haemophilus influenzae

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURAFacultad de Medicina Humana

“Año de la Diversificación Productiva y del Fortalecimiento de la Educación”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA Facultad de Medicina Humana

MECANISMOS DE AGRESION Y DEFENSA IMODULO BACTERIAS

HAEMOPHILUS INFLUENZAE

Docente : Dr. Cesar Torres Díaz

Alumno : CULQUI CARRASCO, CLAUDIA

Ciclo : IV – 2015

PIURA - PERU

Haemophilus Influenzae Página 1


HAEMOPHILUS

Haemophilus es un género de bacterias Gram negativas con forma de cocobacilos pero muy pleomórficas. Aunque la forma típica es la cocobacilar, se consideran pleomóficas porque pueden realmente variar drásticamente su morfología.

El género incluye organismos comensales con un cierto grado de patogenicidad; H. influenzae ocasiona septicemia y meningitis a niños pequeños; H. ducreyi es un agente productor de chancros. Es de destacar que originariamente se consideraba a H. influenza como el agente causal de la gripe, creencia errónea, puesto que se trata de un ortomixovirus, pero que le proporcionó el epíteto específico al taxón.

Las especies de Haemophilus se clasifican según las características de la cápsula: siete serogrupos de la a a la f han sido descritos, junto con un e´.2La cápsula tipo b es la más correlacionada con la virulencia de la bacteria.

1. DATOS HISTÓRICOS:

El Haemophilus influenzae, era anteriormente llamado bacilo de Pfeiffer o Bacillus influenzae fue descrito en 1892 por Richard Pfeiffer durante una pandemia de gripe. H. influenzae.

Fue considerado erróneamente como la causa de la gripe común hasta 1933, cuando la etiología viral de la gripe llegó a ser aparente. Sin embargo, H. influenzae es responsable de un amplio rango de enfermedades.

Debido a su pequeño genoma, H. influenzae fue el primer organismo de vida libre cuyo genoma completo fue secuenciado, por Craig Venter. Su genoma consiste de 1.830.140 pares de bases y contiene 1.740 genes.

Se le clasifico taxonómicamente en 1917

TAXONOMIA



CLASIFICACIÓN CIENTÍFICA

DOMINIO: Bacteria

FILO: Proteobacteria

CLASE: Gammaproteobacteria

ORDEN: Pasteurellales

FAMILIA: Pasteurellaceae

GÉNERO: Haemophilus

ESPECIE: H. influenzae

NOMBRE BINOMIAL:

Haemophilus influenzae

CARACTERÍSTICAS GENERALES

Coco bacilos Gram negativos. Son pleomórficos Son inmóviles. Tamaño: 0.4 mm de ancho x 1 mm de largo. Se agrupan a menudo en cadenas cortas y bacilos aislados o

bien filamentosos No forman esporas. No pose cilios. Algunas espacies son capsuladas. Es una bacteria anaerobia facultativa Temperatura óptima de crecimiento a 37

Algunas especies de Haemophilus requieren factores de crecimiento que están presentes en la sangre como factor X y factor V.

Algunos producen hemólisis como Haemophilus Haemolyticus y Haemophilus parahaemolyticus.



METABOLISMO

Estos organismos se cultivan en placas de agar sangre, medio rico que les proporciona toda clase de factores de crecimiento requeridos para su desarrollo: hemina (factor X) y/o factor V o dinucleótido de nicotinamida y adenina. El agar chocolate, también con un fuerte componente de sangre en su composición pero tras sufrir un proceso térmico, acelera mucho su crecimiento.3 La presencia de CO2, una temperatura de 37ºC y un pH alcalino favorece el crecimiento de Haemophilus. Es sensible a efectos exteriores como el frío, desecación y luz solar. Fermentan glucosa pero nunca lactosa nimanitol.

También se ha cultivado con la técnica "Staph streak", que permiten cultivar Staphylococcus y Haemophilus en una misma placa. En este caso,Haemophilus presenta un patrón de crecimiento característico formando satélites en torno a las colonias de estafilococos; esta propiedad se denominasatelismo y muestra la necesidad de factores de crecimiento excretados por el estafilococo. Esta necesidad puede considerarse como determinante en el desarrollo de patologías oportunistas producidas por Haemophilus

CLASIFICACION

Se han descrito 19 especies distintas dentro del género Haemophilus y estos se han clasificado basándose en las necesidades para su crecimiento, pero solo 9 especies del género son humanas.

