inmunologia brucelosis
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5/26/2018 inmunologia BRUCELOSIS
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DOCENTES:
Lic. TM MIRTHA HERNNDEZ ACASIETE
Lic. TM ALEJANDRO RETAMAL SALAZAR
ALUMNO:
Pardav Patio Kevin Leonel
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introduccin Se conoce con el trmino de brucelosis al conjunto de
enfermedades ocasionadas, tanto en el hombre comoen los animales ( zoonosis ) por microorganismos delgnero Brucella.
La brucelosis, tambin llamada fiebre deMalta, fiebre mediterrnea, fiebre ondulante, o
enfermedad de Bang
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Diagnostico serolgico Si bien el aislamiento representa la prueba de
infeccin por Brucella, existen mtodos de diagnsticoserolgico que proporcionan informacin acertada y
permiten una accin oportuna para el tratamiento ycontrol de la enfermedad en casos de brotesepidmicos.
El diagnstico serolgico permite realizar una
evaluacin de la respuesta inmune del paciente frentea la enfermedad en forma rpida y sencilla. Lasventajas de su uso se resumen en los siguientesaspectos:
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Ventajas de su uso Son las ms usadas en el diagnstico de la brucelosis humana y
animal.
Detectan la presencia de anticuerpos IgM, IgG 1, IgG 2 e IgA.
Frente a una infeccin los anticuerpos IgM son los primeros en
aparecer, seguidos de los anticuerpos IgG. Tener presente que los anticuerpos IgM aglutinan ms
intensamente que los IgG, al ser molculas ms voluminosas yposeer mayor nmero de sitios de reaccin.
Los anticuerpos IgM son termolbiles, mientras que los IgG sontermoestables.
Las inmunoglobulinas IgM pierden la actividad aglutinante conagentes reductores como el 2-Mercaptoetanol, mientras que las
IgG no la pierden y pueden ser detectadas mediante el uso de
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Respuesta inmunolgica
La infeccin por Brucella conduce a una respuesta
humoral con la produccin de anticuerpos oinmunoglobulinas. Presencia y evolucin de lasinmunoglobulinas:
1ra - 2da semana posinfeccin: Presencia de IgM.
2da - 3ra semana posinfeccin: Presencia de IgG.
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Diagnostico serolgico Prueba Tamiz
Constituido por:a) Prueba de Rosa de Bengalab) Prueba de Aglutinacin en Placa
Prueba complementaria
Constituido por:a) Prueba de Aglutinacin en Tubob) Prueba del 2 Mercapto-etanol
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Rosa de bengala Prueba in vitro, rpida y sencilla. Representa la prueba "screening" o tamizaje. Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a
su pH cido. Procedimiento cualitativo rpido de aglutinacin
macroscpica que se efecta con una sola dilucin y quedetecta principalmente anticuerpos IgG 1.
El colorante rosa bengala no ejerce ninguna accin en laactividad serolgica y se puede reemplazar por otroscolorantes de acridina. Su funcin es facilitar laobservacin de la reaccin.
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procedimiento Colocar 0.04 ml de suero problema
sobre uno de los cuadrados de laplaca.
Seguidamente colocar junto alsuero 0.04 ml de antgeno Rosa deBengala
Mezclar bien suero y antgeno yrotar la placa durante 4 minutos .
Realizar la lectura tras la luz delvisor. La prueba es cualitativa por lo que el
resultado se informa como positivoo negativo.
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Prueba en placa Prueba in vitro, rpida y sencilla
Detecta anticuerpos IgM e IgG2 al igual que la prueba
lenta en tubo. Proporciona el ttulo de la reaccin de aglutinacin.
Permite su aplicacin en gran escala en las campaasde control y erradicacin.
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procedimiento
Los sueros a estudiar y el antgeno deben estar a temperaturaambiente.
Con la pipeta inclinada a 45 en contacto con la placa, colocar : 0.08,0.04, 0.02, 0.01 y 0.005 ml de suero a ensayar en la columna respectiva.
Homogenizar suavemente el antgeno y con el gotero en posicinvertical dejar caer una gota sobre cada una de las cantidades de suero. Agitar la placa con un suave movimiento rotatorio por cuatro veces.
