immunoregulation of cutaneous leishmaniasis

8/7/2019 IMMUNOREGULATION OF CUTANEOUS LEISHMANIASIS

1/10

I MMUNOREGULATI ON OF CUTANEOUS LEI SHMANI ASI S

T Ce l lL i n e st h a tT r a n s f e rP r o t e c t i v eI mmu n i t yo r

Ex a c e r b a t i o nBe l o n gt o D i f f e r e n tT He l p e rS u b s e t sa n d

R e s p o n d t o D i s t i n c tP a r a s i t eAn t i g e n s

BY PHI LLI P SCOTT, PATRI CI ANATOVI TZ, ROBERT L . COFFMAN, *EDWARD PEARCE, ANDALAN SHER

F r o m t h eL a b o r a t o r yo f P a r a s i t i cD i s e a s e s ,N a t i o n a lI n s t i t u t eo f Al l e r gya n d I n f e c t i o u sD i s e a s e s ,Na t i o n a lI n s t i t u t e so fH e a l t h ,B e t h e s d a ,Ma r y l a n d2 0 8 9 2; a n d t h e * DNAX R e s e a r c h

I n s t i t u t eo f Mo l e c u l a ra n d C e l l u l a rB i o l o g y; P a l oA l t o ,C a l i f o r n i a9 4 3 0 4

I mmu n i t yi nl e i s h m a n i a s i s ,a c h r o n i cp r o t o z o a li n f e c t i o no fmap, i sme d i a t e d b yt h es t i mu l a t i o no fT c e l l st op r o d u c el y mp ho k i n e s , s u c ha s I F N - y ,t h a ta c t i v a t em a c -r o p h a g e st ok i l lt h eo b l i g a t ei n t r a c e l l u l a rL e i s h ma n i ap a r a s i t e s( 1 ). We r e c e n t l yd e m o n -s t r a t e d t h a ti mmu n i z a t i o nw i t ha s o l u b l ee x t r a c to f t h ep a r a s i t e ,t e r m e ds o l u b l el e i s h -ma n i a la n t i g e n( S L A ) ,p r o t e c t sBALB/ cmi c ea g a i n s ta n o r ma l l yf a t a lc h a l l e ng e w i t hL ei s h ma n i ama j o r , a n d t h a t t h i si mmu n i t yi s a s s o c i a t e dwi t h t h e i n d u c t i o no f c e l l -me d i a t e d i mmu n i t y( 2 ). I n a n e f f o r tt o i d e n t i f yt h e i mmu n o g e n swi t h i nSLA, wes e p ar a t e d t h ep r e pa r a t i o ni n t od i s t i n c tf r a c t i o n sb y a n i o n - e x c ha n ge c h r o ma t o gr a p hy ,a n d a s s a y e dt h e a b i l i t yo f e a c h f r a c t i o nt o be r e c o gn i z e d by T c e l l sf r o m SLA-i mmu n i z e dmi c e , a s w e l l a s t oi n du c e p r o t e c t i o n. Wh i l e t wo f r a c t i o n s ,1 a n d 9 ,

s t i mu l a t e dT l y mp h oc y t e s ,o nl yf r a c t i o n9 wa s c a p a bl eo f i n d uc i n gp r o t e c t i o n a g a i n s tc h al l e ngei n f e c t i o n( 3 ). Th i s o bs e r v a t i o nl e du s t op o s t u l a t et h a tr e c o gn i t i o no f l e i s h -ma n i a l a n t i g e n sby T c e l l si s n o t t h es o l ec r i t e r i o n t h a td e f i n e sa p r o t e c t i v el e i s h -ma n i a l i mmuno g en . On e p o s s i b l ee xp l a na t i o nf o ro u r r e s u l t si st h a tt h eT c e l l sr e c o g -n i z i n g t h ep r o t e c t i v ea n d no np r o t e c t i v ef r a c t i o n sd i f f e ri nt h e i ri mmu n o l o g i ca c t i v i t y.Th i s h y po t h e s i si s e x pl o r e d i n t h e p r e s e n tp a p e r.

S e v e r a lr e c e n ts t u d i e sh a v e s h o w nt h a th e l p e rT e l lc l o n e so f t h eL3T4 p h e no t y p ec a n b e d i v i d e di n t ot wo s u b s e t s ,d e s i gn at e d Th l a n d Th2 , b a s e d u p o n t h e t y p e so f l y mp ho k i n e s p r o d u c e df o l l o w i n gs t i mu l a t i o n wi t h a n t i g e n s o rmi t o ge n s ( 4 - 6 ).Cl o n e d l i n e so f t h eTh l t y pe p r o d u c eI L - 2 a n d I FN -y , wh i l eTh 2 c e l l sp r o d u c e I L -4 a nd I L - 5 ,bu t f a i lt o p r o d u c e I L - 2 o r I FN- y. To d e t e r mi n ei f d i f f e r e n t i a li n du c -t i o no f Th l a n d Th 2 c e l l smi g h t e x pl a i n t h er e s u l t so f o u r i mmu ni z a t i o ns t u d i e s ,we e s t a b l i s h e dT c e l ll i n e sr e s p o n s i v et o p r o t e c t i v ea n d n on pr o t e c t i v el e i s h ma n i a la n t i g en s. Th e p r o p e r t i e so f t h e s ec e l ll i n e swe r e a na l y z e dby d e t e r mi n i n g: ( a ) t h e i ra nt i ge ns p e c i f i c i t yu s i n gc o nv e n t i o n alp r o l i f e r a t i o na s s a y sa s w e l l a sT e l l i mmuno -b l o t t i n gt e c hn i q ue s; ( b )t h e l y mp ho k i n ep r o f i l e so f t h e s ec e l l sa f t e rs t i mu l a t i o n; a n d( c )t h e i ra b i l i t yt o a do pt i v e l yt r a n s f e rp r o t e c t i o n. Ou r r e s u l t ss u p p o r t t h e c on c e ptt h a tp r o t e c t i v ea n d n on pr o t e c t i v eT c e l l sbe l o n g t o d i f f e r e n tCD4+ T c e l ls u b s e t s.

A d d r e s sc o r r e s p o n d e n c et o P S c o t t ,Na t i o n a lI n s t i t u t e so fH e a l t h ,L a b o r a t o r yo fP a r a s i t i cD i s e a s e s ,MAI D, B l d g. 4 , Rm . 1 2 6 ,B e t h e s d a ,MD 2 0 8 9 2.

