g13kha
TRANSCRIPT
-
7/16/2019 G13kha
1/32
AKTIVITAS INHIBISI XANTIN OKSIDASE OLEH EKSTRAK
AIR DAN ETANOL ANTING - ANTING (Acalypha indicaL.)
KHAIRRUNNISA
DEPARTEMEN BIOKIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR2013
-
7/16/2019 G13kha
2/32
-
7/16/2019 G13kha
3/32
ABSTRAK
KHAIRRUNNISA. Aktivitas Inhibisi Xantin Oksidase oleh Ekstrak Air dan
Etanol Anting-anting (Acalypha indica L.). Dibimbing oleh ANNA P ROSWIEMdan WARAS NURCHOLIS
Penyakit gout merupakan suatu penyakit akibat terjadinya penimbunan
kristal mononatrium urat di dalam tubuh sehingga menyebabkan nyeri sendi
(arthritis gout). Anting-anting merupakan tanaman obat asli Indonesia yang biasa
digunakan untuk menurunkan kadar asam urat dalam tubuh. Tujuan dari
penelitian ini adalah mengidentifikasi kandungan fitokimia, menguji aktivitas
sitotoksik, dan inhibisi enzim xantin oksidase secara in vitro oleh ekstrak air dan
etanol anting-anting (Acalypha indica L.). Dalam penelitian ini, pada ekstrak air
dan etanol anting-anting dilakukan uji fitokimia dengan metode Harborne, uji
sitotoksisitas dengan metodeBrine Shrimp Lethality Test(BSLT), dan uji inhibisienzim xantin oksidase secara dengan metode spektrofotometri. Uji fitokimiaekstrak air dan etanol anting-anting, masing-masing memperlihatkan adanya
senyawa flavonoid, tanin, saponin, alkaloid dan steroid. Hasil analisis probit
ekstrak air dan etanol dari anting-anting menunjukkan nilai konsentrasi letal 50
(LC50) masing-masing sebesar 446.619 dan 159.629 ppm. Penghambatan xantin
oksidase tertinggi dilakukan oleh ekstrak air 450 ppm sebesar 66.78%, ekstrak
etanol 150 ppm sebesar 65.84%, dan alopurinol 150 ppm sebesar 74.09%. Ekstrak
etanol anting-anting 150 ppm berpotensi sebagai bahan herba untuk alternatif
pengobatan asam urat.
Kata kunci : xantin oksidase, asam urat, anting-anting, inhibisi
-
7/16/2019 G13kha
4/32
-
7/16/2019 G13kha
5/32
ABSTRACT
KHAIRRUNNISA. Xantin Oxidase Inhibitory Activity by Water and Ethanol
Extract ofAnting-anting (Acalypha indica L.). Under the direction of ANNA PROSWIEM and WARAS NURCHOLIS
Gout is a disorder in which sodium urate crystals are deposited in and aroud
joints. Anting-anting is an original plant of Indonesia that often used in gout
therapy The aim of this research for identify phytochemical contents, testing
cytotoxic activity and xanthine oxidase inhibition test by water and ethanol extract
of anting-anting. In this research, it committed phytochemical test by Harborne
Method, cytotoxic test by Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), and inhibition test
of xanthine oxidase activity by spectrofotometry method. The phytochemical
assay result of water and ethanol extract ofanting-anting, each of them showed us
an existing flavonoid, tannin, saponin, alkaloid and steroid compound. The resultof probit analysis of the water and ethanol extract of anting-anting indicated thelethal concentration value 50 (LC50) respectively 446.629 and 156.629 ppm.
Highest inhibition by water extract 450 ppm as 66.78%, ethanol extract 150 ppm
as 65.84%, and allopurinol 150 ppm as 74.09%. Ethanol extracts ofanting-anting
still can said to be potential as inhibitor of xantin oksidase and can be use as anti
uric acid herb.
Keywords : xanthine oxidase, gout, anting-anting, inhibition
-
7/16/2019 G13kha
6/32
-
7/16/2019 G13kha
7/32
AKTIVITAS INHIBISI XANTIN OKSIDASE OLEH EKSTRAK
AIR DAN ETANOL ANTING - ANTING (Acalypha indicaL.)
KHAIRRUNNISA
Skripsi
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelarSarjana Sains pada
Departemen Biokimia
DEPARTEMEN BIOKIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR2013
-
7/16/2019 G13kha
8/32
-
7/16/2019 G13kha
9/32
Judul Skripsi : Aktivitas Inhibisi Xantin Oksidase oleh Ekstrak Air dan Etanol
Anting-anting (Acalypha indica L.)Nama : Khairrunnisa
NIM : G84080069
Disetujui,
Komisi Pembimbing
Dr. Anna P Roswiem, MS
Ketua
Waras Nurcholis, S. Si, M. Si
Anggota
Diketahui,
Dr. Ir. I Made Artika, M.App. Sc
Ketua Departemen Biokimia
Tanggal lulus :
-
7/16/2019 G13kha
10/32
-
7/16/2019 G13kha
11/32
PRAKATA
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas rahmat dan
pertolongan-Nya penulis dapat menyelesaikan penelitian ini. Penelitian ini
berjudul Aktivitas Inhibisi Xantin Oksidase oleh Ekstrak Air dan Etanol Anting-
anting (Acalypha indica L.). Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Februari
sampai dengan Mei 2012 di Laboratorium Pusat Studi Biofarmaka.Penulis mengucapkan terima kasih kepada Ibu Dr. Anna P Roswiem, MS
dan Bapak Waras Nurcholis S.Si, M.Si selaku komisi pembimbing atas segalakesabaran dan keikhlasan dalam memberikan bimbingan, arahan, dan masukan
bagi penulis. Ucapan terima kasih juga penulis sampaikan kepada seluruh staf
Biofarmaka, khususnya Bu Nunuk, Bu Ina, Bu Wiwi, Mas Endi, Mas Nio, dan
Pak Zaim atas bantuan dan arahannya selama melakukan penelitian. Terima kasih
pula penulis ucapkan kepada keluarga, teman-teman Biokimia 45, Sofi, Elsha,
Eka, Wulan yang telah memberikan semangat dan masukannya untuk penelitian
ini. Semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat dan mampu meningkatkan imandan taqwa kita kepada Tuhan pencipta alam semesta.
