 0

VRH/VE + AdV 8 (0,94%) 8 0 0 0

VRH/VE + VP3 8 (0,94%) 7 1 0 0

VRH/VE + MPVh 7 (0,82%) 7 0 0 0

MPVh + VRS 4 (0,47%) 4 0 0 0

VRH/VE + CoV NL63 4 (0,47%) 3 0 1 0

CoV HKU1 + MPVh 3 (0,35%) 3 0 0 0

Organismo Total


Adenovirus 15 (5,7%) 15 0 n/a n/a

Gripe A 5 (1,9%) 4 1 n/a n/a

Gripe A H1 0 (0%) 0 0 n/a n/a

Gripe A H3 5 (1,9%) 4 1 n/a n/a

Gripe A H1-2009 0 (0%) 0 0 n/a n/a

Gripe B 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a

Virus paragripal 1 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a




Virus respiratorio sincitial 31 (11,7%) 30 1 n/a n/a

Coronavirus 229E 0 (0%) 0 0 n/a n/a

Coronavirus HKU1 0 (0%) 0 0 n/a n/a

Coronavirus NL63 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a

Coronavirus OC43 11 (4,2%) 9 2 n/a n/a

Metapneumovirus humano 4 (1,5%) 4 0 n/a n/a

Rinovirus/enterovirus humano 125 (47,3%) 118 7 n/a n/a

Bordetella pertussis 3 (1,1%) 3 0 n/a n/a

Chlamydophila pneumoniae 0 (0%) 0 0 n/a n/a

Mycoplasma pneumoniae 2 (0,8%) 2 0 n/a n/a


Infección simultánea Total (Valor

esperado) ≤ 5 años 6-21 años 22-49 años ≥ 50 años

CoV HKU1 + VRH/VE 3 (0,35%) 1 0 2 0

CoV HKU1 + VRS 3 (0,35%) 3 0 0 0

CoV NL63 + MPVh 3 (0,35%) 3 0 0 0

CoV NL63 + VRS 3 (0,35%) 3 0 0 0

MPVh + VP3 3 (0,35%) 3 0 0 0

AdV + VRH/VE + VP3 2 (0,23%) 2 0 0 0

CoV OC43 + VRS 2 (0,23%) 2 0 0 0

CoV HKU1 + CoV OC43 2 (0,23%) 0 0 1 1

VRH/VE + VP4 2 (0,23%) 2 0 0 0

AdV + MPVh 1 (0,12%) 1 0 0 0

AdV + VP3 1 (0,12%) 1 0 0 0

AdV + VRS) 1 (0,12%) 1 0 0 0

AdV + CoV NL63 1 (0,12%) 1 0 0 0

AdV + VRS + CoV 229E 1 (0,12%) 1 0 0 0

AdV + HRV/EV + B. pertussis 1 (0,12%) 1 0 0 0

AdV + C. pneumoniae 1 (0,12%) 1 0 0 0

CoV 229E + VRS 1 (0,12%) 1 0 0 0

CoV 229E + CoV NL63 +

VRH/VE+VRS 1 (0,12%) 1 0 0 0

CoV 229E + VRH/VE 1 (0,12%) 1 0 0 0

CoV HKU1 + VRH/VE + VRS 1 (0,12%) 1 0 0 0

CoV NL63 + MPVh + VRS 1 (0,12%) 1 0 0 0

HRV/EV + B. pertussis 1 (0,12%) 1 0 0 0

VRH/VE + VP1 1 (0,12%) 0 1 0 0

MPVh + VP4 1 (0,12%) 1 0 0 0

VP4 + VRS 1 (0,12%) 1 0 0 0

Tabla 11. Resumen de valores esperados (infecciones simultáneas determinadas por el FilmArray RP) por grupo de edad para la segunda fase de la evaluación clínica prospectiva (septiembre de 2010–enero de 2011)

Infección simultánea Total


VRH/VE + VRS 6 (2,2%) 6 0 n/a n/a

VRH/VE + AdV 6 (2,2%) 6 0 n/a n/a

CoV OC43 + VRH/VE 5 (1,9%) 5 0 n/a n/a

VRH/VE + VP2 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a

VRH/VE + VP3 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a

VRH/VE + VP4 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a

MPVh + VRS 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a

Gripe B + VRS 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a

AdV + CoV OC43 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a


Infección simultánea Total


CoV OC43 + MPVh 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a

CoV OC43 + VRS 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a

HRV/EV + B. pertussis 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a

PIV2 + M. pneumoniae 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO

Rendimiento clínico

NOTA: Los datos de rendimiento clínico presentados en la primera parte de esta sección se obtuvieron antes de

añadir un segundo ensayo para adenovirus al FilmArray RP. Los datos de un estudio comparativo que demuestra la

eficacia de un FilmArray RP modificado (que contiene un segundo ensayo para adenovirus) en comparación con el

FilmArray RP se presentan a partir de la página 34.

El rendimiento clínico del FilmArray RP se determinó mediante un estudio clínico prospectivo en dos fases. La primera

fase del estudio clínico prospectivo se llevó a cabo en tres centros clínicos estadounidenses durante un plazo de seis

meses (diciembre de 2009 a mayo de 2010). La segunda fase del estudio clínico prospectivo se llevó a cabo en dos

de los tres centros durante un plazo adicional de cinco meses (septiembre de 2010 a enero de 2011) en un intento de

conseguir mayor detección de varios organismos de baja prevalencia (es decir, PIV1, PIV2 y PIV4) durante el máximo

estacional anticipado para PIV1 y PIV2. Fueron invitados a participar sujetos con signos y síntomas de infección

respiratoria. Tras obtener el consentimiento informado, se recogieron muestras de FNS para las pruebas tanto en

FilmArray como en el comparador. Un total de 857 sujetos fueron inicialmente inscritos en la temporada respiratoria

2009/2010 (Fase 1) y 4 se retiraron. La Tabla 12 proporciona un resumen de la información demográfica de los 853

sujetos que participaron en la primera fase del estudio prospectivo. Se inscribieron otros 287 sujetos en la temporada

respiratoria 2010/2011 (Fase 2) y se omitió el análisis de 20 especímenes debido a un almacenamiento incorrecto de

los especímenes antes de la prueba. Otros 3 especímenes fueron también excluidos del análisis por falta del

protocolo clínico necesario asociado a los resultados válidos de mezclas de controles externo. La Tabla 12B

proporciona un resumen de los 264 sujetos restantes.

Tabla 12. Resumen demográfico para el estudio clínico prospectivo con FilmArray RP

A. De diciembre de 2009 hasta mayo de 2010 B. De septiembre de 2010 hasta enero de 2011

Un espécimen de FNS procedente de cada sujeto se ensayó en el FilmArray RP. El rendimiento del FilmArray RP se

evaluó comparando el resultado de la prueba FilmArray RP para cada componente del panel con los métodos

adecuados comparador(es)/de referencia mostrados en la Tabla 13.

Sexo Número de sujetos Sexo Número de sujetos

Varón 449 (53%) Varón 151 (57%)

Mujer 404 (47%) Mujer 113 (43%)

Edad Número de sujetos Edad Número de sujetos

≤5 484 (57%) ≤5 240 (91%)

6-21 95 (11%) 6-21 24 (9%)

22-49 190 (22%) 22-49 0 (0%)

≥50 84 (10%) ≥50 0 (0%)


Tabla 13. Métodos de referencia/comparador(es) usados para evaluar el rendimiento del FilmArray RP

Virus Método(s) de

referencia/comparativos

Adenovirus

Cultivo del virus seguido por identificación de DFA

a

Gripe A

Gripe B

Virus paragripal 1

Virus paragripal 2

Virus paragripal 3

Virus respiratorio sincitial

Subtipado de gripe A H1 Cultivo del virus seguido por una prueba

mediante PCR del cultivo del virus con confirmación de secuencia bidireccional

b

Subtipado de gripe A H3

Subtipado de gripe A H1-2009

Virus paragripal 4

Rinovirus humano

2 pruebas mediante PCR de especímenes del paciente con confirmación de secuencia

bidireccional c

Enterovirus humano

Coronavirus 229E

Coronavirus HKU1

Coronavirus NL63

Coronavirus OC43

Metapneumovirus humano

Bordetella pertussis



a El rendimiento de FilmArray RP para detectar AdV, gripe A, gripe B, VP1, VP2, VP3, o VRS, respectivamente, se

comparó con cultivos del virus seguido por identificación mediante anticuerpo fluorescente. Se consideraron como

positivos “verdaderos” cualquier muestra que diera un resultado positivo en el cultivo vírico seguido por la prueba DFA. Se

consideraron como negativos “verdaderos” cualquier muestra que diera un resultado negativo en el cultivo vírico seguido

por la prueba DFA.

b El rendimiento del FilmArray RP para detectar gripe A H1, A H3, A H1-2009, o VP4, respectivamente, se comparó con

cultivos del virus seguido por un ensayo mediante PCR validado analíticamente con confirmación de secuencia

bidireccional. Los ensayos de comparación están diseñados para amplificar una secuencia diferente de la amplificada en

el ensayo o ensayos FilmArray. Ninguno de los ensayos comparadores mediante PCR solapó ninguna secuencia de

amplicón usada en FilmArray, aunque la diana fuera el mismo gen. Se consideraron positivos “verdaderos” para gripe A

H1, A H3, o A H1-2009, respectivamente, cualquier muestra con un resultado positivo para gripe A según el cultivo vírico y

con datos de la secuencia bidireccional que cumplían los criterios de aceptación predefinidos de calidad correspondiente a

las correspondientes secuencias del subtipo depositadas en la base de datos del National Center for Biotechnology

Information (NCBI) GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov) con valores E aceptables. Se consideraron negativos “verdaderos”

para gripe A H1, A H3, o A H1-2009, respectivamente, cualquier muestra con un resultado negativo para gripe A según el

cultivo vírico, o cualquier muestra con un resultado positivo para gripe A según el cultivo vírico, pero con un resultado

negativo en el correspondiente ensayo específico del subtipo mediante PCR. Se consideraron positivos "verdaderos” para

VP4 cualquier muestra para la cual se obtuvieran datos de secuenciación bidireccional correspondientes a las secuencias

deI VP4 depositadas en la base de datos NCBI GenBank a partir del análisis del material del cultivo del virus. Se

consideraron negativos “verdaderos” para VP4 cualquier muestra cuyo análisis del material del cultivo del virus con el

ensayo mediante PCR específico de VP4 validado analíticamente sea negativo.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/


c El rendimiento del FilmArray RP para detectar HRV, EV, CoV 229E, CoV HKU1, CoV NL63, CoV OC43, hMPV, B.

pertussis, C. pneumoniae, o M. pneumoniaerespectivamente, se comparó con un algoritmo predeterminado que usaba

métodos comparadores compuestos. Los métodos están compuestos por dos ensayos mediante PCR analíticamente

validados seguidos por secuenciación bidireccional. Los ensayos de comparación están diseñados para amplificar una

secuencia diferente de la amplificada en el ensayo o ensayos FilmArray. Ninguno de los ensayos comparadores mediante

PCR solapó ninguna secuencia de amplicón usada en FilmArray, aunque la diana fuera el mismo gen. Se consideraron

positivos “verdaderos” cualquier muestra para la cual se obtuvieran datos de secuenciación bidireccional con los criterios

de aceptación predefinidos de calidad criterios de aceptación correspondientes a las secuencias específicas del

organismo depositadas en la base de datos NCBI GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov) con valores E aceptables. Se

consideraron negativos “verdaderos” cualquier muestra que haya obtenido un valor negativo en ambos ensayos de

comparación mediante PCR.

Un total de 853 especímenes se evaluaron para adenovirus, gripe A, gripe B, virus paragripal 3, virus respiratorio

sincitial, coronavirus HKU1, coronavirus NL63, metapneumovirus humano y rinovirus/rnterovirus humano en la primera

fase del estudio. Un total de 1117 especímenes se evaluaron para virus paragripal 1, virus paragripal 2, virus

paragripal 4, coronavirus 229E, coronavirus OC43, B. pertussis, C. pneumoniae, y M. pneumoniae en las fases

primera y segunda del estudio. (Durante la segunda fase del estudio clínico prospectivo solamente se realizarán los

métodos de referencia/comparación para virus paragripal 1, virus paragripal 2, virus paragripal 4, coronavirus 229E,

coronavirus OC43, B. pertussis, C. pneumoniae, y M. pneumoniae en todos los especímenes y se utilizaron para

calcular el rendimiento.) La sensibilidad clínica o Coincidencia de porcentaje positivo (PPA) se calculó como el

100% x (PV / PV + NF). Un Verdadero Positivo (VP) indica que tanto el FilmArray RP como el método comparador

tuvieron un resultado positivo para este organismo especifico y un Falso Negativo (FN) indica que el resultado del

FilmArray fue negativo mientras que el resultado del comparador fue positivo. La especificidad, o Coincidencia de

porcentaje negativo (NPA), se calculó como el 100% x (NV / NV + PF). Un Verdadero Negativo (VN) indica que tanto

el FilmArray RP como el método comparador tuvieron un resultado negativo y un Falso Positivo (FP) indica que el

resultado del FilmArray RP fue positivo mientras que el resultado del comparador fue negativo. Se calculó en intervalo

de confianza exacto binomial bilateral del 95%. Los resultados se resumen en la Tabla 14.

Tabla 14. Sensibilidad y especificidad clínica, o Coincidencia de porcentaje positivo (PPA) y Coincidencia de porcentaje negativo (NPA) para el estudio clínico prospectivo con FilmArray RP

Organismo Sensibilidad IC 95% Especificidad IC 95%

Adenovirus 24/27a

88,9% 70,8 – 97,7% 812/826b

98,3% 97,2 – 99,1%

Gripe A 9/10 90,0% 55,5–99,8% 841/843c 99,8% 99,2 –100%

Gripe A H1 0/0 n/a n/a 853/853 100% 99,6 – 100%

Gripe A H3 0/0 n/a n/a 853/853 100% 99,6 – 100%

Gripe A H1–2009 8/9 88,9% 51,8 – 99,7% 841/844c

99,6% 99,0 – 99,9%

Gripe B 0/0 n/a n/a 853/853 100% 99,6 – 100%

Virus paragripal 1 1/1 100% n/a 1115/1116d

99,9% 99,5–100%

Virus paragripal 2 7/8e,g

87,4% 47,4–99,7% 1107/1109f,g

99,8% 99,4–100%

Virus paragripal 3 23/24h

95,8% 78,9–99,9% 819/829i

98,8% 97,8 – 99,4%

Virus paragripal 4 9/9 100% 66,4–100% 1107/1108j

99,9% 99,5–100%

Virus respiratorio sincitial 52/52 100% 93,2 – 100% 714/801k

89,1% 86,8 – 91,2%

Organismo PPA IC 95% NPA IC 95%

Coronavirus 229E 12/12 100% 73,5 – 100% 1103/1105l 99,8% 99,4 – 100%

Coronavirus HKU1 23/24 95,8% 78,9 – 99,9% 827/829m

99,8% 99,1 – 100%

Coronavirus NL63 23/24 95,8% 78,9 – 99,9% 829/829 100% 99,6 – 100%

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/


Coronavirus OC43 14/14 100% 76,8 – 100% 1098/1103n,o

99,6% 99,0 – 99,9%

Metapneumovirus humano 88/93 94,6% 87,9 – 98,2% 754/760 99,2% 98,3 – 99,7%

Rinovirus/enterovirus humano 190/205 92,7% 88,2 – 95,8% 613/648 94,6% 92,6 – 96,2%

Bordetella pertussis 6/6 100% 54,1 – 100% 1110/1111 99,9% 99,5 – 100%

Chlamydophila pneumoniae 1/1 100% n/a 1116/1116 100% 99,7 – 100%

Mycoplasma pneumoniae 4/4 100% 39,8 – 100% 1113/1113 100% 99,7 – 100% a El FilmArray RP detectó adenovirus en 1/3 especímenes falsos negativos al realizar la prueba por segunda vez. El

adenovirus en el espécimen vuelta a analizar fue identificado como especie C mediante análisis bidireccional de la

secuencia. Los adenovirus en los dos especímenes falsos negativos restantes fueron identificados como especie C y

especie B. b Se identificaron adenovirus en 13/14 especímenes falsos positivos mediante análisis bidireccional de la secuencia. Diez

fueron identificados como especie C, dos como especie B y uno como especie E. c Los virus de la gripe A (subtipo H1-2009) fueron identificados en 3/3 especímenes falsos negativos (2/2 falsos positivos

en comparación con los cultivos de gripe A en solitario) mediante análisis de secuencia con un ensayo alternativo. d

VP1 se identificó en este espécimen mediante análisis bidireccional de la secuencia. e

El virus VP2 no fue detectado en el único espécimen falso negativo mediante análisis por PCR. f El virus VP2 fue detectado en ambos especímenes falsos positivos mediante análisis bidireccional de la secuencia.

g Dos especímenes adyacentes (un falso positivo y un falso negativo) se pueden haber intercambiado en la prueba con el

método de referencia de cultivo del virus según evidencia el análisis bidireccional de la secuencia de estos especímenes. h

El FilmArray RP detectó VPG3 en el único espécimen falso negativo al realizar la prueba por segunda vez. i Se identificaron virus VPG3 en 10/10 especímenes falsos positivos mediante análisis bidireccional de la secuencia. j Se detectó un virus VP4 en este espécimen de FNS falso positivo mediante análisis bidireccional de la secuencia aunque

no fue detectado en el cultivo del virus. k Se identificaron virus VRS en 83/87 especímenes falsos positivos mediante análisis bidireccional de la secuencia.

l CoV 229E se identificó mediante análisis bidireccional de la secuencia en 1/2 especímenes falsos positivos, usando un

ensayo alternativo. m

Los virus CoV HKU1 fueron identificados en 2/2 especímenes falsos positivos mediante análisis bidireccional de la

secuencia, usando un ensayo alternativo. n CoV OC43 se detectó en 2/5 especímenes falsos positivos usando un ensayo alternativo con análisis bidireccional de la

secuencia. o Se determinó que 2/5 falsos positivos eran productos de reacciones cruzadas procedentes de la amplificación de virus

CoV HKU1 con los cebadores del ensayo CoV OC43.