J . Ex p. MED Th e R o c k e f e l l e rU n i v e r s i t yP r e s s- 0 0 2 2 - 1 0 0 7 / 8 8 / 1 1 / 1 6 7 5 / 1 0$ 2. 0 0 1 6 7 5Vo l ume1 6 8 Novembe r1 9 8 8 1 6 7 5 - 1 6 8 4


2/10

1 6 7 6 T H E L P E R S U B S E T S I N C U TA N E O U S L E I S HMA NI A S I S

Ma t e r i a l sa nd Me t h o d sMi c e. F e ma l eB AL B / cmi c e ( 5 - 8 w k o l d )we r e o b t a i n e df r o mt h e Di v i s i o no f Re s e a r c h

S c i e n c e s ,Na t i o n al I n s t i t u t e so f He a l t h ,B e t h e s d a , MD .P a r a s i t e sa n d An t i g e ns. A c l o ne o fL . ma j o r( MRHO / S U/ 5 9 / Ps t r a i n )wa s u s e d f o r t h e s e

s t u d i e s. S L A a n d f r a c t i o n s1 a n d 9 we r e p r e p a r e da s p r e v i o u s l yd e s c r i b ed( 2 , 3 ) . B r i e f l y ,S L Awa s p r e p a r e df r o mp r o ma s t i g o t e sb y s o n i c a t i o n ,a n d t h e s u p e r n a t a n twa s c o l l e c t e da f t e rc e n -t r i f u g a t i o na t 1 0 0 , 0 0 0g . S L A wa s f r a c t i o n a t e db y a n i o n - e x c h an g ec h r o ma t o g r a p h yo n a M o n oQ c o l u mn , a n d f r a c t i o n s1 a n d 9 , c o r r e s po nd i n gt o t h e f i r s ta n d l a s t p e a k s o f ft h e c o l u mn ,we r e c o l l e c t e d ,d i a l y z eda g ai n s tPBS , a n d s t o r e da t - 7 0 C u n t i lu s e.

E s t a b l i s h me n to f Ce l lL i n e s. B AL B / c mi c e we r ei mmu n i z e di n t r a p e r i t o n e a l l ywi t h e i t h e rf r a c t i o n9 ( 1 0k g ) o rf r a c t i o n1 ( 5 0Rg )a c c o mp a n i e db y t h e b ac t e r i a la dj u v an t ,Co r y n e b a c t e r i u mp a r v u m( 1 0 0wg ). 1 wk l a t e rmi c e r e c e i v e da b o o s t o f a n t i g en a l o n e. 2 wk l a t e rs p l e n i cl y mp h o -c y t e sf r o m i mmu n i z e dmi c e we r e c o l l e c t e da n d s t i mu l a t e dwi t h a n t i g en i n v i t r of o l l owi n ge s t a b l i s h e d p r o t o c o l s( 7 ). T h e c e l l sf r o mf r a c t i o n1 - i mmu n i z e dmi c e( d e s i g n a t e dl i n e1 ) we r es t i mu l a t e dwi t h f r a c t i o n1 ( 5 0wg / ml ) ,wh i l e t h ec e l l sf r o mf r a c t i o n9 - i mmu n i z e dmi c e( d e s i g -n a t e d l i n e 9 )we r e s t i mu l a t e dwi t hwh o l eS L A ( 5 0 wg / ml ) ,s i n c ef r a c t i o n9 wa s n o t a v a i l a b l ei n s uf f i c i e n tq u a n t i t i e sf o r c o n t i n u ou si n v i t r op a s s a g e. T h e c e l l swe r e g r o wni n DME wi t h4 , 5 0 0mg / ml g l u c os e( Ad v a n c e dBi o t e c h no l o g i e sI n c. , S i l v e rSp r i n g ,MD ) c o n t a i n i n g1 0 %FCS , 2 mM g l u t a mi n e ,1 0 0 U / ml o f p e n i c i l l i n6 - p o t a s s i u m,1 0 0 g g o f s t r e p t o my c i ns u l f a t e ,2 5 mM H e p e s , a n d 5 x 1 0 - 52 - ME . I n t h e i n i t i a ls t i mu l a t i o n ,T c e l l s( 2 x 1 06/ ml ) we r ee x p o s e d t o a n t i g enf o r 1 2 d wi t h o ut I L - 2a n d s u b s e q ue n t l yr e s t e da n d s t i mu l a t e di n we e k l yc y c l e swi t h 5 x 1 06/ ml i r r a d i a t e d( 3 , 3 0 0r a d ) s y n g en e i c s p l e e nc e l l s. F o r s t i mu l a t i o n ,l i n e s1 a n d 9 r e c e i v e d ,i n a d d i t i o nt o a n t i g e n ,h i g h l yp u r i f i e dh u m a n r I L - 2f r o mE sc h er i c h i ac o l i( 8 , 9 ) ( 3 5 U / ml; g e ne r o u s l yp r o v i d e db y Ce t u s Co r p. , Eme r y v i l l e ,CA ) .

Ly mp h o c y t eP r o l i f e r a t i o n. T o me a s u r e t h e r e s p o n s e so f T c e l l st o l e i s h ma n i a la n t i g e ns ,1 04c e l l swi t h 5 x 1 05 i r r a d i a t e d( 3 , 3 00 r a d )s y n g en e i cs p l e e nc e l l swe r e c u l t u r e di n 9 6 - w e l lf l a t -b o t t o me dt i s s u ec u l t u r ep l a t e s f o r4 - 6 d wi t h v a r y i n gc o nc e nt r a t i o n so f a n t i g en. An t i g e nr e -s p o n s i v e n e s swa s t h en me a s u r e db y t h e c o l o r i me t r i cMT T p r o l i f e r a t i o na s s a y ( 1 0 ).

A do p t i v eT r a n s f e r s. T c e l l l i n e swe r e h a r v e s t e da f t e rr e s t a n d 5 x 1 06 c e l l swe r e i n j e c t e di n t r a v en ou s l yi n t oB AL B / cmi c e t h a th a d b e e n i r r a d i a t e dwi t h2 0 0 r a d . Mi c ewe r e c h a l l e ng edi n t h e f o o t p adwi t h 1 05 s t a t i o n a r yL . ma j o rp r o ma s t i g o t e s. T h e i n c r e a s ei n f o o t p ad t h i c k n e s swa s me a s u r e dd u r i n gt h e c o u r s e o f i n f e c t i o nb y u s i n ga d i a lmi c r o me t e r( L . S . S t a r r e t tC o . ,At h ol ,MA ) a n d s we l l i n gi n t h e i n f e c t e df o o t p adwa s c o mp a r e dw i t ht h e c o nt r a l a t e r a lu n i n -f e c t e df o o t p a d. No d i f f e r e n c ei n l e s i o nd e v e l o p me n twa s f o u nd i n n on i r r a d i a t e dmi c e a n da n i ma l sr e c e i v i n g2 00 r a di r r a d i a t i o n( d a t an o t s h o w n ). N o r ma lT c e l l swe r ep u r i f i e db y d e p l e -t i o no f B c e l l sb y t wo r o u n d s o f p a n n i n go v e r a f f i n i t y - p u r i f i e dr a b b i ta n t i - mo u s eI g a sd e -s c r i b e d( 1 1 ). I n s o m e e x pe r i me n t su nf r a c t i o na t e ds p l e n i cc e l l p r e p ar a t i o n s( 1 0 ' )we r e u s e da s a s o u r c eo f n o r ma l T c e l l s. N o d i f f e r e n c e si n t h e c o u r s eo f i n f e c t i o nwe r e o b s e r v e db e t we e na n i ma l s r e c ei v i n gT c e l l sa n d u nf r a c t i o na t e dc e l l s.