Bogor, Januari 2013
Khairrunnisa
-
7/16/2019 G13kha
12/32
-
7/16/2019 G13kha
13/32
RIWAYAT HIDUP
Khairrunnisa dilahirkan di Bogor pada tanggal 10 April 1990 dari Ayah
Syamsurizal dan Ibu Aam Aminah. Penulis merupakan anak pertama dari tiga
bersaudara. Penulis menyelesaikan pendidikan jenjang menengah atas di SMA
Negeri 1 Leuwiliang pada tahun 2008. Pada tahun yang sama penulis melanjutkan
pendidikan jenjang perguruan tinggi di Institut Pertanian Bogor (IPB) melaluijalur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI IPB). Penulis diterima sebagai
mahasiswa Departemen Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu PengetahuanAlam IPB. Pada tahun 2011 penulis melaksanakan kegiatan praktik lapangan di
Balai Lingkungan Pertanian dengan karya ilmiah berjudul Mikrob Tanah Sebagai
Pendegradasi Klorpirifos Dalam Tanah. Penulis dan kawan-kawan mendapat dana
program kreativitas mahasiswa bidang penelitian pada tahun 2011 dengan judul
Inhibisi Xantin Oksidase secara In Vitro oleh Ekstrak Suruhan (Peperomia
pellucida (L.) Kunth) dan dengan judul yang sama kami berhasil menjadi salah
satu peserta PIMNAS XXV di Yogyakarta. Di bidang organisasi, penulis jugapernah menjadi anggota pengurus himpunan profesi Community of Research and
Education in Biochemistry (CREBs) pada periode 2010/2011.
-
7/16/2019 G13kha
14/32
-
7/16/2019 G13kha
15/32
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ........................................................................................... ix
DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... ix
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... ix
PENDAHULUAN ............................................................................................ 1
TINJAUAN PUSTAKA..................................................................................... 1
Anting-anting ............................................................................................... 1
Asam Urat .................................................................................................... 2Xantin Oksidase ........................................................................................... 3
Alopurinol .................................................................................................... 4
Uji Sitotoksisitas denganBrine Shrimp Lethality Test(BSLT) ...................... 4
BAHAN DAN METODE ................................................................................. 4
Bahan dan Alat ............................................................................................. 4
Metode Penelitian ......................................................................................... 5
HASIL DAN PEMBAHASAN ......................................................................... 6
Kadar Air ..................................................................................................... 6
Ekstrak Air dan Etanol Anting-anting ........................................................... 6Fitokimia Ekstrak air dan etanol Anting-anting .............................................. 7
Sitotoksisitas pada Larva Udang .................................................................... 7
Aktivitas Inhibisi Xantin Oksidase oleh Ekstrak Air dan Etanol .................... 8
SIMPULAN DAN SARAN .............................................................................. 9
Simpulan ...................................................................................................... 9
Saran ............................................................................................................ 9
DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................... 9
LAMPIRAN ................................................................................................... 13
-
7/16/2019 G13kha
16/32
-
7/16/2019 G13kha
17/32
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Rendemen ekstrak air dan etanol anting-anting ........................................ 72 Kandungan fitokimia ekstrak air dan etanol anting-anting ....................... 73 Nilai LC50 ekstrak air dan etanol anting-anting ....................................... 84 Daya inhibisi ekstrak air dan etanol anting-anting terhadap enzim xantin
oksidase .................................................................................................. 8
DAFTAR GAMBAR
Halaman1 Tanaman anting-anting ........................................................................... 22 Lintas katabolisme nukleotida purin ....................................................... 33 Pengubahan xantin menjadi asam urat ................................................... 34 Mekanisme inhibisi xantin oksidase oleh alopurinol .............................. 4
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Diagram alir penelitian ......................................................................... 142 Prosedur ekstraksi ................................................................................. 153 Kadar air simplisia anting-anting .......................................................... 164 Rendemen ekstrak anting-anting ........................................................... 165 Fitokimia anting-anting......................................................................... 176 Uji sitotoksik menggunakan larva udangA. salina ................................ 187 Hasil perhitungan analisi probit ............................................................ 198 Uji aktivitas inhibisi xantin oksidase ..................................................... 199 Pembuatan kurva standar xantin ........................................................... 2010 Data hasi uji enzimatis ekstrak anting-anting ........................................ 2111 Analisis statistika inhibisi xantin oksidase oleh ekstrak air dan etanol
anting-anting ......................................................................................... 23
-
7/16/2019 G13kha
18/32
-
7/16/2019 G13kha
19/32
PENDAHULUAN
Penyakit asam urat (gout) sudah dikenal
sejak 2000 tahun yang lalu dan menjadi salahsatu penyakit tertua yang dikenal manusia.Prevalensi artritis pirai pada populasi di USA
diperkirakan 13.6/100000 penduduk,sedangkan di Indonesia sendiri diperkirakan1.6-13.6/100000 orang, prevalensi ini
meningkat seiring dengan meningkatnya umur(Tjokroprawiro et al. 2007).
Tingginya kadar asam urat dalam darahpada penderita gout maupun hiperurisemiadiakibatkan oleh faktor produksi asam uratberlebihan, obesitas, diabetes yang disertai
dengan tekanan darah tinggi (Utami et al.2009). Asam urat merupakan hasil akhirkatabolisme purin dalam tubuh. Pada kondisi
patofisioligis dapat terjadi peningkatan kadarasam urat dalam darah melewati batas normal,yang disebut hiperurisemia (Edward 2001).