El FilmArray RP detectó un total de 94 infecciones mixtas en la primera fase de la evaluación clínica prospectiva

realizada entre diciembre de 2009 y mayo de 2010 (853 especímenes ensayados y analizados). Esto representa 18%

del total de especímenes positivos (94/524). Ochenta y siete (87/94; 92,6%) fueron infecciones dobles, 6 (6/94; 6,3%)

fueron infecciones triples y uno fue una infección cuádruple (1/94; 1,1%). El número total de resultados de ensayo que

comprendían estas infecciones simultáneas fue de 189. La infección simultánea simple más frecuente fue

rinovirus/enterovirus humano con el virus respiratorio sincitial (20/94; 21,1%). Estos virus fueron los más prevalentes

entre la población analizada. De las 94 infecciones simultáneas, 54 contuvieron uno o más organismos que no se

habían detectado con los métodos de referencia/de comparación, es decir, discrepancia de la infección simultánea.


Tabla 15. Diferentes combinaciones de infecciones simultáneas detectadas por el FilmArray RP en la primera fase del ensayo clínico prospectivo (diciembre de 2009 a mayo de 2010)

Diferentes combinaciones de infecciones simultáneas Detectadas por el FilmArray RP

To

tal

Infe

cc

ion

es

sim

ult

án

eas

Número de discrepantes

Infecciones simultáneasa

Organismo(s) discrepante(s)a

Organismo 1

Organismo 2

Organismo 3

Organismo 4

AdV B. pertussis VRH/VE 1 1

AdV/B. pertussis

AdV VRH/VE VP3 2 2 AdV (2)

AdV CoV 229E VRS 1 1 AdV; RSV

AdV C. pneumoniae 1 0

AdV CoV NL63 1 1 AdV

AdV MPVh 1 1 AdV; MPVh

AdV VRH/VE 8 2 AdV; VRH/VE

AdV VP3 1 1 VP3

AdV VRS 1 1 VRS

CoV 229E VRS 1 0

B. pertussis VRH/VE 1 1 VRH/VE

CoV 229E CoV NL63 VRH/VE VRS 1 1 VRS; CoV 229E

CoV 229E VRH/VE 1 0

CoV HKU1 VRH/VE VRS 1 1 VRS

CoV HKU1 CoV OC43 2 2

CoV OC43 (2)b

CoV HKU1 MPVh 3 0

CoV HKU1 VRH/VE 3 0

CoV HKU1 VRS 3 1 VRS

CoV NL63 MPVh VRS 1 1 VRS

CoV NL63 MPVh 3 0

CoV NL63 VRH/VE 4 1 VRH/VE

CoV NL63 VRS 3 2 VRS (2)

CoV OC43 VRS 2 2 VRS(2) CoV OC43 (2)

MPVh VRH/VE 7 3 MPVh (2); VRH/VE (1)

MPVh VP3 3 1 VP3

MPVh VP4 1 1 MPVh

MPVh VRS 4 4 MPVh (1); VRS (3)

VRH/VE VP1 1 1 VP1

VRH/VE VP3 8 6 VRH/VE (3); VP3 (3)

VRH/VE VP4 2 0

VRH/VE VRS 21 16 VRH/VE (8); VRS (13)

VP4 VRS 1 0


Total de infecciones simultáneas 94 54 65/200 (32,5%)

Total de infecciones dobles 87 47 55/178 (30,9%)

Total de infecciones triples 6 6 8/18 (44,4%)

Total de infecciones cuádruples 1 1 2/4 (50%) a Se ha definido una infección simultánea discrepante o un organismo discrepante como aquella infección o aquel organismo

detectado por FilmArray RP, pero no detectado en los métodos de referencia/comparadores, o por una discrepancia en la

investigación mediante análisis bidireccional de la secuencia. Sesenta y cinco (65) organismos en 54 de las 94 infecciones

simultáneas no fueron detectadas por los métodos de referencia/comparadores. Cuarenta y cuatro (44) se investigaron mediante

análisis bidireccional de la secuencia con un ensayo alternativo; en 37 casos, el ensayo de investigación identificó correctamente el

organismo en el espécimen. b

Ambos resultados discrepantes de CoV O43 fueron falsos positivos debido a reactividad cruzada entre el ensayo CoV OC43 con

los virus CoV HKU1 de los especímenes.

Tabla 16. Diferentes infecciones simultáneas adicionales detectadas por los métodos de referencia/comparadores, pero no por el FilmArray RP, en la primera fase del ensayo clínico prospectivo (diciembre de 2009 a Mayo 2010)

aEsta tabla incluye solamente infecciones simultáneas diferentes que se detectaron por los métodos de

referencia/comparadores, pero no por el FilmArray RP; el resto de infecciones simultáneas detectadas por los métodos de

referencia/comparadores ya fueron incluidos en la tabla anterior.

Tabla 17. Infecciones mixtas detectadas por FilmArray RP en la primera fase (diciembre de 2009 a mayo de 2010) y la segunda fase (septiembre de 2010 a enero de 2011) del ensayo clínco prospectivo y prevalencia de organismos individuales en infecciones mixtas

Combinaciones de organismos Número de muestras positivas

Porcentaje de muestras

totales ensayadas

(n/1117)

Organismo Número de infecciones

mixtas

Prevalencia en infecciones mixtas (n/121)

VRH/VE + VRS 27 2,40% VRH/VE 82 68%

AdV + VRH/VE 14 1,30% VRS 59 49%

VRH/VE + VP3 9 0,80% AdV 24 20%

MPVh + VRH/VE 7 0,60% MPVh 25 21%

CoV OC43 + VRH/VE 5 0,50% VP3 15 15%

MPVh + VRS 5 0,40% CoV NL63 13 11%

CoV NL63 + VRH/VE 4 0,40% CoV OC43 12 10%

CoV HKU1 + MPVh 3 0,30% CoV HKU1 12 10%

Diferentes combinaciones de infecciones simultáneas

a T

ota

l

Infe

ccio

nes

sim

ult

án

eas

Número de infecciones simultáneas discrepantes

Organismo(s) discrepante(s)

Organismo 1 Organismo 2

CoV 229E VRH/VE 1 1 VRH/VE (1)

MPVh VRH/VE 3 3 MPVh (2); VRH/VE (1)

VRH/VE VRS 1 1 VRH/VE (1)

Total de infecciones simultáneas 5 5

Total de infecciones dobles 5 5


Combinaciones de organismos Número de muestras positivas

Porcentaje de muestras

totales ensayadas

(n/1117)

Organismo Número de infecciones

mixtas

Prevalencia en infecciones mixtas (n/121)

CoV HKU1 + VRH/VE 3 0,30% VP4 5 4%

CoV HKU1 + VRS 3 0,30% CoV 229E 4 3%

CoV NL63 + MPVh 3 0,30% B. pertussis 3 2%

CoV NL63 + VRS 3 0,40% VP2 2 2%

CoV OC43 + VRS 3 0,30% C. pneumoniae 1 1%

MPVh + VP3 3 0,30% Gripe B 1 1%

VRH/VE + VP4 3 0,30% M. pneumoniae 1 1%

AdV + VRH/VE + VP3 2 0,20% VP1 1 1%

AdV + VRS) 1 0,20%

CoV HKU1 + CoV OC43 2 0,20%

HRV/EV + B. pertussis 2 0,10%

AdV + B. pertussis + HRV/Entero 1 0,10%

AdV + C. pneumoniae 1 0,10%

AdV + CoV 229E + VRS 1 0,10%

Adenovirus + CoV NL63 1 0,10%

Adenovirus + CoV OC43 1 0,10%

Adenovirus + MPVh 1 0,10%

Adenovirus + VP3 1 0,10%

CoV 229E + CoV NL63 + VRH/VE + VRS 1 0,10%

CoV 229E + VRH/VE 1 0,10%

CoV 229E + VRS 1 0,10%

CoV HKU1 + VRH/VE + VRS 1 0,10%

CoV NL63 + MPVh + VRS 1 0,10%

CoV OC43 + MPVh 1 0,10%

MPVh + VP4 1 0,10%

VRH/VE + VP1 1 0,10%

VRH/VE + VP2 1 0,10%

Gripe B + VRS 1 0,10%

VP4 + VRS 1 0,10%

PIV2 + M. pneumoniae 1 0,10%

Un total de 1117 especímenes clínicos prospectivos fueron probados y analizados durante la primera fase y la

segunda fase de la evaluación clínica prospectiva (temporada respiratoria 2009/2010 y temporada respiratoria

2010/2011). De las 1117 especímenes clínicos prospectivos analizados, 94,6% (1057/1117) de estos especímenes

proporcionaron resultados válidos en el primer intento (es decir, en el primer cartucho cargado). Se obtuvieron

resultados inválidos, o no se obtuvieron resultados, para los restantes 60 especímenes (5,4%) (sin resultados para

24 especímenes debido a pruebas incompletas; 36 especímenes fueron no válidos debido a fallos en el control del

cartucho). De las 24 pruebas incompletas, 3 fueron detenidas por los usuarios (0,3%); 6 fueron debidas a errores

relacionados con el programa (0,6%) y 15 fueron debidas a errores del instrumento (1,3%). Cincuenta y siete (57) de

las 60 especímenes inicialmente fallidos (sin resultados o con resultados inválidos) dieron resultados válidos tras una


segunda prueba simple con un nuevo cartucho/muestra. Los tres (3) especímenes restantes fueron fallidos en el

segundo intento (2 debido a controles fallidos del cartucho, 1 debido a un error del instrumento), pero dieron

resultados válidos al volver a repetir la prueba con otro cartucho/muestra.

Se observó una única fuga procedente de un cartucho (1/1244 cartuchos cargados; 0,08%) durante la primera fase de

la evaluación clínica prospectiva. Tras el descubrimiento de la fuga, el operador siguió los procedimientos de

descontaminación recomendados y llevó a cabo una vigilancia de la contaminación realizando una prueba con un

frotis de la zona que rodeaba el instrumento. No se detectó contaminación. No se observaron fugas de cartuchos en la

segunda fase de la evaluación clínica prospectiva.

Prueba de especímenes preseleccionados archivados

Algunos organismos, como la gripe, bien no se encontraron en el estudio clínico prospectivo o tenían una baja

prevalencia. Para complementar los resultados del estudio clínico prospectivo, se llevó a cabo una evaluación de

especímenes preseleccionados archivados. Los especímenes fueron FNS archivados que se seleccionaron porque

anteriormente habían dado un resultado positivo para uno de los siguientes organismos: Adenovirus, Bordetella

pertussis, coronavirus 229E y OC43, enterovirus, gripes A H1, H1-2009, y H3, gripe B, Mycoplasma pneumoniae, y los

virus paragripales 1-4. Antes de realizar la prueba en el FilmArray RP, se confirmó la presencia (o ausencia en los

especímenes negativos) de los organismos esperados en cada uno de los especímenes mediante ensayos con PCR

específicos del organismos seguidos por secuenciación bidireccional. Los especímenes se organizaron en “paneles

de prueba” y se distribuyeron al azar de forma que los usuarios que realizaban las pruebas FilmArray RP no recibieron

información con respecto al resultado esperado de la prueba. Cada panel contenía especímenes conocidos por ser

positivos y especímenes conocidos por ser negativos para el organismo específico en evaluación, lo que permite el

cálculo de una Coincidencia de porcentaje positivo (PPA) y una Coincidencia de porcentaje negativo (NPA). Un

resumen de la información demográfica disponible de las muestras ensayadas se proporciona en la Tabla 18 y los

resultados de las pruebas FilmArray se presentan en la Tabla 19.

Tabla 18. Resumen de los datos demográficos del estudio de especímenes archivados mediante el FilmArray RP

Total de especímenes 668

Sexo

Mujer (%) 217 (32,5%)

Varón (%) 217 (32,5%)

Desconocidoa

234 (35%)

Edad

Prom. 13

Mediana 7

Mín. 0,5

Máx. 91

Intervalo de edad

≤5 239 (35,8%)

6-21 112 (16,8%)

22–49 42 (6,3%)

≥50 47 (7%)

≥5b 3 (0,4%)

Desconocidoa 225 (33,7%)

a No se proporcionó información demográfica para los especímenes procedentes de una fuente. Puesto que los

especímenes procedían de un hospital pediátrico, se entiende que el intervalo de edad de los especímenes fue de <1 año a 21 años. b

Una fuente proporcionó la categoría de edad “menos de 5 años de edad o igual/mayor de 5 años de edad”


Tabla 19. Resumen de los datos de rendimiento del estudio de especímenes archivados mediante el FilmArray RP

Organismo

Coincidencia de porcentaje positivo (PPA)

Coincidencia de porcentaje negativo (NPA)

PV/PV +NF

Porcentaje IC 95% NV/NV+PF Porcentaje IC 95%

Adenovirus

27/27a

100% 87,2 – 100% 28/28 100% 87,7 – 100%

B. pertussis

53/56b

94,6% 85,1 - 98,9% 56/58c

96,5% 88,1 - 99,6%

Coronavirus 229E

13/13 100% 75,3 – 100% 45/47d

95,7% 85,5 - 99,5%

Coronavirus OC43

24/24 100% 85,8 – 100% 33/36e

91,7% 77,5 - 98,2%

Enterovirus

22/23f

95,7% 78,0 - 99,9% 90/90 100% 96,0 – 100%

Gripe A H1

32/32g

100% 89,1 – 100% 127/127 100% 97,1 – 100%

Gripe A H1–2009

34/34h

100% 89,7 – 100% 125/125 100% 97,1 – 100%

Gripe A H3

54/54i

100% 93,4 – 100% 105/105 100% 96,5 – 100%

Gripe B

30/30j

100% 88,4 – 100% 129/129 100% 97,2 – 100%

M. pneumoniae

54/64k

84,4% 73,1 - 92,2% 58/65l

89,2% 79,1 - 95,6%

Virus paragripal 1 34/35m

97,1% 85,1 - 99,9% 94/94 100% 96,2 – 100%

Virus paragripal 2 28/28n

100% 87,6 – 100% 101/101 100% 96,4 – 100%

Virus paragripal 3 36/36

100% 90,3 – 100% 93/93 100% 96,1 – 100%

Virus paragripal 4 11/11o

100% 71,5 – 100% 6/6 100% 54,1 – 100%

a De los 28 especímenes de AdV recibidos para analizar, el estado del organismo de un (1) espécimen no se pudo

confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional y se excluyó del

análisis posterior. b Dos (2) especímenes positivos para B. pertussis fueron originariamente identificados por el laboratorio de origen como

negativos para B. pertussis, pero inesperadamente se descubrió que eran positivos mediante la PCR específica del

organismo seguido por secuenciación bidireccional. Ambos especímenes dieron negativo cuando se analizaron en el

FilmArray y se descubrió que ambos eran negativos para B. pertussis durante la investigación de discrepancias en la

prueba de confirmación. c Diez (10) especímenes negativos para B. pertussis fueron inicialmente identificados por el laboratorio de origen como

positivos para B. pertussis, pero esto no se pudo confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por

secuenciación bidireccional. Dos (2) de estos especímenes dieron positivo cuando se analizaron en el FilmArray y se

descubrió que ambos eran positivos para B. pertussis durante la investigación de discrepancias en la prueba de

confirmación. Se descubrió que dos (2) muestras positivas según el laboratorio de origen contenían B. holmesii; ambas

muestras proporcionaron el resultado negativo esperado cuando se analizaron con el FilmArray RP. d

Un (1) espécimen negativo para CoV 229E fue identificado inicialmente por el laboratorio de origen como positivo para

CoV 229E, pero esto no se pudo confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación

bidireccional. Este espécimen fue positivo cuando se analizó con el FilmArray RP. e

Cuatro (4) especímenes negativos para CoV OC43 fueron identificados inicialmente por el laboratorio de origen como

positivos para CoV OC43, pero esto no se pudo confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por

secuenciación bidireccional. Dos (2) de estos especímenes fueron positivos cuando se analizaron con el FilmArray RP. f De los 30 especímenes de enterovirus recibidos para análisis, el estado del organismo de 7 especímenes no se pudo

confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional, y se excluyeron del análisis

posterior. g De los 37 especímenes de gripe A H1 recibidos para análisis, el estado del organismo de 5 especímenes no se pudo


posterior. h

De los 37 especímenes de grupo-2009 A H1 recibidos para análisis, el estado del organismo de 2 especímenes no se

pudo confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional, y se excluyeron del

análisis posterior. Una muestra adicional fue excluida debido a un resultado inválido en FilmArray.


i De los 58 especímenes de gripe A H3 recibidos para análisis, el estado del organismo de 4 especímenes no se pudo


posterior. j De los 36 especímenes de gripe B recibidos para análisis, el estado del organismo de 5 especímenes no se pudo


posterior. Una muestra adicional fue excluida debido a un resultado inválido en FilmArray. k Los resultados de Ct obtenidos durante la prueba de confirmación mediante PCR de las 10 muestras que no fueron

detectadas por FilmArray indicaron una baja cantidad del organismo en la muestra (intervalo Ct 34,3-38,7) posiblemente

resultado de la degradación de la muestra durante el almacenamiento de estos especímenes archivados. l Veintidós (22) especímenes negativos para M. pneumoniae fueron inicialmente identificadas por el laboratorio de origen

como positivas para M. pneumoniae, pero esto no se pudo confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido

por secuenciación bidireccional. Siete (7) de estos especímenes fueron positivos cuando se analizaron con el

FilmArray RP. m

De los 38 especímenes de VP1 recibidos para análisis, el estado del organismo de 3 especímenes no se pudo confirmar

mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional, y se excluyeron del análisis posterior. n

De los 29 especímenes de VP2 recibidos para análisis, el estado del organismo de 1 espécimen no se pudo confirmar

mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional, y se excluyeron del análisis posterior. o

De los 13 especímenes de VP4 recibidos para análisis, el estado del organismo de 2 especímenes no se pudo confirmar

mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional, y se excluyeron del análisis posterior.

Prueba de especímenes artificiales de C. pneumoniae

No estaban disponibles para su ensayo especímenes de FNS archivados que anteriormente hubieran dado positivo

en el análisis de C. pneumoniae. Por tanto, se utilizaron especímenes artificiales de C. pneumoniae como sucedáneos

de especímenes clínicos para probar la sensibilidad y especificidad del ensayo FilmArray RP para C. pneumoniae.

Especímenes residuales que se habían recogido durante la evaluación clínica prospectiva se enriquecieron con

C. pneumoniae en niveles clínicamente relevantes (o no se enriquecieron; 50 de cada). El estado del organismo de

cada espécimen artificial fue ciego para los usuarios que analizaron los especímenes.

