fitokimia: analisis flavonoid dengan spektroskopi serapan uv - pereaksi geser

8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser

1/40

Spektroskopi Serapan

-Pereaksi Geser

Angelina Wening

Ayu Intansari

Didit Darmawan

Josy Kurnia W

Karina Indra Dewi

I Gusti Ngurah Raka

Intan Arafah

Izzatu Rizqiyah

RR Aprilla Wulan

Riana Maya

Shinta Marlin

Tryas Yanuari

FITOKIMIA II 2015Kelompok 2


2/40

PendahuluanIntan Arafah

1206230454


3/40

PendahuluanBeberapa cara untuk menganalisis flavonoid antara lain:

- Spektroskopi NMR

- Spektroskopi Massa

- Spektroskopi IR

- Spektroskopi Serapan UV-Vis

- Spektroskopi sirkular dikroisme

- Kristalografi X-ray

Pada presentasi ini akan dijelaskan dengan cara

Spektroskopi serapan UV-Vis


4/40

Spektrum Umum• Spektrum flavonoid biasanya ditentukan dalam larutan dengan pelarutmetanol atau etanol. Spektrum khas flavonoid terdiri atas dua maksimalpada rentang 230-295 nm (pita II)dan 300-560 nm (pita I).

• Senyawa hasil isolasi dilarutkan dalam metanol (Biasa digunakan pelarutmetanol atau etanol, tetapi spektrum yang dihasilkan dalam etanol kurangbaik), kemudian diidentifikasi menggunakan spektroskopi UV.Pengamatan dilakukan pada panjang gelombang 200-800 nm


5/40

Rentang Spektrum UV-Vis Flavon

Andersen, Øyvind M.; Kenneth R. Markham. 2006. Flavonoids Che Biochemistry, and Applications. Boca Raton: CRC Press.


6/40

Bentuk daerah spektrum flavonoid padaSpektrofotometri UV-Tampak

ejournal.unp.ac.id/students/index.php/fis/article/download56/513 analisis flavonoid uv


7/40

Pergeseran Pita pad

Flavon dan FlavonolDidit Darmawan1206211064


8/40

Flavon & Flavonol

a. Flavonb. Flavonol

Perbedaan pada peak I


9/40

1. Perubahan substitusi cincin A serapapita II

Perubahan substitusi cincin B & C

serapan pita I

2. Oksigenasi tambahan (terutamhiroksilasi! pergeseran pita "an

sesuai ke pan#ang gelombang "ang leb

C


10/40

3.Metilasi atau glikolisasi (terutama 3, 5, 7,dan 4’-OH) pergeseran pita ke panjanggelombang lebih rendah

4.Asetilasi cenderung menghilangkanpengaruh gugus hidroksil fenol terhadapspektrum

5.Asam sinamat sebagai asil pada flavonoid dideteksi pada pita serapan kira-kira 320 nm

6.Pada flavon dan flavonol, sistem 3’, 4’-di OH puncak kedua pada pita kedua (kadangberupa bahu)


11/40

Pereaksi GeserShinta Marlin1206240000


12/40

Pereaksi Geser Pereaksi yang menyebabkan pergeseran puncak pita serapan yang

terjadi

Berguna untuk menentukan kedudukan gugus hidroksil fenol bebas pada

inti flavonoid

Secara tidak langsung juga dapat menentukan kedudukan gula atau metilyang terikat pada salah satu gugus hidroksil fenol

Jenis pereaksi geser: NaOMe, NaOAc, NaOAc/H3BO3, AlCl3, AlCl3/HCl


13/40

Pereaksi Geser

Membuat Pereaksi Geser

•Kira‐kira 2,5 g logam natrium (ditimbangdalam keadaan terendam dalam eter minyakbumi/heksana di dalam gelas piala) dipotongkecil‐kecil dan ditambahkan ke dalam 100 mmetanol. Larutan yang diperoleh harusdisimpan di dalam botol kaca bertutupplastik.

Natriummetoksida(NaOMe)

• Digunakan serbuk NaOAc AR anhidrat.Pelumeran NaOAc untuk menghilangkanHOAc sisa biasanya tidak dilakukan.

Natrium asetat(NaOAc)


14/40

• Kira‐kira 5 g AlCl3 segar dan keringditambahkan dengan hati-hati kedalam 100 mL metanol AR. Simpandalam botol plastik bertutup.

Alumunium klorida

(AlCl 3 )

• 50 mL HCl pekatditambahkan ke dalam 100mL aquadest.

Asamhidroklorida(HCl)

• Digunakan serbuk asamborat anhidrat AR.