B i o a s s a y s. I F N- ywa s me a s u r e di n a n E L I S A f o l l o w i n gt h ep r o c e d u r ed es c r i b e db y C u r r ye t a l. ( 1 2 ). B r i e f l y ,I F N- y i nc u l t u r es u p er n a t a n t swa s t r a p p edb y i mmo b i l i z e dH b 1 7 0r a tmA br e c o gn i z i n gm o u s e I F N- y ,a n d d e t e c t e db y a p o l y c l o n a lmo n os p ec i f i cr a b b i ta n t i - mo u s eI F N- y( r a i s e da c c or d i n gt o t h e me t h o d so f C u r r ye t a l . [ 1 2 ] )f o l l o we db y a p e r o x i d a s e - c o n j u g a t e dg o a t a n t i - r a b b i tI g a n t i s e r a( B i o - R a dL ab or a t o r i e s ,Ri c h mo n d ,CA ) . Qu a n t i t a t i o n wa sb yc o mp a r i s o nwi t h a k n o wn a mo u n to f mu r i n er I F N- y( g e n e r o u s l yp r o v i d e db y Ge n e n t e c h ,I n c. , So u t h S a n F r a n c i s c o ,CA ) . P l a t e swe r e t h en w a s h e d a n d d ev e l o pe d wi t ha p e r o x i d a s e

s u b s t r a t e( A BT S; K i r k e g a a r d& P e r r y La b or a t o r i e s , I n c. , Ga i t h e r s b u r g ,MD ) a n d r e a d o n

a n E L I S A r e a d e r.T c e l l g r o w t hf a c t o r swe r e me a s u r e db y t h e i ra b i l i t yt o s u p p or t p r o l i f e r a t i o no f t h em o u s e

H T 2 m o u s eT c e l l l i ne i nt h e p r e s e n c eo f 1 1 BI la n t i - I L - 4a n t i b od y( 1 3 ) o r S 4 B 6 a n t i - I L - 2a n t i b od y( 4 ) u s i n g t h e c o l o r i me t r i cMT T a s s a y a s p r e vi o us l yd e s c r i b ed( 4 ). Te s t s u p e r n a -t a n t swe r e h ar v e s t e df r o mT c e l ll i n e s( 1 06/ ml )a f t e ra 2 4 - hs t i mu l a t i o nwi t h C o n A ( 5 wg / ml ).

I L - 5wa s me a s u r e di n a n I L - 5 - s p e c i f i cE L I S A a s s a yu s i n g t wo m A b s ( 1 4 ).T Ce l lI mmu n ob l o t t i n gT c e l li mmu n o b l o t t i n gwa s d o n e a s p r e v i o u s l y d es c r i b ed( 1 5 ). B r i e f l y ,

S D S - PA GE wa s p e r f o r me du n d e r r e d u c i n gc o nd i t i o nswi t h 5 0 0g g o f l e i s h ma n i a la nt i g en( f r a c t i o n s1 o r 9 ) a pp l i e dt o a s i n g l ewe l l t r o u g h. A f t e re l e c t r o ph o r e s i sa n d t r a n s f e ro f t h e


3/10

SCOTT ET AL. 1 6 7 7

p r o t e i n st o n i t r o c e l l u l o s e( 0. 1 - p mp o r es i z e ) ,6 - mmd i s c swe r ep u n c h e do u t o f t h eb l o t i n t o9 6 - we l lp l a t e s. T c e l l s( 1 04 ) a n d i r r a d i a t e ds p l e e nc e l l s( 5 x 1 05 )w e r ea d d e d ,a n d p r o l i f e r a -t i o nwa s me a s u r e d b y [ ' H] t h y mi d i n eu p t a k ef r o md ay4 - 5.

A na l y s i so f C e l lS u r f a c eP h e n o t y p e. Th e s u r f a c ea n t i g e n so f t h eT c e l ll i n e swe r ec h a r a c t e r -i z e db y i n d i r e c ti mmu n of l u o r e s c e n c ea f t e rr e a c t i o nw i t ha n t i - L 3 T4( GK1. 5 )a n d a n t i - L y - 2( B e c t o nDi c k i n s on& Co . , S u n n y v i l l e ,CA) .

Re s ul t s

A n t i g e n i cRe s p o n s i v e n e s sa n d C el lS u r f a c eP h e n o t y p eo fL e i s h ma n i a lT Ce l lL i n e s. Sp l e e nc e l l sf r o mBAL B/ c m c e i mmu n i z e dw i t he i t h e rf r a c t i o n1 o r f r a c t i o n9 we r e h a r -v e s t e da n d s t i mu l a t e di n v i t r owi t h f r a c t i o n1 ( l i n e1 ) o r SL A ( l i n e9 ) . SL A wa s u s e df o r s t i mu l a t i o n o fl i n e9 s i n c ef r a c t i o n9 wa s n o t a v a i l a b l ei n s u f f i c i e n tq u a n t i t i e sf o r c o n t i n uo u si n v i t r op a s s a g e . As d es c r i b ed i n t h e Mat e r i a l sa n d Me t h o d s , t h e

c e l l swe r e s t i mu l a t e dwi t h a nt i g ena n d I L - 2 a n d r e s t e di n c y c l e sl a s t i n g4 - 1 0 d , f o l -l o wi n g e s t a b l i s h e d p r o t o c o l s. Af t e r 6 - 1 0 s t i mu l a t i o na n d r e s t c y c l e s ,t h e a nt i g ens p e c i f i c i t i e so f t h el i n e swe r e d et e r m n ed b y me a s u r i n g c e l lp r o l i f e r a t i o n. Li n e 1r e s p o n de dt o b o t h SL A a n d f r a c t i o n1 , b ut n o t t o f r a c t i o n9 , wh i l el i n e9 r e s p o n de dt o SL A a n d f r a c t i o n9 , b u t n o t t o f r a c t i o n1 ( F i g. 1 ,A a n d B) . I n t e r e s t i n g l y ,a s e c o n dl i n et h a twe a t t e mp t e d t o e s t a b l i s ha g a i n s tf r a c t i o n9 ( l i n e9 . 2 ) r e s p o n de dp oo r l yt o f r a c t i o n9 , b u t d i dr e s p o ndt o f r a c t i o n1 a n d SL A ( F i g. 1 C . An al y s i so f t h es u r -f a c ep h e no t y p eo f t h ec e l ll i n e sd e mo n s t r a t e d t h a t a l l 3 l i n e swe r e L 3 T 4 ' Ly - 2- .A n a l y s i so f t h eA n t i g e n sR ec o g n i z e db yL i n e 1a n d L i n e9 b y T C el lI mmu n o b l o t t i n g. Th e

