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INMUNOFLUORESCENCIA
Dr. Juan Carlos AldaveMédico Especialista en Inmunología Clínica y Alergología
Comité de Inmunodeficiencias PrimariasAsociación Latinoamericana de Inmunología
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• Objetivos de la práctica:– Conocer el fundamento de la técnica de
inmunofluorescencia
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Inmunofluorescencia
• Es una prueba de diagnóstico serológico que tiene dos variedades principales: – IF directa: para detección de antígenos en una
muestra clínica– IF indirecta: para detección de anticuerpos
específicos en el suero del paciente
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Inmunofluorescencia directa (IFD)
• Prueba de una sola etapa
• Sobre una lámina depositamos una muestra en la que buscamos la presencia de un determinado antígeno (antígeno problema)
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Inmunofluorescencia directa (IFD)
• Añadimos anticuerpos específicos del antígeno problema, marcados con isotiocianato de fluoresceína (conjugado)
• Si el antígeno problema se encuentra presente en la muestra, el conjugado se une. En caso contrario el conjugado se elimina con un lavado de la lámina
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Inmunofluorescencia indirecta (IFI)
• Prueba de 2 etapas
• Sobre una lámina que lleva pegado un antígeno conocido, añadimos el suero del paciente
• Si el suero contiene anticuerpos específicos, éstos se unen al antígeno
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Inmunofluorescencia indirecta (IFI)
• Posteriormente se añaden anticuerpos anti-inmunoglobulina humana marcada con isotiocianato de fluoresceína (conjugado)
• El conjugado se unirá a los anticuerpos del paciente
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Lectura de inmunofluorescencia
• La lectura se hace con un microscopio de fluorescencia, cuya luz estimula al isotiocianato de fluoresceína, haciendo que emita luz fluorescente de color verde
• La observación de luz verde fluorescente en la lámina indica la presencia del antígeno en la muestra (IFD) o de anticuerpos específicos en el suero (IFI)
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IFI: primera etapa
IFI: segunda etapa
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UTILIDAD DE LA IF EN LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS ANTINUCLEARES (ANA)
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ANTÍGENO
ANTICUERPO
¿QUÉ SON?
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Importancia
• Asociación con enfermedades del tejido conectivo
• Participación en la patogenia de la enfermedad– Anti DNA – nefritis lúpica– Anti Ro – bloqueo cardiaco congénito
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GRACIAS
“Que Dios los cuide mucho y bendiga su familia y trabajo”