INSEMINACION ARTIFICIAL EN EQUINOS 1. DEFINICION El trmino Inseminacin Artificial consiste en depositar esperma en el aparato reproductor de la yegua por medio de ciertos instrumentos en lugar del servicio natural. Por otro lado, es una tcnica que tiene una vertiente teraputica y est indicada en determinados casos de infertilidad; por ejemplo en algunas yeguas, fundamentalmente viejas y/o con deficiencias uterinas relativas o compensadas, en las que es contraproducente la cubricin ya que son incapaces de eliminar en un tiempo prudencial para la viabilidad del embrin la contaminacin poscoito que induce toda cubricin. En estos animales o en estos celos en concreto se recomienda la inseminacin, ya que se reduce la intensidad de la respuesta inflamatoria del tero poscubricin, incrementndose as las posibilidades de gestacin. La inseminacin artificial tiene diversas modalidades segn el esperma que se utilice, que puede ser: refrigerado (lquido) o congelado (slido), y dentro de poco, aunque en estos momentos no es posible, se podr inseminar adems con esperma sexado (lquido o slido) que permitir decidir el sexo de la progenie. 2. HISTORIA Existen documentaciones sobre experimentos cientficos en Inseminacin Artificial que datan de 1780 en Italia, cuando Spallanzani insemin a una perra con xito. No obstante, hay reportes ms antiguos no documentados acerca de los rabes utilizando la I.A. en caballos desde principios de 1900 y en ganado desde 1920. A finales de los 30's, se dice que ellos ya estaban reproduciendo miles de cabezas de ganado vacuno y ovino mediante la I.A. Es as que, en 1937 el Dr. Cole de Minnesota, practic la primera I.A. en forma comercial en los Estados Unidos. Por esos mismos aos, en Pabst Farms en Wisconsin tambin empezaron a utilizar la I.A. Asimismo, en mayo de 1938 se empez la primera organizacin de I.A. en los Estados Unidos, la New Jersey Holstein Breeders Cooperative Association. Tres aos ms tarde, en 1941, 120 ganaderos organizaron Vernon County Breeders. En Mxico los primeros intentos con Semen fresco fueron hechos en 1945 por el Dr. Carvajal; pero fue hasta 1960 que a escala comercial, se empez la I.A. por medio de semen congelado y en fresco. Los pioneros en ese campo utilizaron un equipo mvil; actualmente la empresa Reproduccin Animal, S.A. de C.V. se ha especializado en este campo. En contraste con la rpida aceptacin de la IA en otras especies, en particular los bovinos, en los equinos el nmero de animales en programas de inseminacin ha crecido muy lentamente. Hay varias razones que explican este fenmeno. Una de ellas ha sido la actitud conservadora de muchos criadores, quizs influenciados

por la poltica de una de las razas ms difundidas y econmicamente importante en el mundo, la Sangre Pura de Carrera (SPC), que no permite hasta hoy, el uso de la IA y TE (transferencia de embriones). El temor al fraude, especialmente con animales de alto valor, ha sido durante aos una de las razones esgrimidas por los criadores que no aceptaban la IA, pero el uso de las pruebas de paternidad a travs de sus marcadores genticos previa a la inscripcin definitiva de un producto ha sido determinante en las nuevas regulaciones, a tal punto que en la actualidad, la mayora de las razas puras han incorporado estas tcnicas de manera obligatoria para la identificacin definitiva de los animales registrados. Es en la dcada de los 80, con la aparicin y rpida incorporacin a los sistemas productivos de la ultrasonografa y las transferencias embrionarias donde la IA tiene realmente un crecimiento expansivo con el importante respaldo de los criadores de caballos deportivos, en especial trotadores, de salto y polo. El inters en el uso de la IA se ha incrementado en los ltimos aos debido al riesgo de la transmisin de enfermedades venreas por medio de la monta natural y a los riesgos que esta implica en padrillos y/o yeguas de alto valor econmico. Adems, permite utilizar ms eficientemente padrillos viejos o con trastornos msculo-esquelticos, cubrir un mayor nmero de yeguas con una mnima cantidad de saltos y reducir los costos operativos. Los ndices de preez con cualquiera de los sistemas de IA utilizados (semen fresco, refrigerado o congelado) se han incrementado recientemente lo suficiente como para dar mrgenes de confiabilidad comercialmente aceptables. Esta tcnica registra actualmente un crecimiento expansivo a nivel internacional, con cientos de miles de yeguas inseminadas cada ao; y lo que es mejor an, con el avance cientfico, actualmente se puede realizar el sexado de espermatozoides, tcnica que detecta diferencias en el contenido de ADN, y con la cual se pueden separar espermatozoides que contienen el cromosoma X Y. Una referencia importante es lo ocurrido el 6 de agosto de 1998, fecha en la que naci la primera cra equina producto de espermatozoides sexados y a partir de la cual, han ocurrido numerosos reportes de nacimientos de potrancas sexadas. Argentina es uno de los pases en los cuales esta tcnica se encuentra en pleno desarrollo en equinos y bovinos.