c e l ll i n e swe r e e s t a b l i s h e dw i t hFPLC f r a c t i o n sc o n t a i n i n gmu l t i p l ep r o t e i n s. To i d e n t i f yt h e r e l a t i v enu mbe r a n d mo l e c u l a rwe i g h t so f a n t i g e n sr e c og n i z edb y t h e s eT c e l l swe u s ed t h e t e c h n i q u eo f T c e l li mmu n ob l o t t i n g. I n s p i t eo f t h ef a c tt h a t l i n e s1a n d 9 h ad b e e n ma i n t a i n e d i n c u l t u r ef o r>3 mo , t h e yb o t h e x h i b i t e da h e t e r o g e -n e o u s r e s p on s ewi t h r e g a r d t oan t i g e ns p e c i f i c i t y( F i g. 2 ) . T h e s e r e s u l t si n d i c a t et h a tn o s i n g l ec l o nep r e d o m n at e da f t e rp r o l o ng e di n v i t r oc u l t u r e. Li n e 1 r e c o gn i z eda l a r g en u mb e r o f a n t i g e n sc o nt a i n e di n f r a c t i o n1 , t h ema j o r i t yo f wh i c hh ad a mo lwt


4/10

1 6 7 8 T HELPERSUBSETS I N CUTANEOUS LE I SHMANI ASI S

Ee

0e00

u g / m l

F I GURE1. P r o l i f e r a t i v er e s p o n s eo fc e l ll i n e st ol e i s h ma n i a l a n t i g en s.T c e l l sf r o ml i n e1 ( A ) ,l i n e9 ( B ) ,a n dl i n e9 . 2 ( C) w e r es t i mu l a t e d w i t h0 . 1,1 , 1 0 ,o r 2 5w g / mlo fSL A ( E ) , f r a c t i o n1 ( * ) ,o r f r a c t i o n9 ( N) i nt h e

p r e s e n c eo f

APC. A f t e r

4 di nc u l t u r e ,c e l lr e s p o n s i v e n e s st oa n t i g e n swa sd e t e r mi n e d u s i n gt h eMTT c e l lp r o l i f e r a t i o na s s a ya sd e s c r i b e di nMa t e r i a l sa n dMe t h o d s. F o re a c hd a t ap o i n tCh eb a c k g r o u n dr e s p o n s eh a sb e e ns u b t r a c t e d. One r e p r e s e n t a t i v ee x p e r i me n to u to f t h r e ef o re a c hc e l ll i n ei s p r e s e n t e d.

F I GURE2. T c e l li mmu n o b l o t so f( A )l i n e1 t o f r a c t i o n1 a n d( B)l i n e9 t o f r a c t i o n9 . T c e l l sw e r ei n c u -b a t e dw i t hp o r t i o n so fn i t r o c e l l u l o s ec o r r e s p on d i n gt od i f f e r e n tmo l e c -u l a rw e i g h ta n t i g e nsw i t h i ne a c hf r a c t i o ni n t h ep r e s e n c eo fAPC a sd e s c r i b e di nMa t e r i a l sa n dMe t h -o d s. P r o l i f e r a t i o nw a sm e a s u r e db yi n c o r p o r a t i o no f [3Hl t h y mi d i n ea t4 d , a n dt h er e s u l t sp r e s e n t e dr e p -r e s e n tt h emean c pmo fq u a d r u p l i -c a t e we l l sw i t h t h eb a c k g r o u n dc pms u b t r a c t e d.


5/10


6/10

1 6 8 0 T HEL P ERSUBSET SI N C U TA N E O U S L E I S HMA NI A SI S

E

E

NNW2YU

ZH0aFO0w

EENNW

Y

x0aarOOu

WE EK S

WE EK S

F i c U RE3 . Ad o pt i v et r a n s f e ro fp r o t e c t i o na n de x ac e r b at i o nw i t h( A)l i n e s1 a n d9 , a n d( B)l i n e9. 2 .C o n t r o lBALB / cmi c e( / ) , o rmi c ei n j e c t e di n t r a v e no us l y wi t h5 x 1 06T c e l l sf r o mn o r ma lmi c e( * ) , l i n e1 ( 0 ) , l i n e9 ( O) , o rl i n e9 . 2 ( A)w e r ec ha l l e ng ed wi t h1 05 L . ma j o rs t a t i o n a r yp r o ma s t i g ot e sa n d t h ec o u r s eo f i n f e c t i o nwa s f o l l o w e d.Th er e s u l t sp r e s e n t e da r e t h emeano ff i v emi c e. St a n d ar de r r o rb a r sa r es h o w nf o r t h el a s tme a s u r e me n t.

We p r e v i o u s l yf o u n dt h a tB AL B / c mi c e c a n b e p r o t e c t e da ga i n s tl e t h a li n f e c t i o nwi t hL . ma j o rb y i mmu n i z a t i o nwi t hS LA , a n d t h a t t wo f r a c t i o n sd e r i v e df r o mS L A

s t i mu l a t e dT c e l l s( f r a c t i o n s1 a n d 9 ) , wh i l eo nl yo n e ( f r a c t i o n9 ) s t i mu l a t e dp r o t e c -t i v ei mmu n i t y( 3 ). S i mi l a r l y ,we n o w r e p o r tt h a t c e l ll i n e sr e a c t i v ea g ai n s tf r a c t i o n

1 a r eu na b l et o i n du c ep r o t e c t i o n ,wh i l eT c e l l sr e c o gn i z i n gf r a c t i o n9 a n t i g e n st r a n s f e rp r o t e c t i v ei mmu n i t ye q u i v a l e n tt o t h a to b t a i n edb y a c t i v ei mmu n i z a t i o n. Th i s i st h e f i r s td e s c r i p t i o no f a T c e l ll i n et r a n s f e r r i n gp r o t e c t i o ni n c u t a n e ou sl e i s h ma n i -a s i s , a n d s e r v e st o f u r t h e rd e mo n s t r a t et h ep a r a mo u n ti mp o r t a n c eo f c e l l - me di a t e di mmu n i t yi n c o n t r o l l i n gl e i s h ma n i a li n f e c t i o n s. Mo r e s i g n i f i c a n t ,h o w e v e r ,i s t h eo bs e r v a t i o nt h a tp r o t e c t i v ea n d n on p r o t e c t i v eT c e l ll i n e sd i f f e ri n t h e t y p e s o fl y m-p h o k i n e sp r o d u c e da f t e rmi t o g e na n d a n t i g ens t i mu l a t i o n. L i n e 9 p r o d u c e s I L - 2a n d I F N- y , wh i l el i n e s1 a n d 9 . 2 p r o d u c eI L - 4 a n d I L - 5. T h e l y mp h ok i n ep r o f i l e

