Genética GeneralLaboratorio

Universidad Nacional de San MartínInstituto de Investigaciones Biotecnológicas

TP2: Mapeos mediante cruzamientos genéticamente controlados en Drosophila

TP 2: Mapeos mediante cruzamientos genéticamente controlados en Drosophila

Objetivos

1 ) Mapeo genético entre los genes yellow y white basándose en la frecuencia relativa de recombinantes

2 ) Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de una colección de mutantes insercionales basándose en la segregación de los marcadores de los balanceadores con respecto al marcador del P

Mapa genético - Ligamiento

Establecer el orden y las distancias relativas entre genes ligados en un mismo cromosoma en base a la frecuencia de eventos de recombinación genética (crossing over).

Crossing over: las cromátidas homólogas no hermanas intercambian material genético.

la probabilidad de entrecruzamiento es proporcional a la distancia entre genes

Unidad de distancia de mapa genético: unidad de mapa (um) ó centi Morgan (cM)1 um equivale a 1% de recombinantes

Mapa genético de Drosophila

Alas cross-veinless (cv)

Alas cortadas (ct)

Ojos vermillion (v)

Genes ligados en el cromos X:

Alas cross-veinless (cv)

Alas cortadas (ct)

Determinar mapa genético entre:

Cruzamiento prueba calcular la frecuencia de recombinantes

Progenie:

Ojos vermillion (v)

Parentales: hembras v + + x machos v cv ct + cv ct Y

v + + 580 + cv ct 592v cv + 45+ + ct 40v cv ct 89+ + + 94v + ct 3+ cv + 5

% rec entre loci v-cv = ?% rec entre loci cv-ct = ?% rec entre loci v-ct = ?

En Drosophila, el macho no recombina

% rec entre loci v-cv = 18,5% % rec entre loci cv-ct = 6,4%% rec entre loci v-ct = 13,2%

cv ct v6,4 um 13,2 um

18,5 um < 19,6 um

Determinar mapa genético :

No considera los dobles recombinantes

subestimación

TP 2: Mapeos mediante cruzamientos genéticamente controlados en Drosophila

Objetivos

1 ) Mapeo genético entre los genes yellow y white basándose en la frecuencia relativa de recombinantes

2 ) Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de una colección de mutantes insercionales basándose en la segregación de los marcadores de los balanceadores con respecto al marcador del P

Parte I Mapeo genético entre los genes yellow y white en el cromosoma X de Drosophila

Cruzamiento a realizar

¿Cuál es el fenotipo/genotipo esperado en la progenie?

Contar número de individuos recombinantes

Calcular la distancia genética entre los loci yellow y white

prueba

¿Cómo se obtuvieron las moscas heterocigotas?

Mapeo genético entre los genes curly wing (Cy) y black body (b) en el cromosoma 2 de Drosophila

x Hembra Macho

TP 2: Mapeos mediante cruzamientos genéticamente controlados en Drosophila

Objetivos

1 ) Mapeo genético entre los genes yellow y white basándose en la frecuencia relativa de recombinantes

2 ) Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de una colección de mutantes insercionales basándose en la segregación de los marcadores de los balanceadores con respecto al marcador del P

Mapeo del elemento P

Mapear el sitio de inserción para identificar el gen afectado

Sitio etiquetado por el elemento P

1) Determinar el cromosoma que contiene el elemento P

2) Determinar la posición genética relativa del elemento P dentro del cromosoma

3) Determinar la posición molecular del elemento P en el genoma

Marcador w+

Secuencia del P

Parte II Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de una colección de mutantes insercionales

-891-964 Líneas de la colección de moscas-869

-Observar y anotar el color de ojos de cada línea

-Elemento P insertado:

Cromosomas balanceadores- Contienen rearreglos cromosómicos No recombinan con el

cromosoma homólogo

- Contienen marcadores dominantes Seguimiento de los cromosomas en la progenie (tanto el balanceador como el cromosoma homólogo)

Deducir fácilmente el genotipo de la progenie cuando la mutación de interés no presenta un fenotipo morfológica visible

Etiquetas para cruzamientos genéticos controlados

Fenotipo de la progenie:

Seleccionar en contra de Sb para quedarse con las moscas que tiene la mutación de interés

-Balanceador en el cromosoma III marcado con Stubble (Sb)-Mutación puntual en el cromosoma 3

Genotipo de la progenie:

Caso 1:

Parentales:

Fenotipo de la progenie:

Seleccionar en contra de Sb para quedarse con las moscas que tienen el elemento P en el III

-Balanceador en III marcado con Stubble (Sb)-Elemento P insertado en cromosoma II (marcador w+)-Elemento P insertado en cromosoma III (marcador w+)

Genotipo de la progenie:

Caso 2:

Parentales:

Progenie:

Mantener líneas con mutaciones letales balanceadas

-Balanceador en III marcado con Stubble (Sb)-Mutación letal en homocigosis en el III

Parentales:

Progenie:

Parentales:

La mutación letal se pierde con las generaciones

Caso 3:

Parte II Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de una colección de mutantes insercionales

-Líneas de la colección de moscas: 891, 964, 869

-Cruzamientos a realizar:

En la progenie: Evaluar la segregación del P con marcador w+ con respecto a los marcadores de los cromosomas balanceadores II y III

Fenotipo de la progenie

Cromosoma 3: Balanceador marcado con Stubble (Sb)

Caso del elemento P (w+) en el cromosoma 2Cromosoma 2: Balanceador marcado con Curly (Cy)

Cruzamiento a realizar

La segregación del elemento P está condicionada por el cromosoma balanceador del II, no es independiente de Cy (marcador del cromosoma homólogo)

Fenotipo de la progenie

Cromosoma 3: Balanceador marcado con Stubble (Sb)

Caso del elemento P(w+) en el cromosoma 3Cromosoma 2: Balanceador marcado con Curly (Cy)

Cruzamiento a realizar

La segregación del elemento P está condicionada por el cromosoma balanceador del III, no es independiente de Sb (marcador del cromosoma homólogo)

Fenotipo de la progenie

Cromosoma 3: Balanceador marcado con Stubble (Sb)

Caso del elemento P(w+) en el cromosoma X

Hembras:

Cromosoma 2: Balanceador marcado con Curly (Cy)

Cruzamiento a realizar

Machos:

Fenotipo diferencial entre macho y hembra

El elemento P segrega ligado al cromosoma X

Fenotipo de la progenie

Cromosoma 3: Balanceador marcado con Stubble (Sb)

Caso del elemento P(w+) en el cromosoma 4Cromosoma 2: Balanceador marcado con Curly (Cy)

Cruzamiento a realizar

Elemento P segrega de manera independiente con respecto a los marcadores de los cromosomas II y III y el cromosoma X

Parte I:Mapeo genético entre los genes yellow y white

Parte II:Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de una colección de mutantes insercionales

yw x yw++ Y

F1) F2)

w x línea a mapearw w; Cy ; Sb; +

F1) F2)

Analizar en TP4

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14 días a 23ºC

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