Luego colocar la placa sobre la mesa de trabajo y cubrirla para evitar laevaporacin. Marcar en el reloj 5 minutos.
Luego de los 5 minutos rotar la placa por cuatro veces y dejarla enreposo por 3 minutos. Terminado el tiempo, rotar la placa cuatro veces y leer en el visor.
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Prueba en tubo Prueba in vitro realizada en tubos.
Es llamada tambin prueba lenta en tubos al necesitar
48 horas para la lectura de las reacciones deaglutinacin.
Mtodo para corroborar los resultados de otraspruebas serolgicas
Deteccin de anticuerpo IgM e IgG2.
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Seguir el esquema siguiente : Colocar en una gradilla unaserie de 5 tubos por muestra , ms un tubo para el suerocontrol positivo.
Agitar la gradilla. Tapar los tubos
Incubar en bao mara o estufa a 37C por 48 horas.
Tubo # 1 2 3 4 5 control
Suero ml 0.08 ml 0.04 ml 0.02 ml 0.01 ml 0.005 ml 0.04 ml
Ag. al 1% 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml
Dilucin 1/25 1/50 1/100 1/200 1/400 1/50
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lectura La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luz que
atraviesa los tubos. Las determinaciones se basan en la claridad oturbidez de la mezcla y en la firmeza de los grumosal agitarsuavemente los tubos.
Aglutinacin Completa: El lquido de la mezcla suero -antgeno, aparece claro con una sedimentacin de grumos alfondo del tubo, que al agitarlo suavemente se suspenden en ellquido.
Aglutinacin Incompleta: La mezcla suero - antgeno sepresenta parcialmente clara, que al agitar suavemente el tuboaparece una leve suspensin de grumos.
Aglutinacin Negativa: La mezcla suero - antgeno apareceturbia, a una suave agitacin no aparecen grumos.
En sueros humanos se considera como ttulopositivo una dilucin 1/200. Un ttulo de 1/100 esconsiderado slo como presuntivo.
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Prueba 2-mercaptoetanol Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG 2. Se basa en que los anticuerpos IgM se degradan debido a la
accin de ciertos compuestos que contienen el radical tiol, tales
como el 2-mercaptoetanol. Las molculas de IgG 2, en cambio,no sufren un efecto que altere su actividad para las reaccionesaglutinantes.
En el hombre esta prueba se debe incorporar en el diagnstico derutina.
En los animales infectados los anticuerpos IgG persisten durantems tiempo y alcanzan ttulo ms altos que las IgM. La prueba 2-mercaptoetanol es til para detectar infectados
crnicos humanos o animales.
A l ti i l t l l id d l l
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procedimiento Diluir el antgeno al 2%. Ejemplo: 2 mL del antgeno + 98 mL de solucin salina
al 0,85%. Diluir el 2-mercaptoetanol 0,1 molar (Mol= 78,13). Ejemplo: 0,78 mL 2-
mercaptoetanol + 99, 22 mL de solucin salina al 0,85%. Diluir el fenol al1 % en solucin salina al 0,85%. Ejemplo: 1 mL de fenol + 99
mL de solucin salina al 0,85%. Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas
como T y M). Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba2-mercaptoetanol.
Con una pipeta Bang colocar 0,08 mL, 0,04 mL, 0,02 mL 0,01 mL y 0,005mL desuero en el fondo de cada tubo.
Agregar 1 mL de solucin salina fenolada a la hilera T. Agregar 1 mL de solucin de 2-mercaptoetanol a la hilera M. Esperar 30 minutos. Agregar 1 mL de la solucin del antgeno a todos los tubos (hilera T y M). j.
Agitar la gradilla para homogeneizar las muestras. Incubar a 37C por 48 horas
Aglutinacin completa: el lquido de la mezcla suero -antgeno aparece claro, con una sedimentacin degrumos al fondo del tubo que al agitarlo suavemente sesu penden en el lquido.Aglutinacin negativa: el lquido de la mezcla suero-
antgeno aparece turbia y a una suave
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