Tabla 20. Datos del rendimiento en FilmArray RP para especímenes artificiales de C. pneumoniae

Organismo

Coincidencia de porcentaje positivo (PPA)

Coincidencia de porcentaje negativo (NPA)

PV/PV +NF

Porcentaje IC 95% NV/NV+PF Porcentaje IC 95%

C. pneumoniae

50/50

100% 92,9–100%

50/50

100% 92,9–100%

Estudio clínico de comparación (FilmArray RP modificado comparado con el FilmArray RP original)

El FilmArray RP original fue modificado con la adición de un segundo ensayo para adenovirus para mejorar la

capacidad del dispositivo para detectar adenovirus. Para demostrar el rendimiento del FilmArray RP modificado,

se llevó a cabo un estudio de comparación mediante el análisis de 222 especímenes sin identificar de frotis

nasofaríngeos archivados recogidos entre 2008 y 2011 en EE. UU. (en al menos 8 ubicaciones geográficamente

diferentes) y en Escocia (en al menos 1 ubicación) tanto con el FilmArray RP original como con el FilmArray RP

modificado. El FilmArray RP modificado detectó un total de 26 especímenes de adenovirus, de estos solamente 15

fueron detectados por el FilmArray RP original, demostrando una tasa de detección superior en un 73% del FilmArray

RP modificado en este estudio clínico de comparación. Para los restantes 19 organismos del panel, el rendimiento fue

aparentemente equivalente entre las versiones de FilmArray RP original y modificada.


Tabla 21. Comparación del rendimiento entre el FilmArray RP modificado y el FilmArray RP original usando especímenes

archivados

Analito Concordancia positiva Concordancia negativa

orig + mod +

orig + mod -

PPA IC 95% orig - mod -

orig - mod +

NPA IC 95%

Adenovirus 15 0 100%

(15/15) 78,2–100% 196 11

a

94,7% (196/207)

90,7–97,3%

CoV 229E 6 0 100% (6/6)

54,1–100% 216 0 100%

(216/216) 98,3–100%

CoV HKU1 8 0 100% (8/8)

63,1–100% 214 0 100%

(214/214) 98,3–100%

CoV NL63 15 1 b

93,8% (15/16)

69,8–99,8% 206 0 100%

(206/206) 98,2–100%

CoV OC43 13 0 100%

(13/13) 75,3–100% 208 1

c 99,5% (208/209)

97,4– 100%

MPVh 10 0 100%

(10/10) 69,2–100% 209 3

d 98,6% (209/212)

95,9–99,7%

VRH/VE 57 4 e 93,4%

(57/61) 84,0–98,2% 158 3

e 98,1% (158/161)

94,6–99,6%

Gripe A 36 0 100%

(36/36) 90,3–100% 184 1

f

99,5% (184/185)

97,0–100%

Gripe A H1 9 0 100% (9/9)

66,4–100% 213 0 100%

(213/213) 98,3–100%

Gripe A H1-2009

15 0 100%

(15/15) 78,2–100% 205 1

f 99,5% (205/206)

97,3–100%

Gripe A H3 13 0 100%

(13/13) 75,3–100% 209 0

100% (209/209)

98,3–100%

Gripe B 10 0 100%

(10/10) 69,2–100% 212 0

100% (212/212)

98,3–100%

VRS 21 0 100%

(21/21) 83,9–100% 201 0

100% (201/201)

98,2–100%

VP1 11 0 100%

(11/11) 71,5–100% 211 0

100% (211/211)

98,3–100%

VP2 8 0 100% (8/8)

63,1–100% 214 0 100%

(214/214) 98,3–100%

VP3 18 0 100%

(18/18) 81,5–100% 204 0

100% (204/204)

98,2–100%

VP4 6 0 100% (6/6)

54,1–100% 214 2 g 99,1%

(214/216) 96,7–99,9%

B. pertussis 25 1 h 96,2%

(25/26) 80,4–99,9% 196 0

100% (196/196)

98,1–100%

C. pneumoniae

1 0 100% (1/1)

n/a 221 0 100%

(221/221) 98,3–100%

M. pneumoniae

0 0 n/a n/a 222 0 100%

(222/222) 98,4–100%

orig = FilmArray RP original, mod = FilmArray RP modificado, PPA = Concordancia de porcentaje positivo, NPA = Concordancia de porcentaje negativo, IC = Intervalo de confianza. a

Se confirmó mediante análisis bidireccional de la secuencia que 10/11 de las detecciones de AdV adicionales realizadas por el FilmArray RP modificado contenían AdV; estos AdV fueron identificados por secuenciación como AdVC2, AdVC5, AdVC6, AdVE4 y un serotipo indeterminado. Un espécimen no se pudo secuenciar debido a los bajos niveles de analito.

b Se descubrió un solo espécimen positivo para CoV NL63 cuando se analizó con el cartucho RP original, pero no con el cartucho

RP modificado. El espécimen se había identificado anteriormente como positivo para B. pertussis y el laboratorio original no lo había analizado para CoV NL63. Este espécimen anteriormente ensayado usando el cartucho original fue negativo para CoV NL63. No hubo especímenes suficientes para llevar a cabo la investigación de discrepancias. Se sospecha que la baja carga de virus pudo haber causado este resultado falso.

c La discrepancia acerca del Coronavirus OC43 fue debida a reactividad cruzada entre el ensayo OC43 y el virus HKU1 que fue

detectado en el cartucho RP modificado y no en el cartucho RP original.


d 2/3 especímenes discrepantes de metapneumovirus humano fueron confirmados mediante análisis bidireccional de la

secuencia. Se sospecha que la baja carga de virus es la responsable de haber evitado la detección mediante la secuenciacion del otro espécimen. e

0/7 especímenes discrepantes de rinovirus/enterovirus humano fueron confirmados mediante análisis bidireccional de la secuencia. Se sospecha que la baja carga de virus es la responsable de haber evitado la detección mediante la secuenciacion. f Un único espécimen que contenía gripe A H1-2009 proporcionó resultados dudosos en el cartucho RP original, pero fue

detectado por el cartucho modificado. g El virus paragripal 4 fue confirmado en ambos especímenes discrepantes mediante análisis bidireccional de la secuencia.

h B. pertussis fue confirmado en el espécimen discrepante mediante análisis bidireccional de la secuencia.

Para complementar los datos de especímenes archivados de organismos de baja prevalencia y para proporcionar

datos adicionales sobre el rendimiento de adenovirus específicamente para AdVC2 y AdVC6, se analizó un conjunto

de 44 especímenes artificiales (FNS enriquecidos) (10 AdVC2, 10 AdVC6, 10 C. pneumoniae, y 14 M. pneumoniae) y

con el FilmArray RP modificado como con el FilmArray RP original. El estado del organismo de cada espécimen

artificial fue ciego para los usuarios que analizaron los especímenes. El FilmArray RP modifiado detectó los

20 especímenes de adenovirus enriquecidos, mientras que el FilmArray RP original no detectó ninguno de los

especímenes de adenovirus enriquecidos. El FilmArray RP modificado también detectó otro adenovirus en el fondo de

un espécimen enriquecido con C. pneumoniae. El rendimiento fue aparentemente equivalente entre el FilmArray RP

modificado y el FilmArray RP original para C. pneumoniae y M. pneumoniae.

Tabla 22. Datos de comparación clínica entre el FilmArray RP modificado y el FilmArray RP original para 44 especímenes

artificiales

Organismo

Concordancia positiva Concordancia negativa

orig + mod +

orig + mod -

PPA IC 95% orig - mod -

orig - mod +

NPA IC 95%

Adenovirus (AdVC2 y AdVC6)

0 0 n/a n/a 23 21a 52,3%

(23/44) 36,7–67,5%

C. pneumoniae

8 1 88,9% (8/9)

51,8–99,7% 35 0 100%

(35/35) 90,0–100%

M. pneumoniae

14 0 100%

(14/14) 76,8–100% 30 0

100% (30/30)

88,4–100%

orig = FilmArray RP original, mod = FilmArray RP modificado, PPA = Concordancia de porcentaje positivo, NPA = Concordancia de porcentaje negativo, IC = Intervalo de confianza. a

Además de los diez especímenes enriquecidos con AdVC6 y los diez especímenes enriquecidos con AdVC2, el FilmArray RP modificado también detectó un adenovirus en el fondo de un espécimen que había sido enriquecido conC. pneumoniae. Esta detección fue confirmada mediante análisis bidireccional de la secuencia como AdVC2.

Los adenovirus detectados en especímenes archivados se clasificaron por grupos de serotipos mediante análisis bidireccional de la secuencia. Combinados, los datos de comparación de los especímenes archivados y artificales demuestran la detección mejorada de AdVC2, AdVC5, AdVC6, AdVE4 mediante el FilmArray RP modificado comparado con el FilmArray RP original.

Tabla 23. Detecciones por serotipo de adenovirus mediante el FilmArray RP modificado y el FilmArray RP original en

especímenes archivados y artificiales

Adenovirus (Serotipado mediante PCR)

Número de especímenes positivos para adenovirus

(detectados según el FilmArray RP modificado)

Detecciones mediante el FilmArray RP original

AdVC1 8 8/8 (100%)

AdVC2

15 a

2/15 (13%)

AdVC5 2 1/2 (50%)

AdVC6 16 a

1/16 (6%)

AdVB3 1 1/1 (100%)

AdVE4 3 2/3 (67%)

Serotipo de AdV desconocido 2 0/2 (0%)


a Diez especímenes de AdVC2 y diez especímenes de AdVC6 se realizaron de forma artificial enriqueciendo estos virus

en especímenes de FNS. Un AdVC2 también fue detectado, y su secuencia fue confirmada, en el fondo de un espécimen enriquecido con C. pneumoniae.

Límite de detección

La sensibilidad analítica o Límite de detección (LoD) de los organismos FilmArray RP se determinó mediante el

análisis de diluciones limitantes de cultivos o especímenes clínicos cuantificadas. El LoD se define como la menor

concentración a la que el organismo se detecta de una forma consistente (detección en ≥95% de las muestras

analizadas). La concentración del límite de detección (LoD) de cada analito de FilmArray RP incluido en la Tabla 24

se ha confirmado con la detección en, al menos, 19/20 réplicas (≥ 95 %) en los sistemas FilmArray y FilmArray 2.0.

El sistema FilmArray Torch detectó estos mismos analitos con un límite de detección (LoD) de 1x (según FilmArray 2.0)

con una tasa de ≥ 95 % (n = 20).

Tabla 24. LoD para los organismos detectados por FilmArray RP

Organismo Cepa Concentración del LoD

Adenovirusa

AdVC1

100 TCID50/mla

AdVC2

AdVE4

AdVC6

Coronavirus 229E ATCC VR-740 4 TCID50/ml

Coronavirus HKU1b Espécimen clínico

a 1,9 x 10

6 copias de ARN/ml

Coronavirus NL63 NR-470 5 TCID50/ml

Coronavirus OC43 ATCC VR-759 600 TCID50/ml

Enterovirus Echovirus 6 30.000 TCID50/mlc

Metapneumovirus humano hMPV-16, IA10-2003 (Tipo A1)

2 TCID50/ml

Rinovirus humano Tipo 1A 1 TCID50/ml

Gripe A H1N1 A/Brisbane/59/07 200 TCID50/ml

A/New Caledonia/20/99 2000 TCID50/ml

Gripe A H1-2009 A/SwineNY/03/2009 100 TCID50/ml

Gripe A H3N2 A/Wisconsin/67/2005 5 TCID50/ml

A/Port Chalmers/1/73 50 TCID50/ml

Gripe B B/FL/04/06

60 TCID50/ml B/Taiwan/2/62

Virus paragripal 1 Tipo 1 500 TCID50/ml



Virus paragripal 4 Tipo 4 (subtipo A) 5000 TCID50/ml

Virus respiratorio sincitial Tipo A 2 TCID50/ml

Bordetella pertussis A639 4000 UFC/ml

Chlamydophila pneumoniae TW183 3000 copias de ADN/ml

Mycoplasma pneumoniae M129 (Tipo 1) 30 TCID50/ml

a El límite de detección (LoD) de adenovirus de 100 TCID50/ml se confirmó mediante el FilmArray RP (v1.7) modificado.

El límite de detección (LoD) de adenovirus de FilmArray RP original fue de 300 TCID50/ml.


b Coronavirus HKU1 se evaluó usando un espécimen clínico que contenía una carga elevada de coronavirus HKU1. El

espécimen se cuantificó mediante PCR en tiempo real frente a una curva patrón del transcrito sintético del ARN del

coronavirus HKU1 para obtener la cuantificación del ácido nucleico vírico en el espécimen (copias de ARN/ml). c El LoD de enterovirus (30.000 TCID50/ml representa la sensibilidad de los ensayos Entero1 y Entero2. Se puede obtener

un resultado positivo para rinovirus/enterovirus humano a concentraciones 100 veces inferiores (300 TCID50/ml) basadas

en la detección del virus con una combinación de 6 ensayos relevantes (HRV1-4, Entero1, y Entero2).

NOTA: La mayor parte de los virus volvieron a crecer y se cuantificaron en TCID50 (50% de la dosis infecciosa en

tejido cultivado) para determinar el LoD. La unidad TCID50 es una medida de la infectividad o citotoxicidad en lugar

del número de organismos o copias de ácido nucleico. La variabilidad en TCID50/ml puede que no refleje con

precisión las diferencias en la sensibilidad relativa de detección entre diferentes organismos o diferentes cepas del

mismo organismo.

Reactividad analítica (Inclusividad)

La reactividad analítica de los ensayos FilmArray RP se evaluó con un panel de inclusividad que consiste en

cepas/aislados que representan la diversidad genética, temporal, y geográfica del FilmArray RP: 33 adenovirus,

6 coronavirus (1 229E, 3 HKU1, 1 OC43, y 1 NL63), 10 metapneumovirus humano, 12 enterovirus, 14 rinovirus,

22 gripe A (incluyendo 10 gripe A H1, 3 gripe A H1-2009, y 9 gripe A H3), 11 gripe B, 12 virus paragripal (3 PIV1,

2 PIV2, 3 PIV3, y 4 PIV4), 6 virus respiratorio sincitial, 9 Bordetella pertussis, 4 Chlamydophila pneumoniae, y

9 Mycoplasma pneumoniae. Cada cepa se analizó inicialmente en una matriz simulada de muestra FNS en o cerca

del LoD (mediante el FilmArray RP original salvo que se indique otra cosa). Se probaron concentraciones más altas si

el organismo no se pudo detectar al LoD. Cada una de las 148 cepas analizadas en este estudio fueron detectadas

por el FilmArray RP.

Para algunos organismos, se llevó a cabo un análisis adicional de datos clínicos y análisis in silico de las secuencias

de la base de datos de la NCBI, con el fin de complementar el análisis del panel de inclusividad.

Adenovirus

Los ensayos de inclusividad de adenovirus se realizaron sobre 33 aislados de adenovirus que representaban

22 serotipos diferentes pertenecientes a las especies A-F. Cada aislado se ensayó a una concentración del LoD

(100 TCID50/ml) usando el FilmArray RP modificado. Si no se detectó un aislado de adenovirus al LoD, se repitió

el análisis a 10x LoD. Los aislados no detectados a 10x LoD (1000 TCID50/ml) se marcaron como No detectado,

sin embargo, se pudo observar cierta reactividad en algunos serotipos cuando estaban presentes en una muestra

a niveles más altos.

La Tabla 25 proporciona resultados de inclusividad para serotipos respiratorios que pertenecen a las especies B,

C, y E. El FilmArray RP fue diseñado para detectar todas las especies/serotipos respiratorios del adenovirus.

AdVB55 y AdVC57 son los únicos serotipos respiratorios que no fueron evaluados en la prueba de inclusividad.

La información disponible de la secuencia para estos serotipos indica una correspondencia perfecta con los

cebadores del ensayo de adenovirus FilmArray RP y se predice una detección eficaz a 1x LoD.


Tabla 25. Resultados de la prueba de inclusividad para adenovirus - Serotipos respiratorios

Especie Serotipo Aislado Concentración

detectada

Multiplicidad de LoD

detectados

B

3 Zeptometrix #0810062CF 100 TCID50/ml 1x

7a Zeptometrix #0810021CF 100 TCID50/ml 1x

7d2 Iowa/2001 100 TCID50/ml 1x

7h Iowa/1999 100 TCID50/ml 1x

11 Wisconsin/2005 100 TCID50/ml 1x

14 Missouri/2005 100 TCID50/ml 1x

16 ATCC VR-17 100 TCID50/ml 1x

21 Missouri/2005 100 TCID50/ml 1x

34 Texas/2005 100 TCID50/ml 1x



C


2

New York/2004 100 TCID50/ml 1x

ATCC VR-846 100 TCID50/ml 1x

Aislado clínico #266153 100 TCID50/ml 1x




6

Colorado/2005 100 TCID50/ml 1x





E 4a South Carolina/2004 100 TCID50/ml 1x

4p3 New Jersey/2005 100 TCID50/ml 1x

La Tabla 26 proporciona resultados de inclusividad para serotipos no respiratorios que pertenecen a las

especies A, D y F. La sensibilidad de la detección de adenovirus no respiratorios variará.

Tabla 26. Resultados de la prueba de inclusividad para adenovirus - Serotipos no respiratorios

Especie Serotipo Aislado Concentración

detectada Multiplicidad de LoD detectados

A

12 ATCC VR-863 No detectadoa

18 ATCC VR-19 No detectadoa


Db




F 40 Zeptometrix #0810084CF No detectado

a

41 Indiana/2004 100 TCID50/ml 1x


a Los serotipos de adenovirus AdVA12, AdVA18 y AdVF40 no fueron detectados cuando se analizaron a 10x LoD

(TCID50/ml). b

La especie de adenovirus D comprendía más de 30 serotipos diferentes.

Información complementaria sobre la reactividad de adenovirus (datos clínicos procedentes de FilmArray RP original y

modificado):

Un subconjunto de especímenes clínicos prospectivos y retrospectivos archivados con resultado positivo en

FilmArray RP para adenovirus se sometió a PCR y a análisis bidireccional de la secuencia. El análisis BLAST de

los datos de las secuencias obtenidos de una región del exón del gen de adenovirus identificó la

especie B (serotipos 3, 3+11p, 7, 16 y 21), la especie C (serotipos 1, 2, 5 y 6), y la especie E (serotipo 4) en estos

especímenes clínicos. Las especies A, D, F y G (frecuentemente asociadas con conjuntivitis y gastroenteritis) no

fueron identificadas entre los especímenes clinicos.

