hplc sistemleri
TRANSCRIPT
Süreyya ÖZCANHacettepe Üniversitesi
Gıda Müh. Böl.
HacettepeÜniversitesi
ĐĐççerikerik
• HPLC’nin Tarihçesi
• HPLC’de Ayırma
• Ayırmada Rol Alan Unsurlar
• HPLC Sistemleri
• HPLC’de Kullanılan Dedektörler
• Floresans Dedektör
• HPLC’nin Kullanım Alanları
M.S. Tswett. Ber. Dtsch. Bot. Ges. 24: 384-393 (1906)
1906 - Mikhail Semenovich Tswett
HPLC TarihHPLC Tarihççesiesi
1906 - Mikhail Semenovich Tswett (1872-1919)Calcium Carbonate, Petroleum Ether1931- Kuhn ve Lederer1938 - Ismailov ve Schraiber1940's – Consden, Gordon ve Martin Partisyon veKağıt Kromatografisi1950's – Stahl Gaz, Đnce-Tabaka, Jel-Süzme veGradient Elution Kromatografisi1960's - Ticari HPLC’ye giriş
HPLC TarihHPLC Tarihççesiesi
AyAyıırmarma
ABsorpsiyon ADsorpsiyon
Ayırma, durgun faz ile hareketli faz arasındaki göçe bağlıdır.
Durgun Faz – Kolon içerisinde sabit duran faz ör. C18, Silica
Hareketli Faz –Numuneyi durgun faz üzerinde taşıyan fazdır.
Enjektör
Detektör
Kolon
Solvan
Karıştırıcı
Pompalar
Yüksek Performanslı Sıvı Kromatograf
Atık
AyAyıırmarma
Enjektör
Detektör
Kolon
Solvan
Pompalar
KarıştırıcıEnjeksiyon
mAU
zaman
Afl G2Afl G1
Afl B2
Afl B1AyAyıırmarma
Enjektör
Detektör
Kolon
Solvan
Pompalar
Karıştırıcı
Kromatogram
Enjeksiyon
mAU
zaman
Afl G2Afl G1
Afl B2
Afl B1AyAyıırmarma
Kolon SeçimiDurgun faz, partikül büyüklüğü, vs..Kolon UzunluğuHareketli Faz BileşimiKolon SıcaklığıAkış Hızı
AyAyıırmada Rol Alan Unsurlarrmada Rol Alan Unsurlar
Kontrol Modülü
Çözücü Kabini
Vakum degasser
Pompa
Otoörnekleyici
Kolon kompartmanı
Dedektör
HPLC SistemleriHPLC Sistemleri
UV-VIS65%
RILS
10%
Elektro10%
FLD8%
MS
RayoaktiviteĐletkenlikLC/IR
Genel HPLC DedektGenel HPLC Dedektöörlerirleri
Detektör performans özellikleri:
• Hassasiyet (LOD, LOQ)• Seçicilik• Lineerlik• Kalitatif Bilgi• Güvenilirlik• Kullanım kolaylığı• Üniversal olması
Performans Performans ÖÖzelliklerizellikleri
Flow
Cell
PhotomultiplierTube
LightSource
Excitation
EmissionVariable Excitation
andEmission
Wavelengths
Floresans DedektFloresans Dedektöörr
• Floresans sadece seyreltik çözeltiler için lineerdir.
• Emisyon ölçümü sadece 900’ de yapılmakta ve ağ ile bir tek dalga boyu seçimi yapılmaktadır. Bu sebeple ölçüm çok hassastır.
• Bazı kimyasallar floresansı yok ederek hassasiyeti azaltır (i.e., O2).
• Eksitasyon dalga boyunda absorbsiyon yapan çözücüler kullanılmamalıdır.
• FLD detektörleri akış hızı ve ısı değişikliğinden fazla etkilenmemektedir.
• Seçici detektörlerdir.
Floresans DedektFloresans Dedektöör r ÖÖzelliklerizellikleri
Mikotoksin AnalizleriMikotoksin Analizleri
FLD UygulamalarFLD Uygulamalarıı
Kimyasal
Çevre
Đlaçlar
Tüketici Ürünleri
Klinik
polistirenlerboyalarfitalatlar
tetrasiklinlerhormonlarantidepressantlarbarbituratlar
amino asitlervitaminler
Biyolojik Bilimlerproteinlerpeptidlernucleotidler
yağlarAntioksidan bileşiklerşekerler
poliaromatik hidrokarbonlarInorganik iyonlarherbisitler
HPLC UygulamalarHPLC Uygulamalarıı
Teşekkürler...