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FRAGILIDAD OSMTICA RESISTENCIA GLOBULAR

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***ANEMIAS HEMOLTICASCARACTERSTICAS ACORTAM. DE LA SUPERVIVENCIA NORMAL DESTRUCCIN PREMATURA DE LOS GRs. ACUM. DE LOS PRODUCTOS DEL CATABOLISMO DE LA HbAUM. DE LA ERITROPOYESIS EN LA MO.

LA HEMLISIS INTRAVASCULAR SE MANIFIESTA x: 1) HEMOGLOBINEMIA 2) HEMOGLOBINURIA 3) METAHEMALBUMINEMIA 4) ICTERICIA 5) HEMOSIDERINURIA

*ANEMIAS HEMOLTICASPruebas de laboratorio: de reticulocitos. Frotis de sangre perif.: anormales. del catabolismo del hemo y de bilirrubina no conjugada: ictericia de la haptoglobina srica. de la hemopexina srica. Hemosiderina en orina.

*Propiedades

*Membrana Eritroctica

*Membrana Eritroctica

*Na+K+ -ATPasaNa+ : 140 mmoles/LNa+ : 6 mmoles/LK + : 100 mmoles/LK + : 4 mmoles/L Plasma

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*FRAGILIDAD OSMTICA RESISTENCIA OSMTICA Resistencia de los GRs a la hemlisis se mide en condiciones de tensin osmtica, q dependen del volumen de la clula, el rea de la superficie y la funcin de la membrana.FRAGILIDAD OSMTICA de GRs expuestos a sols hipots decrs provoc. la entrada de agua en GR (se lisan). Mide la habil. de los GR de increm. su vol. al ser sometidos a sols. hipot-nicas decrecs de NaCl. Procedimiento: Suspender GRs en 1 serie de tubos con sols. hipots de NaCl de 0.85 % a 0.0 %. Incub. a temp. amb. x 30 y centrifugar. Se mide el % de hemlisis en las sols. sobrenads. y se grafica cada conc. de NaCl vs % de hemlisis.

*Solucin de Dacie: Osmticamente Equiv. a 10 g/LCloruro de sodio 180,00 gFosfato disdico anh. 27,31 gFosfato monosdico 2 H2O 4,86 gAgua destilada c.s.p. 2000 mL

Conserv. en refrigeracin

Se utiliza una Sol. osmticamente equiv a 1 g/L

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Solucin Dacie Osmticamente equiv. a: 1 g/100 mL

Cloruro de sodio 9 gFosfato disdico anhidro1,365 5 gFosfato monosdico 2 H2O0,243 gAgua destilada c.s.p. 1,000 mL

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ClNa1 g/100 mLAguabidestClNa1 g/100 mLAguabidestOsmt.Eq a:Abs. a 540 m

8,51,54,250,750,857,52,53,751,250,756,53,53,251,750,656,03,03,02,00,65,52,752,752,250,555,02,52,52,50,54,52,252,252,750,454,02,02,03,00,43,51,751,753,250,353,01,51,53,50,32,01,01,04,00,21,00,50,54,50,2

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TuboN% de NaClSol ClNa 1 %AguaDestSangreHepari-nizadaLeerAbsorb540 nm%Hemlisis10.856.81.20.0220.75620.0230.655.22.80.0240.604.83.20.0250.554.43.60.0260.50440.0270.453.64.40.0280.403.24.80.0290.352.85.20.02100.302.45.60.02110.201.66.40.02120.100.87.20.02

*Resistencia globular es la q ptan los GRs frente a sols. salinas hipotnicas de conc. decrecientes. Resist. globular mnima: Cuando se inicia la hemlisis Resist. globular mxima: Cuando la hemlisis es completa. La ME est constituida por lpidos y protenas con poros x los q puede salir la Hb, cuando la ME se altera en contacto con sols hipotnicas. En estas condiciones el agua penetra en la clula, se prod 1 desplazam. de electrolitos y la Hb escapa x los poros.Frag. Osm. aum (Resist Osm dism)

*Procedimiento 20 L de sangre total en tubos con 5 mL de solucin de DacieHomogenizar y dejar en reposo 30 Centrif. a 2500 rpm x 5 min0,85% 0,75% 0,65% 0,60% 0,55% 0,50% 0,45% 0,40% 0,35% 0,30% 0,20% 0,10%

* Los sobrenadantes se leen en el espectrofotmetro a 540 m (o en el fotocolormetro con filtro verde) usando como blanco el sobrenadante correspondiente a 0,85 %. Si en esta concentracin aparece hemlisis se prepara una solucin de mayor concentracin: 1,00% de cloruro de sodio para ser utilizada como blanco.

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*CALCULO:

% de hemlisis = Abs. del sobrenadante de c/ tubo x 100 Abs. del sobrenadante 100 % hemoliz.Los GRs normales empiezan a hemolizar a concs. de 0.5 % de NaCl. La hemlisis es completa a 0.3 % de NaCl.

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TUBO% de NaCl% de Hemlisis10,85020,75030,65040,60050,55060,500 570,455 4580,4050 9090,3590 99100,3097 100110,20100120,10100

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***InterpretacinGRs normales: Hemlisis inicial a 0,5% Hemlisis completa a 0,3 %.Esferocitos tienen membrana + permeable: F.O y la lisis: se inicia a conc. + altas y termina entre 0,5 a 0,4 %Talasemia: F.O.

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Q.F. Gustavo Guerra B.**