Coronavirus 229E, HKU1, OC43 y NL63

Tabla 27. Resultados de las pruebas de inclusividad para coronavirus

Coronavirus Cepa / Aislado Concentración detectada


Detectado

229E ATCC VR-740 4 TCID50/ml 1x

HKU1

Espécimen clínico #1120 2,08 x 10

6

Copias de ARN/mlb

1,1x

Espécimen clínico #6123 1,41 x 10

4 TCID50/ml

a

~1,9 x 106 copias de ARN/ml

b

1x

Espécimen clínico #6213

(Tipo B)c

1,9 x 106 copias de ARN/ml

b 1x

NL63 Recursos BEI NR-470 50 TCID50/ml 1x

OC43 ATCC VR-759 600 TCID50/ml 1x

a El virus incluido en el Espécimen clínico n.º 6123 se hizo crecer en cultivo y se cuantificó (TCID

50/ml) mediante ensayo de

infectividad. b La cuantificación del ARN vírico incluido en los especímenes clínicos que contenían coronavirus HKU1 se llevó a cabo

usando RT-PCR en tiempo real frente a una curva patrón generada a partir de una plantilla de ARN sintético. c La clasificación del Coronavirus HKU1 Espécimen clínico n.º 6213 (Tipo B) fue determinada mediante análisis bidireccional

de la secuencia del gen de la nucleocápsida (N).


Tabla 28. Resultados de las pruebas de inclusividad para el metapneumovirus humano

Subtipo ID de la cepa

Concentración

detectada


detectados

A1 9 IA3-2002 2 TCID50/ml 1x

16 IA10-2003 2 TCID50/ml 1x

A2 20 IA14-2003 2 TCID50/ml 1x

27 IA27-2004 2 TCID50/ml 1x

B1 3 Peru2-2002 2 TCID50/ml 1x

5 Peru3-2003 2 TCID50/ml 1x


Subtipo ID de la cepa

Concentración

detectada


detectados

13 IA7-2003 2 TCID50/ml 1x

18 IA18-2003 2 TCID50/ml 1x

B2 8 Peru6-2003 2 TCID50/ml 1x

22 IA16-2003 2 TCID50/ml 1x

Rinovirus y enterovirus humano

Las pruebas de inclusividad analítica evaluaron la reactividad de los ensayos VHR y Entero del FilmArray RP con

25 serotipos individuales que representaban diferentes especies, incluyendo las especies A-D de enterovirus y

las especies A y B de rinovirus.

Tabla 29. Resultados de las pruebas de inclusividad para rinovirus / enterovirus humano

Especie Cepa / Serotipo

Concentración

detectada

Multiplicidad de LoDa

detectados

Enterovirus A

Coxsackievirus A10

ATCC VR-168 30.000 TCID50/ml 1x

Enterovirus 71 ATCC VR-1432

1:30.000 dilución de una solución madre

n/a

Enterovirus 71 9.400 TCID50/mlb <1x

Enterovirus B

Coxsackievirus A9 9.400 TCID50/mlb <1x

Coxsackievirus B3 30.000 TCID50/ml 1x

Coxsackievirus B4 30.000 TCID50/ml 1x

Echovirus 6 30.000 TCID50/ml 1x

Echovirus 9 9.400 TCID50/mlb <1x

Echovirus 11 300.000 TCID50/ml 10x

Enterovirus C

Coxsackievirus A21 /Kuykendall


Coxsackievirus A24 DN-19


Enterovirus D Enterovirus 68 (F02-3607 corn)


Rinovirus A

A1 1 TCID50/ml 1x

A2 (HGP)


A7 (68-CV11)


A16 (11757)


A34 (137-3)


A57 (Ch47)



Especie Cepa / Serotipo

Concentración

detectada

Multiplicidad de LoDa

detectados

A77 (130-63)


A85 (50-525-CV54)


Rinovirus B

B3 (FEB)


B14 (1059)


B17 (33342)

ATCC-282 100 TCID50/ml 100x

B27 (5870)


B42 (56822)


B83 (Baylor 7)


a El LoD para enterovirus usado en este estudio fue 30.000 TCID50/ml. El LoD para rinovirus fue 1 TCID50/ml.

b Las cepas fueron analizadas por debajo de la concentración LoD para enterovirus LoD debido a una menor concentración

del virus en el fluido de cultivo.

Información complementaria sobre la reactividad de rinovirus/enterovirus humano (datos clínicos y análisis in silico):

Además de las pruebas de inclusividad analítica, se llevó a cabo un análisis BLAST sobre los datos de las

secuencias obtenidas a partir de especímenes clínicos prospectivos y retrospectivos archivados que dieron

positivo en la prueba mediante FilmArray para rinovirus/enterovirus humano. En los especímenes clínicos se

identificaron las siguientes especies y subtipos:

Especie de enterovirus A: Enterovirus serotipo 71

Coxsackievirus A2 y A6

Especie de enterovirus B: Echovirus serotipos 3, 6, 7, 11, 15, 21 y 30

Coxsackievirus B1, B3 y A9

Enterovirus serotipos 81 y 88

Especie de Rhinovirus A: Rinovirus humano serotipos 1B, 8, 9,10, 13, 19, 21, 22, 23, 28, 30, 32, 34, 38, 39,

40, 46, 47, 49, 51, 54, 56, 58, 59, 61, 62, 66, 68, 75, 77, 78, 80, 82, 98 y 100

Especie de Rhinovirus B: Rinovirus humano serotipos 27, 69, 83 y 91

Rinovirus especie C: Al menos 3 cepas individuales y 12 aislados diferentesa

aEl rinovirus humano especie C (también conocida como enterovirus especie D) no se clasificó en serotipos.

El enterovirus especie C incluye los tipos 1-3 del virus de la poliomielitis. La reactividad simulada de los ensayos

FilmArray RP para rinovirus/enterovirus humano con secuencias de enterovirus especie C y virus de la

poliomielitis se generó mediante un enfoque bioinformático. El alineamiento de las secuencias de cebadores del

ensayo con las secuencias listadas en GenBank indicó que el ensayo FilmArray RP puede reaccionar con los

tipos 1, 2 y 3 del virus de la poliomielitis, proporcionando un resultado de rinovirus/enterovirus humano.


Tabla 30. Reactividad simulada de los ensayos VRH y entero de FilmArray RP con secuencias del virus de la poliomielitis

Cepa GenBank ID Resultado simulado en FilmArray RP

Poliovirus humano 1 cepa CHN8264c/GZ/CHN/2004 FJ769385 Rinovirus/enterovirus humano

Poliovirus humano 2, genoma completo AY177685 Rinovirus/enterovirus humano

Poliovirus humano 3 cepa IRA10853, genoma completo EU684056 Rinovirus/enterovirus humano

Gripe A

Tabla 31. Resultados de las pruebas de inclusividad para aislados humanos de gripe A

Tipo Cepa

Concentración

detectada


detectados

Gripe A

H1

A/Brisbane/59/07 200 TCID50/ml 1x

A/Solomon Islands/3/2006 200 TCID50/ml 1x

A/Hawaii/15/01

CDC#2001701117 1:300

a n/a

A/New Caledonia/20/99 200 TCID50/ml 1x

A1/Denver/1/57 200 TCID50/ml 1x

A/Mal/302/54 200 TCID50/ml 1x

A1/FM/1/47 200 TCID50/ml 1x

A/Weiss/43 200 TCID50/ml 1x

A/PR/8/34 2000 TCID50/ml 10x

A/NWS/33 200 TCID50/ml 1x

Gripe A

H1-2009

A/SwineNY/01/2009 100 TCID50/ml 1x



Gripe A

H3

A/Brisbane/10/07 5 TCID50/ml 1x

A/Wisconsin/67/2005 5 TCID50/ml 1x

A/NewYork/55/2005

CDC#2005705561 1:300.000

a n/a

A/Victoria/3/75 5 TCID50/ml 1x

A/Port Chalmers/1/73 5 TCID50/ml 1x

A/Aichi/2/68 50 TCID50/ml 10x

A/Hong Kong/8/68 5 TCID50/ml 1x


Tipo Cepa

Concentración

detectada


detectados

Alice (vaccine) A/England/42/72


MRC-2 Cepa recombinante


a La cepa no se volvió a cultivar ni a titular. Se usaron diluciones del cultivo/títulos originales procedentes de CDC.

El título de HA para A/Hawaii/15/01 es desconocido y el título de HA para A/NewYork/55/2005 fue 256.

Información complementaria sobre reactividad para cepas de gripe de origen humano, porcino y aviar (datos de pruebas

analíticas y análisis in silico):

Los virus de la gripe A se clasifican por hospedador y subtipo, una combinación de tipos de H (hemaglutinina) y N

(neuraminidasa). Ocasionalmente, cepas de la gripe no humana se tranfieren a hospedadores humanos. Algunas

cepas de gripe porcina y aviar se probaron o analizaron mediante bioinformática para determinar su reactividad

con los ensayos de la gripe A y de subtipado incluidos en el FilmArray RP. Los ensayos gripe A (FluA-pan1 y

FluA-pan2) fueron diseñados para reaccionar con todas las cepas de la gripe A. Los ensayos de subtipado de la

gripe A incluidos en el FilmArray RP (FluA-H1-pan, FluA-H1-2009 y FluA-H3) fueron diseñados para reaccionar

con subtipos específicos HA, con un interés especial en las cepas de hospedadores humanos. En ensayo FluA-

H1-2009 fue diseñado para ser específico de la variante pandémica humana del virus H1N1 de origen porcino que

apareció en 2009.

Las pruebas de aislados víricos o de ácidos nucleicos procedentes de cultivos víricos indicaron que los ensayos

de la gripe A y de subtipado incluidos en FilmArray RP reaccionan con algunas cepas de origen porcino y aviar tal

como se esperaba (Tabla 32)

Tabla 32. Resultados de las pruebas de inclusividad con algunos aislados de la gripe A de origen porcino y aviar

Hospedador Subtipo Aislado / Cepa

Concentración de

la prueba

FilmArray

Resultado

Porcino H1N1 Influenza A/Swine/1976/31 ~1 x 10

6 EID50/ml

Gripe A H1a

H1N1 Influenza A/Swine/Iowa/15/30 ~1 x 107

EID50/ml

Aviar H1N2 Kilbourne F63

A/NWS/34 (HA) x A/Rockefeller Institute/5/57 (NA)b

14,8 ng de ARN Gripe A H1

a No se observó reactividad con el ensayo de subtipado H1-2009 u otros ensayos del FilmArray RP.

b Se obtuvo ARN purificado y cuantificado de un cultivo de gripe aviar procedente de Recursos BEI.

Las pruebas de laboratorio de las cepas de la gripe A fueron complementadas con predicciones de la reactividad

in silico usando bioinformática y alineamientos de secuencias entre los cebadores del ensayo FilmArray RP y las

secuencias de gripe A de origen humano, porcino y aviar. Para cada cepa, se evaluaron varias (3) GenBank IDs,

correspondientes a los segmentos génicos a los que se dirigen los ensayos FilmArray RP (matrix [MA], no

estructural [NES] y de hemaglutinina [HA]). Se determinó la reactividad simulada en función del número y

ubicación de emparejamientos incorrectos en la región diana.

Basándose en este análisis, se prevé que las cepas relacionadas en la Tabla 33 reaccionen con los ensayos de

gripe A y de subtipado H1 o H3 en FilmArray RP tal como se indica.


Tabla 33. Reactividad simulada de los ensayos de gripe A en FilmArray para cepas de origen humano, porcino y aviar.

Hospedador Subtipo Aislado / Cepa GenBank ID

Resultado de FilmArray simulado

Humano

H1N1 A/California/UR06-0393/2007(H1N1)

CY026540

Gripe A H1

CY026543

CY026539

H1N2 A/New York/297/2003(H1N2)

CY002668

CY002665

CY002664

H1-2009 A/Aalborg/INS133/2009(H1N1)

CY063606 Gripe A H1-

2009 CY063610

CY063607

H3N2 A/Boston/38/2008(H3N2)

CY044581

Gripe A H3

CY044584

CY044580

A/(H3N2)va A/Pennsylvania/09/2011(H3N2)

JN655537

JN655534

JN655538

Porcino

H1N1 A/swine/Wisconsin/1/1971(H1N1)

CY022414

Gripe A H1

CY022417

CY022413

H1N2 A/swine/Hong Kong/NS857/2001(H1N2)

GQ229348

GQ229350

GQ229347

Aviar

H3N1 A/blue-winged teal/ALB/452/1983(H3N1)

CY004635

Gripe A H3

CY004638

CY005940

H3N5 A/mallard/Netherlands/2/1999(H3N5)

CY060261

CY060264

CY060265

H3N7 A/northernshoveler/California/HKWF1367/2007(H3N7)

CY033372

CY033375

CY033376

H3N8 A/American black duck/Washington/699/1978(H3N8)

GU052299

GU052302

GU052300 aLa variante del virus H3N2 de origen porcino fue identificada en especímenes de origen humano en 2011. Todas las

secuencias disponibles en GenBank (a fecha del 12 de diciembre de 2011) fueron evaluadas y se proporciona en esta tabla un

único representante individual. Se prevé que todos los aislados cuyas secuencias estaban disponibles generen un resultado de

gripe A H3 en su análisis con el FilmArray RP.


Se prevé que las cepas de origen humano, porcino y aviar relacionadas en la Tabla 34 reacciones solamente con los ensayos de gripe A (FluA-pan1 y FluA-pan2) del FilmArray RP proporcionando un resultado Gripe A (ingún subtipo detectado).

Tabla 34. Reactividad simulada de los ensayos de gripe A en FilmArray para cepas de origen humano, porcino y aviar.

Hospedador Subtipo Cepa GenBank ID Reactividad

simulada en FilmArray RP

Humano

H2N2 A/Albany/20/1957(H2N2)

CY022013

Gripe A (ningún subtipo

detectado)

CY022014

CY022017

H5N1

A/Cambodia/R0405050/2007(H5N1)

HQ200572

HQ200573

FJ225472

A/Hong Kong/486/97(H5N1)

AF084281

AF255368

AF115289

H7N2 A/New York/107/2003(H7N2)

EU587368

EU587373

EU587374

H7N3 A/Canada/rv504/2004(H7N3)

CY015006

CY015007

CY015010

H7N7 A/Netherlands/219/03(H7N7)

AY340089

AY342422

AY338459

H9N2 A/Hong Kong/1073/99(H9N2)

AJ404626

AJ278647

AJ278649

Porcino

H1N2 A/swine/Sweden/1021/2009(H1N2)

GQ495135

GQ495136

GQ495132

H5N1 A/swine/East Java/UT6010/2007(H5N1)

HM440124

HM440111

HM440123

Aviar

H2N2

A/chicken/New York/13828-3/1995(H2N2)

CY014822

CY014825

CY014821

A/Japan/305/1957(H2N2)

CY045804

CY014977

CY014980

A/Korea/426/1968(H2N2)

CY031595

CY031596

CY031599

H3N2 A/American black duck/North Carolina/ 675-075/2004(H3N2)

GU051135

GU051136

GU051137

H3N6 A/American black duck/New Brunswick/25182/2007(H3N6)

CY047696

CY047697

CY047700

H4N6 A/blue-winged teal/Minnesota/ Sg-00043/2007(H4N6)

CY063977

CY063978

CY063981

H5N1 A/rook/Rostov-on-Don/26/2007(H5N1)

EU814503

EU814504

EU814507


Hospedador Subtipo Cepa GenBank ID Reactividad

simulada en FilmArray RP

A/turkey/VA/505477-18/2007(H5N1)

GU186509

GU186510

GU186513

A/chicken/Bangladesh/1151-10/ 2010(H5N1)

HQ156765

HQ156766

HQ156764

H5N2 A/duck/Pennsylvania/10218/1984(H5N2)

AB295603

AB286120

AB286652

H5N3 A/duck/Singapore/F119/3/1997(H5N3)

GU052802

GU052803

GU052805

H6N1 A/duck/PA/486/1969(H6N1)

EU743286

EU743287

EU743289

H6N2 A/mallard/Czech Republic/ 15902-17K/2009(H6N2)

HQ244430

HQ244433

HQ244434

H7N7 A/mallard/Korea/GH171/2007(H7N7)

FJ750872

FJ959087

FJ959090

H9N2 A/turkey/Wisconsin/1/1966(H9N2)

CY014663

CY014664

CY014667

H10N7 A/chicken/Germany/N/1949(H10N7)

GQ176136

GQ176135

GQ176132

H11N9 A/duck/Memphis/546/1974(H11N9)

CY014691

GQ257441

CY014687


Gripe B

Tabla 35. Resultados de la prueba de inclusividad para la gripe B

Cepa Concentración detectada

Multiplicidad de

LoD detectados

B/FL/04/06 60 TCID50/ml 1x

B/Ohio/01/2005

CDC#2005743348 1:3.000.000

a n/a

B/Florida/07/04 60 TCID50/ml 1x

B/Malaysia/2506/04 600 TCID50/ml 10x

B/Hong Kong/5/72 ATCC VR-823 60 TCID50/ml 1x

B/Taiwan/2/62 ATCC VR-295 60 TCID50/ml 1x

B/Maryland/1/59 ATCC VR-296 600 TCID50/ml 10x

B/GL/1739/54 ATCC VR-103 60 TCID50/ml 1x

B/Allen/45 ATCC VR-102 6000 EID50/ml n/a

B/Lee/40ATCC VR-101 60 TCID50/ml 1x

B/Brigit Recombinant ATCC VR-786 60 TCID50/ml 1x

a La cepa no se volvió a cultivar ni a titular. Se usaron diluciones del cultivo/títulos originales procedentes de CDC.

El título de HA para B/Ohio/01/2005 fue 128.

