26  

LAMPIRAN

27  

Lampiran 1. Daftar alat dan bahan yang digunakan selama penelitian

Daftar alat

1. Tabung Erlenmeyer 16. Seser 2. Cawan petri 17. Gayung 3. Mikropipet 18. Alat bedah 4. Mikrotube 19. Selang 5. Tip 20. Perangkat aerasi 6. Laminair air flow 21. Pompa air 7. Thermo shaker 22. Timbangan digital 8. Refrigerator sentrifugasi 23. Plastik 9. Vortex 24. Terminal kabel 10. Mikrotube plate 25.Jepitan 11. Inkubator 26. Ember 12. Mesin PCR 27. Siring filter 13. Perangkat elektroforesis 28. Waring 14. Autoklave 29. Bak fiber 15. Akuarium 30. Alat tulis

Daftar bahan

1. Ikan mas 2. Insang suspect KHV 3. Pakan komersial 4. PBS 5. LB-T media 6. Kuning telur 7. Reagen-reagen PCR 8. Agaros 9. Reagen-reagen elektroforesis 10. Label 11. Tissue

28  

Lampiran 2. Prosedur kultur bakteri pembawa vaksin DNA

NaCl 1% Yeast ekstrak 0,5% Tripton 1% Mili Q water Bahan disiapkan semua bahan ditimbang

Inkubasi 16 jam, 240 rpm Kultur cair

Siap untuk dibuat pelet

Lampiran 3. Prosedur pemanenan bakteri pembawa vaksin DNA dan pencampuran ke dalam pakan

divortex hingga homogen

Bakteri dimasukkan ke dalam mikrotube 1,5 mL

disentrifugasi, 12.000 rpm, 4°C, 30”

dicuci dengan PBS (3x)

Diinaktiva-si dengan suhu 80°C, 5’

Diseentrifu-gasi 12.000 rpm, 4°C, 30”

diresuspensi dengan PBS, 1 mL

Ditambah kan kuning telur 2%

Dicampur kan ke pakan, diaduk

Wrapping & dikering anginkan

ditambahkan mili Q water 

Diautoklave 121°C, 15’ 

29  

Lampiran 4. Prosedur preparasi filtrat KHV

30  

Lampiran 5. Skema dan time line penelitian

 

 

 

 Keterangan: A : vaksinasi 1 kali dalam satu minggu dan uji tantang B : vaksinasi 2 kali dalam satu minggu dan uji tantang C : vaksinasi 3 kali dalam satu minggu dan uji tantang K- : tanpa vaksinasi dan ikan diinjeksi dengan PBS K+: tanpa vaksinasi dan uji tantang S : senin R : rabu J : jumat UT : uji tantang IPBS: injeksi dengan PBS Time line penelitian

Kegiatan Oktober November Desember

1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4Adaptasi Vaksinasi Pasca vaksinasi Uji tantang Pengamatan

J

J

J

tanpa vaksin

S

S R7 hari adaptasi

7 hari adaptasi

7 hari adaptasi

7 hari adaptasi tanpa vaksin

7 hari adaptasi

7 hari masa vaksinasi

28 hari

UT

UT

UT

IPBS

UT

Pengamatan

Pengamatan

Pengamatan

Pengamatan

Pengamatan

30 hari pengamatan

A

B

C

K-

K+

31  

Lampiran 6. Prosedur pembuatan preparat ulas untuk analisis indeks fagositosis

Lampiran 7. Prosedur histopatologi

darah diambil dengan siring 1 mL

Dimasukkan ke dalam mikrotube 1,5 mL

dibuat ulasan darah

Darah dicampur dengan 50µL staphilococcus 

diambil 10 µℓ campuran nya

Didiamkan , 20’

direndam dengan methanol absolute 5’, dikeringkan

direndam dengan giemsa 70%, 15’, bilas, keringkan

Fiksasi, bouins 24 jam

Dehidrasi alkohol, 80, 90,95,95, 100%

Clearing, alkohol-xylol,xylol 1,2,&&3

Impregnasi xylol-parafin

Embedding paraffin 1.2, & 3

Pewarnaan hematoksilin-eosin, rehidrasi, mounting

pemotongan,mikrotom 6 µm

Bloking, overnight

32  

Lampiran 8. Kelangsungan hidup harian ikan mas pascauji-tantang filtrat KHV

Perlakuan Kelangsungan Hidup pada Hari ke- (%)