Algunas especies requieren factor X que es un grupo de compuestos tetrapirrolicos termoestables que son proporcionados por diversos pigmentos que contienen hierro por ejemplo: Hemina y Hematina.

Los compuestos de factor X se usan en la síntesis de Catalasas Peroxidasas y el Sistema de transporte de electrones de citocromo.

Los microorganismos que dependen del factor X para su crecimiento son capaces de sintetizar protocorfilina a partir deácidos alfa aminolevelinico. Una reacción que sirve como base para detectar cepas de Haemophilus.

Algunas especies de Haemophilus pueden también requerir factor V (dinucleótido de nicotidamina y adenina).

Las especies de Haemophilus dependiente del factor V no crecen generalmente en agar-sangre de rutina en el cual los eritrocitos están intactos.

Pueden usarse medios que contienen eritrocitos lisados como agar chocolate o agar sangre con 5% de sangre no lisada de caballo o conejo y medio con suplemento de fildes para la recuperación de especies de Haemophilus de muestras clínicas.



La especies humanas de Haemophilus se asocian con las vías respiratorias altas con excepción del Haemophilus ducreyi que causa una enfermedad de transmisión sexual denominada Chancroide.

Las especies de Haemophilus recuperadas de muestras humanas se identifican en el laboratorio clínico por la demostracióndel requerimiento del factor X y V, reacciones hemolíticas en agar-sangre de caballo, producción de catalasa y oxidasa y mediante la realización de diversas pruebas bioquímicas de rutina, que incluyen producción de indol, actividad de ureasa, actividad de ornitina de decarboxilasa.

ESTRUCTURA ANTIGENICA

El Haemophilus influenzae posee en sus envolturas 3 factores antigénicos importantes ellos son:

El polisacárido capsular El LPS (endotoxina) La proteína de la membrana externa (proteasas de Ig A humanas)

Los componentes más importantes son los dos primeros: el polisacárido capsular y la endotoxina. Estos serían responsables de la virulencia, adherencia y resistencia a la fagocitosis.

Estos microorganismos también elaboran proteasas de Ig A que son enzimas capaces de hidrolizar la cadena pesada de Ig A humana. Como se fija a las mucosas donde el mecanismo inmunológico esta mediado por Ig A, su clivaje puede ayudar a la virulencia del microorganismo.

CULTIVOS

En agar chocolate, después de 24 horas de incubación, se presentan colonias planas, de color café grisáceo con diámetro de 1 a 2 mm. Sin embargo el H. influenzae no se desarrolla en agar sangre de carnero exepto alrededor de colonias de estafilococos.

La identificación de los microorganismos del grupo hemofilus depende en parte de la demostración de la necesidad de ciertos factores de crecimiento denominados X y V. El factor X actúa fisiológicamente como hemina y el factor V puede ser sustituido por el dinucleótido de nicotinamida y adenina (NAD) u otras coenzimas. Las colonias de estafilococos en agar sangre liberan NAD prodiciendo el fenómeno de crecimiento satélite.

Durante el desarrollo de colonias existen variaciones notables como la tendencia a perder su cápsula (y por ende su especificidad) y también podrían adquirir resistencia.



Como ya se ha mencionado antes el H. influenzae se diferencia de los demás bacilos gram negativos por su requerimiento de factores X y V y porque son incapaces de ocasionar hemólisis sobre agar sangre. Otra característica es que en el desarrollo de colonias de H. influenzae la fermentación de carbohidratos es escasa e irregular. A su vez el H. influenzae es incapaz de producir porfirinas a partir de ácido delta-aminolevulínico.

H. influenzae en agar chocolate

H. influenzae en agar sangre)CLASIFICACIÓN

Son variadas las clasificaciones del H. influenzae, hay tres tipos de clasificación basadas en criterios distintos, a continuación se detalla las clasificaciones

SEROTIPOS

En 1930 se definieron dos categorías principales de H. influenzae: cepas con cápsula y sin ella.