Obat sintetik yang biasa dikonsumsi untukmengobati asam urat adalah alopurinol.Alopurinol merupakan obat medis yang
digunakan untuk menghambat kerja enzimxantin oksidase. Namun penggunaan obat inimemberikan efek samping, seperti reaksi
alergi kulit, nyeri kepala, serta kerusakan hatidan ginjal (Tjay et al. 2002).Oleh karena itu,perlu obat alternatif yang memiliki aktivitas
pengobatan lebih baik dan efek samping yang
rendah.Penelitian penghambat aktivitas xantin
oksidase telah banyak dilakukan padaberbagai tanaman obat yang berpotensisebagai obat antigout. Penelitian yang
dilakukan Kong et al. (2000) melaporkanbahwa ekstrak metanol Cinnamomum cassia,Chrysanthemum indicum, dan Lycopus
europaeus memiliki aktivitas menghambatxantin oksidase lebih besar dari 50%.Senyawa 6-aminopurin yang berasal dari daungandum memiliki daya inhibisi yang kuat
dengan nilai IC50 10.89 M (Hsieh et al.
2007). Hasil penelitian Iswantini danDarusman (2003) menunjukkan peran ekstrakkasar flavonoid herba sidaguri sebagaipenghambat aktivitas xantin oksidase dengan
daya inhibisi terkuat bila dibandingkandengan produk jamu komersial antigoutlainnya yang beredar di pasaran. Kemampuan
ekstrak kasar flavonoid sidaguri sebagaipenghambat aktivitas xantin oksidasemencapai 55.29% melalui mekanisme inhibisikompetitif (Hidayat 2007).
Anting-anting, merupakan gulma yangsangat umum ditemukan tumbuh liar di
pinggir jalan, lapangan rumput, maupun di
lereng gunung (Muslimah 2008). Tanaman inidigunakan oleh masyarakat Indonesia dalamterapi antigout. Hasil penelitian Kartika
(2004), menunjukkan bahwa tanaman anting-anting (Acalypha indica L.) mengandung
saponin, tanin, flavonoid, acalyphine, danminyak atsiri. Kandungan senyawa flavonoiddan alkaloid berpotensi mampu menghambatxantin oksidase (Milian et al. 2004). Namun,kajian ilmiah tentang potensi anting-anting
sebagai inhibitor enzim xantin oksidase belumbanyak dilakukan. Oleh karena itu pada
penelitian ini akan digali potensi ekstraktanaman Anting-anting (Acalypha indica L.)sebagai alternatif obat untuk mengatasi
penyakit asam urat.Tujuan dari penelitian ini adalah
mengidentifikasi kandungan fitokimia,
menguji aktivitas sitotoksik, dan inhibisienzim xantin oksidase secara in vitro olehekstrak air dan etanol anting-anting (Acalypha
indica L.). Hipotesis penelitian ini adalahsenyawa bioaktif dari ekstrak air dan etanoltanaman anting-anting (Acalypha indica L.)
memiliki potensi sebagai inhibitor enzimxantin oksidase. Penelitian ini dilakukanuntuk memberi informasi ekstrak air dan
etanol anting-anting (Acalypha indica L)dapat digunakan sebagai obat alternatifpenyakit gout.
TINJAUAN PUSTAKA
Anting-anting (Acalypha indicaL.)
Anting-anting (Gambar 1) merupakangulma yang sangat umum ditemukan sebagai
tumbuhan liar di pinggir jalan, lapanganrumput maupun lereng gunung. Herbasemusim, tegak, tinggi 30-50 cm, bercabang.
Helaian daun berbentuk bulat telur sampailanset, tipis, ujung dan pangkal runcing, tepibergerigi, panjang 2-8 cm, lebar 1,5- 3,5 cm,
berwarna hijau, bunga majemuk, berkelamin
satu, keluar dari ketiak daun, kecil-kecildalam rangkaian berbentuk bulir, buahnyakotak, bulat, hitam. Biji bulat panjang,berwarna coklat. Akarnya tunggang, berwarnaputih kotor. Anting-anting ini dapat
diperbanyak dengan biji (Dalimartha 2006).Anting-anting termasuk dalam divisi
Spermatophyta, subdivisi Angiospermae,
kelas Dicotyledoneae, ordo Euphorbiales,family Euphorbiaceae, genus Acalypha, danspesies Acalypha indica L. (Kartesz 2000).Herba anting-anting ini memiliki berbagai
nama diantaranya ceka mas (Melayu), lelatang,
kucing-kucingan, rumput kekosongan (Sunda),
-
7/16/2019 G13kha
20/322
-
7/16/2019 G13kha
21/32
rumput bolong-bolongan, anting-anting (Jawa)(Dalimartha 2006).
Daun, batang, dan akar tanaman ini
mengandung saponin dan tanin. Batangnyajuga mengandung flavonoid dan daunnya
mengandung minyak atsiri. Bagian yangdigunakan adalah seluruh bagian tumbuhansebagai obat, baik dalam bentuk kering atausegar. Herba ini bermanfaat sebagaiantiradang, antibiotik, diuretik, pencahar, dan
penghenti pendarahan (Dalimartha 2006).Penelitian yang telah dilakukan berkaitan
dengan tanaman anting-anting antara lainpenelitian Hermawan (2002) mengatakanbahwa rebusan akar anting-anting memiliki
aktivitas hipoglikemik yang lebih besardibandingkan obat pembanding (Daonil) padatikus Sprague dawley yang dinduksi aloksan.
Menurut Armansyah et al (2010), ekstraketanol daun Acalypha indica L. berpotensisebagai hepatoprotektif. Ekstrak dengan dosis
50, 100, dan 200 mg/ kg bb dapat menurukankadar SGPT dan SGOT pasca pemberianparasetamol.