1 4 5 15 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 A 100 100 96,67 96,67 96,67 83,33 83,33 83,33 83,33 80 80 80 70 66,67 66,67 66,67 66,67 66,67 B 100 100 100 100 100 86,67 86,67 83,33 83,33 83,33 83,33 83,33 80 80 80 80 80 80 C 100 100 100 100 100 96,67 96,67 93,33 93,33 93,33 93,33 93,33 93,33 93,33 93,33 93,33 93,33 93,33 K+ 100 100 100 100 100 76,66 76,66 76,66 76,66 56,67 56,67 56,67 56,67 56,67 56,67 56,67 56,67 56,67 K- 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100

33  

Lampiran 9. Grafik Jumlah konsumsi pakan selama penelitian

Keterangan: A :vaksinasi satu kali dalam satu minggu dan uji tantang dengan KHV B :vaksinasi dua kali dalam satu minggu dan uji tantang dengan KHV C :vaksinasi tiga kali dalam satu minggu dan uji tantang dengan KHV K- :tanpa vaksinasi dan ikan diinjeksi dengan PBS, dan K+ :tanpa vaksinasi dan uji tantang dengan

Lampiran 10. Hasil pengamatan indeks fagositosis selama penelitian

Perlakuan Indeks fagositosis minggu ke- (%)

7 14 21 28 42 49 56 A 11 13 13 8 28 30 34 B 6 5 4 3 25 26 22 C 10 11 12 10 23 25 20 K- 9 8 8 10 14 13 13 K+ 11 12 11 9 23 28 35

Keterangan: A = vaksinasi satu kali dalam satu minggu dan uji tantang dengan KHV B = vaksinasi dua kali dalam satu minggu dan uji tantang dengan KHV C = vaksinasi tiga kali dalam satu minggu dan uji tantang dengan KHV K-=tanpa vaksinasi dan diinjeksi dengan PBS K+=tanpa vaksinasi dan uji tantang dengan KHV

34  

Waktu pengamatan

SUHU (°C) A1 A2 A3 A4 B1 B2 B3 B4 C1 C2 C3 C4 K-1 K-2 K-3 K-4 K+1 K+2 K+3 K+4

Rabu pagi 18,5 18,5 20 19,5 20,5 18 17,5 18 18,5 20 17,5 19,5 18 20 18,5 18 17,5 18 18 20 30/11/2011 sore 18,5 18,5 20 19,5 20,5 18 17,5 18 18,5 20 17,5 19,5 18 20 18,5 18 17,5 18 18 20

Kamis pagi 18 18 18,5 19 17,5 18 17,5 17,5 19 16,5 18,5 19 19 18 17,5 17,5 16,5 17,5 17,5 18,5 01/12/2011 sore 18 18 18,5 19 17,5 18 17,5 17,5 19 16,5 18,5 19 19 18 17,5 17,5 16,5 17,5 17,5 18,5

Jum't pagi 18 18 20 19 19,5 18 18 18 17,5 20 17 19 17 20 18,5 17,5 17,5 17 17,5 20 02/12/2011 sore 17,5 17,5 19 18,5 19 19 17 19 17 19 17 18,5 17 19 17,5 17 17 17 17 19

Sabtu pagi 17 17 17 17,5 18 17 17 17 17,5 18 16 17,5 16 17 17 17,5 16 16 16,5 18 03/12/2011 sore 17,5 17,5 18 18 18,5 17 17 17 17 19 17 18 17 18 17,5 17 17 17 17 18,5

