grupo 1 - verificação. temas a abordar: teste de suscetibilidade aos antibióticos; testes: placa...
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Grupo 1 - Verificação
Temas a abordar:•Teste de suscetibilidade aos antibióticos;•Testes:
Placa de testemunho; Teste de viabilidade;
•Processo de transconjugação;•Isolamento dos transconjugantes;•Previsão dos resultados;•Verificação.
Teste de suscetibilidade aos antibióticos • Ensaio que mede a susceptibilidade ou resistência de uma
bactéria aos antibióticos
• Realizado em placas de agar,rico em proteínas e hidratos de carbono que fornecem o substrato ideal para o desenvolvimento e crescimento de bactérias deinteresse clínico
Teste de suscetibilidade aos antibióticos
• São utilizados discos de difusão antibióticos depositados sobre a superfície do meio onde se inoculou, por espalhamento, uma amostra de uma cultura bacteriana previamente desenvolvida em meio líquido.
• Tendo como base a tabela de Teste de Susceptibilidade, podemos comparar os resultados e concluir a eficácia de cada antibiótico em inibir o crescimento das bactérias
Teste de suscetibilidade aos antibióticos
• AMC - amoxicilina + ácido clavulânico
• NAL - ácido nalidíxico• AMX - amoxicilina• AZT - aztreonam• FOX - cefoxitina• FEP - cefepime
999 – klebsiela pneumoneae •Halo com 19 mm no disco de ácido
nalidíxico; sendo por isso sensível
•Resistente a todos os B-lactâmicos;
• Lac +
K802N - Escherichia coli•Sensível a todos os B-lactâmicos;
•Resistente ao ácidonalidíxico;
•Lac -
TESTE DE VIABILIDADE E TESTEMUNHO
Meio em Gelose de Ágar
―Não seletivo―Não diferencial
Meio em Gelose de Ágar―Contem Amoxicilina + Ácido Nalidixico
TESTE DE VIABILIDADE E TESTEMUNHO
Permite verificar a viabilidade das bactérias: observa-se crescimento tanto da bactéria dadora como da recetora.
Permite verificar se as bactérias são, de facto, sensíveis aos antibióticos utilizados
Bactérias Vivas e Viáveis
Não se verifica crescimento bacteriano
TESTE DE VIABILIDADE E TESTEMUNHO
TESTE DE VIABILIDADE
PLACA TESTEMUNHO
OBSERVAÇÕES
Conjugação bacteriana
Klebsiela pneumonae E. coli
Em que consiste:
• Conjugação é a transferência de DNA plasmídico de uma bactéria dadora (Klebsiela pneumoneae) para uma bactéria recetora (E. coli).
Procedimento:
• Promoveu-se a conjugação bacteriana por dois métodos:
• 1. Encontro em gelose de agár;• 2. Encontro em caldo.
Resultados:
• Após incubação tanto da placa como do caldo obteve-se uma mistura
bacteriana constituída por bactéria dadora, recetora e transconjugantes
.
Isolamento dos Transconjugantes
• Consiste na separação das bactérias transconjugantes das bactérias dadoras e receptoras, obtidas no final do processo de transconjugação.
• Este processo vai permitir avaliar o comportamento das bactérias transconjugantes, no que respeita ao seu fenótipo. Permitindo assim, compará-las com o fenótipo das bactérias que lhes deram origem.
ProcedimentoÁgar
Recolha da massa de
crescimento obtido
Suspensão em 1 mL de Soro
Fisiológico
Dilu
içõe
s
Mãe
1/10
1/100
1/1000
Plaqueamento
ProcedimentoCaldo
Mãe 1/10 10/100 1/1000
Diluições
Plaqueamento
Plaqueamento Meio de MacConkey + Antibióticos
Macconkey
Lactose
Vermelho Neutro
Cristal violeta
Sais Biliares
• Utilizado para o isolamento de bactérias Gram negativo.
• Permite diferenciar bactérias Lac+ e Lac-
Plaqueamento Meio de MacConkey + Antibióticos
Antibióticos
Ác. Nalidíxico
Quinolona
Actua inibindo as
topoisomerases II e IV
Impede a formação dos
ácidos nucleícos
Amoxicilina
Oximino-ß-lactâmico
Do grupo das amino-
penicilinas
Atua na fase parietal da
formação do peptidoglican
o
Inibe a acção das
transpeptidases
Previsão dos resultados • Teoricamente as placas Mac Conkey deveriam ter colónias
âmbar/amarelas.
Previsão dos resultados • Contudo podem aparecer placas com colónias vermelhas.
Transconjugantes mudaram de
cor porque houve
degradação do antibiótico que produz ácidos.
Cresceram colónias da
bactéria dadora.
Sofreram alguma
mutação que lhes fez ganhar a
resistência ao antibiótico.
• Para verificar se na situação anterior existem apenas colónias transconjugantes:
Verificação
Isolamento em meio Mac Conkey sem antibióticos
Colónias Vermelhas – Bactéria dadora
Colónias amarelas – Bactéria T
• Pode ocorrer o crescimento de colónias satélites (bactérias recetoras).
Previsão de resultados
Necessário verificar se as bactérias que cresceram no meio seletivo são apenas as
transconjugantes
Podemos fazer de 3 maneiras
Verificação
Inocular as bactérias obtidas
em meio Mac Conkey com discos de antibiótico de
amoxicilina e ácido nalidíxico.
Inocular as bactérias obtidas
em meio Mac Conkey com os
antibióticos inseridos no agar.
Estria à superfície Técnica do
isolamento em quadrantes
VerificaçãoInocular as bactérias obtidas em meio Mac Conkey com discos de
antibiótico de amoxicilina e ácido nalidíxico.
Colónias que cresceram são de bactérias Transconjugantes
VerificaçãoInocular as bactérias obtidas em meio Mac Conkey com discos de
antibiótico de amoxicilina e ácido nalidíxico.
Colónias que cresceram são de bactérias recetoras
VerificaçãoInocular as bactérias obtidas em meio
Mac Conkey com os antibióticos inseridos no agar.
Estria à superfície
Colónias que cresceram são de bactérias Transconjugantes
VerificaçãoInocular as bactérias obtidas em meio
Mac Conkey com os antibióticos inseridos no agar.
Estria à superfície
Colónias que cresceram são de bactérias recetoras
VerificaçãoInocular as bactérias obtidas em meio
Mac Conkey com os antibióticos inseridos no agar.
Técnica do isolamento
em quadrantes
No 4º quadrante teremos as bactérias Transconjugantes