RECONOCIMIENTO CUALITATIVO DE LAS VITAMINAS HIDROSOLUBLES UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO

INFORMEBIOQUMICA

Abstract: En el desarrollo de esta prueba se realizaron varios ensayos cualitativos y especficos(ensayo con la tiamina, ensayos con la piridoxina, ensayos con la niacina, ensayos con el acido ascrbico ) con el objetivo de reconocer algunas de las vitaminas hidrosolubles por pruebas de colorimetra rpidas y sencillas mencionadas anteriormente con muestras conocidas como las vitaminas que son ingeridas de forma equilibrada y en dosis esenciales promoviendo el correcto funcionamiento fisiolgico(tiamina, niacina, piridoxina y acido ascrbico), debido a la especificidad de cada una de estas pruebas realizadas en el laboratorio y las caractersticas de cada una de las vitaminas se logr reconocer si estas se disuelven en agua.Palabras clave: ensayos cualitativos, vitaminas hidrosolubles, tiamina, niacina, piridoxina y acido ascrbico.

INTRODUCCION

Las vitaminas son un grupo de molculas orgnicas relativamente pequeas esenciales para el crecimiento y desarrollo adecuado. Se consumen en los alimentos debido a que los humanos y otros animales perdieron la capacidad de sintetizarlas. Con respecto a su estructura cabe resaltar que no poseen nada en comn y que adems sus funciones biolgicas no aportan criterios que permitan una definicin concreta y una clasificacin ordenada. Sin embargo algunas caractersticas que se les atribuye a la mayora de ellas son:Se encuentran en cantidades muy pequeas en los materiales biolgicos Son esenciales para el funcionamiento normal de los sistemas bioqumicos y fisiolgicos, tanto en la vida animal como en la vegetal y en la microbianaDe otro lado, el nico criterio que persiste para la clasificacin de estas sustancias es su solubilidad, razn por la cual se les divide en vitaminas hidrosolubles (complejo B y vitamina C) y liposolubles (A, D, E, K).Las vitaminas hidrosolubles son aquellas que se disuelven en agua. Se trata de coenzimas o precursores de coenzimas, necesarias para muchas reacciones qumicas del metabolismo y a diferencia de las vitaminas liposolubles no se almacenan en el organismo. Esto hace que deban aportarse regularmente y slo puede prescindirse de ellas durante algunos das.Dentro de las que se encuentran en el grupo de vitaminas solubles son:VITAMINA B1 (tiamina): se presenta libre en los alimentos o como su ester pirofosfato. La ausencia en el organismo ocasiona beriberiVITAMINA B3 (niacina): con este termino se conoce el conjunto constituido por el acido nicotnico y su amida la nicotina mida. En los sistemas vivos, el anillo de piridina esta formado parte de la estructura del NAD+ y su derivado NADP+, ambas coenzimas son el grupo prosttico de muchas enzimas que participan en reacciones de oxido-reduccin.VITAMINA B6 (piridoxina): es el grupo prosttico de enzimas que tienen que ver con la utilizacin intracelular de los aminocidos y se presenta como fosfato de piridoxal.VITAMINAC (acido ascrbico): se encuentra prcticamente en todos los vegetales la sintetizan los mamferos. El ismero ptico denominado comnmente acido eritrorbico, aunque no acta como vitamina, se comporta de manera semejante al ascorbato en numerosos sistemas redox y por lo tanto tiene usos similares como aditivo alimentario.MetodologaPara el desarrollo de esta prctica se realizaron 14 pruebas diferentes a las muestras conocidas que son las vitaminas (tiamina, niacina, piridoxina y acido ascrbico). Entre las principales reacciones de identificacin de las vitaminas hidrosolubles se encuentran las siguientes:

A. Ensayo con la tiamina:

Para esta prueba se uso 1 tubo de ensayo donde se disolvieron 10mg de tiamina en 3ml de agua destilada, se agrego 1ml de NaOH 2M y posteriormente se adiciono 4 gotas de ferri cianuro de potasio 0,15M, dicha solucin permaneci con una coloracin amarilla plida, se agito y se deposito 5ml de n-butanol, para finalmente dejar en reposo la solucin por 5 minutos aproximadamente, al cabo de los cuales a la luz ultravioleta (365nm) la capa de n-butanol muestra una fluorescencia violeta. Finalmente se realizaron las respectivas observaciones.