Minggu pagi 17 17 17 17,5 18 17 17 17 17,5 18 16 17,5 16 17 17 17,5 16 16 16,5 18 04/12/2011 sore 17 17 17 17,5 18 17 17 17 17,5 18 16 17,5 16 17 17 17,5 16 16 16,5 18

Senin pagi 17,5 17,5 18,5 18,5 18,5 17 17 17 17,5 19 17 18,5 16,5 18 17,5 17 17 17 16 18 05/12/2011 sore 17,5 17,5 18 18 18,5 17 17 17 17 18 17 18 17 17 17 17 17 17 16,5 17,5

Selasa pagi 17 17 17 17,5 18 17 16,5 17 17 18 16 17,5 16,5 17 17 17 16 16 16 17 06/12/2011 sore 17,5 17,5 18 18,5 19 17,5 16,5 17,5 17 19 16,5 18,5 16,5 18 18 17 16,5 16,5 17 18

Rabu pagi 17 17 17 17,5 18 17 16,5 17 17 18 16,5 18 16 17 17 16,5 16 16 16,5 17 07/12/2011 sore 17,5 17,5 18 18,5 19 17,5 16,5 17,5 17 19 16,5 18,5 16,5 18 18 17 16,5 16,5 17 18

Kamis pagi 17,5 17 19 18,5 18,5 17,5 17 17 17 18,5 16,5 18,5 16 19 17 17 16,5 16,5 16,5 18,5 08/12/2011 sore 17,5 17,5 18 18,5 19 17,5 16,5 17,5 17 19 16,5 18,5 16,5 19 18 17 16,5 16,5 17 18

Jumat pagi 17 17 17 18 18,5 17 17 17 17,5 18 16,5 18 17 17,5 17 17 16,5 16 17 18,5 09/12/2011 sore 17,5 17,5 18 18 18 17 16 17,5 17 17 16,5 18 17 18 17 17 16,5 16 17 18

Sabtu pagi 18 18 18 18 18 17,5 16 17,5 17,5 17 16,5 18 17 18 17 17 16,5 16 17 18 10/12/2011 sore 17,5 17,5 18 18 18 17 16 17,5 17,5 17 16,5 18 16,5 18 17 17 16,5 16 17 18

Minggu pagi 17,5 17,5 18 18 18,5 17 16 17 17 18,5 16 18,5 16 18 16,5 17 16 16,5 17 18 11/12/2011 sore 20 20 23 22 23 19 20 19 19 23 19 22 19 23 21,5 19,5 20,5 19 20 23

35  

Senin pagi 18,5 18,5 19 18,5 19,5 18 16,5 18 18 19 16,5 18,5 16,5 19 18 17,5 16,5 17 17 19 12/12/2011 sore 18,5 18,5 19 18,5 19,5 18 16,5 18 18 19 16,5 18,5 16,5 19 18 17,5 16,5 17 17 19

Selasa pagi 18,5 19 19,5 19 20 18,5 17,5 18,5 18 20 17 19 17 19,5 18 18 17 18 18 20 13/12/2011 sore 18,5 19 19,5 19 20 18,5 17,5 18,5 18 20 17 19 17 19,5 18 18 17 18 18 20

Rabu pagi 18 18 18,5 18,5 18,5 17,5 16,5 17,5 17 18,5 16,5 18,5 16,5 18,5 17 17 16,5 16,5 16,5 18,5 14/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

Kamis pagi 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5 15/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

Jumat pagi 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5 16/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

Sabtu pagi 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5 17/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

Minggu pagi 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5 18/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

Senin pagi 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5 19/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

Selasa pagi 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5 20/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

Rabu pagi 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5 21/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

Kamis pagi 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5 22/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

Jumat pagi 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5 23/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

Sabtu pagi 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5 24/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

36  

Minggu pagi 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5 25/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