Gambar 1 Tanaman anting-anting
Asam Urat
Asam urat termasuk asam lemah danmerupakan kristal putih yang tidak berbau,
tidak berasa, dan sangat sukar larut dalam air(Price & Wilson 2006). Menurut Wisesa danSuastik (2006), asam urat diketahui memiliki
fungsi sebagai antioksidan dan mungkinmerupakan antioksidan yang paling pentingdalam plasma dengan kontribusi sampai 60%
dari seluruh aktivitas pembersihan radikalbebas dalam serum manusia.
Urat yakni bentuk asam urat yang larutdalam darah dapat menangkap superoksida,radikal hidroksil, oksigen tunggal dan jugamempunyai kemampuan untuk kelasi logam-
logam transisi (Johnson et al. 2003). Namundemikian asam urat juga bersifat prooksidatifpada kondisi tertentu, khususnya bila
antioksidan lain berada dalam level yangrendah. Diketahui asam urat dapatmerangsang oksidasiLow Density Lipoprotein(LDL) in vitro yang merupakan langkah kunci
dalam progresivitas arterosklerosis. Efek
merusak asam urat pada sel endoteldiperkirakan melalui aktivasi leukosit danterdapat korelasi yang konsisten antara
peningkatan konsentrasi asam urat denganmarker inflamasi di sirkulasi (Johnson et al.
2003).Gout didefinisikan sebagai penyakit atau
sindrom yang disebabkan oleh adanyapembengkakan atau inflamasi karenamenumpuknya kristal mononatrium urat pada
tulang sendi sebagai akibat dari tingginyakadar asam urat dalam darah (Johnstone
2005). Penyakit asam urat umumnyamenyerang lebih banyak laki-laki daripadaperempuan. Perempuan memiliki hormon
estrogen yang ikut membuang asam uratmelalui urin (Mansjoeret al. 2004). Pada laki-laki, sebelum pubertas kadarnya sekitar 3.5
mg/dL. Setelah pubertas, kadarnya meningkatsecara bertahap dan dapat mencapai 5.2mg/dL (Price & Wilson 2006). Pada
perempuan kadar asam urat biasanya tetaprendah, baru pada usia pramenopausekadarnya di dalam darah rata-rata sekitar 4
mg/dL. Setelah menopause, kadarnyameningkat lagi sampai 4.7 mg/dL.Hiperurisemia adalah peningkatan kadar asam
urat serum di atas nilai normal, pada laki-lakidi atas 7 mg/dL dan pada perempuan di atas 6mg/dL (Price & Wilson 2006). Hiperurisemiadapat menimbulkan penyakit gout
(Dalimartha 2006).Nukleotida purin, di dalam tubuh manusia
akan diuraikan melalui suatu lintasmetabolisme yang ditunjukkan oleh Gambar2. Pelepasan gugus fosfat pada adenosin mono
fosfat (AMP) dilakukan oleh enzim5nukleotidase. Adenilat menghasilkanadenosin, yang kemudian mengalamideaminasi menjadi inosin. Inosin kemudian
dihidrolisis menghasilkan basa purinhipoxantin dan d-ribosa. Hipoxantindioksidasi berturut-turut menjadi xantin dan
kemudian asam urat oleh xantin oksidase(Nelson & Cox 2004).
Katabolisme guanosin mono fosfat (GMP)juga menghasilkan urat sebagai produk akhir(Gambar 2). GMP pertama-tama dihidrolisismenghasilkan nukleosida guanosin, yang
kemudian diuraikan menghasilkan guaninbebas. Guanin mengalami pembebasanhidrolitik gugus aminonya menghasilkan
xantin, yang diubah menjadi asam urat olehxantin oksidase (Nelson & Cox 2004).
Asam urat adalah produk akhir yang
diekskresi dari katabolisme purin pada hewanprimata. Akan tetapi, pada banyak vertebratalainnya, asam urat mengalami degradasi
-
7/16/2019 G13kha
22/323
-
7/16/2019 G13kha
23/32
lanjutan menjadi alantoin, oleh enzim uratoksidase (Nelson & Cox 2004).
Gout dikelompokan menjadi dua, yaitu
primer dan sekunder. Gout primer disebabkanoleh kelainan metabolik. Gout sekunder
disebabkan oleh keadaan hiperurisemia akibatpenyakit, penurunan fungsi ginjal, peningktandegradasi asam nukleat, peningkatan produksipurin, konsumsi alkohol, atau karena obat-obatan tertentu (Murray et al. 2003).
Pengobatan gout, didasarkan pada usahauntuk menurunkan produksi asam urat atau
meningkatkan ekskresi asam urat oleh ginjalsehingga obat-obatan tersebut dapatdigolongkan menjadi dua, yaitu golongan
urikostatik (inhibitor xantin oksidase) danurikosurik (Price & Wilson 2006).
Contoh obat golongan urikostatik adalah
alopurinol. Efek samping alopurinol adalahmual, muntah, dan diare. Selain itu dapat jugamenimbulkan neuritis perifer, depresi sumsum
tulang, dan kadang-kadang anemia aplastik(Katzung 2010).
Probenesid dan sulfinpirazon merupakan
obat urikosurik yang digunakan untukmenurunkan kadar asam urat melaluipeningkatan ekskresi asam urat di tubulus
ginjal dengan menghambat reabsorbsinya.Efek samping yang sering terjadi padapengobatan dengan terapi urikosurik adalahiritasi saluran pencernaan, dermatitis alergi,
dan ruam kulit (Katzung 2010).
Gambar 2 Lintas katabolisme nukleotida purin(Nelson & Cox 2004).