B. Ensayos con la piridoxina.

Para esta prueba se uso 1 tubo de ensayo donde se disolvieron 0,1g de clorhidrato de piridoxina en 1,0 ml de agua. A una gota de esta solucin se le adiciono 1 ml de agua y una gota de cloruro frrico 0,15M; donde se observo un color marrn rojizo. A continuacin se adiciono 2 ml de cido clorhdrico 1,9M donde el color de esta solucin cambia a amarillo.

Se tomo un tubo de ensayo con 0,5 ml de cido sulfanlico e inmediatamente se agrego 3 gotas de nitrito de sodio 0,09M. Al cabo de 15 minutos aproximadamente se adiciono 1 ml de NaOH 2M y 5 mg de clorhidrato de piridoxina; observndose un color amarillo intenso. A continuacin se adiciono 2ml de cido actico 4,83 M y el color de la solucin vira a naranja.Se tomo un tubo al cual se disolvieron 0,1g de clorhidrato de piridoxina en 4ml de agua destilada y posteriormente se agrego 0,5ml de cido ntrico 2,06M y 1ml de nitrato de plata 0,1N, donde se pudo observar un precipitado blanco.Se tomaron las correspondientes observaciones de cada uno de los ensayos con la piridoxina.C. Ensayos con la niacina.Para este ensayo se uso 1 tubo de ensayo en donde se preparo una solucin que contena 2 ml de agua, 1 gota de hidrxido sodio 0,1N y una gota de fenolftalena en etanol para luego agregar a esta pequeas cantidades de cido nicotnico hasta que la solucin se presentara incolora.Para este ensayo se uso 1 tubo de ensayo en donde se disolvieron 0,1g de cido nicotnico en 10 ml de agua recin hervida y enfriada para que posteriormente se tomara una tira de papel indicador universal para saber la coloracin que arroja dicho ensayo que debi corresponder a un pH de 3,0 aproximadamente.Se calent en una cpsula de porcelana 0,05g de cido nicotnico mezclado con 1,0g de carbonato de sodio anhdrido, en este ensayo se produjo piridina que fue perceptible por su olor.Se tomo un tubo de ensayo para hervir 1,0g de nicotina con 1ml de NaOH 2M, en dicho ensayo se produjo amonaco que fue perceptible por su olor, estos vapores fueron expuestos a una tira de papel indicador de pH donde arrojo un color naranja intenso.Se tomaron las correspondientes observaciones de cada uno de los ensayos con la niacina.D. Ensayos con el acido ascrbico

En una cuchara con un mechero se calent cido ascrbico. El producto derretido tiene un color semejante al del caramelo. Para este ensayo se uso 1 tubo de ensayo en donde se disolvieron 0,1g de cido ascrbico en 2ml de agua para luego aadir unas gotas de HNO3 y 3 a 4 gotas de nitrato de plata. Se pudo observar un precipitado gris oscuro.Para este ensayo se uso 1 tubo de ensayo en donde se disolvieron 0,04g de vitamina C en 4 ml de agua, luego se agrego 0,1g de Na2CO3 y aproximadamente 20 mg de sulfato ferroso, se agito y se dejo en reposo, se pudo observar un color violeta intenso, que se disipo al agregar 5ml de cido sulfrico.Para este ensayo se uso 1 tubo de ensayo en donde se disolvieron 1ml de agua destilada 20mg de cido ascrbico y se agrego 1ml de Fehling A y 1ml de Fehling B, se observo la formacin de un precipitado amarillo anaranjado que al calentarlo viro a rojo ladrillo.Para este ensayo se uso 1 tubo de ensayo en donde se disolvieron 0,1g de cido L-ascrbico en 2ml de agua, de esta solucin se tomo 2 gotas y se pusieron en un tubo de ensayo respectivamente , luego se adiciono una gota de 2,6-diclorofenolindolfenol al 3%, observndose as un cambio de color de azul a rojo.Para este ensayo se preparo una solucin en un tubo de ensayo de cido ascrbico al 2% a esta mezcla se le adicionaron unas 7 gotas de nitro prusiato de sodio para luego alcalinizar con 1ml de NaOH en este ensayo se observo la aparicin de un color azul oscuro.Se tomaron las correspondientes observaciones de cada uno de los ensayos con el acido ascrbico.

