FISIOLOGÍA VEGETAL

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PRACTICA N° 6

EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LOS PIGMENTOS DE LOS

CLOROPLASTOS

Los cloroplastos de las plantas superiores contienen varios

pigmentos los cuales son reconocibles gracias a su

solubilidad en solventes orgánicos en una forma selectiva

para reconocer estos pigmentos existen varios métodos de los

cuales utilizaremos el químico y cromatográfico.

I. MATERIALES Y METODOLOGIA

Material Vegetal

Hoja de ciruelo hoja de sanguinaria

Equipos E Instrumentos

Mortero y pilón Vaso de precipitados Embudo de vidrio

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Tubos de prueba Papel filtro Gradilla

Cajas Petri Embudo separador

Soluciones

a. Agua Destilada

b. Alcohol Etílico

c. Bencina

d. Metanol

b c

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I. METODOLOGIA

A. PREPARACION DEL EXTRACTO

1. De cada una de las muestras vegetales se tomó unas

cuantas hojas y en forma independiente se colocó en cada

mortero para proceder a la trituración con ayuda del

pilón.

El triturado o machacado se realizó agregando

alcohol en una cantidad tal que no exceda de 30 ml

Muestra de hojas de

ciruela siendo trituradas.

Muestra de hojas de

sanguinaria siendo

trituradas.

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2. El extracto obtenido anteriormente se filtra y se

recibe en un vaso precipitado. El extracto nos servirá

para el reconocimiento posterior de los pigmentos.

Extracto de hojas de ciruela Extracto de hojas de ciruela

Alternativa

Una variante en la preparación del extracto consiste en hervir las

hojas antes de proceder al triturado.

B.- SEPARACION QUIMICA DE LOS PIGMENTOS

1. Del extracto obtenido en el paso A se tomó unos 10 ml. Lo

que corresponde al extracto de las hojas de ciruelo o

sanguinaria y se vertió en un embudo de separación que

contiene 10 ml de bencina y cuidadosamente se agitó

durante unos instantes.

Este proceso se realizó para ambas muestras (hojas de ciruela y hojas de

sanguinaria.

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2. Lentamente se adicionó 10 ml de agua destilada por las

paredes internas del embudo. Se dejó en reposo hasta que

se observe la separación en dos fases.

3. Se descartó la fase inferior abriendo la llave del embudo

separador y se retenga solo la porción superior.

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4. La porción de la que quedó se lavó dos veces con 10 ml

de agua destilada, descardando siempre la porción

inferior que se forma.

5. Concluido el lavado se agregó 10 ml de metanol y se

mesclo cuidadosamente dejando luego en reposo hasta

observar la formación de dos nuevas capas

Clorofila A

Clorofila A

Clorofila B

Clorofila B

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6. Se transfiere la porción inferior obtenida en el paso

anterior a otro embudo separador, se utilizó tubo de

prueba para recibir la porción respectiva.

C.- ANALISIS CROMATOGRAFICO DE LOS PIGMENTOS

1. Del extracto original obtenido en el paso A tome unos 10

ml y viértalo en una caja Petri; tomando

una porción de papel de cromatografía forme como un

cuaderno abierto (atienda las indicaciones).

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2. Introduzca el papel de cromatografía en la caja Petri

evitando que entre en contacto con las paredes laterales

de la caja. espere que el extracto baya ascendiendo unos

3 cm en el papel para retirar y finalmente espere a que

seque.

3. Una vez seco, introduzca el papel en otra caja Petri

conteniendo alcohol etílico. La parte de papel que

contienen los pigmentos debe encontrarse en contacto con

el alcohol. espere unos minutos hasta que los pigmentos

se hayan separado lo suficiente; luego retire el papel

del alcohol, espere a que seque y observa identificando

los diversos pigmentos existentes en cada una de las

muestras vegetales.

Alcohol etílico

Resultados del Papel de cromatografía

de las hojas de ciruelo

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1. Pegue al acondicionar bencina al extracto se

produce la separación en dos fases.

La bencina también llamado éter de petróleo, es una

mezcla de hidrocarburos que se emplea como disolvente

o materia prima por lo que la bencina es un

biposolvente y solvente orgánico que está en afinidad

con los pigmentos carotenos y la xantofila a siendo

que la separación sea más fácil.

Alcohol etílico

Resultados del Papel de

cromatografía de las hojas

de la sanguinaria

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2. Pegue el papel de cromatografía en su hoja e indique

y nombre de cada uno de los pigmentos presentes.

Clorofila A carotenos

Clorofila A xantofilas

Clorofila B xantofila

Resultados del Papel de cromatografía de las

hojas de ciruelo

Clorofila A carotenos

Resultados del Papel de cromatografía

de las hojas de la sanguinaria