Xantin Oksidase
Peristiwa timbulnya gout tak terlepas dari
peran serta enzim xantin oksidase. Enzim inimampu mengubah xantin menjadi asam uratmelalui reaksi oksidasi seperti ditunjukkan
oleh Gambar 3. Xantin oksidase merupakansuatu kompleks enzim yang terdiri darimolibdenum, FAD dan Fe2S2 sebagai pusat
reaksi redoks. Enzim ini terdiri dari duasubunit identik yang saling berhadapan,memiliki 1332 residu asam amino denganbobot molekul sekitar 270000 Da. Selainfungsi katalisis mengubah hipoxantin menjadixantin maupun xantin menjadi asam urat,
telah ditemukan fungsi lain dari enzim inidalam mengkatalisis reduksi nitrat dan nitritmenjadi nitrit oksida (Millar et al. 2002) dan
sekaligus menyebabkan pembentukan radikalsuperoksida yang dapat menyebabkanperadangan (Bodamyali et al. 2002).
Xantin oksidase berperan penting dalamkatabolisme purin. Enzim ini mempunyai 2bentuk, yaitu xantin oksidase dan xantin
dehidrogenase. Enzim xantin dehidrogenasedapat dikonversi menjadi xantin oksidase padamamalia, baik dalam reaksi reversibel maupun
ireversibel. Enzim xantin oksidase merupakanenzim yang tersebar luas dalam beberapaspesies, dari bakteri hingga manusia. Enzim
xantin oksidase di dalam tubuh manusia
terdapat pada hati, jika enzim ini terdapatdiluar hati mengindikasikan kerusakan fungsi
hati (Hille 2006).Enzim xantin oksidase mengatalisis
oksidasi hipoxantin menjadi xantin lalu
menjadi asam urat yang berperan pentingdalam penyakit gout (Gambar 3). Pada saatbereaksi dengan xantin untuk membentuk
asam urat, atom oksigen ditransfer darimolibdenum ke xantin. Perombakan pusatmolibdenum yang aktif terjadi denganpenambahan air. Selama proses oksidasi,
molekul oksigen bertindak sebagai akseptor
elektron menghasilkan radikal superoksida(O2*) dan hidrogen peroksida (Rhamdani2004).
Gambar 3 Pengubahan xantin menjadi asamurat (Hille 2006).
-
7/16/2019 G13kha
24/32
4
-
7/16/2019 G13kha
25/32
Alopurinol
Alopurinol berguna untuk mengobati gout
sekunder. Obat ini bekerja denganmenghambat xantin oksidase, yang mengubahhipoxantin
menjadi xantin
dan selanjutnya
menjadi asam urat. Mekanisme umpan balikalopurinol menghambat sintesis purin yangmerupakan prekusor xantin. Alopurinol
sendiri mengalami biotransformasi oleh enzimxantin oksidase menjadi aloxantin yang masaparuhnya lebih panjang daripada alopurinol,itu sebabnya alopurinol yang masa paruhnyapendek cukup diberikan satu kali sehari(Gunawan & Sulistia 2007).
Alopurinol merupakan suatu analoghipoxantin (dengan atom N dan C pada posisi7 dan 8 saling bertukar), digunakan secara
luas untuk mengatasi penyakit pirai (Stryer2000). Mekanisme kerja alopurinol, awalnyabertindak sebagai substrat dan kemudian
sebagai inhibitor xantin oksidase. Oksidase iniakan menghidroksilasi alopurinol menjadialoxantin (oksipurinol). Sintesis urat dari
hipoxantin dan xantin segera menurun setelahpemberian alopurinol. Oleh karena itu,konsentrasi hipoxantin dan xantin serum
meningkat, sedangkan kadar urat menurun,xantin dan hipoxantin ini lebih mudah larut(dalam urin) (Stryer 2000). Mekanisme
inhibisi xantin oksidase oleh alopurinol
terlihat pada Gambar 4.Tjay et al. (2002) menyatakan bahwa obat
ini mempunyai efek samping terutama reaksialergi kulit, nyeri kepala, serta kerusakan hatidan ginjal. Selain itu, Pacher et al. (2006)
menyebutkan efek samping alopurinol yangumum adalah gastrointestinal distess, reaksihipersensitif, dan skin rash. Reaksi
hipersensitif terjadi setelah beberapa bulanatau tahun setelah pengobatan. Efek ini biasaterjadi pada individu dengan kelainan ginjal.Gejala keracunan alopurinol meliputi demam,
rash vaskulitis, eosinofilia, dan kerusakan
fungsi ginjal.
Gambar 4 Mekanisme inhibisi xantin oksidase
oleh alopurinol (Stryer 2000).
Uji Sitotoksisitas dengan Bri ne Shrimp
Lethali ty Test(BSLT)
Uji potensi hayati dapat dilakukan denganmenggunakan metode BSLT. Metode inisering digunakan untuk menentukan nilai
sitotoksisitas dari suatu bahan alam. Melaluiuji BSLT dapat diketahui nilai LethalConcentration (LC50) senyawa bioaktif pada
sampel terhadap larva udang. Nilai LC50adalah konsentrasi yang dibutuhkan untukmematikan 50% dari populasi larva udangtotal (Meyeret al.1982).
Metode uji potensi hayati BSLT memilikibeberapa keunggulan, diantaranya waktu
pelaksanaan cepat, biaya relatif murah,sederhana, tidak memerlukan teknik aseptis,tidak memerlukan peralatan khusus, dan
hanya membutuhkan sedikit sampel uji(Meyeret al.1982).Pertimbangan pemilihan larva udang
sebagai hewan uji didasarkan karena telurArtemia memiliki daya tahan yang lama(dapat tetap hidup dalam kondisi kering,
selama beberapa tahun). Disamping itu, telurArtemia lebih cepat dan mudah menetasdalam waktu 48 jam, sehingga dapat
dihasilkan larva udang dalam jumlah besaryang siap untuk diuji (Carballo et al. 2002).Alasan lain yang menyebabkan dipilihnya
larva udang sebagai hewan uji adalah, karena
larva udang memiliki membran kulit yangtipis, sehingga kematian suatu larva akibat
efek sitotoksik dari senyawa bioaktif dapatdianalogikan dengan kematian sebuah seldalam organisme (Fenton 2002).