TABLAS DE RESULTADOS ENSAYO CON LA TIAMINARESULTADOS Y OBSERVACIONES

TIAMINAPositivo, coloracin violeta, alta concentracin por medio de la fluorescencia.

ENSAYO CON LA PIRIDOXINARESULTADOS Y OBSERVACIONES

ENSAYO APositivo, por medio de una coloracin roja, reaccin con el vitmero piridoxal.

ENSAYO BPositivo, cambio de amarillo a naranja, reaccin con el vitmero piridoxamina.

ENSAYO CPositivo, coloracin precipitado blanco, reaccin vitmero blanco.

ENSAYO CON LA NIACINARESULTADOS Y OBSERVACIONES

ENSAYO APositivo, por medio de una coloracin azul y posterior incoloracin, vitmero nicotidico.

ENSAYO BPositivo, por medio del papel indicador pH 3.

ENSAYO CPositivo, olor a pescado(piridina).

ENSAYO DPositivo, vapores y papel indicador a pH 12.

ENSAYO CON CIDO ASCRBICORESULTADOS Y OBSERVACIONES

ENSAYO APositivo, caramelizacin

ENSAYO BPositivo, precipitado gris oscuro.

ENSAYO CPositivo, Violeta a incoloracin.

ENSAYO DPositivo, Coloracin Rojo Ladrillo

ENSAYO EPositivo, Cambio de coloracin

ENSAYO FPositivo, Coloracin azul oscuro.

DISCUSIN DE RESULTADOSEnsayo con la tiaminaEn este ensayo se present un ensayo positivo cmo era de esperarse, segn las respectivas hiptesis, en este ensayo al agregar el agente oxidante, constituido por ferrocianuro de potasio, NaOH, y n-butanol, de esta manera se xido la tiamina que fue agregada inicialmente, hasta convertirse en Tiocromo, de esta manera se presenta una capa de fluorescencia por parte del n-butanol violeta, segn la intensidad de esta capa podemos deducir la alta cantidad de tiamina presente. Ensayo con la piridoxina Ensayo A: Para este ensayo el clorhidrato de piridoxina, al agregar el cloruro frrico, genero una reaccin en la que se aade el grupo ferroso al grupo de cido clorhdrico, de esta manera se reconoci el grupo fenol, que en este caso reaccion con el vitmero piridoxal, de la piridoxina, de esta manera la luz reflejaron los cristales en un rojo purpreo.Ensayo B: Para este ensayo el cido sulfanilico y el cido nitroso reaccionaron formando un cido nitroso (HNO), este compuesto ataca a las sales ataca a las sales aromticas, y en este caso a las aminas aromticas del vitmero de la piridoxina (piridoxamina), formando un grupo A-N=N+, de esta manera este compuesto que es conocido cmo una sal diazonio, al agregar el NaOH, reaccionaron con la vitamina formando un copulable, que form la coloracin amarilla, al oxidarla nuevamente con el cido actico, se form la coloracin naranja.Ensayo C: Para este ensayo de la vitamina B, el cido ntrico acta sobre el vitmero piridoxina de la vitamina, oxidando, esto se da junto con la presencia del cloruro en la solucin, por lo cual se forma el precipitado de AgCl, y generan la reaccin del precipitado blanco.Para los tres ensayos, las hiptesis concordaron.

Ensayo con la niacinaEnsayo A: En este ensayo con la niacina, el hidrxido de Sodio agregado actu alcalinizando la solucin, mientras la fenolftalena actu cmo el indicador, de esta manera la solucin al inicio se mantuvo alcalina con un pH alto(bsico) y con coloracin lila-azulosa(Fig. 1), al momento de aadir el vitmero de la niacina( cido nicotnico), se fueron cediendo los iones H+ del carboxilo, acidificando la solucin y provocando la posterior incoloracin(Fig. 2) presentada, concluyendo que las hiptesis fueron acertadas.