Virus paragripales

Tabla 36. Resultados de la prueba de inclusividad para los virus paragripales

Tipo Cepa o fuente Concentración

Multiplicidad de

LoD detectados

VP1

Zeptometrix #0810014CF 500 TCID50/ml 1x

C-35 ATCC VR-94 500 TCID50/ml 1x

C39 BEI NR-3226 500 TCID50/ml 1x

VP2 Zeptometrix #0810015CF 10 TCID50/ml 1x

Greer ATCC VR-92 10 TCID50/ml 1x

VP3


C-243 ATCC VR-93 500 TCID50/ml 50x

NIH 47885 BEI NR-3233 100 TCID50/ml 10x

VP4 A

M25 ATCC VR-1378 5000 TCID50/ml 1x


B CH-19503 ATCC VR-1377 5000 TCID50/ml 1x

Zeptometrix #08010060BCF 5000 TCID50/ml 1x



Tabla 37. Resultados de la prueba de inclusividad para el virus respiratorio sincitial

Tipo Cepa o fuente

Concentración

detectada

Multiplicidad de

LoD detectados

A

Zeptometrix #0810040ACF 2 TCID50/ml 1x

A/A2 ATCC VR-1540 2 TCID50/ml 1x

A/Long ATCC VR-26 2 TCID50/ml 1x

B

B/9320 ATCC VR-955 2 TCID50/ml 1x

B/Wash18537/62 ATCC VR-1580 2 TCID50/ml 1x

B/WV/14617/85 ATCC VR-1400 2 TCID50/ml 1x


Tabla 38. Resultados de la prueba de inclusividad para Bordetella pertussis

Cepa Concentración detectada Multiplicidad de LoD

detectados

A639 4000 UFC/ml 1x

E431 4000 UFC/ml 1x

F ATCC 8467 4000 UFC/ml 1x

5 [17921] ATCC 9340 4000 UFC/ml 1x

18323 [NCTC 10739] ATCC 9797 4000 UFC/ml 1x

10-536 ATCC 10380 4000 UFC/ml 1x

CNCTC Hp 12/63 [623] ATCC 51445 4000 UFC/ml 1x

Tohama I ATCC BAA-589

(cepa de la vacuna) 4000 UFC/ml 1x

MN2531 ATCC BAA-1335 4000 UFC/ml 1x


Tabla 39. Resultados de la prueba de inclusividad para Chlamydophila pneumoniae

Cepa Concentración detectada Multiplicidad de

LoD detectados

AR-39 ATCC 53592 3000 copias/ml 1x

CDC/CWL-029 VR-1310 3000 copias/ml 1x

CM-1 ATCC VR-1360 3000 copias/ml 1x

TW183 ATCC VR-2282 3000 copias/ml 1x



Tabla 40. Resultados de la prueba de inclusividad para Mycoplasma pneumoniae

Tipo Cepa Concentración detectada Multiplicidad de

LoD detectadosb

Tipo 1

M129 30 TCID50/ml 1x

M129-B7

ATCC 29342 300 UCC/ml

a 10x

PI 1428

ATCC 29085 3000 UCC/ml 100x

Tipo 2

FH strain [NCTC 10119]

ATCC 15531 300 UFC/ml

c n/a

[Mac]

ATCC 15492 300 UCC/ml 10x

No determinado

[M52]


[Bru]

ATCC 15377 30.000 UCC/ml 1000x

Mutant 22


UMTB-10G


a UCC= unidad de cambio de color. Tanto el TCID50 como UCC se determinaron según el método de Reed-Muench.

La cuantificación en UCC/ml se consideró equivalente al TCID50/ml en términos de cuantificación. b Tras las pruebas de inclusividad, todos los aislados de M. pneumoniae anteriormente cuantificados en UCC/ml se volvieron a

evaluar por PCR en tiempo real frente a una curva patrón con el LoD de la cepa (M129, TCID50/ml). Basándose en la

cuantificación molecular relativa, todos los aislados fueron detectados a niveles <1x–10x LoD, en lugar de 1-1000x LoD

determinados mediante UCC/ml. ATCC 49894, ATCC 15293, ATCC 29342 y ATCC 39505 fueron detectados en o por debajo

de 1x LoD, mientras que ATCC 15492, ATCC 29085 y ATCC 15377 fueron detectados entre 1-10x LoD. c Este ha sido el único aislado de M. pneumoniae el panel capaz de formar colonias en placa y fue cuantificado en UFC/ml.

Especificidad analítica (Reactividad cruzada y exclusividad)

La posible reactividad cruzada entre los ensayos incluidos en el FilmArray RP fue evaluada analizando muestras

FNS simuladas que contenían elevadas concentraciones de los organismos respiratorios del panel (de decenas a

miles de veces superiores al LoD). Las pruebas de exclusividad se realizaron con el FilmArray RP modificado,

salvo donde se indica. No se observó reactividad cruzada con las cepas y concentraciones relacionadas en la

Tabla 41.

NOTA: El ensayo del coronavirus OC43 puede reaccionar de forma cruzada con algunas cepas del coronavirus

HKU1 cuando está presente en la muestra a elevadas concentraciones.

Tabla 41. Resultados de la prueba de reactividad cruzada con organismos del FilmArray RP

Virus o bacteria Tipo / Cepa

Concentración de la

prueba Multiplicidad de LoD analizados

Adenovirus AdVC1 1,00x105 TCID50/ml 1000x

Coronavirus

229E

ATCC VR-740 5,67x10

3 TCID50/ml 1418x

HKU1a

Espécimen clínico 42/08 1,34x10

8 copias/ml 70x

NL63

NR-470 5,67x10

3 TCID50/ml 1134x





OC43

ATCC VR-759 7,30x10

4 TCID50/ml 122x

Metapneumovirus

humano

Tipo A1 MPVh-16

IA10-2003 A1 8,17x10

3 TCID50/ml 4085x

Rinovirus/enterovirus

humano

Echovirus 6 3,40x106 TCID50/ml 113x

Rinovirus A1 5,67x103 TCID50/ml 5670x

Gripe A

H1N1

A/Brisbane/59/07 1,00x105 TCID50/ml 500x

A/New Caledonia/20/99b 1,00x10

5 TCID50/ml 500x

A/PR/8/34b 1,00x10

6 TCID50/ml 5000x

A1/FM/1/47b 4,70x10

3 TCID50/ml 24x

A/NWS/33b 4,70x10

3 TCID50/ml 24x

A1/Denver/1/57b 4,70x10

3 TCID50/ml 24x

A/Solomon Islands/3/2006 b

1,39x104 TCID50/ml 70x

A/Weiss/43b 4,70x10

3 TCID50/ml 24x

A/Mal/302/54b 1,39x10

4 TCID50/ml 70x

Gripe A

H1-2009 A/SwineNY/03/2009 8,40x10

4 TCID50/ml 840x

Gripe A

H3N2

A/Wisconsin/67/2005 8,17x103 TCID50/ml 1634x

A/Victoria/3/75b 4,70x10

3 TCID50/ml 940x

A/Port Chalmers/1/73b 5,67x10

3 TCID50/ml 1134x

A/Aichi/2/68b 1,00x10

5 TCID50/ml 20.000x

A/Hong Kong/8/68b 1,00x10

5 TCID50/ml 20.000x

A/Aliceb 4,70x10

3 TCID50/ml 940x

A/MRC 2b 8,17x10

3 TCID50/ml 1634x

A/Brisbane/10/07b 8,17x10

3 TCID50/ml 1634x

Gripe B

B/FL/04/06 1,67x104 TCID50/ml 278x

B/Lee/40b 8,17x10

3 TCID50/ml 136x

B/Taiwan/2/62b 5,03x10

4 TCID50/ml 838x

B/GL/1739/54b 8,17x10

3 TCID50/ml 136x

B/Maryland/1/59b 8,17x10

3 TCID50/ml 136x

B/Florida/07/04b 1,00x10

5 TCID50/ml 1667x

B/Malaysia/2506/04b 5,67x10

3 TCID50/ml 95x

B/Allen/45b 1,00x10

5 TCID50/ml 1667x

B/HongKong/5/72b 8,17x10

3 TCID50/ml 136x





B/Brigitb 3,50x10

4 TCID50/ml 583x

Virus paragripales

Tipo 1 1,39x104 TCID50/ml 28x

Tipo 2 1,6x104

TCID50/ml 1670x

Tipo 3 1,00x105 TCID50/ml 10.000x

Tipo 4A 5,67x103 TCID50/ml

c 1,13x

c

Virus respiratorio

sincitial

A 1,39x104 TCID50/ml 6950x

B 2,14x104 TCID50/ml 10.700x


E431b

1,00x106 UFC/ml 250x

A639

ATCC 8467b

ATCC 9797b

ATCC 51445b

ATCC BAA-589b

ATCC 9340b

ATCC 10380b

ATCC BAA-1335b

Chlamydophila

pneumoniae TW183 2,42x10

5 copias/ml 81x

Mycoplasma

pneumoniae

M129 1,88x105 TCID50/ml 6267x

ATCC 15531b 4,27x10

5 UFC/ml n/a

ATCC 15293b

1,00x106

UCC/ml 33.333x

ATCC 15377b

ATCC 15492b

ATCC 29085b

ATCC 29342b

ATCC 39505b

ATCC 49894b

a No se observó reactividad cruzada entre el aislado de coronavirus HKU1 y el ensayo del coronavirus OC43 para la

concentración analizada Sin embargo, en el conjunto de datos clínicos, 2 especímenes mostraron reactividad cruzada entre el

ensayo OC43 y el virus HKU1 contenido en el espécimen. b

Se llevó a cabo una prueba de exclusividad con el FilmArray RP original. c

El virus paragripal 4A no se pudo analizar a concentraciones elevadas debido al título relativamente bajo del cultivo del virus almacenado.


El potencial del FilmArray RP para reaccionado de forma cruzada con organismos no pertenecientes al sistema

FilmArray RP fue evaluado mediante análisis de un panel de exclusividad constituido por 26 bacterias, 6 virus y

1 levadura. Estos organismos fueron seleccionados por su relación con los organismos incluidos en FilmArray RP,

su relevancia clínica (causan síntomas respiratorios o representan la flora nasofaríngea) o tienen una elevada

prevalencia entre la población (p. ej. el virus del herpes simple). Se enriqueció una matriz de muestra negativa con

las bacterias o los hongos a una concentración de 106 UFC/ml y los virus a una concentración entre 10

4 -

105 TCID50/ml, o la mayor concentración posible. El FilmArray RP no reaccionó de forma cruzada con los

organismos del panel de exclusividad relacionados en la Tabla 42.

Tabla 42. Panel de exclusividad no FilmArray RP – No se observó reactividad cruzada con el organismo relacionado

Virus Cepa / Aislado

Bocavirus Espécimen clínico

Citomegalovirus (CMV) AD-169 (VR-538)

Virus de Epstein-Barr (VEB) B95-8

Virus del herpes simple Tipo 1

Virus del sarampión Edmonston

Paperas Zeptometrix # 0810079CF

Levadura Cepa / Aislado

Candida albicans Zeptometrix #0801504

Bacteria Cepa / Aislado

Bordetella bronchisepticaa Aislado clínico

Bordetella holmesii F061

Bordetella parapertussisa A747

Chlamydia trachomatis D-UW3

Corynebacterium diptheriae ATCC14779

Escherichia coli O157:H7

Haemophilus influenzae MinnA

Lactobacillus acidophilus Cepa de tipo

Lactobacillus plantarum 17-5

Legionella longbeacheae Long Beach 4

Legionella micdadei Tatlock

Legionella pneumophilia Philadelphia

Moraxella catarrhalis Ne 11 (cepa de tipo)

Mycobacterium tuberculosis H37Ra-1

Mycoplasma hominis ATCC 23114

Mycoplasma genitalium ATCC 33530

Neisseria elongate Cepa de tipo

Neisseria gonorrhoeae ATCC 700825

Neisseria meningitidis M1027 (cepa de tipo)

Pseudomonas aeruginosa Zeptometrix #0801519

Staphylococcus aureus COL

Staphylococcus epidermidis RP62A

Streptococcus pneumoniae Tipo 59


Virus Cepa / Aislado

Streptococcus pyogenes Zeptometrix #0801512

Streptococcus salivarius ATCC 13419

Ureaplasma urealyticum ATCC 27618

a Aunque no se ha observado en este estudio, el ensayo Bordetella pertussis de FilmArray RP puede tener una reacción

cruzada con cepas de B. bronchiseptica y B. parapertussis que tengan un pseudogen de la toxina tosferínica (consulte la

sección Limitaciones).

Pruebas complementarias de exclusividad analítica para cepas de gripe de origen aviar:

Se llevó a cabo una prueba adicional de exclusividad analítica (mediante el FilmArray RP original) bien con

aislados vivos o ARN genómico purificado de cepas de gripe A de hospedador aviar con los siguientes resultados:

Tabla 43. Resultados de las pruebas de exclusividad de virus o ácido nucleico procedentes de aislados de la gripe A de origen aviar

Hospedador Subtipo Aislado / Cepa Concentración de

la pruebaa

Resultado de FilmArray

Aviar

H2N2

A/Japan/305/57 3,3 ng de ARN

Gripe A (ningún subtipo

detectado)

Kilbourne F38 A/Korea/426/68 (HA, NA) x A/Puerto Rico/8/34

6,3 ng de ARN

H5N1 A/Vietnam/1203/2004 R-H5 N/Ab

H5N2 A/duck/Pennsylvania/10218/84 2,5 ng de ARN

H5N3 Kilbourne F181

A/duck/Singapore/645/97 247 ng de ARN

H7N2 A/NewYork/107/2003 N/A

b

H7N3 A/Mallard/Netherlands/12/2000 N/A

b

H10N7 A/chicken/Germany/N/49 68 ng de ARN

a Se obtuvo ARN purificado y cuantificado de cultivos de gripe aviar procedentes de Recursos BEI

b Título de virus HA almacenados procedentes de CDC = 128. Se analizaron veinte microlitros de virus almacenado.

Información complementaria sobre la exclusividad para el coronavirus SARS:

Se llevó a cabo un análisis in silico de la secuencia del virus del SARS (GenBank ID NC_004718.3) frente a los

cebadores de cada uno de los 4 ensayos para coronavirus del FilmArray RP. Cuando los cebadores del ensayo

del coronavirus no-SARS se alinearon con la correspondiente secuencia diana del virus SARS, cada cebador

contenía al menos 6 emparejamientos erróneos. Según los alineamientos, no se prevé reactividad entre el virus

SARS y los 4 ensayos para coronavirus del FilmArray RP.

Contaminación cruzada y arrastre

Para evaluar la contaminación cruzada o arrastre, se introdujeron muestras fuertemente positivas (Tabla 41) y se

analizaron una junto a otra con otras muestras fuertemente positivas que contenían diferentes organismos. No se

observaron resultados falsos positivos, indicando que el diseño del sistema y las prácticas recomendadas para

manipular la muestra son eficaces para evitar el arrastre.


Reproducibilidad

Se llevó a cabo un estudio de reproducibilidad multicéntrico para determinar la reproducibilidad entre centros y

global del FilmArray RP. Las pruebas de reproducibilidad se realizaron en tres centros de prueba usando el

FilmArray RP original y un panel de doce especímenes FNS simulados enriquecidos con varias combinaciones de

organismos en tres niveles de prueba diferentes: positivo intermedio (3X LoD), positivo bajo (1X LoD) y negativo

alto (LoD/10). Se prevé que el nivel de la prueba de negativo alto genere resultados positivos en

aproximadamente 20-80% de las muestras analizadas. Cada día de prueba, dos operarios de cada centro

analizaron dos alícuotas de especímenes en dos instrumentos FilmArray diferentes (seis especímenes por

operador por instrumento por día). Cada espécimen fue analizado cuatro veces al día durante cinco días en los

tres centros de prueba, con un total de 60 pruebas por organismo y concentración. En el estudio de

reproducibilidad se utilizaron un total de 26 lotes de reactivos y 20 instrumentos FilmArray. Los resultados Positivo,

Dudoso, Negativo y los datos Tm para cada organismo se resumen en las tablas siguientes:

Tabla 44. Resumen de resultados de coincidencia positiva, coincidencia negativa y Tm para el análisis de reproducibilidad de

organismos en un único ensayo

Adenovirus AdVC1

Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia

con el resultado esperado

a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado

Positivo intermedio (3X LoD)

c

900 TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,74 0,24 83,33 - 84,26

Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 84,23 0,21 83,95 - 84,60

Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,76 0,28 83,03 - 84,13

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 83,93 0,36 83,03 - 84,60

Positivo bajo (1X LoD)

c

300 TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,42 0,28 83,01 - 83,98

Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,90 0,26 83,54 - 84,30

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,62 0,38 83,05 - 84,64

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 83,64 0,39 83,01 - 84,64

Negativo altob

(LoD/10)c

30 TCID50/ml

Centro A 18/20 2/20 90,0% 68,3% – 98,8% 83,33 0,26 83,02 - 83,76

Centro B 16/20 4/20 80,0% 56,3% – 94,3% 83,71 0,30 82,93 - 84,29

Centro C 10/20 10/20 50,0% 27,2% – 72,8% 83,26 0,31 82,61 - 83,86

Todos los

centros 44/60 16/60 73,3% 60,3% – 83,9% 83,43 0,38 82,61 - 84,29

Negativo

Centro A 0/180 180/180 100% 98,0% -100%

Centro B 0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro C 0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Todos los

centros 0/540 540/540 100% 99,3% – 100%

a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”

fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b

Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.


c Las pruebas de reproducibilidad se llevaron a cabo antes de la modificación del panel para incluir un segundo ensayo de

adenovirus. Las concentraciones de prueba y diferentes LoD reflejan el LoD para adenovirus antes de la modificación del panel (300 TCID50/ml).