F I GURE 4 . S umma r y o f a do pt i v et r a n s f e re x pe r i me n t s. R e s u l t sf r o mf i v ec e l lt r a n s f e re x p e r i me n t sp e r f o r me da sd e sc r i b e di nF i g. 2 a r ep r e s e n t e d. P e r -c e n tp r o t e c t i o no rp e r c e n te x a c e r b a t i o nwa s me a s u r e da t 5 wk ( N) o r 1 0 wk( 0 ) a f t e ri n f e c t i o nb yd e t e r mi n i n gt h ep e r c e n ti n c r e a s e o rd e c r e a s ei nl e s i o ns i z ec o m p a r e dw i t hmi c et h a th a dn o tr e c e i v e da n yc e l l s.


7/10

S CO T T ET A L . 1 6 81

f o r l i n e9 c o r r e s p o n d st o t h a t d es c r i b edf o r t h eT h l s u b s e t ,wh e r e a sl i n e s1 a n d 9 . 2h a v e t h e p r o p e r t i e so f t h eT h 2 s u b s e t. T h e i n i t i a lc l a s s i f i c a t i o no f C D 4 c e l l si n t oT h l a n dT h 2 t y p e swa s a c c o mp l i s h e db y e x a mi n i n gt h ep r o f i l eo f l y mp h ok i n e sp r o -d u c e db y mu r i n eT c e l lc l o n e si n v i t r o( 4 ). Ou r r e s u l t si n d i c a t et h a t e v e n T c e l ll i n e st h a t e x h i b i ts i g n i f i c a n th e t e r o g en e i t ywi t h r e g a r d t o a nt i g ens p e c i f i c i t yma y b e p r i -ma r i l yc o m p o s e do f o n e T h c e l ls u b s e t ,a n d i n a d d i t i o n ,t h a t t h e i nv i t r od i f f e r e n c e so b s e r v e di n t h e s eT h c e l ls u b s e t sa r e i mp o r t a n ti n d e t e r mi n i n gh o w T c e l l si n f l u e n c et h e o u t c o meo f a n i n f e c t i o n.

Pr e v i o us a t t e mp t st oe s t a b l i s hp r o t e c t i v eL e i s h ma n i a - s p e c i f i cT c e l ll i n e sh a v e b e e nu n s uc c e s s f u l ,e v e n t h o u g hp r o t e c t i o nb y a do p t i v et r a n s f e ro f f r e s hi mmu n e T c e l l sh a s b e e n d emo n s t r a t e d( 1 , 2 1 , 2 2 ). On e e x p l a n a t i o nf o r t h e s er e s u l t si s t h a t a f t e ri n v i t r o c u l t u r ewi t hc r u d ea nt i g enp r e p a r a t i o n s ,T c e l l sr e c og ni z i n g n on pr o t e c t i v ea nt i g en sa nd / o r o f t h eT h 2 p h e no t y p ema y p r e d o mi n a t e. O n t h e o t h e rh a n d , t h e

s u c c e s so f o u r a do p t i v et r a n s f e r sma y b e r e l a t e dt o e s t a b l i s h i n gl i n e9 wi t ha d ef i n edp r o t e c t i v ea n t i g e n p r e p a r a t i o n. A mo r e i mp o r t a n ti s s u e,h o we v e r , i s wh y p r e v i o u s l ye s t a b l i s h edc e l l l i n e s( 2 2 ) ,a s we l la s l i n e s1 a n d 9 . 2 , n o t o n l yf a i lt o p r o t e c t mi c e ,b u t a c t u a l l ye x ac e r b a t et h e i n f e c t i o n. O n e p o s s i b i l i t yi s t h a t l y mp h o k i n e sp r e f e r e n -t i a l l yp r o d u c e db y t h e s ec e l l sd o wn - mo d u l a t et h e r e s p o ns eo f ma c r o p h a g e st o I F N-y a n d / o r e n h a n c ep a r a s i t eg r o wt hwi t h i nma c r o p h a g e s. I n t h i s r e g a r d ,we r e c e n t l yf o u n dt h a t s u p e r n a t a n t s d er i v e df r o mmi t o g e n - s t i mu l a t e dl i n e 1 T c e l l si n h i b i tt h ea b i l i t yo f ma c r o p h a g e st o r e s p o n dt o I F N - - tf o r ma c r o p h a g ek i l l i n go f L e i s h ma n i a( ma n u s c r i p ti n p r e p a r a t i o n ). I L - 4 o r I L - 5 ,wh i c ha r e o n l y p r o d u c e db y t h e T h 2c el l l i n es ,wo u l db e c a nd i d a t e sf o rs u c h mo d u l a t i o n. I n a dd i t i o n ,o t h e r l y mp h o k i n e st h a t a r e s y n t h es i z e di n l a r g e ra mo u n t sb y o u r T h 2 c e l l l i n e smi g h t c o n t r i b u t et ot h ee n h a n c e dl e s i o nd e v e l o p me n t. F o r e x a mp l e , i np r e l i mi n a r ye x p e r i me n t swe h a v ef o u n dt h a t l i n e1 p r o d u c e ss i g n i f i c a n t l ymo r e c o l o n y - s t i mu l a t i n gf a c t o r( g r a nu l o -

c y t e / ma c r o p h a g eC S F a n d / o r I L - 3 )a f t e rs t i mu l a t i o nt h a n l i n e9 , a n d b o t h o f t h e s ef a c t o r sh a v e b e e n r e p o r t e dt o e n h a n c e l e s i o nd e v e l o p me n t( 2 0 ). We a r e c ur r e n t l yi n v e s t i g a t i n gt h e i n v i t r oa n d i n v i v oe f f e c t so f t h e s el y mp h o k i n e su p o n l e i s h ma n i a li n f e c t i o n.