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VENTAJAS DE LA INSEMINACIN ARTIFICIAL Acelera el mejoramiento gentico de ciertos individuos Reduce las posibilidades de injurias y traumas entre animales Permite utilizar garaones que han desarrollado pobres hbitos reproductivos o han tenido algn trauma que impida la ereccin, monta y/o eyaculacin Permite evaluar el semen, lo que garantiza calidad seminal o de lo contrario reconoce cambios en la calidad Ayuda a identificar problemas reproductivos

Previene el desgate no solo fsico sino reproductivo de un determinado semental Maximiza la cantidad de yeguas inseminadas por garan en un mismo da Mejora los ndices de preez en yeguas repetidoras Aumenta valores seminales en garaones viejos Ofrece rangos de preez ms altos comparados con la monta natural Permite el servicio de yeguas problemas Aumenta disponibilidad gentica al romper restricciones geogrficas Almacenamiento de semen por muchos aos.

2. CARACTERISTICAS SEMINALES Fertilidad del esperma congelado En la especie equina la fertilidad del esperma congelado es muy inferior a la del toro, ya que los espermatozoides son ms sensibles a la congelacindescongelacin y manifiestan ms daos que los del toro, por lo que el nmero de espermatozoides frtiles al descongelar es menor en caballos. Aproximadamente slo un 25-30% de los sementales producen esperma que tiene a la descongelacin una aceptable capacidad fecundante, mientras que en el resto se pueden diferenciar los que tienen congelabilidad moderada y mala Concentracin y porcentaje de Esperma El esperma eyaculado de un caballo frtil no alcanza la concentracin y porcentaje de espermatozoides mviles normales en comparacin con el de un toro. El rendimiento de un caballo que congele bien es muy inferior al de un toro. Rentabilidad de la tcnica Cada yegua necesita al menos entre dos a tres dosis, segn la frecuencia a la que se le someta a exploraciones ecogrficas, por lo cual la rentabilidad de la tcnica no es tan importante como en el ganado vacuno. No obstante, hay nuevos mtodos de inseminacin uterina profunda, con los cuales se est consiguiendo buena fertilidad con dosis que llevan menor cantidad de espermatozoides y con lo cual se pueden inseminar ms yeguas por eyaculado. 3. METODOS DE COLECTA DE SEMEN 3.1. Vagina Artificial con o sin monta Este mtodo es el ms utilizado. Consiste de una cubierta de cuero o tubo recubierta con doble capa de ltex. Como su nombre lo indica, su funcin es mimetizar la vagina de la yegua. La vagina artificial generalmente se llena con agua a una temperatura que oscila entre 40 y 50C. Esta temperatura mayor a la temperatura corporal estimula la eyaculacin del macho una vez que ha penetrado. Cuando el caballo monta el maniqu o una yegua destinada para la colecta, el pene se desva hacia la vagina y se recupera el semen en un recipiente plstico.