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan adalahcampuran daun dan batang tanaman anting-anting (Acalypha indica L.) yang berasal dari
daerah Ciawi (Bogor), akuades, etanol 70%,
kloroform, NH4OH, H2SO4 2 M, pereaksiMeyer, pereaksi Wagner, pereaksiDragendorf, asam asetat anhidrat, H2SO4pekat, serbuk Mg, HCl pekat, amil alkohol,larutan besi(III) klorida, NaOH 1N, telur
Artemia salina L., bufer fosfat 0.05 M pH7.5, xantin, enzim xantin oksidase, HCl 0.58M, alopurinol.
Alat yang digunakan adalah neracaanalitik, tabung reaksi, gelas piala, labu takar,pipet volumetrik, cawan porselin, oven,eksikator, rotary evaporator, pinggan
porselin, penangas air, vial, mikropipet, kaca
pembesar, dan spektofotometer UV-VIS.
-
7/16/2019 G13kha
26/32
5
-
7/16/2019 G13kha
27/32
Metode Penelitian
Penyiapan SampelBahan baku anting-anting diperoleh dari
daerah Ciawi, Bogor. Kegiatan sortasi basahyang merupakan tahap awal penelitian ini,
bertujuan memisahkan kotoran atau bahan-bahan asing lainnya dari tanaman yang akanditeliti. Pekerjaan dilanjutkan dengan
pencucian untuk menghilangkan tanah danpengotor lainnya yang masih menempel padabahan yang sudah disortasi basah. Tahapberikutnya adalah perajangan pada daun danbatang tanaman anting-anting yang bertujuanmempermudah proses pengeringan. Daun dan
batang anting-anting kemudian dikeringkanmenggunakan oven pada suhu 50C. Daun danbatang anting-anting kemudian dihaluskan
hingga diperoleh simplisia anting-antingkering berukuran 80 mesh.
Penentuan Kadar Air (AOAC 1984)Cawan porselin dikeringkan dalam oven
pada suhu 105C selama 30 menit, lalu cawandidinginkan di dalam eksikator selama 30menit dan ditimbang bobot kosongnya.Sampel ditimbang sekitar 3 g dan dimasukkan
ke cawan porselin. Sampel beserta cawannyadipanaskan pada suhu 105C selama 3 jam di
dalam oven. Setelah didinginkan dalameksikator selama 30 menit, cawan besertaisinya ditimbang. Penentuan kadar air
dilakukan sebanyak 3 kali ulangan sampaidiperoleh bobot konstan.
Kadar air =
x 100%
keterangan :A = bobot sampel awal (g)B = bobot sampel sesudah dikeringkan (g)
Ekstraksi Air dan Ekstraksi Etanol (BPOMRI 2004)
Simplisia anting-anting diekstraksi dengannisbah sampel dan pelarut (air atau etanol70%) = 1:10, menggunakan metode maserasi
selama 24 jam sambil sekali-sekali diadukselama 6 jam pertama. Maserat dipisahkandan proses diulangi 2 kali dengan jenis dan
jumlah pelarut yang sama. Semua maseratdikumpulkan dan diuapkan dengan rotaryevaporator dengan suhu 40C hingga
diperoleh ekstrak kental.
Uji Fitokimia (Harborne 1987)
Uji Alkaloid. Sebanyak 0.05 g ekstrak
anting-anting dilarutkan dalam 10 mLkloroform dan 4 tetes NH4OH, kemudiandisaring dan filtratnya dimasukkan ke dalam
tabung reaksi bertutup. Ekstrak kloroform
dalam tabung reaksi dikocok dengan 6 mLH2SO4 2 M dan lapisan asamnya dipisahkanke dalam tabung reaksi yang lain. Lapisan
asam ini diteteskan pada lempeng tetes danditambahkan pereaksi Meyer, Wagner, dan
Dragendorf yang akan menimbulkan warnaberturut-turut putih, coklat, dan merah jingga.
Uji Triterpenoid dan Steroid. Sebanyak0.05 g ekstrak anting-anting dilarutkan dengan25 mL etanol panas 50C, kemudian disaring
ke dalam pinggan porselin dan diuapkansampai kering. Residu dilarutkan dengan eter
dan dipindahkan ke dalam tabung reaksi, laluditambahkan 3 tetes asam asetat anhidrat dan1 tetes H2SO4 pekat (Uji Lieberman
Burchard). Warna merah atau ungumenunjukkan adanya triterpenoid dan warnahijau atau biru menunjukkan adanya steroid.
Uji Flavonoid. Sebanyak 0.05 g ekstrakanting-anting ditambahkan 100 mL air panaskemudian dididihkan selama 5 menit dan
disaring. Filtrat yang diperoleh kemudiandiambil sebanyak 5 mL, ditambah denganserbuk Mg 0.05 g, 1 mL HCl pekat, dan 1 mL
amil alkohol. Campuran kemudian dikocokkuat-kuat. Uji positif ditandai denganmunculnya warna merah, kuning, atau jingga
pada lapisan amil alkohol.Uji Saponin. Sebanyak 0.05 g ekstrak
anting-anting ditambahkan 100 mL air panaskemudian dididihkan selama 5 menit dan
disaring. Sebanyak 5 mL filtrat dikocok dalamtabung reaksi tertutup selama 10 detikkemudian dibiarkan selama 10 menit. Adanyasaponin ditunjukkan dengan terbentuknyabuih stabil.
Uji Tanin. Sebanyak 0.05 g ekstrakanting-anting ditambahkan 100 mL air panaskemudian dididihkan selama 5 menit dandisaring. Sebagian filtrat yang diperoleh
ditambah larutan besi(III) klorida.Terbentuknya warna hitam kehijauanmenunjukkan adanya tanin.