Bo t h o f t h e s o l u b l ef r a c t i o n sr e c og n i z e db y t h e s ec e l ll i n e sa r e c o m p o s e do f m a n yp r o t e i n s ,a n d , u s i n gt h e T c e l l i mmu n o b l o t t i n gt e c hn i q ue ,we f o u n dt h a t t h e c e l ll i n e se xh i b i t e dh e t e r o g e n e i t ywi t h r e g a r d t o a nt i g ens p e c i f i c i t y. Ne v e r t h e l e s s ,i n t h ep r e s e n ts t u d i e sr e c o g n i t i o no f f r a c t i o n1 p r o t e i n sa p p e a r e dt ob e p r i ma r i l ya s s o c i a t e dwi t h s t i mu l a t i o no f T h 2 c e l l s. T h i s c o r r e l a t i o nwa s s t r e ng t h e ne dw h e n w e f o u n dt h a ta s e c o n dc e l ll i n e( l i n e9 . 2 ) ,m e a n t t o b e e s t a b l i s h eda g ai n s tf r a c t i o n9 , p r e f e r e n -t i a l l yr e c og n i z e df r a c t i o n1 a nt i g en sa n d h a d a T h 2 l y mp h o k i n ep r o f i l e. Al t h o u g ht h e r e a s o n f o r t h e d e v e l o p me n to f a n t i - f r a c t i o n1 r e a c t i v i t yb y l i n e9 . 2 i s , a s y e t ,u n c l e a r ,i t mi g h t b e d u e t o t h e p r e s e n c e o f a c r o s s r e a c t i v ea nt i g enf o u n di n b o t hf r a c t i o n s1 a n d 9 . T h e s e r e s u l t sma y a p p e a r t o c o n t r a d i c to u r e a r l i e ro bs e r v a t i o nst h a t f r e s hT c e l l sf r o mSL A - i mmu n i z e dmi c e p r o d u c e dI F N- yw h e n s t i mu l a t e dwi t hf r a c t i o n1 ( 3 ). Ho we v e r , r e c e n ts t u d i e si n d i c a t e t h a tn e wl ys e n s i t i z e dC D 4 T c e l l sma y h a v e t h e c a p a c i t yt o p r o d uc e l y mp ho k i n e sa s s o c i a t e dwi t h b o t hT h l a n d T h 2c e l l s ,a n d t h a t c h r o n i cs t i mu l a t i o n , c e r t a i n l yi n v i t r oa n d p o s s i b l yi n v i v o ,l e a dst ot h e c o mmi t me n to f t h e s ec e l l st o o n e o f t h e t wo t y p e s o fT h c e l l s( 2 3 ). T h u s , o nt h e b a s i so f o u r o b s e r v a t i o n swe s u g g e s tt h a t s t i mu l a t i o n o fT c e l l swi t h f r a c t i o n1ma y p r e f e r e n t i a l l yl e a dt o t h e d e v e l o p me n to f T h 2 t y p e c e l l s. O n t h e o t h e rh a n d ,


8/10

1 6 82 T H E L P E R SUBSET SI N C U TA N E O U S L E I S HMA NI A SI S

r e c og n i t i o n o ff r a c t i o n9 a n t i g en swa sa c h a r a c t e r i s t i co f t h eTh l c e l ll i n e. We s i m i -l a r l ys u g g e s tt h a ts t i mu l a t i o nw i t ht h i sp a r a s i t ef r a c t i o nma y p r e f e r e n t i a l l yl e adt ot h ed e v e l o pme n to fTh l c e l l s. T h u s ,w h i l ei t i sd i f f i c u l tt o g en er a l i z ef r o mt h ea n a l -y s i so f t h r e ec e l l l i n e s ,i t i sp o s s i b l et h a tf r a c t i o n1 a n t i g en sp r e f e r e n t i a l l ys t i mu l a t eT h 2c e l l s ,w h i l ef r a c t i o n9 p r o t e i n ss t i mu l a t eTh l c e l l s ,a n o bs e r v a t i o nt h a t s u g ge s t st h a t c e r t a i n p a r a s i t ea n t i g en sma yp r e f e r e n t i a l l ys t i mu l a t eo n ec l a s so fT h c e l l. Wea r en o wa na l y z i n ga l a r g e rn umb e r o f c e l ll i n e sa n dc l o ne sw i t hd e f i n e dp r o t e i n st o i n v e s t i g a t et h i sh y po t h e s i s.T h e d a t ap r e s e n t e dh e r ei n d i c a t e t h a tt h ee f f e c t o rT c e l l sr e s p o n s i b l ef o rp r o t e c -

t i o ni n l e i s hma n i a s i s a r e o f t h eTh l s u b s e t ,wh i c hi sn o ts u r p r i s i n gs i n c ep r o t e c t i o ni n t h i sd i s e a sei sme d i a t e d b yma c r o p ha ge - a c t i v a t i n gf a c t o r s ,s u c ha s I F N - y. T h u s ,wewo u l da r g u et h a ti mmu n i z a t i o nl e a d st op r e f e r e n t i a li n d u c t i o no fTh l c e l l s ,w h i l ed u r i n ga n o r ma li n f e c t i o ni nBAL B/ cmi c eT h 2c e l l sa r ep r i ma r i l ys t i mu l a t e d ,l e ad i n g

t on on h ea l i n gi n f e c t i o n s.

S i m i l a r l y ,wewo u l ds u g g e s tt h a t i r r a d i a t i o no r i nv i v ot r e a t -mentw i t ha n t i - L 3 T 4mA b s h i f t st h eb a l a n c eo fT h s u b s e t st o w a r d sTh l c e l l s. T h i sh y po t h e s i si ss u p p o r t e db y r e c e n to bs e r v a t i o nso fL oc k s l e ya n dc o w o r k e r s( 2 0 ) ,wh of o u n dt h a tl y mp h ok i n e sa s s oc i a t e d wi t hT h 2c e l l sp r e d o mi n a t e di nd r a i n i n gl y mp hn o d e so f L . ma j o r - i n f e c t e dBALB / cmi c e ,w h i l el y mp h ok i n e sa s s o c i a t e dw i t hTh lc e l l sw e r ep r e v a l e n ti na g e n e t i c a l l yr e s i s t a n ts t r a i n ,a s w e l la s i nBAL B/ cmi c et r e a t e dw i t ha n t i - L 3 T4mA b . At p r e s e n t ,t h ef a c t o r sc o n t r i b u t i n gt o t h ep r e f e r e n t i a li n du c -t i o no fT h 2 c e l l si nL e i s h ma n i a - i n f e c t e dBALB / cmi c ea r eu n k n o w n. Ne v e r t h e l e s s ,i t i sc l e a r t h a tt h ei d e n t i f i c a t i o no f t woT c e l ls u b s e t sc o n t r i b u t i n gt o e i t h e rp r o t e c -t i o no r e x ac e r b a t i o ni n l e i s h ma ni a s i so f f e r sa f r a me wo r kw i t hwh i c ht o i n t e r p r e tp r e v i o us o b s e r v at i o n s i n t h ef i e l da n dd es i g nf u t u r es t u d i e s.