3.2. Condn Es utilizado principalmente es aquellos sementales que no toleran manipulacin o son sumamente nerviosos. A diferencia del mtodo anterior, el caballo penetra la yegua, y posterior a la desmonta, el condn se retira del pene para analizar el semen que se ha depositado; por lo cual, una de las desventajas de este mtodo es la posibilidad de contaminar la muestra as como la prdida parcial o total del contenido. 3.3. Estimulacin mecnica Algunos sementales responden fcilmente a la estimulacin manual combinada con estimulacin visual y calrica en la base del pene. Es utilizada sobretodo en garaones muy dciles y de fcil manejo 3.4. Induccin farmacolgica El reflejo de la eyaculacin puede ser inducido con ciertos frmacos que actan a nivel del Sistema Nervioso y Reproductor. 4. EVENTOS Lavado y restriccin de la yegua. Preparacin de la vagina artificial Lavado de pene Introduccin del garan dentro del rea de colecta Monta Desviacin del pene dentro de la vagina Desmonta Recuperacin del eyaculado Evaluacin seminal

5. ANALISIS SEMINAL 5.1. Evaluacin Macroscpica

o Volumen o Apariencia o Osmolaridad o pH 5.2. Evaluacin Microscpica

o Motilidad o Longevidad o Concentracin o Morfologa o Pruebas bacteriolgicas, virales o Pruebas funcionales

6. ALMACENAMIENTO DE SEMEN Y TRANSPORTE Empleo de diluyentes para semen fresco El uso de diluyentes (extender) est ampliamente difundido ya que permite la preservacin de la muestra varias horas antes de la inseminacin sin afectar significativamente su capacidad fertilizante. Es importante tener en cuenta que el xito del mtodo depende de la calidad inicial de la muestra. Los diluyentes pueden agregarse al eyaculado libre de gel, previamente templado a 37 C. Los componentes del diluyente proveen al semen substratos metabolizables, pH y presin osmtica adecuada, compuestos que lo protegen contra el shock fro y antibiticos que reducen la proliferacin bacteriana (penicilina G 1000-1500 UI/ml; estreptomicina 1000-1500 g/ml, gentamicina 1001000 g/ml, polimixina B 200-1000 UI/ml, ticarcilina 100-1000 g/ml o amicacina 100-1000 g/ml). Transporte de semen refrigerado. Con el objeto de preservar la muestra por un perodo de tiempo mayor, alrededor de 24-48 horas, se puede refrigerar el semen diluido, mantenindolo a 5 C, mediante una curva de enfriamiento que consiste en la disminucin de la temperatura de la muestra a razn de 0.3 C por minuto. La muestra diluida debe tener una concentracin de 50 millones de espermatozoides por mililitro. Este proceso reduce la actividad metablica, retardando los cambios que llevan al envejecimiento de los espermatozoides (ageing). El semen as refrigerado no necesita ser pre calentado antes de la inseminacin. El transporte de semen refrigerado se ha simplificado significativamente gracias al desarrollo de un container comnmente llamado Equitainer (Hamilton-Thorn Researchs, Danvers M.A.). Este termo ha sido diseado para realizar una curva lenta de disminucin de la temperatura que logra 4-5 C en 20-24 horas con una duracin mxima de 48 horas. Los pasos a seguir para refrigerar una muestra de semen son los siguientes: a. Recoleccin del eyaculado. b. Filtracin para eliminar la porcin gelatinosa. c. Evaluacin macroscpica del eyaculado (Volumen) c. Evaluacin microscpica del eyaculado (en especial de la movilidad progresiva). d. Recuento en cmara. e. Dilucin del semen con el diluyente. f. Evaluacin microscpica de la movilidad pos dilucin. g. Envasado y refrigeracin. 7. TIPOS 7.1. INSEMINACIN ARTIFICIAL CON SEMEN FRESCO: Consiste en recolectar y evaluar el eyaculado, dividirlo en dosis que contengan como mnimo 500 millones de espermatozoides con motilidad progresiva e inseminar a las yeguas 30 a 90 minutos post-recoleccin.