Asam borat(H 3 BO 3 )


15/40

Tahapan Kerja

Pereaksi Geser Angelina Wening W.1206224224


16/40

Pereaksi Geser

Tahapan Kerja

6 tetes pereaksi AlCl3, ditambahkan ke dalam larutan flavonoid, campur, laukur spektrum ‘AlCl3’. Selanjutnya ditambahkan 3 tetes HCl, campur, lalu u

spektrum ‘AlCl3/HCl’. Akhirnya cuplikan dibuang dan cuci kuvet

Setelah itu, tambahkan 3 tetes NaOMe ke dalam kuvet, campur, lalu rekamlspektrum ‘NaOMe’. Untuk memeriksa adanya penguraian, spektrum ‘NaOM

direkam lagi setelah kira‐kira lima menit. Kemudian, buang cuplikan dan kuyang telah dicuci diisi lagi dengan larutan flavonoid persediaan.

Mengukur spektrum cuplikan dalam MeOH (spektum ‘MeOH’)


17/40

Cont$

Lalu spektrum ‘NaOAc/ H3BO3’ diukur setelah ditambahkan H3BOdan dicampur (banyaknya H3BO3 kira‐kira setengah dari NaOAc)

Untuk memeriksa apakah ada penguraian, spektrum ‘NaOAc’ diukuulang setelah kira‐kira 5 menit.

Kemudian, tambahkan serbuk NaOAc ke dalam larutan flavonoid

persediaan dalam kuvet sedemikian rupa sehingga terdapat kira‐ki2mm lapisan NaOAc pada dasar kuvet, kocok, ukur spektrum ‘NaOA


18/40

Penafsiran Spektrum

NaOMeKarina Indra Dewi1206260154


19/40

Spektrum NaOMe•

Merupakan spektrum flvonoid yang gugus hidroksilfenolnya sampai batas tertentu terionisasi.

• Merupakan petunjuk ‘sidik jari’ pola hidroksilasi dan juga bermanfaat untuk mendeteksi gugus hidroksil yanglebih asam dan tidak tersubtitusi

•

Degradasi atau pengurangan kekuatan spektrumsetelah waktu tertentu merupakan petunjuk baik akanadanya gugus yg peka terhadap basa.


20/40

Jenis

flavonoid

Pergeseran yg tampak Petunjuk penafsira

pita 1 pita 2

flavon

flavonol

• Kekuatan

menurun terus

(artinyapenguraian)

• Mantap + 45 -65

nm kekuatan tak

menurun

• Mantap +45-65 nm

kekuatan menurun

•

Pita baru(dibandingkan dgn

MeOH), 320-335

nm

• 3,4’-OH, o-diOH pa

cincin A; pada cinc

OH yang berdampi

• 4’-OH

• 3-OH, tak ada 4’-O

bebas

• 7-OH

Isoflavon Tidak ada pergeseran, tak ada OH pada cinc

Flavanon

Dihidroflav

onol

• Kekuatan menurun

dengan berjalannya

waktu

• o-diOHpada cincin

(penurunan lamba

diOH pada cincin B


21/40

• K=kira-kira

Jenis

flavonoid

Pergeseran yg tampak Petunjuk penafsir

pita 1 pita 2

Khalkon

auron

• +80-95 nm

(kekuatan naik)

• +60-70 nm

(kekuatan naik)

• Pegeseran lebih

kecil

• 4’OH (auron)

• 6-OH tanpa oksi

pada 4’(auron)

• 6-OH dengan oks

pada 4’ (auron)

• +60-100nm

(kekuatan naik)• Tanpa kenaikan

kekuatan

• +40 – 50 nm

• 4-OH (Khalkon)

• 2-OH atau 4’-OH

tanpa 4-OH

• 4’-OH (2’-OH atau

juga ada)

Antosianidi

n

Antosianin

Semuainya terurai kecuali 3-deoksiantosianidin • Nihil


22/40

Menafsirkan

Spektrum NaOAcRr. Aprilla Wulansari1206247032


23/40

Langkah Pertama

Menentukan jenis flavonoid denganmemperhatikan:• Bentuk umum spektrum serapan senyawa dalam MeOH

• Panjang gelombang pita serapan

• Data kromatografi kertas


24/40

Langkah Kedua•

Mempertimbangkan arti perubahan spektrumyang disebabkan oleh berbagai pereaksi geser.

• Penafsiran perubahan spektrum dapat dilihatpada tabel berdasarkan jenis flavonoid yangdisertakan untuk setiap pereaksi geser.


25/40

Spektrum NaOAc•

Natrium asetat (NaOAc) hanya menyebabkanpengionan yang berarti pada gugus hidroksilflavonoid yang paling asam.

•Digunakan terutama untuk mendeteksi adanyagugus 7-hidroksil bebas (atau yang setara).