S u mma r y

BALB / cmi c ec a nbe p r o t ec t e d a g a i n s t an o r ma l l yf a t a lL e i s h ma n i a ma j o ri n f e c t i o nb y i mmu n i z a t i o nw i t ha p a r t i a l l y p u r i f i e d ,s o l u b l es ub f r a c t i o n o f t h ep a r a s i t e( f r a c -t i o n9 ). I n t h i ss t u d y ,we d e m o n s t r a t et h a ta T c e l ll i n ee s t a b l i s he da ga i n s tf r a c t i o n9 , d es i g na t e dl i n e9 , t r a n s f e r sp r o t e c t i o n equ i v a l e ntt o t h a to b t a i n edb y a c t i v ei m-mu n i z a t i o n. I n c o n t r a s t ,T c e l ll i n e s( l i n e s1 a n d 9. 2 ) r e s p on s i v et oa n on pr o t e c t i v es o l u b l ef r a c t i o n( f r a c t i o n1 ) n o to n l yf a i l e dt op r o t e c tB AL B / cmi c ea g ai n s tL . ma j o r ,b u t e x a c e r b a t e dt h e i n f e c t i o n. Mos ti mp or t a nt l y ,i n a d d i t i o nt o d i f f e r i n gi n t h e i ra nt i g ens p e c i f i c i t y ,p r o t e c t i v ea n de x ac e r b a t i v eT c e l l sl i n e sc o ul db e d i s t i n g u i s he do n t h eb a s i so f t h el y mp h ok i n e sp r o d u c e d ,a c h a r a c t e r i s i t i cp r e v i o u s l yu s e dt o s e p a -r a t emu r i n eT h c e l l si n t ot wos u b s e t s ,d es i g na t e dT h l a n dT h 2. We f o u n dt h a tt h ep r o t e c t i v ec e l ll i n e ,l i n e9 , d i s pl a y ed t h eTh l p r o p e r t yo f s e c r e t i n gI L - 2a n d I F N - y ,w h i l et h ee x ac e r b a t i n gl i n e ss e c r e t e dI L - 4a n d I L - 5 ,a c h a r a c t e r i s t i co fT h 2 c e l l s.Ou r r e s u l t sd e m o n s t r a t et h a tT h l a n dT h 2 c e l l sma y h a v ed r ama t i c a l l yd i f f e r e n te f f e c t so nt h eo u t c o meo f a n i n f e c t i o n ,a n ds u g g e s tt h a t s us c e p t i b i l i t ya n dr e s i s t a n c ei n e x p e r i me n t a ll e i s h ma ni a s i sma yd e p e n du p o na b a l a nc eb e t we e nt h eT h s u b s e t si n d uc e d.

Th ea u t h o r se x p r e s st h e i ra p p r e c i a t i o nt oDr. S t e p h an i eJ am e sf o rh el p f u l d i s c us s i o nsa n dt oMr. B r i a nS e ymo u rf o rt e c h n i c a la s s i s t a n c e. I na d d i t i o n ,t h e a u t h o r st h a n kDr. P e t e rMe l b yf o r a s s i s t a nc ei nT c e l li mmu no b l o t t i n g.

Re c e i v e df o rp u b l i c a t i o n2 3Ma y 1 98 8 a ndi n r e v i s e df o r m 2 1J u l y1 9 8 8.


9/10

S C O T T E T A L. 1 6 83

R e f e r e n c e s

1 . H o wa r d ,J . G . 1 9 8 6. I mmu n o l o g i c a lr e gu l a t i o na n d c on t r o l o fe x p e r i me n t a lL e i s h ma n i -

a s i s. I n t. Re v. Ex p. P a t h o l. 2 8: 7 9.2 . S c o t t ,P . , E . P e a r c e ,P. Na t o v i t z ,a n d A . S h e r . 1 9 8 7. Va c c i n a t i o na g ai n s tc u t a n eo u sl e i s h -

ma n i a s i si n a mu r i n em o d e l I . I n du c t i o no f p r o t e c t i v ei mmu n i t ywi t h a s o l u b l ee x t r a c t

o f p r o ma s t i g o t e s. J . I mmu n o l. 1 3 9: 2 2 1.

3 . S c o t t ,P . , E . P e a r c e ,P Na t o v i t z ,a n d A . S h e r . 1 9 8 7. Va c c i n a t i o na g a i n s tc u t a n eo u sl e i s h -

ma n i a s i si n a mu r i n e mo d e l. I I. I mmu n o l o g i cp r o p e r t i e so f p r o t e c t i v ea n d n on - p r o t e c t i v e

s u bf r a c t i o nso f a s o l u b l ep r o ma s t i g o t ee x t r a c t. J . I mmu n o l. 1 3 9: 3 1 1 8.

4 . M o s m a n n , T . R . , H . Ch e r wi n s k i ,M . W B o n d , M . A . Gi e dl i n ,a n d R . L . Co f f ma n.

1 9 8 6. T wo t y p e s o fmu r i n eh e l p e rT c e l lc l o ne. I . D e f i n i t i o na c c o r d i n gt o p r o f i l e so f l y m-

p h ok i n ea c t i v i t i e sa n d s e c r e t e dp r o t e i n s. J . I mmuno l. 1 3 6: 2 3 4 8.

5 . Ch e r , D . J . , a n d T. R . M o s m a n n . 1 9 8 7. T wo t y p e so f mu r i n eh e l p e rT c e l l c l o ne. I I.

De l a y ed - t y p eh y p e r s e n s i t i v i t yi s me d i a t e d b yT H l c l o n es. J . I mmu n o l. 1 3 8 : 3 6 88.

6 . Ch e r wi n s k i ,H . M . , J . H . S c h u ma c h e r ,K . D . B r o w n , a n d T . R . M o s m a n n . 1 9 8 7. T wot y p e s o fm o u s eh e l p e rT c e l lc l o n e I I I. F ur t h e r d i f f e r e n c e si n l y mp h ok i n es y n t h e s i sb e -

t we e n T h l a n dT h 2 c l o n esr e v e al e db y R N A h y b r i d i z a t i o n ,f u n c t i o n a l l ymo n os p e c i f i c

b i o a s s a y sa n d mo n o c l o n a la nt i b od i e s. f . Ex p. Me d. 1 6 6: 1 2 2 9.7 . Ch e e v e r , M . A . , D . B . T h o m p s o n ,J . P Kl a r n e t ,a n d P D . Gr e e n b e r g. 1 9 8 6. An t i g en -

d r i v e nl o n g t e r m- c u l t u r e dT c e l l sp r o l i f e r a t ei n v i v o ,d i s t r i b u t ewi d e l y ,me d i a t e s p e c i f i c

t u mo r t h e r a p y ,a n d p e r s i s tl o ng - t e r ma s f u n c t i o n a lme mo r y T c e l l s. J . Ex p. Me d. 1 6 3: 1 1 0 0.

8 . Wa n g , A . , S . D . L u , a n d D . Ma r k . 1 9 8 4. S i t e - s p e c i f i cmu t a g e n es i so f t h eh u m a n i n t e r l e u k i n -

2 g e n e : s t r u c t u r e - f u n c t i o na n a l y s i so f t h ec y s t e i n e r e s i d ue s. S c i e n c e( Wa s h. DC ) . 2 2 2 : 1 4 3 1.