Coronavirus 229E ATCC VR-740

Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


12 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

81,20 0,20 80,81 - 81,47

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

81,80 0,32 81,35 - 82,18

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

81,35 0,34 81,03 - 82,13

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 81,37 0,40 80,81 - 82,18


4 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

81,19 0,21 80,83 - 81,66

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

81,62 0,25 81,12 - 82,08

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

81,09 0,32 80,30 - 81,56

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 81,31 0,38 80,30 - 82,08

Negativo altob

(LoD/10)

0,4 TCID50/ml

Centro A

14/20 6/20 70% 45,7% -,88,1%

81,06 0,22 80,72 - 81,43

Centro B

7/20 13/20 35% 15,4% -,59,2%

81,54 0,24 81,15 - 82,08

Centro C

11/20 9/20 55% 31,5% -,76,9%

81,17 0,24 80,70 - 81,68

Todos los

centros 32/60 28/60 53,3%

40,0% -,66,3%

81,25 0,34 80,70 - 82,08

Negativo

Centro A

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro B

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro C

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Todos los

centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%




Coronavirus HKU1 Tipo B

(Espécimen clínico 6123) Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 75,61 0,23 75,37 - 76,02

Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 76,02 0,26 75,58 - 76,33

Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 75,49 0,32 74,96 - 75,90


Coronavirus HKU1 Tipo B

(Espécimen clínico 6123) Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado

5,7 x 106 copias

de ARN/ml Todos los centros

60/60 0/60 100% 94,0% -100% 75,69 0,41 74,96 - 76,33


1,9 x 10

6 copias

de ARN/ml

Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 75,47 0,22 74,96 - 75,79

Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 75,89 0,20 75,59 - 76,12

Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 75,35 0,30 74,83 - 75,81

Todos los centros

60/60 0/60 100% 94,0% -100% 75,55 0,40 74,83 - 76,12

Negativo altob

(LoD/10)

1,9 x 105 copias

de ARN/ml

Centro A 15/20 5/20 75,0% 50,9% -,91,3% 75,51 0,28 75,06 - 75,90

Centro B 17/20 3/20 85,0% 62,1% -,96,8% 75,85 0,22 75,26 - 76,23

Centro C 19/20 1/20 95,0% 75,1% – 99,9% 75,33 0,22 74,98 - 75,59

Todos los centros

51/60 9/60 85,0% 73,4% – 92,9% 75,55 0,38 74,98 - 76,23

Negativo

Centro A 0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro B 0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro C 0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Todos los centros

0/540 540/540 100% 99,3% - 100%




Coronavirus NL63 Recursos BEI NR-470

Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia con el resultado esperado

a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


15 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,21 0,31 79,64 - 80,90

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,55 0,33 79,99 - 81,03

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,04 0,25 79,67 - 80,62

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,29 0,40 79,64 - 81,03


5 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,08 0,25 79,57 - 80,42

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,40 0,24 79,98 - 80,89

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 79,88 0,27 79,36 - 80,40

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,12 0,38 79,14 - 80,89

Negativo altob

(LoD/10)

0,5 TCID50/ml

Centro A

13/20 7/20 65,0% 40,8% -,84,6% 80,08 0,34 79,21 - 80,82

Centro B

14/20 6/20 70,0% 45,7% -,88,1% 80,36 0,30 79,98 - 80,91

Centro C

10/20 10/20 50,0% 27,2% -,72,8% 79,91 0,26 79,24 - 80,30


Coronavirus NL63 Recursos BEI NR-470

Nº. Positivo

Nº. Negativo


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado

Todos los

centros 37/60 23/60 61,7% 48,2% -,73,9% 80,11 0,39 79,21 - 80,91

Negativo

Centro A

0/180 180/180 100% 98,0% -100%

Centro B

0/180 180/180 100% 98,0% -100%

Centro C

0/180 180/180 100% 98,0% -100%

Todos los

centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%




Coronavirus OC43 ATCC VR-759

Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


1800 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,98 0,23 80,53 - 81,36

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,39 0,25 81,04 - 81,82

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,20 0,26 80,60 - 81,55

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 81,17 0,32 80,53 - 81,82


600 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,82 0,26 80,29 - 81,25

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,31 0,24 80,95 - 81,85

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,07 0,37 80,40 - 81,58

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 81,07 0,38 80,29 - 81,85

Negativo altob

(LoD/10)

60 TCID50/ml

Centro A

18/20 2/20 90,0% 68,3% -,98,8% 80,86 0,24 80,49 - 81,25

Centro B

14/20 6/20 70,0% 45,7% -,88,1% 81,29 0,28 80,92 - 81,81

Centro C

16/20 4/20 80,0% 56,3% -,94,3% 81,04 0,32 80,11 - 81,45

Todos los

centros 48/60 12/60 80,0% 67,7% -,89,2% 81,07 0,36 80,11 - 81,81


Negativo

Centro A

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro B

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro C

1/180 179/180 99,4% 96,9% –100%

Todos los

centros 1/540 539/540 99,8% 99,0% -100%





MPVh-16 (Tipo A1) Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


6 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,61 0,23 77,06 - 77,90

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 78,07 0,28 77,67 - 78,61

Centro C

19/20 1/20 95,0% 75,1% -,99,9% 77,73 0,21 77,45 - 78,11

Todos los

centros 59/60 1/60 98,3% 91,1% -100% 77,82 0,36 77,06 - 78,61


2 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,39 0,21 77,04 - 77,79

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,88 0,22 77,37 - 78,11

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,60 0,24 77,16 - 77,99

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 77,62 0,35 77,04 - 78,11

Negativo altob

(LoD/10)

0,2 TCID50/ml

Centro A

17/20 2/20 85,0% 62,1% -,96,8% 77,34 0,20 77,05 - 77,59

Centro B

19/20 6/20 95,0% 75,1% -,99,9% 77,76 0,22 77,06 - 78,11

Centro C

12/20 4/20 60,0% 36,1% -,80,9% 77,37 0,29 76,74 - 77,79

Todos los

centros 48/60 12/60 80,0% 67,7% -,89,2% 77,50 0,35 76,74 - 78,11

Negativo

Centro A

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro B

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro C

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Todos los

centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%





Gripe B

B/FL/04/06 Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


180 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,47 0,26 79,88 - 80,93

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,88 0,31 80,30 - 81,30

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,36 0,32 79,78 - 80,80

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,56 0,40 79,78 - 81,30


60 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,44 0,27 80,00 - 80,92

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,79 0,29 80,40 - 81,33

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,34 0,22 79,77 - 80,81

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,51 0,37 79,77 - 81,33

Negativo altob

(LoD/10)

6 TCID50/ml

Centro A

12/20 8/20 60,0% 36,1% -,80,9% 80,42 0,32 79,84 - 80,90

Centro B

10/20 10/20 50,0% 27,2% -,72,8% 80,78 0,25 80,40 - 81,17

Centro C

8/20 12/20 40,0% 19,1% -,64,0% 80,30 0,21 79,79 - 80,69

Todos los

centros 30/60 30/60 50,0% 36,8% -,63,2% 80,50 0,36 79,79 - 81,17

Negativo

Centro A

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro B

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro C

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Todos los

centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%




Virus paragripal 1 Zeptometrix # 0810014CFN

Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


1500 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 78,86 0,26 78,42 - 79,25

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 79,32 0,28 78,83 - 79,78

Centro C

19/20 1/20 95,0% 75,1% -,99,9% 78,50 0,28 78,02 - 78,87

Todos los

centros 59/60 1/60 98,3% 91,1% -100% 78,91 0,50 78,02 - 79,78


Virus paragripal 1 Zeptometrix # 0810014CFN

Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


500 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 78,60 0,31 77,99 - 79,05

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 78,93 0,26 78,31 - 79,36

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 78,50 0,38 77,90 - 79,16

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 78,67 0,40 77,90 - 79,36

Negativo altob

(LoD/10)

50 TCID50/ml

Centro A

15/20 5/20 75,0% 50,1% -,91,3% 78,54 0,25 78,10 - 78,94

Centro B

15/20 5/20 75,0% 50,1% -,91,3% 78,94 0,25 78,52 - 79,36

Centro C

13/20 7/20 65,0% 41,0% -,84,6% 78,41 0,35 77,87 - 79,02

Todos los

centros 43/60 17/60 71,7% 58,6% -,82,6% 78,61 0,42 77,79 - 79,36

Negativo

Centro A

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro B

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro C

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Todos los

centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%




Virus paragripal 2 Zeptometrix #0810015CF

Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


30 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,63 0,36 83,01 - 84,39

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 84,06 0,40 83,44 - 84,79

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,88 0,32 83,13 - 84,28

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 83,85 0,42 83,01 - 84,79


10 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,56 0,28 82,94 - 84,08

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 84,00 0,31 83,52 - 84,63

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,79 0,32 82,92 - 84,25

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 83,78 0,37 82,92 - 84,63



Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado

Negativo altob

(LoD/10)

1 TCID50/ml

Centro A

12/20 8/20 60,0% 36,1% -,80,9% 83,43 0,34 82,71 - 83,96

Centro B

12/20 8/20 60,0% 36,1% -,80,9% 83,91 0,31 83,43 - 84,56

Centro C

11/20 9/20 55,0% 31,5% -,76,9% 83,71 0,36 82,91 - 84,30

Todos los

centros 35/60 25/60 58,3% 44,9% -,70,9% 83,69 0,41 82,71 - 84,56

Negativo

Centro A

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro B

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro C

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Todos los

centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%





Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


30 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,17 0,36 80,71 - 81,86

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,48 0,35 81,03 - 81,89

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,94 0,28 80,63 - 81,37

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 81,22 0,41 80,63 - 81,89


10 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,97 0,36 80,36 - 81,52

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,35 0,26 80,93 - 81,79

Centro C

17/20 3/20 85,0% 62,1% -,96,8% 80,86 0,28 80,10 - 81,21

Todos los

centros 57/60 3/60 95,0% 86,1% -,99,0% 81,08 0,40 80,10 - 81,79

Negativo altob

(LoD/10)

1 TCID50/ml

Centro A

10/20 10/20 50,0% 27,2% -,72,8% 80,99 0,26 80,30 - 81,34

Centro B

7/20 13/20 35,0% 15,4% -,59,2% 81,29 0,28 80,61 - 81,77

Centro C

5/20 15/20 25,0% 8,7% -,49,1% 80,84 0,24 80,41 - 81,24

Todos los

centros 22/60 38/60 36,7% 24,6% -,50,1% 81,05 0,34 80,30 - 81,77

Negativo Centro

A 0/180 180/180 100% 98,0% –100%



Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado

Centro B

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro C

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Todos los

centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%




Virus paragripal 4a Zeptometrix #0810060CF

Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


15.000

TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,70 0,30 77,36 - 78,10

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 78,09 0,56 77,48 - 78,74

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,73 0,40 77,05 - 78,21

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 77,82 0,47 77,05 - 78,74


5000 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,11 0,28 76,64 - 77,68

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,65 0,41 76,73 - 78,71

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,23 0,38 76,81 - 78,20

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 77,33 0,46 76,64 - 78,71

Negativo altob

(LoD/10)

500 TCID50/ml

Centro A

4/20 16/20 20,0% 5,7% -,43,7% 77,07 0,26 76,63 - 77,58

Centro B

5/20 15/20 25,0% 8,7% -,49,1% 77,59 0,27 77,05 - 78,00

Centro C

11/20 9/20 55,0% 31,5% -,76,9% 77,24 0,30 76,62 - 77,84

Todos los

centros 20/60 40/60 33,3% 21,7% -,46,7% 77,29 0,40 76,62 - 78,00

Negativo

Centro A

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro B

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro C

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Todos los

centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%


fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo.


b Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.

Virus respiratorio sincitial Tipo A

Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


6 TCID50/ml

Centro A

60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,44 0,35 79,46 - 80,83

Centro B

60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,86 0,25 80,41 - 81,56

Centro C

60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,39 0,33 80,08 - 80,91

Todos los

centros 180/180 0/180 100% 97,8% -100% 80,58 0,40 79,46 - 81,56


2 TCID50/ml

Centro A

40/40 0/40 100% 91,2% –100% 79,82 0,50 78,93 - 80,62

Centro B

40/40 0/40 100% 91,2% –100% 80,40 0,46 79,47 - 81,03

Centro C

40/40 0/40 100% 91,2% –100% 80,13 0,47 79,13 - 80,79

Todos los

centros 120/120 0/120 100% 97,0% -100% 80,10 0,57 78,93 - 81,03

Negativo altob

(LoD/10)

0,2 TCID50/ml

Centro A

18/20 2/20 90,0% 68,3% -,98,8% 79,63 0,50 78,72 - 80,72

Centro B

17/20 3/20 85,0% 62,1% -,96,8% 80,12 0,50 79,26 - 80,89

Centro C

11/20 9/20 55,0% 31,5% -,76,9% 79,97 0,57 78,83 - 80,84

Todos los

centros 46/60 14/60 76,7% 64,0% -,86,6% 79,90 0,58 78,72 - 80,89

Negativo

Centro A

0/120 120/120 100% 97,0% –100%

Centro B

0/120 120/120 100% 97,0% –100%

Centro C

0/120 120/120 100% 97,0% –100%

Todos los

centros 0/360 360/360 100% 99,0% -100%





Bordetella pertussis A639

Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


12.000 UFC/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 88,36 0,36 87,46 - 89,05

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 88,81 0,29 88,26 - 89,20

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 88,34 0,18 87,97 - 88,58

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 88,50 0,38 87,46 - 89,20


4000 UFC/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 88,39 0,28 87,73 - 88,96

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 88,64 0,31 88,07 - 89,20

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 88,22 0,28 87,74 - 88,67

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 88,42 0,34 87,73 - 89,20

Negativo altob

(LoD/10)

400 UFC/ml

Centro A

16/20 4/20 80,0% 56,3% -,94,3% 88,41 0,34 87,86 - 89,36

Centro B

12/20 8/20 60,0% 36,1% -,80,9% 88,70 0,32 88,33 - 89,29

Centro C

12/20 8/20 60,0% 36,1% -,80,9% 88,26 0,28 87,52 - 88,71

Todos los

centros 40/60 20/60 66,7% 53,3% -,78,3% 88,46 0,37 87,52 - 89,36

Negativo

Centro A

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro B

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro C

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Todos los

centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%





TW183 Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


9000 copias/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 79,65 0,29 78,94 - 79,99

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,27 0,30 79,88 - 80,82

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 79,73 0,23 79,42 - 80,09

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 79,92 0,45 78,94 - 80,82



TW183 Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


3000 copias/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 79,63 0,27 79,03 - 80,09

Centro B

19/20 1/20 95,0% 75,1% -,99,9% 80,15 0,28 79,68 - 80,62

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 79,61 0,30 78,84 - 80,09

Todos los

centros 59/60 1/60 98,3% 91,1% -100% 79,79 0,42 78,84 - 80,62

Negativo altob

(LoD/10)

300 copias/ml

Centro A

11/20 9/20 55,0% 31,5% -,76,9% 79,55 0,25 79,25 - 80,08

Centro B

14/20 6/20 70,0% 45,7% -,88,1% 80,02 0,29 79,66 - 80,72

Centro C

10/20 10/20 50,0% 27,2% -,72,8% 79,61 0,29 79,16 - 80,21

Todos los

centros 35/60 25/60 58,3% 44,9% -,70,9% 79,72 0,38 79,16 - 80,72

Negativo

Centro A

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro B

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro C

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Todos los

centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%




Mycoplasma pneumoniae Tipo 1- M129

Nº. Positivo

Nº. Negativo

% Concordancia


a IC 95%

Promedio Tm

%CV Tm

Intervalo de Tm

observado


90 TCID50/ml

Centro A

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,42 0,29 77,04 - 77,71

Centro B

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,94 0,33 77,59 - 78,30

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,83 0,28 77,44 - 78,12

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 77,75 0,38 77,04 - 78,30


30 TCID50/ml

Centro A

19/20 1/20 95,0% 75,1% -,99,9% 77,55 0,30 77,05 - 78,00

Centro B

17/20 3/20 85,0% 62,1% -,96,8% 77,96 0,33 77,36 - 78,37

Centro C

20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,68 0,39 76,65 - 78,10

Todos los

centros 56/60 4/60 93,3% 83,8% -,98,2% 77,73 0,40 76,65 - 78,37


Negativo altob

(LoD/10)

3 TCID50/ml

Centro A

5/20 15/20 25,0% 8,7% -,49,1% 77,58 0,31 76,72 - 78,01

Centro B

4/20 16/20 20,0% 5,7% -,43,7% 78,01 0,27 77,67 - 78,45

Centro C

11/20 9/20 55,0% 31,5% -,76,9% 77,76 0,34 77,04 - 78,09

Todos los

centros 20/60 40/60 33,3% 21,7% -,46,7% 77,78 0,38 76,72 - 78,45

Negativo

Centro A

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro B

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Centro C

0/180 180/180 100% 98,0% –100%

Todos los

centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%




Tabla 45. Resumen de resultados de coincidencia positiva, coincidencia negativa y Tm para el análisis de reproducibilidad de

organismos en ensayo múltiple

Resumen de concordancia de reproducibilidad para el enterovirus (rinovirus/enterovirus humano)

Enterovirus Echovirus 6 (Especie B) Nº.

Positivo Nº.

Negativo

% Concordancia con

el resultado esperado

a IC 95%


90.000 TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Todos los centros

60/60 0/60 100% 94,0% -100%


30.000 TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Todos los centros

60/60 60/60 100% 94,0% -100%

Negativo altob

(LoD/10)

3000 TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Todos los centros

60/60 0/60 100% 94,0% -100%

Negativo

Centro A 0/60 60/60 100% 94,0% -100%

Centro B 0/60 60/60 100% 94,0% -100%

Centro C 0/60 60/60 100% 94,0% -100%

Todos los centros

0/180 180/180 100% 97,8% -100%





Resumen de la reproducibilidad de la Tm (por ensayo) para enterovirus

Ensayo Enterovirus

Echovirus 6 (Especie B)

Promedio

Tm

% CV

Tm

Intervalo de Tm

observado

Entero 1

Positivo intermedio

3x LoD

90.000 TCID50/ml

Centro A 87,12 0,24 86,79 - 87,73

Centro B 87,51 0,30 86,99 - 88,05

Centro C 86,98 0,33 86,37 - 87,64

Todos los

centros 87,18 0,39 86,37 - 88,05

Positivo bajo

1x LoD

30.000 TCID50/ml

Centro A 87,00 0,33 86,17 - 87,64

Centro B 87,36 0,29 86,80 - 87,85

Centro C 86,81 0,35 86,15 - 87,41

Todos los

centros 87,05 0,42 86,15 - 87,85

Negativo alto

0,1x LoD

3000 TCID50/ml

Centro A 86,89 0,29 86,06 - 87,40

Centro B 87,34 0,31 86,67 - 87,86

Centro C 86,67 0,29 85,97 - 87,30

Todos los

centros 86,96 0,44 85,97 - 87,86

Entero 2

Positivo intermedio

3x LoD

90.000 TCID50/ml

Centro A 87,09 0,28 86,68 - 87,73

Centro B 87,47 0,30 86,82 - 88,00

Centro C 86,93 0,36 86,16 - 87,64

Todos los

centros 87,14 0,41 86,16 - 88,00

Positivo bajo

1x LoD

30.000 TCID50/ml

Centro A 86,98 0,30 86,28 - 87,53

Centro B 87,34 0,28 86,89 - 87,82

Centro C 86,77 0,35 86,05 - 87,52

Todos los

centros 87,02 0,41 86,05 - 87,82

Negativo alto

0,1x LoD

3000 TCID50/ml

Centro A 86,86 0,29 86,17 - 87,54

Centro B 87,26 0,35 86,59 - 87,94

Centro C 86,65 0,27 86,27 - 87,20

Todos los

centros 86,92 0,42 86,17 - 87,94


HRV4

Positivo intermedio

3x LoD

90.000 TCID50/ml

Centro A 85,70 0,31 85,21 - 86,18

Centro B 86,19 0,30 85,35 - 86,77

Centro C 85,59 0,34 84,91 - 86,19

Todos los

centros 85,81 0,44 84,91 - 86,77

Positivo bajo

1x LoD

30.000 TCID50/ml

Centro A 85,45 0,26 84,81 - 86,06

Centro B 85,87 0,24 85,44 - 86,36

Centro C 85,32 0,40 84,69 - 86,26

Todos los

centros 85,54 0,40 84,69 - 86,36

Negativo alto

0,1x LoD

3000 TCID50/ml

Centro A 85,37 0,26 84,80 - 86,04

Centro B 85,82 0,23 85,43 - 86,23

Centro C 85,22 0,22 84,82 - 85,58

Todos los

centros 85,46 0,39 84,80 - 86,23

Resumen de concordancia de reproducibilidad para el rinovirus (rinovirus/enterovirus humano)

Rinovirus humano A1 Nº.