26/40

Penafsiran Spektrum NaOAc

JenisFlavonoid

Pergeseran yang TampakPetunjukPenafsiranPita I Pita II

Flavon

Flavonol

Isoflavon

+5 sampai 20 nm (berkurang

bila ada oksigenasi pada 6

atau 8)

7-OH

Kekuatan berkurang dengan

bertambahnya waktu

Gugus yang

peka terhadap

basa,

misalnya 6,7

atau 7,8 atau’


27/40

Flavanon

Dihidroflavon

ol

+35 nm

+60

7-OH (dengan 5-

OH)

7-OH (tanpa 5-

OH)

Kekuatan

berkurang

dengan

bertambahnya

waktu

Gugus yang peka

terhadap basa,

misalnya 6,7 atau

7,8-diOH

Khalkon

Auron

Pergeseran batokrom pada

panjang gelombang yang

lebih panjang

4’ dan/atau 4-OH

(khalkon)

4’ dan/atau 6-OH

(auron)

Keterangan:

+ (pergeseran batokromik, untuk memperpanjang panjang gelombang)


28/40

Pergeseran Spektrum dengan Pereaksi Geser

Natrium Asetat


29/40

Spektrum NaOAc-

H3BO3 Riana Maya1206210931


30/40

Spektrum NaOAc/H3BO3

Menjembatani kedua gugus hidroksil pada guguso-dihidroksi dan digunakan untuk mendeteksinya

.


31/40

Penafsiran Spektrum NaOAc/H3B

Jenis

Flavonoid

Pergeseran yang TampakPetunjuk

PenafsiraPita I Pita II

Flavon

Flavonol

Auron

Khalkon

+12 sampai

36 nm (nisbi

terhadap

spektrumMeOH)

Pergeseran

lebih kecil

O-diOH pad

cincin B

O-diOH pad

cincin A (6

atau 7,8)

Isoflavon+10 sampai

15 nm (nisbi O-diOH pad


32/40

Penafsiran Spektrum

AlCl3 dan AlCl3/HCJosy Kurnia Wulandari1206257701


33/40

JENIS FLAVONOID

(PEREAKSI)

PERGESERAN YANG TAMPAK PETUNJUK

PENAFSIRAPITA I PITA II

Flavon dan Flavonol

(AlCl3/HCl)

(AlCl3)

+35 sampai 55 nm 5-OH

+17 sampai 20 nm 5-OH dengan

oksigenasi pa

Tak berubah Mungkin 5-O

gugus prenil

+50 sampai 60 Mungkin 3-O

(dengan atauOH)

Pergeseran AlCl3/HCl

tambah 30 sampai 40

nm

o-diOH pada

Pergeseran AlCl3/HCl

tambah 20 sampai

o-diOH pada

(tambahan p

Isoflavon , flavanon dan

dihidroflavonol

+10 sampai 14 nm 5-OH (isofl


34/40

dihidroflavonol

(AlCl3/HCl)

(AlCl3)

+20 sampai 26 nm 5-OH

(flavanon,d

)

Pergeseran AlCl3/HCl,

tambah 11 sampai 30nm

o-diOH pa

(6,7 dan 7,

Pergeseran AlCl3/HCl,

tambah 30 nm sampai

38 nm (peka terhadap

NaOAc)

Dihodrofla

5-OH (tam

sembarang

o-diOH)

Auron

Khalkon

(AlCl3/HCl)

+48 sampai 54 nm

+40 nm

2’-OH (kha

2’-OH (kha

oksigenasi

+60 sampai 70 nm 4-OH (aur

Antosianidin +25sampai35nm o-diOH


35/40

Antosianidin

Antosianin

(AlCl3)

+25 sampai 35 nm

(pada pH 2-4)

odiOH

Pergeseran lebih esar Banyako

diOH (3-d

antosiani

Spektrum AlCl3 dan AlCl3/HCl karena membentuk kompleks tahan asam antara gudihidroksil, pereaksi ini dapat digunakan untuk mendeteksi kedua gugus tersebut. Jspectrum AlCl3 merupakan penjumlahan pengaruh semua kompleks terhadap spectsedangkan spectrum AlCl3/HCl hanya merupakan pengaruh kompleks hidroksi-ketodicatat bahwa jika etanol yang digunakan sebagai pelarut (bukan methanol), pergesterjadi sangat peka terhadap sesepora air.


36/40

Contoh Pengaruh

Pereaksi Geser Ayu Intansari R. Putri1206225201

Izzatu Rizqiah

1206246742

C thM f tP ki


37/40

Contoh Manfaat PereaksiGeserNaOMe

%umber 'arkham ). *.. 1+,,. Cara Mengidentifkasi Flavonoid. Banun


38/40

Con’d


C thM f tP kiG


39/40

Contoh Manfaat Pereaksi GeserNaOAc



40/40

Daftar Pustaka• Markham K R. 1988.Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung : Penerbit

ITB.• Andersen, Øyvind M.; Kenneth R. Markham. 2006. Flavonoids Chemistry,Biochemistry, and Applications. Boca Raton: CRC Press.

fitokimia: analisis flavonoid dengan spektroskopi serapan uv - pereaksi geser

Documents