HPLC (High Performance HPLC (High Performance Liquid CromatographyLiquid Cromatography): ):

la strumentazionela strumentazione

Sistema di iniezione: Sistema di iniezione:

il il looploop

HPLC: High Performance Liquid Chromatography

E’ una Cromatografia di Ripartizione Liquido/Liquido- il soluto si ripartisce tra fase stazionaria (un liquido supportato o chimicamente legato su solido all’interno di una colonna di acciaio o vetro speciale e la fase mobile liquida (il solvente eluente).

Diversi tipi e possibilità:Cromatografia liquida in fase diretta:

fase stazionaria più polare della fase mobilesostanze più polari più trattenute, escono dopo, TR >

Cromatografia liquida in fase inversa (“Reverse Phase”): fase mobile più polare della fase stazionariasostanze più polari meno trattenute, escono prima, TR <

Eluizione isocratica = stesso eluenteEluizione a gradiente = varia polarità eluente

HPLC: fasi mobili e stazionarieHPLC: fasi mobili e stazionarie

Fase stazionaria:Fase stazionaria:InversaInversa

Fasi mobili:Fasi mobili:ProprietàProprietà

Fase stazionaria:Fase stazionaria:

Diretta es. SILICEDiretta es. SILICE

Fase inversaFase inversa

Fase direttaFase diretta

Esempi diEsempi di

separazioniseparazioni

HPLCHPLC

HPLCHPLC

Effetto DIAMETRO Particelle FASE Effetto DIAMETRO Particelle FASE STAZIONARIA su HEPT/Velocità di FlussoSTAZIONARIA su HEPT/Velocità di Flusso

Esempi diEsempi di

separazioniseparazioni

HPLC:HPLC:

Effetto Effetto dimensioni dimensioni

particelle sui particelle sui tempi di tempi di analisianalisi

HPLCHPLC

•Fasi stazionarie a granulometria finissima (400 mesh)•Colonne d’acciaio•Sotto pressione (fino 400 atm)

COLONNECOLONNE RIVELATORIRIVELATORI

Confronto tra HPLC e GCConfronto tra HPLC e GC

Separazioni migliori per basse T e 2 fasi interagenti

Tutti gli organici

Rivelatoria fluorescenzae UV per HPLC