Senin pagi 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5 26/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

Selasa pagi 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5 27/12/2011 sore 19 20 20 20 20,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 20,5

Rabu pagi 19 20 20 20 23,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 23,5 28/12/2011 sore 19 20 20 20 23,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 23,5

Kamis pagi 19 20 20 20 23,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 23,5 29/12/2011 sore 19 20 20 20 23,5 19 18,5 19 19 20 18,5 20 19 20 19 19 18,5 18,5 20 23,5

37  

Lampiran 12. Hasil PCR insang ikan positif KHV

Keterangan: M :marker K :kontrol positif K- :kontrol negatif A :insang pada ikan sampel A B :insang pada ikan sampel B C :insang pada ikan sampel C D :insang pada ikan sampel D E :insang pada ikan sampel E F :insang pada ikan sampel F

M D

K+

E F C AK- B

38  

Lampiran 13. Denah ruangan penelitian dan letak akuarium

Keterangan: A1 :akuarium perlakuan A ulangan ke-1 A2 :akuarium perlakuan A ulangan ke-2 A3 :akuarium perlakuan A ulangan ke-3 A4 :akuarium perlakuan A ulangan ke-4 B1 :akuarium perlakuan B ulangan ke-1 B2 :akuarium perlakuan B ulangan ke-2 B3 :akuarium perlakuan B ulangan ke-3 B4 :akuarium perlakuan B ulangan ke-4 C1 :akuarium perlakuan C ulangan ke-1 C2 :akuarium perlakuan C ulangan ke-2 C3 :akuarium perlakuan C ulangan ke-3 C4 :akuarium perlakuan C ulangan ke-4 K-1 :akuarium perlakuan kontrol negatif ulangan ke-1 K-2 :akuarium perlakuan kontrol negatif ulangan ke-2 K-3 :akuarium perlakuan kontrol negatif ulangan ke-3 K-4 :akuarium perlakuan kontrol negatif ulangan ke-4 K+1 :akuarium perlakuan kontrol positif ulangan ke-1 K+2 :akuarium perlakuan kontrol positif ulangan ke-2 K+3 :akuarium perlakuan kontrol positif ulangan ke-3 K+4 :akuarium perlakuan kontrol positif ulangan ke-4

K+1 D3 

K+2  C3  K‐1 K+3

A2 C4

A1 A4

D1 

B1 

C1

K‐4

K‐3B3

B4

B2

C2

K‐2  D2

A3  K+4

AC Pintu 

D4

39  

Lampiran 14. Estimasi biaya produksi pakan bervaksin

komposisi bahan

bobot bahan 1 botol (g)

jumlah bahan yang digunakan harga bahan (Rp)

harga bahan total (Rp)

%/100mL g/100 mL 500 g 100 mL 1 mL 1 mL

Tripton 500 1 1 760000 1520 15,2 62,25 Yeast

ekstrak 500 0,5 0,5 660000 660 6,6 NaCl 500 1 1 425000 850 8,5

Mili Q water 20 L 600000 3000 30

Ampisilin 15 g 22500 225 2,25

Biaya komponen budidaya ikan mas Cyprinus carpio selama 1 siklus/3 bulan

Komponen Jumlah Harga Total Benih 2000 ekor 600/ekor 1200000 Pakan 810 Kg 170000/30Kg 4590000 Vaksin 1 mL/ekor 62,8/mL 125600

Perbandingan analisis usaha antar perlakuan

Perlakuan

A B C K Benih 1200000 1200000 1200000 1200000 Pakan 4590000 4590000 4590000 4590000 vaksin 125600 251200 376800

Kotal pengeluaran 5915600 6041200 6166800 5790000 Kelangsungan hidup 66,66% 80,00% 93,30% 56,66%

Σ ikan panen 1333 1600 1866 1133 Pendapatan 5499450 6600000 7697250 4249500 Keuntungan -416150 558800 1530450 -1540500