Positivo Nº.

Negativo

% Concordancia


a IC 95%


3 TCID50/ml

Centro A 60/60 0/60 100% 94,0% -100%

Centro B 60/60 0/60 100% 94,0% -100%

Centro C 60/60 0/60 100% 94,0% -100%

Todos los

centros 180/180 0/180 100% 97,8% -100%


1 TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Todos los

centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100%

Negativo altob

(LoD/10)

0,1 TCID50/ml

Centro A 40/40 0/40 100% 91,2% -100%

Centro B 40/40 0/40 100% 91,2% -100%

Centro C 32/40 8/40 80,0% 64,4% -,91,0%

Todos los

centros 112/120 8/120 93,3% 87,3% -,97,1%

Negativo

Centro A 0/60 60/60 100% 94,0% -100%

Centro B 0/60 60/60 100% 94,0% -100%

Centro C 0/60 60/60 100% 94,0% -100%

Todos los

centros 0/180 180/180 100% 97,8% -100%





Resumen de la reproducibilidad de la Tm (por ensayo) para rinovirus

Ensayo Rinovirus humano

A1

Promedio

Tm

% CV

Tm

Intervalo de Tm

observado

HRV1

Positivo intermedio

3x LoD

3 TCID50/ml

Centro A 83,79 0,44 83,25 - 85,09

Centro B 84,06 0,31 83,43 - 84,56

Centro C 83,68 0,23 83,22 - 84,09

Todos los

centros 83,84 0,38 83,22 - 85,09

Positivo bajo

1x LoD

1 TCID50/ml

Centro A 83,71 0,29 83,07 - 84,35

Centro B 84,07 0,34 83,44 - 84,66

Centro C 83,93 0,34 83,24 - 84,71

Todos los

centros 83,90 0,37 83,07 - 84,71

Negativo alto

0,1x LoD

0,1 TCID50/ml

Centro A 83,56 0,28 83,02 - 84,26

Centro B 83,91 0,34 83,22 - 84,52

Centro C 83,76 0,31 83,04 - 84,48

Todos los

centros 83,74 0,36 83,02 - 84,52

HRV2

Positivo intermedio

3x LoD

3 TCID50/ml

Centro A 83,33 0,48 82,55 - 84,67

Centro B 83,65 0,29 83,11 - 84,17

Centro C 83,30 0,28 82,70 - 83,77

Todos los

centros 83,42 0,41 82,55 - 84,67

Positivo bajo

1x LoD

1 TCID50/ml

Centro A 83,28 0,31 82,57 - 83,86

Centro B 83,66 0,36 83,02 - 84,37

Centro C 83,52 0,39 82,82 - 84,29

Todos los

centros 83,48 0,40 82,57 - 84,37

Negativo alto

0,1x LoD

0,1 TCID50/ml

Centro A 83,17 0,34 82,42 - 83,88

Centro B 83,58 0,36 82,80 - 84,31

Centro C 83,37 0,33 82,51 - 83,92

Todos los

centros 83,37 0,40 82,42 - 84,31

HRV3

Positivo intermedio

3x LoD

3 TCID50/ml

Centro A 82,73 0,53 81,99 - 83,94

Centro B 83,25 0,36 82,49 - 83,88

Centro C 82,89 0,43 82,10 - 83,88

Todos los

centros 82,96 0,51 81,99 - 83,94

Positivo bajo

1x LoD

1 TCID50/ml

Centro A 82,67 0,49 81,76 - 83,65

Centro B 83,24 0,44 82,40 - 84,08

Centro C 83,07 0,41 82,13 - 83,76

Todos los

centros 82,98 0,54 81,76 - 84,08

Negativo alto

0,1x LoD

Centro A 82,68 0,50 81,78 - 83,67

Centro B 83,21 0,46 82,18 - 84,37

Centro C 82,97 0,42 81,85 - 83,64


Ensayo Rinovirus humano

A1

Promedio

Tm

% CV

Tm

Intervalo de Tm

observado

0,1 TCID50/ml Todos los

centros 82,96 0,52 81,78 - 84,37

HRV4

Positivo intermedio

3x LoD

3 TCID50/ml

Centro A 83,81 0,38 83,28 - 84,98

Centro B 84,14 0,34 83,43 - 84,83

Centro C 83,80 0,25 83,44 - 84,20

Todos los

centros 83,90 0,37 83,28 - 84,98

Positivo bajo

1x LoD

1 TCID50/ml

Centro A 83,79 0,31 83,18 - 84,45

Centro B 84,08 0,31 83,55 - 84,61

Centro C 84,04 0,38 83,35 - 84,93

Todos los

centros 83,94 0,37 83,18 - 84,93

Negativo alto

0,1x LoD

0,1 TCID50/ml

Centro A 83,58 0,26 83,11 - 84,05

Centro B 83,88 0,31 83,34 - 84,49

Centro C 83,86 0,27 83,24 - 84,58

Todos los

centros 83,76 0,33 83,11 - 84,58

Resumen de concordancia de reproducibilidad para la gripe A H1

Gripe A H1N1 A/Brisbane/59/07 Nº.

Positivo Nº.

Dudoso Nº.

Negativo

% Concordancia con


a IC 95%


600

TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro B 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro C 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Todos los centros

60/60 0/60 0/60 100% 94,0% -100%


200

TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro B 19/20 1/20 0/20 95,0% 75,1% -,99,9%

Centro C 17/20 2/20 1/20 85,0% 62,1% – 96,8%

Todos los centros

56/60 3/60 1/60 93% 83,8% – 98,2%

Negativo alto

(LoD/10)b

20

TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro B 17/20 2/20 1/20 85,0% 62,1% – 96,8%

Centro C 14/20 5/20 1/20 70,0% 45,7% -,88,1%

Todos los centros

51/60 7/60 2/60 85,0% 73,4% -,92,9%

Negativo

Centro A 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%

Centro B 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%

Centro C 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%

Todos los centros

0/540 0/540 540/540 100% 99,3% – 100%


fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo.


b Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.

Resumen de reproducibilidad de la Tm (por ensayo) para la gripe A H1

Ensayo Gripe A H1N1

A/Brisbane/59/07 Promedio

Tm % CV Tm

Intervalo de Tm observado

FluA- pan1

Positivo moderado 3x LoD 600 TCID50/ml

Centro A 84,67 0,24 84,27 - 85,12

Centro B 85,10 0,24 84,78 - 85,56

Centro C 84,64 0,34 83,76 - 85,23

Todos los centros

84,80 0,37 83,76 - 85,56

Positivo bajo 1x LoD 200 TCID50/ml

Centro A 84,57 0,27 84,17 - 85,31

Centro B 85,01 0,28 84,59 - 85,75

Centro C 84,68 0,26 84,16 - 85,18

Todos los centros

84,75 0,34 84,16 - 85,75

Negativo alto 0,1x LoD 20 TCID50/ml

Centro A 84,27 0,26 83,85 - 84,81

Centro B 84,75 0,23 84,29 - 85,32

Centro C 84,46 0,35 83,89 - 85,48

Todos los centros

84,48 0,37 83,85 - 85,48

FluA- pan2


Centro A 80,42 0,25 79,78 - 80,63

Centro B 80,85 0,27 80,39 - 81,26

Centro C 80,31 0,28 79,89 - 80,72

Todos los centros

80,52 0,39 79,78 - 81,26


Centro A 80,36 0,23 79,99 - 80,73

Centro B 80,80 0,21 80,42 - 81,15

Centro C 80,52 0,22 80,19 - 80,89

Todos los centros

80,57 0,32 79,99 - 81,15


Centro A 79,91 0,37 79,15 - 80,41

Centro B 80,49 0,30 79,67 - 80,83

Centro C 80,10 0,35 79,56 - 80,73

Todos los centros

80,17 0,45 79,15 - 80,83

FluA- H1-pan


Centro A 78,79 0,25 78,31 - 79,25

Centro B 79,20 0,31 78,30 - 79,57

Centro C 78,76 0,39 77,79 - 79,25

Todos los centros

78,91 0,42 77,67 - 79,57


Centro A 78,77 0,25 78,42 - 79,34

Centro B 79,20 0,27 78,72 - 79,67

Centro C 78,80 0,25 78,30 - 79,26

Todos los centros

78,93 0,36 78,30 - 79,67


Centro A 77,65 0,33 77,15 - 78,21

Centro B 78,18 0,45 77,47 - 79,26

Centro C 77,93 0,49 77,43 - 79,04

Todos los centros

77,92 0,51 77,15 - 79,26


Resumen de concordancia de reproducibilidad para la gripe A H1-2009

Gripe A H1-2009 A/Swine NY/03/2009 Nº.

Positivo Nº.

Dudoso Nº.

Negativo

% Concordancia con


a IC 95%


300 TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro B 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro C 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Todos los centros

60/60 0/60 0/60 100% 94,0% -100%


100 TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro B 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro C 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Todos los centros

60/60 0/60 0/60 100% 94,0% -100%

Negativo altob

(LoD/10)

10 TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro B 19/20 1/20 0/20 95,0% 75,1% -,99,9%

Centro C 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Todos los centros

59/60 1/60 0/60 98,3% 91,1% – 100%

Negativo

Centro A 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%

Centro B 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%

Centro C 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%

Todos los centros

0/540 0/540 540/540 100% 99,3% – 100%




Resumen de reproducibilidad de la Tm (por ensayo) para la gripe A H1-2009

Ensayo Gripe A H1-2009

A/Swine NY/03/2009 Promedio

Tm % CV Tm


FluA- pan1


Centro A 84,67 0,24 84,27 - 85,12

Centro B 85,10 0,24 84,78 - 85,56

Centro C 84,64 0,34 83,76 - 85,23

Todos los centros

84,80 0,37 83,76 - 85,56


Centro A 84,57 0,27 84,17 - 85,31

Centro B 85,01 0,28 84,59 - 85,75

Centro C 84,68 0,26 84,16 - 85,18

Todos los centros

84,75 0,34 84,16 - 85,75


Centro A 84,27 0,26 83,85 - 84,81

Centro B 84,75 0,23 84,29 - 85,32

Centro C 84,46 0,35 83,89 - 85,48

Todos los centros

84,48 0,37 83,85 - 85,48


Ensayo Gripe A H1-2009

A/Swine NY/03/2009 Promedio

Tm % CV Tm


FluA- pan2


Centro A 80,62 0,20 80,31 - 80,83

Centro B 81,01 0,17 80,70 - 81,36

Centro C 80,69 0,23 80,19 - 81,02

Todos los centros

80,81 0,32 80,19 - 81,36


Centro A 80,39 0,29 79,87 - 80,73

Centro B 80,91 0,27 80,20 - 81,24

Centro C 80,30 0,17 80,05 - 80,61

Todos los centros

80,62 0,44 79,87 - 81,24


Centro A 80,43 0,27 80,08 - 81,03

Centro B 80,72 0,27 80,11 - 81,14

Centro C 80,41 0,34 79,86 - 80,82

Todos los centros

80,54 0,34 79,86 - 81,14

FluA- H1-pan


Centro A 78,87 0,40 78,20 - 79,56

Centro B 79,44 0,35 78,94 - 79,99

Centro C 78,62 0,43 77,92 - 79,44

Todos los centros

78,97 0,58 77,92 - 79,99


Centro A 78,37 0,30 77,89 - 79,24

Centro B 78,90 0,37 78,21 - 79,76

Centro C 78,16 0,25 77,83 - 78,69

Todos los centros

78,47 0,51 77,78 - 79,76


Centro A 78,34 0,37 77,90 - 79,37

Centro B 78,83 0,37 77,99 - 79,68

Centro C 78,08 0,27 77,68 - 78,51

Todos los centros

78,40 0,53 77,68 - 79,68

FluA- H1-2009


Centro A 78,73 0,24 78,31 - 79,14

Centro B 79,20 0,24 78,84 - 79,67

Centro C 78,54 0,30 77,89 - 78,92

Todos los centros

78,81 0,44 77,89 - 79,67


Centro A 78,64 0,26 78,10 - 79,14

Centro B 79,03 0,25 78,53 - 79,48

Centro C 78,49 0,24 78,12 - 78,82

Todos los centros

78,71 0,39 78,10 - 79,48


Centro A 78,60 0,28 77,90 - 79,04

Centro B 79,00 0,23 78,52 - 79,36

Centro C 78,52 0,28 78,10 - 78,93

Todos los centros

78,70 0,38 77,90 - 79,36


Resumen de concordancia de reproducibilidad para la gripe A H3

Gripe A H3N2 A/Wisconsin/67/2005

Nº. Positivo

Nº. Dudoso

Nº. Negativo


a IC 95%


15 TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro B 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro C 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Todos los

centros 60/60 0/60 0/60 100% 94,0% -100%


5 TCID50/ml

Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro B 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Centro C 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%

Todos los

centros 60/60 0/60 0/60 100% 94,0% -100%

Negativo altob

(LoD/10)

0,5 TCID50/ml

Centro A 3/20 11/20 6/20 15,0% 3,2% -,37,9%

Centro B 4/20 12/20 4/20 20,0% 5,7% -,43,7%

Centro C 3/20 8/20 9/20 15,0% 3,2% -,37,9%

Todos los

centros 10/60 31/60 19/60 16,7% 8,3% -,28,5%

Negativo

Centro A 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%

Centro B 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%

Centro C 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%

Todos los

centros 0/540 0/540 540/540 100% 99,3% – 100%




Resumen de reproducibilidad de la Tm (por ensayo) para la gripe A H3

Ensayo Gripe A H3N2

A/Wisconsin/67/2005 Promedio

Tm % CV Tm


FluA- pan1


Centro A 85,33 0,26 84,79 - 85,73

Centro B 85,48 0,42 84,91 - 86,27

Centro C 85,06 0,38 84,50 - 85,40

Todos los centros

85,36 0,38 84,50 - 86,27


Centro A 84,95 0,41 84,19 - 86,03

Centro B 85,31 0,31 84,79 - 86,02

Centro C 84,83 0,26 84,37 - 85,25

Todos los centros

85,03 0,41 84,19 - 86,03

Negativo alto 0,1x LoD 0,5 TCID50/ml

Centro A 84,91 0,39 84,22 - 85,60

Centro B 85,24 0,30 84,78 - 85,77

Centro C 84,86 0,27 84,48 - 85,33

Todos los centros

85,01 0,37 84,22 - 85,77


Ensayo Gripe A H3N2

A/Wisconsin/67/2005 Promedio

Tm % CV Tm


FluA- pan2


Centro A 79,75 0,25 79,51 - 79,99

Centro B 79,94 0,30 79,40 - 80,37

Centro C 79,60 0,24 79,14 - 79,86

Todos los centros

79,81 0,33 79,14 - 80,37


Centro A 79,42 0,31 79,00 - 80,30

Centro B 79,69 0,35 79,14 - 80,29

Centro C 79,25 0,20 78,82 - 79,59

Todos los centros

79,45 0,37 78,82 - 80,30


Centro A 79,22 0,35 78,64 - 79,75

Centro B 79,59 0,29 79,05 - 79,99

Centro C 79,24 0,20 78,84 - 79,54

Todos los centros

79,35 0,36 78,64 - 79,99

FluA- H3


Centro A 82,58 0,35 81,87 - 83,01

Centro B 82,89 0,19 82,60 - 83,11

Centro C 82,44 0,33 81,98 - 82,81

Todos los centros

82,62 0,39 81,87 - 83,11


Centro A 82,32 0,29 81,88 - 82,69

Centro B 82,69 0,34 82,16 - 83,32

Centro C 82,21 0,25 81,76 - 82,73

Todos los centros

82,39 0,41 81,67 - 83,32


Centro A 82,28 0,36 81,71 - 82,91

Centro B 82,61 0,29 82,17 - 83,05

Centro C 82,20 0,23 81,87 - 82,57

Todos los centros

82,37 0,36 81,71 - 83,05


Repetibilidad

Los resultados de repetibilidad del FilmArray RP se evaluaron con el FilmArray RP original repitiendo las pruebas

realizadas con las mismas 12 especímenes analizados en el estudio de reproducibilidad, minimizando todas las

fuentes posibles de variabilidad. Las pruebas de repetibilidad dentro de un mismo centro se llevaron a cabo en el

Centro C durante 12 días de pruebas. Cada día, los 12 especímenes se analizaron 4 veces por 2 operarios en

2 instrumentos FilmArray.