Las cepas acapsulares son no tipificables, por lo general son parte de la flora normal del tracto respiratorio y constituyen el mayor porcentaje de H. influenzae.



En cambio los microorganismos capsulares son diferenciados por sus polisacáridos de capsulares, existiendo seis tipos distintos: a, b, c, e, d, f. Siendo El del tipo B el más patógeno. El antígeno capsular de tipo b es un fosfato de polirribosarribitol (PRP), este es el principal factor de virulencia. Así el H. influenzae de tipo B es el más patógeno y produce una amplia variedad de enfermedades.

Porcentaje de portadores de H. influenzae en la flora respiratoria

BIOTIPOS

Además de la diferenciación serológica de H. Influenzae, la especie se subdivide en ocho biotipos (I hasta VII) de acuerdo con sus propiedades bioquímicas. Las tres reacciones bioquímicas que se emplean son:

Producción de indol Actividad de ureasa y Actividad ornitina descarboxilasa.

Los biotipos (del I al VIII) se determinan siguiendo el siguiente esquema:



El cuadro muestra las tres diferentes reacciones evaluadas para determinar los biotipos. + significa reacción positiva y – significa

reacción negativa

PATOGÉNESIS

La patogénesis de las infecciones de H. influenzae no se comprende totalmente, aunque la presencia del tipo B encapsulado (HiB) es el principal factor de virulencia. Su cápsula le permite resistir la fagocitosis y la lisis en los huéspedes no inmunizados. Las cepas no encapsuladas son menos invasivas, aunque son capaces de inducir una respuesta inflamatoria que causa trastornos, ejemplos de infeccion por cepas capsuladas son meningitis, neumonia y epiglotitis. La vacunación con la vacuna Hib conjugada es efectiva en la prevención de la infección y varias vacunas están ahora disponibles para uso rutinario.

La mayoría de las cepas de H. influenzae son patógenos oportunistas, esto es, usualmente viven en su huésped sin causar enfermedades, pero pueden causar problemas cuando otros factores (tal como una enfermedad viral que reduce la respuesta inmune) crean una oportunidad infecciosa. Se conocen seis tipos de H. influenzae capsuladas: a, b, c, d, e y f, así como cepas no capsuladas, responsables de enfermedades emergentes.

Las enfermedades causadas naturalmente por H. influenzae parecen afectar solo a los seres humanos. En los niños, H. influenzae tipo B (HIB) causa bacteriemia y meningitis bacteriana aguda. Ocasionalmente causa celulitis, osteomielitis, epiglotitis e infecciones asociadas. Debido al uso rutinario de la vacuna HIB conjugada en EE.UU. desde 1990, la incidencia de la enfermedad HIB invasiva se ha reducido a 1,3/100.000 niños. Sin embargo, HIB continúa siendo la causa principal de las infecciones del tracto respiratorio inferior en niños de los países en vías de desarrollo que no realizan vacunaciones. Las cepas de H. influenzae sin cápsula (no del tipo B) causan infecciones del oído (otitis media) y oculares (conjuntivitis) y sinusitis en niños y se asocian con la neumonía. La meningitis, especialmente en infantes, niños mayores de 7 años y en los ancianos, es la manifestación clínica más seria de las invasiones tisulares causadas por Haemophilus influenzae. Ciertas cepas de tipo no-b aparecen con mutaciones que causan enfermedades invasivas en individuos vacunados en contra del tipo b (las cepas capsuladas).

PATOGÉNESIS DEL HAEMOPHILUS INFLUENZAE TIPO B: Es el agente etiológico mas común de meningitis bacteriana en niños de1 mes a 4 años de edad. La colonización nasofaringea previa en un huésped susceptible lleva a la invasión del torrente circulatorio y a la



posterior siembra en las meninges. Haemophilus influenzae, la especie patógena más importante del género, también esta asociada a infecciones como epiglotitis, celulitis, artritis séptica y neumonía.