Este sistema es ideal para padrillos que deban servir 2 mas yeguas por da en plena temporada, con problemas msculo-esquelticos, o para trabajar con grupos de yeguas con sincronizacin de las ovulaciones. Con un eyaculado promedio, se pueden inseminar entre 5 y 10 yeguas y los ndices de preez son iguales o levemente superiores (10 %) a la monta natural. 7.2. INSEMINACIN ARTIFICIAL CON SEMEN REFRIGERADO: Este sistema es muy dependiente de la calidad y respuesta seminal de cada padrillo a los cambios trmicos, por lo que ofrece ms variantes de manejo. En general, el semen puede refrigerarse a 4-5C por 24 a 48 hs., pero hay reportes de aceptables ndices de preez an despus de 80 horas, utilizando diluyentes especiales, respetando una curva de descenso trmico y mantenimiento de la temperatura, ya que las dosis de esperma refrigerado slo se descongelan en el momento de su utilizacin. La logstica es importante en la implementacin de este sistema dado que requiere de una buena sincronizacin entre el manejo de las yeguas a inseminar y la recoleccin y envo del semen. Los resultados son muy variables entre padrillos, pero respetando los protocolos e inseminando con semen refrigerado durante 24 horas y como mximo 24 hs previas a la ovulacin, los ndices son muy semejantes a la monta natural. Es uno de los sistemas de mayor crecimiento en la actualidad, permitiendo inclusive el envo de semen entre diferentes continentes, especialmente de aquellos padrillos a los cuales, debido a caractersticas propias de sus espermatozoides, no es posible congelarles semen, al menos por los mtodos convencionales desarrollados hasta el presente. 7.3. INSEMINACIN ARTIFICIAL CON SEMEN CONGELADO: Desde el primer reporte hecho por Barker y Gandier en 1957, hasta la dcada del 80, el impacto de este mtodo en los sistemas de produccin de equinos fue muy leve en occidente. Actualmente, se calcula que ms de 10.000 yeguas son inseminadas anualmente en Europa y ms de 350.000 en China; por ello, existen ms de 20 protocolos para criopreservar semen equino, que utilizan diferentes curvas trmicas, diluyentes, envases, descongelacin, etc.; lo cual implica que, las tasas de preez por ciclo sean muy variables y que resulte muy difcil comparar los distintos procedimientos. Algunas de las ventajas de la IA con semen congelado son: 1) Es mucho ms econmico, prctico, y seguro transportar un termo con Nitrgeno lquido con grandes cantidades de dosis para inseminar cientos de yeguas de un padrillo 2) reduccin de los costos de servicios, transporte de las yeguas, seguros, stress, riesgo de contraer enfermedades, accidentes en yeguas con cra al pie, etc.

3) La "estacin reproductiva" del padrillo puede continuar mientras ste se encuentra participando en torneos, concursos, exposiciones, convaleciendo de enfermedades, o eventualmente, aos despus de su muerte 4) Reduccin del uso de padrillos genticamente inferiores 5) conservacin y accesibilidad de semen de padrillos genticamente superiores 6) preservacin del semen en Nitrgeno lquido (-196 C) por un nmero indefinido de aos. Sin embargo se han expresado ciertas "desventajas" acerca del uso de semen congelado que son en general producto de informacin incompleta sobre el tema y no inherentes a la tcnica en s, sino a su administracin, reglamentaciones y dogmas. De todos modos, existe una considerable variacin entre padrillos respecto a la capacidad de sus espermatozoides para sobrevivir intactos a temperaturas bajo cero. Las tasas de preez reportadas varan entre 0 y 70 %, pero en la mayora de los padrillos oscila entre 20 a 40 % de preez por ciclo, resultados que a pesar de ser bajos son, en general, considerados como aceptables hasta el momento. 8. MANEJO EN LA INSEMINACION Cuando se emplea la inseminacin artificial es necesario contar con especialistas en reproduccin equina, que determinen si la yegua es apta para ser inseminada y para determinar el momento ptimo; coordinando asimismo la inseminacin, con la peticin del esperma al centro correspondiente o, elaborando la dosis de ste; y de ese modo, obtener todos los beneficios que conlleva la tcnica.