Uji Sitotoksisitas Terhadap A. salina(Meyer et al. 1982)
Penetasan Telur. Telur A. salinaditimbang sebanyak 50 mg kemudian
dimasukkan ke dalam wadah yang berisi airlaut yang sudah disaring. Setelah diaerasi,kista dibiarkan selama 48 jam di bawah
pencahayaan lampu agar menetas sempurna.
Uji Sitotoksisitas pada A. salina.Sebelum dilakukan uji sitotoksisitas, terlebihdulu dibuat larutan ekstrak standar dengan
konsentrasi 2000 ppm. Sebanyak 10 ekorlarva A. salina dimasukkan ke dalam vial
yang berisi air laut lalu ditambahkan larutan
-
7/16/2019 G13kha
28/32
6
-
7/16/2019 G13kha
29/32
ekstrak (air dan etanol) sehingga konsentrasiakhirnya menjadi 10, 100, 500, dan 1000 ppm(Lampiran 6). Pengamatan dilakukan setelah
24 jam dengan menghitung jumlah larva yangmati dari total larva yang dimasukkan ke
dalam vial. Pengolahan data persen mortalitaskumulatif digunakan analisis probit LC50dengan selang kepercayaan 95%.
Uji Aktivitas Inhibisi Xantin Oksidase
Secara In Vitro(Tamta et al. 2005 yang
dimofikasi)Kurva Standar. Larutan substrat (xantin)
dibuat pada berbagai konsentrasi (0.1, 0.2,0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7 mM), kemudian diukur
serapannya menggunakan spektrofotometerUV pada panjang gelombang 293 nm. Kurvahubungan antara konsentrasi dan serapan
dibuat. Persamaan kurva linear tersebutdigunakan untuk menghitung aktivitas xantinoksidase.
Inhibisi Aktivitas Xantin Oksidase. Ujidaya inhibisi ekstrak air dan etanol anting-anting pada xantin oksidase dilakukan pada
kondisi optimumnya seperti yang dilaporkanoleh Iswantini & Darusman (2003). Kondisioptimum tersebut adalah pada suhu inkubasi
20C, pH 7.5, konsentrasi xantin oksidase 0.1unit/ml, konsentrasi xantin 0.7 mM, waktuinkubasi selama 45 menit, dan pada panjang
gelombang 293 nm.
Ekstrak dimasukkan ke dalam tabungreaksi dengan variasi konsentrasi berdasarkan
hasil uji BSLT. Variasi konsentrasi untukekstrak etanol adalah 150, 300, dan 450 ppmsedangkan untuk ekstrak air adalah 50, 150,
dan 300 ppm. Ekstrak tersebut kemudianditambah larutan bufer kalium fosfat 50 mMpH 7.5 sebanyak 1.9 mL. Campuran kemudian
ditambah 1 mL xantin 0.7 mM dan xantinoksidase 0.1 unit/mL sebanyak 0.1 mL laludiinkubasi pada suhu 20C selama 45 menit.Setelah diinkubasi, campuran segera
ditambahkan HCl 0.58 M sebanyak 1 mL
untuk menghentikan reaksinya. Campurandiukur serapannya menggunakanspektrofotometer UV pada panjanggelombang 293 nm untuk melihat seberapa
besar sisa xantin yang tidak bereaksi dalamsampel uji. Daya inhibisi dibandingkandengan alopurinol dengan konsentrasi 150
ppm.
Analisis Data.Data kuantitatif yang diperoleh diuji
dengan analisis sidik ragam (ANOVA) untukmengetahui pengaruh perlakuan terhadap
parameter yang diukur. Penentuan beda nyatadiantara perlakuan digunakan uji beda nyata
Duncans Multiple Range Test(DMRT) padataraf uji 5% (Mattjik & Sumertajaya 2006).
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air
Sampel yang digunakan pada penelitian iniadalah simplisia dari campuran daun danbatang anting-anting. Penentuan kadar air
berguna untuk menyatakan kandungan zatdalam tumbuhan sebagai persen bahan kering.Menurut Winarno (2002), kadar air yang baikadalah kurang dari 10%. Kadar air rerata yangdiperoleh dari simplisia anting-anting adalah4.21% (Lampiran 3). Dengan demikian,
simplisia dengan kadar air tersebut dapatdisimpan dalam jangka waktu cukup lama,
karena kemungkinan bahan rusak oleh jamurpada saat penyimpanan sangat kecil.
Ekstrak Air dan Etanol Anting-anting
Isolasi senyawa yang terkandung dalamsimplisia anting-anting dilakukan melaluiekstraksi pelarut dengan cara maserasi.Pelarut yang digunakan pada penelitian iniadalah air dan etanol 70%. Kedua pelarut ini
dipilih berdasarkan ketertarikan senyawa aktifyang diduga dapat menginhibisi xantinoksidase yang ingin diambil dari anting-anting,
yakni alkaloid dan flavonoid. Kedua senyawatersebut dapat bersifat polar atau semipolar,sehingga digunakan air yang bersifat polar
dan etanol 70% yang bersifat semipolar.Alasan lain adalah adanya peraturan yangdikeluarkan oleh BPOM RI (2010) mengenaicairan penyari untuk keperluan farmakologimenyebutkan hanya boleh menggunakan airatau etanol.
Hasil penelitian ini, menunjukkan bahwarendemen ekstrak air dan etanol anting-anting,adalah sebesar 19.04% dan 14.85% (Tabel 1).
Rendemen ekstrak air yang lebih tinggi jikadibandingkan rendemen ekstrak etanol,menunjukkan bahwa senyawa metabolit
sekunder pada anting-anting lebih banyakyang bersifat polar dibandingkan senyawayang bersifat semipolar.