(Figura 1) (Figura 2)

Ensayo B: En este ensayo simplemente se agreg el agua de pH neutro, y al agregar el cido nicotnico, se acidifico la solucin, de esta manera se fue dando la cedencia de los iones H+ del grupo carboxilo, hasta obtener un pH de 3 (Fig. 3), comprobndolo con el pH indicador.

Papel indicador

Ensayo C: En este ensayo al hacer reaccionar al vitmero cido nicotnico con el carbonato de sodio, este ltimo "saca" al cido carboxlico del cido nicotnico produciendo la piridina (fig3), la cual es reconocible por su olor similar al pescado.

(Figura 3)

DESCARBOXILACIN DEL CIDO NICOTNICO.Ensayo D: En este ensayo el hidrxido de sodio alcalina la solucin, de esta manera genera el cambio en la carga de la nicotinamida, en su grupo funcional amida ioniza el NH, hasta NH, desprendiendo este de la nicotinamida y generando vapores inmediatamente(Figura 4), los cules por el NaOH y el amonaco, estuvieron a un pH alcalino.

NH + H+---------------------> NH

Ensayo con cido ascrbico

Ensayo A: Para este ensayo al subir la temperatura el cido ascrbico, se alz por encima de su punto de fusin(pirolisis), esto se debe a la degradacin de los azucares, ya que este es proveniente de los azucares, se caramelizo el cido ascrbico(Fig. 5), formando una serie de voltiles de sabor caracterstico, y color oscuro.

(figura 5)

Ensayo B: Para este ensayo el cido ascrbico se xido con la presencia de cido ntrico, de modo que posteriormente al agregarle el nitrato de Plata reaccion produciendo el AgCl y por el pH de la solucin se form un precipitado de color gris oscuro(Fig. 6).

(Figura 6)

Ensayo C: Para este ensayo el cido ascrbico(fig7) el grupo aldehdo se va alcalinizando por el NaCO y al agregarle el sulfato ferroso, este ltimo acta como indicador, de esta manera se produjo una coloracin violeta, posteriormente se agreg el cido sulfrico(HSO) y se fue acidificando poco a poco.

(Figura 7) cido Ascrbico

Ensayo D: En este ensayo el reactivo de Fehling se oxid por el cido ascrbico, produciendo el xido de cobre de coloracin amarilla, para que se oxide el cido ascrbico, de manera que al calentarlo se oxide ms efectivo, de esta manera cambiando su coloracin a rojo ladrillo (Fig. 8)

Ensayo E: En este ensayo el cido ascrbico se oxid por medio del 2,6 diclorofenol-indofenol(DPIP), hasta cido deshidroascrbico, de la siguiente manera:CHO-2H+ - 2e- CH0reducindose este reactivo 2,6 diclorofenol-indofenol de la siguiente manera:CH(NO) + 2H+ + 2e- CHCl(NO)de esta manera se presento el cambio de coloracin de azul a rojo.Ensayo F: Para este ensayo la solucin reaccionar con las cetona y los esteres presentes en el cido ascrbico, estas se alcalinizan con el hidrxido de Sodio, actuando cmo medio, esto indic por medio de una coloracin azul oscuro la presencia del cido ascrbico. CONCLUSIONES Se concluye que la tiamina es hidrosoluble, al ser agregada en agua destilada y diluirse completamente, y su concentracin se determina con la cantidad de coloracin violeta presentada. Se concluye que la piridoxina es una vitamina hidrosoluble, al ser agregada en agua destilada y diluirse completamente, y los tres vitmeros pueden ser determinados fcilmente. Se concluye que la niacina es hidrosoluble, fue agregada en agua y se diluy, y sus dos vitmeros al ser uno cido y otro bsico pueden ser determinados fcilmente. Se concluye que el cido ascrbico es una vitamina hidrosoluble, al diluirse fcilmente en agua, contiene azucares debido a su procedencia.BIBLIOGRAFIAF.Alberts.D.Bray.K.Hopkin. A johsson.(2006).Introduccin a la biologa celular. 2da edicin.Editorial Mdica panamericana.

J.M. Berg.J.L. Tymo Czko y Lstrger. (2003)Bioqumica, 5ta edicin. Editorial Revert S.A.