ian dari asisten elisa
TRANSCRIPT
Asisten Laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta2010
Definisi
Metode Konsentrasi protein Spesifisitas Reaksi imunologis Antigen dan antibodi Reaksi enzimatis
Istilah
λ = 450nm Protein = antigen dan antibodi ELISA reader HRP atau AP ABTS atau OPD atau TMB atau pNPP OD
Fungsi
Determinasi konsentrasi protein/ glikoprotein (p53, IL-10, IL-6, IL-2, IFN-γ, dll.)
Determinasi aktifitas ensim (misal : CuZn-SOD).
Determinasi afinitas antibodi terhadap antigen, dalam produksi dan seleksi MoAb.
Jenis ELISA
1. Sandwich ELISA- Polystyrene well telah dilapisi
monoklonal antibodi- sampel adalah antigen- Ditambah antibodi lagi yang
polyclonal dan sudah dilabel enzim- Diberikan substrat enzim- Produk berwarna
HRP/AP
Substrat ensimProduk
kromogenik
Fase solid
Antibodi ke-1
Antibodi ke-2
berlabel ensimAntigen
Ensim HRP/ AP
2. Competitive ELISA- Polystyrene well sudah dilapis antibodi
monoklonal- Tuangkan sampel yaitu antigen yang
belum diketahui- Tuangkan immunogen sebagai
kompetitor yang sudah dilabel enzim- Tuangkan substrat- Produk hasilkan warna
Perbedaannya?
Di grafik yang akan didapat! Kurva sumbu x adalah konsentrasi
protein dan sumbu y adalah nilai OD
OD
Konsentrasi
standart
sandwich
OD
Konsentrasi standart
competitive
Sandwich ELISA Competitive ELISA
1. Memerlukan 2 jenis Ab.
2. Ab ke 2 berkonjugat Ensim.
3. Tidak terjadi kompetisi perikatan antigen, karena tidak memakai kompetitor.
4. Kurva standart : Sigmoid
1. Satu jenis Ab.
2. Immunogen berkonjugat ensim
3. Kompetisi antara immunogen dan antigen teruji
4. Kurva standart :inversi dari bentuk kurva Sandwich ELISA
KIT ELISA Toxoelisa IgG dan IgM Alat: Elisa reader, printer, gelas
ukur, mikropipet,micro tip, glove, pemanas air/incubator thermostat, multichanel micropipette, beaker glass, cawan petri, log book, alat tulis dan marker, masker
Bahan: kit ELISA Toxolisa (kontrol negatif, kontrol positif, calibrator,well,TMB,wash buffer), aquades steril
Prosedur
Persiapan Encerkan semua 1:40 menggunakan
diluent (5mikroliter sampel + 200mikroliter diluent)
Encerkan wash buffer 20x dgn aquades (1ml wash buffer + 19ml aquades)
100μl sampel, NC, PC, kalibrator, dan diluent sbg blanko 10
detik
Inkubasi 37o C, 30 menit
Wash buffer 4x buang, aquades 1x buang
100ul conjugate, 10 detik
Inkubasi 37o C, 30 menitWash buffer 4x
buang, aquades 1x buang
100ul TMB, 10 detik100 ul stop solution
Baca pada absorbansi panjang gelombang 450nm
Pengawasan mutu
Absorbansi blanko harus <0,250 Absorbansi cut off calibrator ≥0,250 Indeks untuk NC dan PC hrs dalam
range tertera pada COA
Interpretasi hasil
Index Toxo IgG/IgM <0,9 = Negatif Index Toxo IgG.IgM 0,9-0,99 =
equivocal Index Toxo IgG/IgM ≥1,00 = Positif
Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih Terima kasih