Figura izquierda.- Recogida de esperma en vagina artificial y Figura de la derecha.- Envase de nitrgeno lquido para transporte de esperma. Asimismo, la yegua debe ser sometida a un examen reproductivo previo con el fin de valorar la integridad anatmica y funcional de su aparato reproductor y descartar aqullas que presenten alteraciones que reduzcan la fertilidad. As, se deben descartar las hembras con anomalas congnitas o adquiridas, como las que presenten alteraciones del tero (fibrosis o infecciones)

Aspecto endoscpico de una fibrosis uterina (izquierda), endoscpico y ecogrfico de una pimetra (centro y derecha) Por tanto, el manejo reproductivo de la yegua que va a ser inseminada es diferente al de hembras de otras especies, entre otras razones, porque tiene unas caractersticas propias en su actividad ovrica y sexual que determinan un celo muy largo, con mxima fertilidad al final del mismo; y en concreto porque, la exploracin rectal mediante ecografa de sus ovarios y tero, repetida durante el tiempo del celo, es necesaria para determinar el momento ms indicado de la IA. De modo que es necesario valorar el aspecto del folculo preovulatorio, midiendo su tamao y forma, grosor de sus paredes y ecogenicidad del sedimento del lquido folicular. Cuando se emplea esperma congelado, se es an ms estricto en la seleccin y manejo de la yegua, llegando a someterla a exploraciones ecogrficas seriadas cada seis horas, ya que en un 75% de las yeguas se puede predecir la ovulacin 24 horas antes de que ocurra, segn el aspecto ecogrfico del folculo preovulatorio.

Aspecto ecogrfico del folculo preovulatorio de la yegua: a 24 horas de la ovulacin (izquierda), ovulando (centro) y con 24 horas posovulacin (derecha).

9. TECNICA DE INSEMINACION *Se necesitan instalaciones adecuadas si se recoge esperma para elaborar la dosis. Para ello, se necesita: una zona o sala de recogida de esperma un laboratorio bsico (fijo o mvil) que permita la valoracin del esperma y elaboracin de dosis para inseminar un potro de inmovilizacin necesario para explorar ecogrficamente e inseminar a la yegua. Tambin son necesarios material y equipos especficos como los catteres de inseminacin de un solo uso para depositar el esperma en el tero de la yegua. *Para inseminar: se deja la dosis de esperma en el cuerpo del tero, atravesando para ello el crvix con el catter de inseminacin (Mtodo Trasncervical) Actualmente, la tendencia generalizada es realizar la inseminacin en su variante intrauterina profunda, porque permite incrementar los porcentajes de fertilidad y reducir la concentracin de espermatozoides de la dosis. Esta variante de inseminacin est ms indicada cuando se emplea esperma congelado (con menos capacidad fecundante) En este caso (Mtodo Uterina profunda) se pueden emplear catteres largos semirgidos de pequeo volumen, o se puede usar un endoscopio flexible adaptado que permite regar la papila tubrica con la dosis; lo que hace ms exacta esta tcnica pero tambin ms cara. Por eso se utiliza en ms ocasiones el catter para inseminacin con pequeo volumen, que se lleva, va vaginal, hasta la parte distal del cuerno uterino correspondiente al ovario que tiene el folculo preovulatorio, ayudados de una mano introducida en el recto (mtodo rectovaginal).

Aspecto ecogrfico del folculo preovulatorio de la yegua: a 24 horas de la ovulacin (izquierda), ovulando (centro) y con 24 horas posovulacin (derecha).

Catteres de inseminacin equina de diferente tamao para pequeo y gran volumen (izquierda). Lugar de depsito de la dosis en el cuerpo del tero (centro) o en la porcin distal del cuerno uterino (derecha). 10. MOMENTO DE INSEMINACION El momento para realizar la inseminacin artificial depender del tipo de esperma. Con esperma refrigerado: Se realiza normalmente por exploracin rectal ecogrfica del aparato reproductor para identificar en un ovario la presencia de un folculo preovulatorio (FP), de tal manera que si est en celo y/o tiene un FP se insemina por primera vez y se repite a las 24 horas hasta que termine el celo o se observe la ovocitacin. El porcentaje medio de fertilidad obtenido es del 60% o mayor. Con esperma congelado: Conviene que la dosis se deposite en el tero entre las 6-8 horas anteriores a la ovocitacin o las 6 posteriores. Para poder predecir el momento de la misma es imprescindible el examen ecogrfico seriado del ovario activo. La fertilidad del congelado vara mucho entre donantes (20-100%) y est influido por la hembra y la tcnica de inseminacin.

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