8/14/2019 Gua de Interpretacin y Uso Placas 3M Para C.totales y E

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Preparar una dilucin 1:10 o mayor

del alimento. Pesar o pipetear el

producto alimenticio en un contenedorapropiado como una bolsa de

digestor, botella de dilucin, bolsaWhirl-Pak, u otro contenedor estril.

Adicionar la cantidad apropiada de unode los siguientes diluyentes estriles:

Buffer de fosfatos de Butterelds (bufferfosfatos IDF, 0.0425 g/L de KH2PO4

ajustado a pH 7.2), agua peptonada

al 0.1%, diluyente de peptona sal(mtodo ISO 6887), agua peptonada

bufferada (mtdo ISO 6579), solucinsalina (0.85-0.90%), caldo letheen libre

de bisultos, agua destilada.

Mezclar u homogenizar lasmuestras por el procedimiento

normal.

Para productos cidos ajustar el pH

de la muestra diluda a 6.5-7.5 conNaOH 1N. Para productos alcalinos

ajustar el pH con HCl 1N.

Almacene los paquetes sin abrir a

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Colocar el difusor con el lado planohacia la placa hacia el lm superior

sobre el inculo.

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Placas PetrilmMR

E. coli/ColiformesEsta gua lo familiarizar con los resultados de las Placas Petrilm 3M para Recuento de E. coli /coliformes. Para ms informacin, contactar

a su representante ocial ms cercano de los Productos de Microbiologa.

La identicacin de la E. coli puede variar por pas(ver la Seccin Instrucciones de Uso para tiempos ytemperaturas de incubacin):

Mtodo Validado AOAC INTERNATIONALE. coli = 49 (colonias azules con gas)Coliformes totales = 87 (rojas y azules con gas)

Gua de Interpretacin

1

Las placas Petrilm para Recuento de E. coli / Coliformes contienen nutrientes de Bilis y Rojo Violeta (VRB), un agentegelicante soluble en agua fra, un indicador de la actividad de glucuronidasa, y un indicador que facilita la enumeracincolonial. La mayora de las E. coli (cerca del 97%) producen beta-glucuronidasa la cual produce un precipitado azul asociadocon la colonia. El lm superior atrapa el gas producido por los coliformes fermentando la lactosa y la E. coli. Cerca del 95%de las E. coli producen gas, indicado por las colonias de color rojo a azuloso asociadas con el gas atrapado sobre la placaPetrilm EC (con el dimetro aproximado de de una colonia).

La AOAC INTERNATIONAL y el Bacteriological Analytical Manual (BAM) de la FDA denen a los coliformes comobacilos gram negativos que producen cido y gas de la lactosa durante la fermentacin metablica. Las colonias decoliformes creciendo en la placa Petrilm EC producen cido el cual ocasiona que el indicador de pH tia el gel de colorrojo obscuro. El gas atrapado alrededor de las colonias de coliformes indica coliformes conrmados.

No usar esta placa solamente para la deteccin de la E. coli O157. Como otros medios para E. coli /coliformes, esta placa noindicar especcamente si esta presente alguna cepa de O157.

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No crecimiento = 0

Note los cambios en el color del gel en las guras 2 a 8.Conforme la cuenta de E. coli y coliformes seincrementa, el color del gel se torna desde rojo obscurohasta azul prpura.

Las burbujas del fondo son caractersticas del gel y noson el resultado del crecimiento de coliformes o E. coli.Ver cuadro 1.

Recuento de E.coli = 3

Cualquier coloracin azul (azulosa a rojo-azul) indica lapresencia de E. coli. La luz frontal aumenta la deteccindel precipitado azul formado por cualquier colonia.

El crculo 1 muestra una colonia rojo-azul usando luzposterior. El crculo 2 muestra la misma colonia conluz frontal. El precipitado azul es mas evidente en elcrculo 2.

Recuento de E. coli = 17

Recuento de coliformes totales = 150

El rea de crecimiento circular es de aproximadamente 20

cm2.La estimacin se puede hacer sobre placas conteniendomas de 150 colonias contando el nmero de coloniasen uno mas cuadrados representativos y determinandoel nmero promedio por cuadro. Multiplicar el numeropromedio por 20 para determinar el recuento estimado porplaca.

3 Placas PetrilmMR Placa para el recuento de E. coli/coliformes

Recuento de E. coli = 13

Recuento de coliformes totales = 28

El rango de conteo para la poblacin total en las placasPetrilm EC es de 15-150

No cuente las colonias que aparecen en la barrerade hule espuma porque estn fuera de la inuenciaselectiva del medio. Ver crculo 1.

2 3

4

BackLighting

FrontLighting

5

1

1

2

1

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TNTCDemasiado Numerosas para Contar Para obtener una cuenta mas precisa, diluya msla m

Recuento real ~ 106

Las placas Petrilm EC con colonias que sonTNTC tienen una mas de las siguientescaractersticas:Muchas colonias pequeas, muchas burbujas degas, y un obcurecimiento del color del gel desderojo a azul prpura..

Recuento real ~ 106

Altas concentraciones de E. coli pueden causar queel area de crecimiento se torne azul prpura.

Recuento presuntivo de E. coli ~ 8

Recuento de coliformes totales ~ 108

Cuando estan presentes altos niveles de coliformes(>108 ), algunas cepas de E. coli pueden producirmenos gas y las colonias azules pueden estar menosdenidas. Cuente todas las colonias azules sin gas y/oColonias azules como E. coli presuntivas. Repique las

colonias azules sin gas y conrme si es necesario.

Recuento real ~ 108

Cuando estan presentes altos numeros de organismos nocoliformes como las Pseudomonas en la placa PetrilmEC, el gel puede cambiar a amarillo.

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8 9

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Burbujas

Recuento de coliformes totales = 3

Las partculas de alimento son de forma irregular yno estan asociadas a burbujas de gas.

Recuento total de coliformes = 78

Los patrones de burbujas pueden variar. El gaspuede desorganizar a la colonia de tal forma que lacolonia queda rodeada por la burbuja.Ver crculos 1 y 2.

Las burbujas de artefacto pueden resultar deinoculacin inapropiada o del atrapamiento de airedentro de la muestra. Son de forma irregular y noestn asociadas a colonias.Ver crculo 3.

Los ejemplos mostrados del 1-10 muestran diversospatrones de burbujas asociadas con las coloniasproductoras de gas. Todas deben ser enumeradas.

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1

2

3

4

5 7

8

6

9 10

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