9 . Ro s e n b e r g ,S . A . , E . A . G r i mm, M . Mc G r o g a n ,M . Do y l e ,E . K awa s a k i , K . K ot h s ,

a n d D . F . Ma r k . 1 9 8 4. Bi o l o g i c al a c t i v i t yo f r e c o mb i n a n ti n t e r l e u k i n - 2p r o d u c e di nE s c h -e r i c h i ac o l i. S c i e n c e( Wa s h. DC ) . 2 2 3 : 1 4 1 2.

1 0 . M o s m a n n , T . 1 9 8 3. Ra p i dc ol o r i me t r i c a ss ayf o rc e l l u l a rg r o w t ha n d s u r v i v a l: a p p l i c a -

t i o n t o p r o l i f e r a t i o na n d c y t o t o x i ca s s a y s. J . I mmu n o l. Me t h o d s. 6 5 : 5 5.

1 1 . Wy s o c k i ,L . , a n d V . L . Sa t o. 1 9 7 8. P l a nn i ng f o rl y mp h oc y t e s: a me t h o df o rc e l ls e l e c t i o n.

P r o c. N a t l. Ac a d. Sc i. US A . 7 5: 2 8 4 4.1 2 . C u r r y , R . C . , P A . Ki e n er ,a n d G . L . Sp i t a l n y. 1 9 8 7. A s e n s i t i v ei mmu n o c h e mi c a la s s a y

f o r b i o l o g i c a l l ya c t i v eMu I F N - g a mma. J . I mmu n o l. Me t h o d s. 1 0 4: 1 3 7.1 3 . Oh a r a , J . , a n dW . E . P a u l . 1 9 8 5. P r o d uc t i on o f amo n o c l o n a la n t i b o d yt o a n d mo l e c u l a r

c h a r a c t e r i z a t i o no f B c e l l s t i mu l a t o r yf a c t o r1 . N a t u r e( L o n d ). 3 1 5: 3 3.

1 4. S c h u ma c h e r ,J . R . , A . O' Ga r r a , P S c h r a d e r ,A . v a n K i mme n a d e ,M . W B o n d , T . R .

M o s m a n n , a n d R . L . Co f f ma n. 1 9 8 8. Ch ar a c t e r i z a t i on o f 4mo n o c l o n a la nt i b od i e st om o u s e i n t e r l e u k i n - 5a n d d e v e l o p me n to f m o u s e a n d h u m a n I L - 5E L I S A a s s a y s. j I m-muno l. 1 4 1: 1 5 7 6.

1 5 . Yo u n g , D . B . , a n d J . R . L a m b . 1 9 8 6. T l y mp h oc y t e sr e s p o n d t o s ol i d - p ha s ea n t i g en:

a n o v e l a p p r o a c h t o t h e mo l e c u l a ra na l y s i so f c e l l u l a ri mmu n i t y. I mmu n o l o g y. 5 9: 1 6 7.1 6 . Ho wa r d ,J . G . , C . Ha l e ,a n d F Y . L i e w. 1 9 8 0. I mmu n o l o g i c a lr e gu l a t i o n o fe x p er i me n t a l

c u t a n eo u sL e i s h ma n i a s i s. I I I. Na t u r e a n d s i g n i f i c a nc eo f s p e c i f i cs u p pr e s s i o no f c e l l -me d i a t e di mmu n i t yi n mi c eh i g h l ys u s c e p t i b l et oL e i s h ma n i at r o p i c aj Ex p. Me d. 1 5 2: 5 9 4.

1 7 . T i t u s ,R . G . , R . Ce r e d i g ,J . C . C e r o t t i n i ,a n d J . A . L ou i s. 1 9 8 5. T h er a p e ut ic e f f e c to fa n t i - L 3 T4 mo no c l o n a la n t i b od y GK 1 . 5 o n c u t a n e o us l e i s h ma ni a s i si n g e n e t i c a l l y -s u s c e p t i b l eB AL B / c mi c e. J . I mmu n o l. 1 3 5: 2 1 0 8.

1 8 . H o wa r d ,J . G . , S . N i c k l i n ,C . Ha l e , a n d F . Y . L i e w. 1 9 8 2. Pr o ph y l a c t i ci mmu n i z a t i o n

a g a i n s te x pe r i me n t a lL e i s h ma n i a s i s: I . Pr o t e c t i o ni n d uc e di n mi c e g en e r a l l yv u l n e r a b l e

t o f a t a lL e i s h ma n i at r o p i c ai n f e c t i o n. J . I mmu n o l. 1 2 9: 2 2 06.

1 9. Mi t c h e l l ,G . F . ,J . M . C u r t i s ,a n d E . H a n d m a n . 1 9 8 1. Re s i s t a n c et o c u t a n e o usl e i s h ma n -

i a s i si n g en et i c a l l y s u s c e pt i b l eB AL B / c mi c e. Au s t. J . Ex p. B i o l. Me d. Sc i. 5 9 : 5 5 5.


10/10

1 6 84 T HELPER SUBSETS I N CUTANEOUS LEI SHMANI ASI S

2 0 . L o ui s ,J . , a n d G Mi l o n. 1 9 8 7 . I mmu n o b i o l o g yo f e x pe r i me nt a l L e i s h man i a s i s. An n.I n s t. P a s t e u rI mmuno l . 1 3 8 : 7 3 7.

2 1 . P r e s t o n ,P . M , a n d D C . Dumon de . 1 9 7 6 . Ex p e r i me n t al c u t a n e ou s l e i s h ma n i a s i s. VP r o t e c t i v ei mmu ni t y i n s u b c l i n i c a la n d s e l f - h e a l i n gi n f e c t i o ni n t h emous e . C l i n. Ex p.I mmun ol. 2 3 : 1 2 6.

2 2 . T i t u s ,R G , G C . L i ma , H D En g e r s , a n d J . A . L ou i s. 1 9 8 5. Ad op t i ve t r a n s f e ro fp a r a s i t e - s p e c i f i ch e l p e rT c e l l p op ul a t i o nsc a p ab l e o f me d i a t i n gL e i s h ma n i ama j o r - s p e c i f i cd el a ye d- t y peh y p e r s e n s i t i v i t y. f I mmuno l. 1 3 3: 1 5 9 4.

2 3 . Gl a s e br o ok , A . , W Ro e d e r , J . L a x e r ,J . Hom, a n d G F i r e s t e i n. 1 9 8 8 . Ch ar a c t e r i z a t i ono f mu r i n e T c e l lc l o n ess e c r e t i n gb ot h I L - 2 an d I L - 4. FASEB( F e d. Am S o c. Ex p. B i o L )f 2 : A 47 4.

immunoregulation of cutaneous leishmaniasis

Documents