Sriwahyuni (2010) menyebutkanrendemen anting-anting yang diekstrakdengan etil-asetat, diklorometana, dan
petroleum eter, masing-masing sebesar 14.9%,13.3%, dan 6.3%. Nilai ini lebih rendah darirendemen ekstrak air dan etanol yang
diperoleh pada penelitian ini. Perbedaanrendemen yang diperoleh dapat disebabkan
oleh perbedaan metode ekstraksi yangdilakukan, perbedaan usia anting-anting yang
-
7/16/2019 G13kha
30/32
7
digunakan dan perbedaan kandungan uji Uji steroid menunjukkan hasil positif pada
-
7/16/2019 G13kha
31/32
digunakan, dan perbedaan kandunganmetabolit sekunder yang terdapat pada anting-anting.
Tabel 1 Rendemen rerata ekstrak air danekstrak etanol 70% anting-anting
Sampel Rerata rendemen (%)
Ekstrak air 19.04 9.25
Ekstrak etanol 70% 14.85 1.50n = 3
Fitokimia Ekstrak Air dan Etanol
Anting-anting
Uji fitokimia bertujuan untuk mengujikeberadaan golongan senyawa metabolit
sekunder seperti alkaloid, flavonoid, saponin,tanin, steroid, dan triterpenoid dalam sampel.Uji pendahuluan ini dilakukan untuk
mengetahui ada tidaknya flavonoid dansenyawa-senyawa lain yang diduga dapat
berperan dalam menginhibisi xantin oksidase.Hasil penelitian ini, menunjukkan bahwa
baik ekstrak air maupun etanol anting-antingkeduanya positif mengandung flavonoid, tanin,
alkaloid, steroid, dan saponin serta negatifuntuk trierpenoid (Tabel 2). Meskipunkandungan kimia pada kedua ekstrak anting-
anting adalah sama, namun sifat dari senyawakimia pada kedua ekstrak tersebut berbeda.Senyawa kimia pada ekstrak air bersifat polar
sedangkan senyawa kimia pada ekstrak etanol
bersifat semipolar. Kartika (2004)menyebutkan bahwa ekstrak kasar daun
anting-anting mengandung flavonoid, alkaloid,saponin, tanin, acalyphine, minyak atsiri, danasam galat. Menurut Hermawan (2002),
ekstrak kasar metanol air akar anting-antingmengandung triterpenoid dan tanin, ekstrakair akar mengandung alkaloid dan ekstrak etil
asetatnya mengandung tanin, alaloid, dansteroid.
Uji fitokimia memberikan tanda hasil yangspesifik untuk setiap ujinya (Lampiran 5). Ujialkaloid menunjukkan hasil positif untukkedua ekstrak. Hasil positif ditandai dengan
terbentuknya endapan berturut-turut berwarnaputih, cokelat, dan merah setelah penambahanpereaksi Meyer, Wagner, dan Dragendorf. Uji
positif bahan mengandung tanin, ditandaidengan terbentuknya warna hitam setelahpenambahan FeCl3, sedangkan uji positif
untuk saponin ditandai dengan terbentuknyabuih yang stabil dalam waktu 10 menit setelahpengocokkan.
Uji triterpenoid kedua ekstrakmenunjukkan hasil negatif. Keduanya tidakmenunjukkan perubahan warna menjadi
merah atau ungu setelah penambahan pereaksi
uji. Uji steroid menunjukkan hasil positif padakedua ekstrak yang ditandai denganterbentuknya warna hijau. Steroid bisa
terdapat dalam bentuk glikosida (Harborne1987). Adanya gula yang dapat larut dalam
air, maka dalam ekstrak air dapatteridentifikasikan steroid bila steroid dalamsampel terdapat dalam bentuk glikosida.
Flavonoid merupakan metabolit sekunderyang terdapat pada vakuola tanaman.
Flavonoid memiliki banyak fungsi padatanaman, salah satunya sebagai zat warna
pada bunga. Peran lain dari flavonoid adalahsebagai antioksidan yang mampumengkompleks logam berat, juga mampu
mengikat protein dengan spesifitas yang tinggi(Andersen & Markham 2006). Hasil ujifitokimia menunjukkan ekstrak anting-anting
mengandung flavonoid.Senyawa bioaktif dari beberapa jenis
tanaman obat dilaporkan mempunyai aktivitas
biologis yang berguna dalam pengobatanpenyakit gout melalui inhibisi enzim xantinoksidase. Penelitian Yulianto (2008)
menyebutkan bahwa rosela yang memilikikandungan bioaktif flavonoid, saponin, tanin,serta ciplukan yang mengandung alkaloid,
saponin, tanin, flavonoid, dan steroid mampumenghambat aktivitas xantin oksidase.Berdasarkan hasil penelitian tersebut dan hasiluji ekstrak anting-anting pada penelitian ini,
maka, diduga komponen bioaktif dari anting-anting yang memiliki aktivitas antigoutmelalui inhibisi enzim xantin oksidase padapenelitian ini adalah flavonoid dan alkaloid.
Tabel 2 Kandungan fitokimia ekstrak air danetanol anting-anting
Uji fitokimiaEkstrak
Air Etanol 70%
Flavonoid + ++Tanin + +Alkaloid + ++
Triterpenoid - -
Steroid + ++Saponin ++ ++
Keterangan : tanda (+) menunjukkan senyawa metabolit
sekunder serta tingkat intensitas warna sedangkan (-)
menunjukkan tidak terdapat senyawa metabolit sekunderpada ekstrak
Sitotoksisitas pada Larva Udang
Pengujian sitotoksisitas dari ekstrak air
dan etanol anting-anting diperoleh nilaikonsentrasi letal 50 (LC50) masing-masingsebesar 446.619 dan 159.629 ppm (Tabel 3).Nilai LC50 ini menunjukkan bahwa ekstraktersebut memiliki potensi bioaktif karena
-
7/16/2019 G13kha
32/32