Porcentaje de enfermedades causadas por H. influenzae

Las Enfermedades causadas por los distintos tipos de H. influenzae son las siguientes:

Capsulares A, C-F: Rara vez causa enfermedades H. Influenzae B: Meningitis, Neumonía, Epiglotitis, Artritis

séptica, H. Influenzae acapsular: (solo producen enfermedad cuando el

sistema inmunológico está debilitado) Bronquitis crónica, Otitis media, Sinusitis, Conjuntivitis

IDENTIFICACIÓN RÁPIDA PARA HAEMOPHILUS INFLUENZAE TIPO "b"

La importancia clínica de Haemophilus influenzae tipo b ha estimulado el desarrollo de métodos inmunológicos rápidos para la detección del polisacárido capsular directamente en las muestras clínicas como LCR, suero y orina.

El microorganismo una vez aislado puede ser identificado rápidamente.

También es posible usar la prueba de Quellung con Ac específicos para identificar presuntivamente los microorganismos presentes en secreciones respiratorias y LCR.



PRUEBA DE QUELLUNG (HINCHAMIENTO DE LA CÁPSULA)

En la prueba de Quellung (del alemán Hinchazón) o reacción de Quellung, es una reaccion bioquimica que usa anticuerpos polivalentes para que se unan a la cápsula de algunas bacterias como Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae y Klebsiella pneumoniae

Si hay suficientes microorganismos en el preparado teñido, puede efectuarse una identificación confirmadora de Haemophilus influenzae tipo b usando la prueba de Quellung.

Se basa en el uso de anticuerpos específicos capaces de unirse al pared del Haemophilus influenzae tipo b, a sus polisacáridos capsulares lo que generará hinchazón en el microorganismo

TINCIÓN DE GRAM Y AZUL DE METILENO

Puede hacerse un diagnóstico presuntivo y rápido de infección por Haemophilus influenzae por medio del examen directo del material clínico adecuado usando estas tinciones.

Si se recibe suficiente muestra debe centrifugarse antes del examen en caso que fuese LCR.

Se coloca una gota de la muestra en un portaobjeto de vidrio limpio.

Se fija con calor y se efectúa la tinción de Gram. Se observan como pequeños cocobacilos Gramnegativos pálidamente teñidos.

Hacer un frotis simultáneo teñido con azul de metileno. Con esta tinción las bacterias se ven como cocobacilos azul negro contra un fondo azul-gris claro.

PREVENCIÓN

La enfermedad por H. influenzae tipo b se puede prevenir con la administración a los niños de vacuna conjugada hemólifus b. Actualmente existen cuatro vacunas disponibles para su uso: PRP-HbOC, PRP-OMP, PRP-T, y PRP-D. Estas cuatro vacunas se encuentran autorizadas para niños mayores de 12 meses. Solo PRP-D no se recomienda para su uso en niños menores de 12 meses. El PRB-HbOC y el PRB-T se encuentran combinadas con vacunas para la difteria, tétanos y pertussis.



El uso extendido de la vacuna de H. influenzae tipo b redujo notablemente la incidencia de meningitis por este microorganismo en más de 95%. La vacuna también reduce la tasa de portadores de H. influenzae tipo b.

También para niños que conviven con pacientes con infección clínica por H. influenzae b se recomienda la prevención con rifampicina (que es un antibiótico bactericida).

TRATAMIENTO

La ampicilina es capaz de penetrar bacterias gram positivas y algunas gram negativas y anaerobias. Inhibe la síntesis de la pared celular de la bacteria, uniéndose a las PBP (proteínas fijadoras de penicilinas), lo que lleva a la destrucción de la pared y lisis celular. Es uno de los antibióticos más comunes utilizados en el mercado y con un efecto muy bueno.

La resistencia a antibióticos ha incrementado entre las cepas de H. influenzae, mayormente en términos de resistencia a la ampicilina mediada por β-lactamasa, lo que representa una seria preocupación clínica a nivel mundial. Por lo general, aquellas cepas resistentes a la ampicilina son también resistentes al cloranfenicol.

Una nueva forma de combatir al H. influenzae, al neumococo, y otros patógenos respiratorios y urinarios, es usar una cefalosporina denomida cefoxina esta es recomendada en casos de resistencia a antibióticos habituales. Y actúa de la misma manera que las penicilinas: interfiriendo en la síntesis de peptidoglucano de la pared celular bacteriana, e inhibiendo la transpeptidación final, necesaria para la reticulación. Esto genera un efecto bactericida.

BIBLIOGRAFÍA.

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Diagnóstico Microbiológico

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