Tabla 46. Resumen de resultados de concordancia positiva para las pruebas de repetibilidad

Resultado del organismo

Positivo moderado Positivo bajo Negativo alto

(3x LoD) (1x LoD) (0,1x LoD)

Nº. positivo/ Total

% Resultados positivos





Adenovirusa 48/48 100% 48/48 100% 34/48 70,8%

Coronavirus 229E 48/48 100% 48/48 100% 19/48 39,6%

Coronavirus HKU1 48/48 100% 48/48 100% 44/48 91,7%

Coronavirus NL63 48/48 100% 48/48 100% 27/48 56,3%

Coronavirus OC43 48/48 100% 47/48 97,9% 33/48 68,8%

Metapneumovirus humano 47/48 97,9% 48/48 100% 32/48 66,7%

Enterovirus 48/48 100% 48/48 100% 48/48 100%

Rinovirus humano 144/144 100% 47/48 97,9% 83/96 86,5%

Gripe A H1 48/48 100% 43/48b 89,6%

b 39/48

c 81,3%

c

Gripe A H1-2009 48/48 100% 48/48 100% 47/48d 97,9%

d

Gripe A H3 48/48 100% 48/48 100% 7/48e 14,6%

e

Gripe B 48/48 100% 48/48 100% 25/48 52,1%

Virus paragripal 1 47/48 97,9% 48/48 100% 32/48 66,7%

Virus paragripal 2 48/48 100% 47/48 97,9% 27/48 56,3%

Virus paragripal 3 48/48 100% 41/48 85,4% 14/48 29,2%

Virus paragripal 4 48/48 100% 48/48 100% 26/48 54,2%

Virus respiratorio sincitial 144/144 100% 96/96 100% 32/48 66,7%

Bordetella pertussis 48/48 100% 48/48 100% 27/48 56,3%

Chlamydophila pneumoniae 48/48 100% 46/48 95,8% 18/48 37,5%

Mycoplasma pneumoniae 48/48 100% 47/48 97,9% 19/48 39,6%

% Positivo (para todos los organismos)

por nivel de prueba

1102/1104 99,8%

942/960 98,1%

599/960 62,4%

a Las pruebas de repetibilidad se llevaron a cabo antes de la modificación del panel para incluir un segundo ensayo de adenovirus.

Las concentraciones de prueba y diferentes LoD reflejan el LoD para adenovirus antes de la modificación del panel (300 TCID50/ml). b Los cinco (5) resultados no positivos para gripe A H1 en el LoD incluyen: (1) resultado Negativo, (1) Gripe A H1 dudoso y

(3) Gripe A dudoso. c Los nueve (9) resultados no positivos para gripe A H1 en el 0,1 x LoD incluyen: (1) resultado Negativo, (3) Gripe A (sin subtipo

detectado), (1) Gripe A H1 dudoso y (4) Gripe A dudoso. d

Un (1) resultado Influenza A H1-2009 Equivocal (Gripe A H1-2009 dudoso) en el nivel de prueba 0,1 x LoD. e Los cuarenta y dos (42) resultados no positivos para gripe A H3 en el 0,1 x LoD incluyen: (18) resultados negativos (sin subtipo

detectado), (2) Gripe A (sin subtipo detectado) (15) Gripe A H3 dudoso, y (7) Gripe A dudoso.


Interferencias

Se evaluaron las sustancias que pudieran estar presentes en las muestras de FNS o introducidas durante la

manipulación de la muestra para determinar su potencial de interferir con el rendimiento del ensayo. Se

enriquecieron cuatro mezclas diferentes que contenían organismos FilmArray RP en una matriz de muestra

simulada FNS (varios FNS) (células epiteliales humanas en VTM) a 5x sus LoD respectivos. Cada muestra

se analizó con el FilmArray RP original en presencia de cada una de las sustancias potencialmente interferentes

incluidas en la Tabla 47. Se encontró que ninguna de las sustancias analizadas competía o interfería con los

ensayos de control o de los organismos incluidos en el FilmArray RP.

Tabla 47. Lista de sustancias potencialmente interferentes evaluadas (no se observó interferencia ni inhibición)

Sustancias endógenas Microorganismos competidores/interferentes

Sangre humana (con citrato sódico) (1% v/v) Virus respiratorio sincitial A 2,8 x 104 TCID50/ml

Mucina (glándula submaxilar bovina) (1% v/v) Rinovirus humano 1,1 x 104 TCID50/ml

ADN genómico humano: 0,2 ng/l Gripe A H1-2009 1,0 x 105 TCID50/ml

2 ng/l Staphylococcus aureus 1,0 x 106 UFC/ml

20 ng/l Neisseria meningitidis 1,0 x 106 UFC/ml

Corynebacterium diptheriae 1,0 x 106 UFC/ml

Sustancias exógenas

Pulverización nasal salina con conservantes (1% v/v) Pomada analgésica (1% p/v)

Pulverización descongestiva nasal (Oximetazolina HCl) (1%v/v)

Vaselina (1% p/v)

Tobramicina (0,6 mg/ml) Tabaco sin humo (1% p/v)

Mupirocina (2% p/v) FluMist® Vacuna nasal contra la gripe (2009-2010)

Sustancias específicas de la técnica

Reactivos de laboratorio:

Medio de transporte de

virus: Frotis:

Lejía (1%, 2%, 5% v/v) Remel M4 Copan 168C (rayón / vástago de aluminio torcido)

Paños desinfectantes Remel M4-RT Copan FloQ (nylon flocado / vástago de plástico)

Etanol (7% v/v) Remel M5 Copan 175KS01 (poliéster / vástago de plástico)

DNAzap (1% v/v) Remel M6 Millipore 519CS01M (nylon flocado / vástago de plástico)

RNaseOut (1% v/v) Copan UTM

La evaluación del sistema FilmArray RP no se llevó a cabo usando especímenes FNS clínicos obtenidos de

individuos que hubieran recibido recientemente la vacuna nasal contra la gripe Flumist®

(MedImmune,

Gaithersburg, MD). Sin embargo, se realizaron pruebas analíticas (usando el FilmArray RP original) con muestras

simuladas que contenían diferentes concentraciones de la formulación del material de vacuna 2009-2010. Los

ensayos FilmArray RP reaccionaron con el material vírico de la gripe A H1, gripe A H3 y gripe B incluido en la

vacuna (Tabla 48). No se observó reactividad cruzada con otros ensayos FilmArray RP no de la gripe.


Tabla 48. Evaluación de la vacuna nasal FluMist® como sustancia potencialmente interferente

FluMist 2009-2010

Ad

en

ovir

us

Co

ron

avir

us 2

29E

Co

ron

avir

us H

KU

Co

ron

avir

us N

L63

Co

ron

avir

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C43

Meta

pn

eu

mo

vir

us

hu

man

o

Rin

ovir

us/e

nte

rovir

us

hu

man

o

Gripe A

Gri

pe B

Vir

us p

ara

gri

pal

1

Vir

us p

ara

gri

pal

2

Vir

us p

ara

gri

pal

3

Vir

us p

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4

Vir

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esp

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tori

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a

pn

eu

mo

nia

e

Myco

pla

sm

a

pn

eu

mo

nia

e

(% v/v) H1 H1-

2009 H3

10% - - - - - - - + - + + - - - - - - - -

1% - - - - - - - + - + + - - - - - - - -

0,1% - - - - - - - + - + + - - - - - - - -

0,01% - - - - - - - + - + + - - - - - - - -

0,001% - - - - - - - + - + + - - - - - - - -

0,0001% - - - - - - - - - Equiva + - - - - - - - -

0,00001% - - - - - - - - - - + - - - - - - - -

0,000001% - - - - - - - - - - - - - - - - - - - a Resultado dudoso para gripe A H3

Análisis de posibles interferencias procedentes de medicamentos

Se analizó el conjunto de datos clínicos procedente del FilmArray RP original para determinar evidencias de los

efectos de medicamentos potencialmente interferentes (medicamentos con receta o sin receta) administrados o

tomados por la población del estudio. En caso de producirse una interferencia clínicamente significativa debido a un

medicamento, se esperaría que la tasa de detección del organismo entre la población medicada sea inferior que entre

la población no medicada. Este efecto no se observó en el conjunto de datos clínicos. Se detectaron uno o más

organismos por los métodos de referencia/comparados en 118 de 257 (45,9%) individuos no medicados. El FilmArray

RP identificó correctamente todos los organismos en 112 (94,9%) de estos individuos. Se detectaron uno o más

organismos por los métodos de referencia/comparados en 342 de los 596 (57,4%) individuos medicados. El FilmArray

RP identificó correctamente todos los organismos en 331 (96,8%) de estos individuos. La Tabla 49 relaciona los

medicamentos administrados o tomados por la población inscrita en el estudio (autonotificados y/o registrados en los

datos de paciente).

Tabla 49. Listado de medicamentos administrados/tomados durante la evaluación clínica FilmArray RP

Acetaminofeno Clindamicina Lansoprazol Fenobarbital

Albuterol Co-trimoxazol Levalbuterol Fenilefrina

Alendronato

Gotas/jarabes para la tos

(varios medicamentos

sin receta)

Levotiroxina Pilocarpina

Alprazolam Ciproheptadina Lisinopril Pravacol (Pravastatina)

Amoxicilina Deferasirox Loperamida Prednisolona

Amoxicilina/Ácido

clavulánico Dextrometorfano Loratadina Prednisona

Azitromicina Dextrometorfano

hidrobromuro Lorazepam Propranolol

Baclofeno Diphenhidramina Metoclopramida Pseudoefedrina

Benzonatato Doxilamina succinato Metolazona Ranitidina

Betametasona Soluciones de electrolito Metoprolol Gotas/pulverización de


(sales de rehidratación) solución salina nasal

(varios medicamentos sin

receta)

Brimonidina Enoxaparina Midazolam Salmeterol

Budesonida Eszopiclona Montelukast Simeticona

Budesonida/Formoterol

fumarato dihidrato Fentanilo Naproxeno Sirolimus

Bupropion hidrocloruro Fluticasona Nizatidina Espironolactona

Carvedilol Furosemida Omeprazol Temazepam

Cefdinir Gabapentina Oseltamivir Tiotropio

Cefepima Gemfibrozilo Oxibutinina Ursodiol

Ceftriaxone Guaifenesina Pancrelipasa Valaciclovir

Cefrazol Hydrocodona Pantoprazol Vancomicina

Cetirizina Ibuprofeno Penicilina

Vitaminas/Multivitaminas/

Minerales (varios

medicamentos sin receta)

Clorfeniramina maleato Inderal (Propranolol) Pentamidina Voriconazol

Ciprofloxacino Isosorbida

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO DE FILMARRAY RP EN FILMARRAY 2.0 Y FILMARRAY TORCH

Se llevaron a cabo estudios clínicos y no clínicos para establecer que las características de rendimiento

de FilmArray RP, incluido el límite de detección (LoD) (consulte la sección Límite de detección anterior),

la coincidencia de porcentaje positivo y la coincidencia de porcentaje negativo, así como la reproducibilidad,

son equivalentes en los sistemas FilmArray y FilmArray 2.0. Otros estudios no clínicos demuestran características

de rendimiento similares en los sistemas FilmArray Torch.

NOTA: Los FilmArray Torch Modules son instrumentos FilmArray 2.0 que se han re-configurado como un sistema

apilado para mejorar el rendimiento en espacios de trabajo más pequeños.

Comparación clínica

Se llevó a cabo un estudio de comparación clínica con especímenes anteriormente obtenidos durante la evaluación

clínica prospectiva de FilmArray RP y complementados con otros especímenes archivados procedentes de

instalaciones médicas y laboratorios de referencia externos para aumentar el número de especímenes analizados

para analitos de baja prevalencia. Se seleccionaron un total de 102 especímenes de forma que cada analito

estuvo representado de 3 a 5 veces. Cada espécimen se descongeló y se ensayó usando los sistemas FilmArray

y FilmArray 2.0. La coincidencia de porcentaje positivo (PPA) global entre los sistemas fue 96,8%, y el límite

inferior del intervalo de confianza de 95% (IC 95%) bilateral se encontró en el 92,0%. La coincidencia de porcentaje

negativo (NPA) global entre los sistemas fue 99,8%, y el límite inferior del intervalo de confianza de 95% (IC 95%)

bilateral se encontró en el 99,5%.


Tabla 50. Resultados de analito obtenidos en el estudio de comparación clínica entre sistemas FilmArray

Analito FilmArray 2.0 / FilmArray

PPA % IC 95% NPA % IC 95%

Virus

Adenovirus 5/5 100% 47,8-100% 97/97 100% 96,3-100%

Coronavirus 229E 5/5 100% 47,8-100% 97/97 100% 96,3-100%

Coronavirus HKU1 6/6 100% 54,1-100% 95/96 99% 94,3-100%

Coronavirus NL63 6/6 100% 54,1-100% 96/96 100% 96,2-100%

Coronavirus OC43 4/5 80% 28,4-99,5% 97/97 100% 96,3-100%

Metapneumovirus humano 5/5 100% 47,8-100% 97/97 100% 96,3-100%

Rinovirus/enterovirus humano 9/10 90% 55,5-99,7% 91/92 98,9% 94,1-100%

Gripe A 16/16 100% 79,4-100% 86/86 100% 95,8-100%

Gripe A H1 3/3 100% 29,2-100% 99/99 100% 96,3-100%

Gripe A H1-2009 6/6 100% 54,1-100% 96/96 100% 96,2-100%

Gripe A H3 7/7 100% 59-100% 95/95 100% 96,2-100%

Gripe B 5/5 100% 47,8-100% 97/97 100% 96,3-100%

Virus paragripal 1 7/7 100% 59-100% 95/95 100% 96,2-100%

Virus paragripal 2 6/6 100% 54,1-100% 95/96 99% 94,3-100%

Virus paragripal 3 6/6 100% 54,1-100% 96/96 100% 96,2-100%

Virus paragripal 4 5/6 83,3% 35,9-99,6% 96/96 100% 96,2-100%

Virus respiratorio sincitial 8/8 100% 63,1-100% 94/94 100% 96,2-100%

Bacteria

Bordetella pertussis 4/4 100% 39,8-100% 97/98 99% 94,4-100%

Chlamydophila pneumoniae 3/3 100% 29,2-100% 99/99 100% 96,3-100%

Mycoplasma pneumoniae 5/6 83,3% 35,9-99,6% 96/96 100% 96,2-100%

Concordancia global 121/125 96,8% 92,0-99,1% 1911/1915 99,8% 99,5-99,9%

Se calculó el rendimiento del sistema para el análisis de 102 especímenes en cada plataforma. Para el FilmArray,

se realizaron un total de 108 pruebas, de las que se completaron 104 (96,3%; 104/108). Se produjeron dos fallos

de prueba debidos al programa (1,9%) y otros dos errores debidos al instrumento (1,9%). No se observaron fallos

en el control. Dos especímenes se volvieron a ensayar por obtener un resultado Gripe A „dudoso‟. Para el

FilmArray 2.0, se realizaron un total de 103 pruebas. Todas se completaron (100%; 103/103). No se observaron

fallos en el control. Un espécimen se volvió a ensayar por obtener un resultado Gripe A „dudoso‟.


Reproducibilidad

Se llevó a cabo un estudio de reproducibilidad multicéntrico para determinar la reproducibilidad entre centros

y global de FilmArray RP en sistemas FilmArray 2.0. Los ensayos de reproducibilidad se realizaron en tres centros

de ensayo usando muestras de FNS artificiales, cada una de ellas enriquecida con combinaciones de cuatro

analitos RP diferentes, representando los tipos de organismos detectados por el panel (bacterias, virus de ADN

y virus de ARN). Cada analito fue evaluado a tres concentraciones diferentes (negativo, positivo bajo y positivo

moderado). Se obtuvieron resultados negativos para aquellos ensayos cuyas muestras no fueron enriquecidas

con el organismo correspondiente (la muestra no contenía analito).

Los datos incluyeron 90 réplicas por analito e incorporaron una gama de variación potencial introducida por

8 operarios diferentes, 3 lotes de cartuchos diferentes, y 11 instrumentos FilmArray 2.0 diferentes configurados en

tres sistemas multi-instrumento diferentes. Análogamente a la reproducibilidad del FilmArray RP en el FilmArray

(Tablas 44-45 anteriores), la concordancia de porcentaje (%) para los valores esperados Detectado, No detectado

o N/A fue 95,6% o mejor y la desviación estándar en la Tm fue 0,5 ˚C o menos en todos los ensayos.

Tabla 51. Resumen de resultados de reproducibilidad en el FilmArray 2.0

Analito ensayado Concentración

ensayada

Resultado esperado de

la prueba


Centro/sistema Total (Intervalo de confianza

de 95%) A B C


Cepa A639 Zeptometrix

0801459

Positivo moderado 3× LoD

1,2x104 UFC/ml

Detectado 30/30 100%

29/30 96,7%

30/30 100%

89/90 98,9%

(94,0-100%)

Positivo bajo 1× LoD

4x103 UFC/ml


30/30 100%

30/30 100%

90/90 100%

(96,0-100%)

Negativo No detectado 30/30 100%

30/30 100%

30/30 100%

90/90 100%

(96,0-100%)

Adenovirus Especies C Serotipo 1 Zeptometrix 0810050CF


3,0x102 TCID50/ml

Detectado 29/30 96,7%

30/30 100%

28/30 93,3%

89/90 98,9%

(94,0%-100%)


1,0x102 TCID50/ml


30/30 100%

29/30 96,7%

89/90 98,9%

(94,0%-100%)


30/30 100%

30/30 100%

90/90 100%

(96,0-100%)

Gripe A H1N1-2009 A/SwineNY/03/2009

Zeptometrix 0810109CFN


3,0x102 TCID50/ml


30/30 100%

30/30 100%

90/90 100%

(96,0-100%)


1,0x102 TCID50/ml


30/30 100%

30/30 100%

90/90 100%

(96,0-100%)


30/30 100%

30/30 100%

90/90 100%

(96,0-100%)


Analito ensayado Concentración

ensayada

Resultado esperado de

la prueba


Centro/sistema Total (Intervalo de confianza

de 95%) A B C


Tipo A

Zeptometrix 0810040ACF


6,0 TCID50/ml Detectado

30/30 100%

30/30 100%

30/30 100%

90/90 100%

(96,0-100%)


2,0 TCID50/ml Detectado

30/30 100%

30/30 100%

30/30 100%

90/90 100%

(96,0-100%)


30/30 100%

30/30 100%

90/90 100%

(96,0-100%)

Se realizó una evaluación de reproducibilidad de FilmArray RP en los sistemas FilmArray Torch. Se analizaron muestras artificiales que contenían cada analito de FilmArray RP en niveles positivos bajos [límite de detección (LoD) de 1x según FilmArray 2.0] en tres sistemas FilmArray Torch completos (12 FilmArray Torch Modules por sistema) durante cinco días (30 réplicas por analito y sistema para 90 réplicas en total por analito). La concordancia con los resultados con estado Detected (Detectado) esperados en los sistemas FilmArray Torch fue del ≥ 95,6% para cada analito de FilmArray RP y la concordancia con los resultados negativos esperados [con estado Not Detected (No detectado)] fue del 100% para cada analito.


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